Ein "Patient-Like" Orthotope Syngene Maus-Modell der Leberzellkarzinom Metastasen

Die Metastasierung von Krebs ist die Hauptursache der durch Krebs verursachten Todesfälle. Wir bieten eine eingehende Beschreibung der unser Überleben Chirurgie Methodik für die Festlegung eines "Patienten-like" orthotopen syngenen Mausmodellsystem zur Untersuchung der Mechanismen der Metastasierung bei soliden Organtumoren.

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, ein patientenähnliches orthotop syngenes Mausmodellsystem für die Untersuchung der Mechanismen der Metastasierung beim hepatozellulären Karzinom zu etablieren. Dies wird erreicht, indem zunächst hepatozelluläre Karzinomzellen der Maus für die Implantation vorbereitet werden. Im zweiten Schritt wird der Bauch eines syngenen Empfängertieres geöffnet und die Zellen vorsichtig in den rechten Leberlappen injiziert.

Letztendlich empfiehlt der Erfolg und die Reproduzierbarkeit dieser Methodik, dass sie bei der Aufklärung der biologischen Mechanismen der Metastasierung des hepatozellulären Karzinoms weit verbreitet eingesetzt werden kann. Der Hauptvorteil dieser Technik gegenüber bestehenden Techniken wie z.B. Maus-Xenotransplantat-Tumormodellen besteht darin, dass unser syngenetisches Tumormodellsystem die Untersuchung der Rolle der Immunantwort bei der Tumormetastasierung ermöglicht. Michelle Nadu, eine Studentin aus unserem Labor, wird dieses Verfahren mit mir demonstrieren. Um die Zellen für die Implantation vorzubereiten, beginnen Sie damit, eine 60 bis 70%ige konfluente Kultur von hepatozellulären Karzinomzellen zweimal mit fünf Millilitern PBS zu waschen.

Inkubieren Sie die Zellkultur mit zwei Millilitern Trypsin bei 37 Grad Celsius. Zählen Sie nach fünf Minuten die Zellen und verdünnen Sie sie fünfmal 10 bis zu den fünften Zellen pro Milliliter PBS. Als nächstes werden 100 Mikroliter Aliquots der Zellen in ein steriles 1,5-Milliliter-Mikrozentrifugenröhrchen pro Maus überführt und die Zellen auf Eis gelegt.

Bestätigen Sie vor Beginn des chirurgischen Eingriffs den richtigen Grad der Anästhesie mit den Zehen. Kneifen Sie, tragen Sie Salbe auf die Augen einer 16 bis 20 Gramm schweren gesunden erwachsenen Bsy-Maus auf und rasieren Sie sich in einem Bereich von etwa einem Zentimeter um die Mittellinie des Bauches des Tieres. Ziehen Sie dann ein Paar Latexhandschuhe an und waschen Sie die exponierte Haut mehrmals mit einem seifigen Desinfektionsmittel, gefolgt von einer sterilen PBS-Spülung für etwa fünf Minuten.

Wenn die Haut vorbereitet wurde, legen Sie die Handschuhe ab und ziehen Sie die entsprechende persönliche Schutzausrüstung an. Stellen Sie eine externe Wärmequelle bereit, um eine anästhetische Unterkühlung während des Eingriffs zu verhindern, und legen Sie dann chirurgisches Klebeband auf die Gliedmaßen und den Schwanz des Tieres, um die Maus in Rückenlage zu fixieren. Machen Sie als Nächstes einen geraden Schnitt unmittelbar unterhalb des Xiphos-Brustbeins und verwenden Sie einen sterilen, selbsthaltenden chirurgischen Retraktor, um den Bauch zu öffnen.

Wenn die Leber sichtbar ist, aspirieren Sie ein Aliquot der Zellen in eine Ein-Milliliter-Spritze, die mit einer 20-Gauge-Nadel ausgestattet ist, und injizieren Sie langsam und vorsichtig alle 100 Mikroliter der hepatozellulären Karzinomzellen in den rechten Leberlappen. Nachdem Sie die Nadel entfernt haben, legen Sie ein steriles Wattestäbchen mindestens eine Minute lang auf, um Blutungen zu stoppen. Verwenden Sie dann eine resorbierbare Naht, um das Unterhautgewebe zu schließen, gefolgt von einem Verschluss der Haut.

Reinigen Sie die Wunde mit chirurgischen Clips mit einem weiteren Desinfektionspeeling und verabreichen Sie subkutan 100 Mikroliter normale Kochsalzlösung. Bringen Sie die Maus dann unmittelbar nach der Operation für mindestens 24 Stunden in einen sauberen Käfig ohne Begleiter und mit Papierbettwäsche. Diese BSY-Mausleber wurden mit fünf mal 10 bis sechs ME implantiert. Eine Maus hepatozelluläre Karzinomzellen, wie gerade gezeigt.

Der klinische klinische Nachweis der Entwicklung eines hepatozellulären Karzinoms war 63 Tage später beobachtbar, wie der Pfeil bei einer Maus zeigt. Auf der Oberfläche der Leber wurde ein oberflächlicher Tumor mit einer gewissen Befestigung an der Bauchdecke beobachtet. Die Lungen dieser Maus wiesen ebenfalls eine abnormale Morphologie auf und zeigten Bereiche mit sichtbarer Blutungsnekrose.

Bei einer zweiten Maus schien die Leber stark abnormal zu sein, wobei die Anomalie als erwartete Kontrolle sehr stark einem oberflächlichen Tumor ähnelte. Mäuse, die nicht implantiert wurden, entwickelten weder in der Leber noch in der Lunge Tumore. Einmal gemastert, kann dieses orthotope syngenetische Mausmodell eine gute Plattform für die Aufklärung der biologischen Mechanismen von Metastasen und hepatozellulärem Karzinom bieten.