Name: Ein Patient-Like Orthotope Syngene Maus-Modell der Leberzellkarzinom Metastasen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-10-24T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 6 s
Description: Erfahren Sie die orthotope syngene Maus-Modellierung für Leberzellkarzinom-Metastasen. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung immunologischer Tumorinteraktionen mit hoher Relevanz für die Onkologie.

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Wir danken Pascal DuBois für das Korrekturlesen des Artikels. Die Autoren möchten sich auch bei den Mitarbeitern der Tierschutzeinrichtung am Hunter College der City University of New York bedanken. Diese Arbeit wurde durch ein NIH RCMI-Stipendium für das Hunter College unterstützt.

Ethics Statement Alle tierexperimentellen Studien wurden von der Institutional Animal Care und Verwenden Committee (IACUC) des Hunter College der City University of New York zugelassen. Anmerkung: acht BALB / c-Mäuse wurden in diesem experimentellen Verfahren verwendet. Fünf BALB / c-Mäuse wurden mit 5 × 10 6 BNL 1ME A.7R.1 Maus hepatozelluläre Karzinomzellen implantiert werden, um die primären Tumoren zu erzeugen. Drei BALB / c-Mäuse keine Implantationen wurden als Kontrollen verwendet. BNL 1ME A.7R.1 ist eine murine Leberzellkarzinom-Zelllinie, die durch chemische Umwandlung aus dem murinen nicht-tumor Hepatozyten-Zellinie BNL CL.2 abgeleitet wurde. BNL 1ME A.7R.1 wurde von der American Type Culture Collection (ATCC) erhalten. 1. Pre-Chirurgie <ol><li> Stellen Sie sicher, dass Mäuse, für alle Überlebens Operationen sind gesund. Um sicherzustellen, dass Mäusen gesund sind, inspizieren Anzeichen von Austrocknung durch Ausbeulung der Haut. Verwenden Sie keine Mäuse, die mit jedem Anzeichen von Krankheit oder distress in diesen Experimenten. </li><li> Wiegen Mäusen, um sicherzustellen, sie sind nicht untergewichtig. Sicherzustellen, dass das Gewicht mindestens 16-20 Gramm. </li><li> Vorbereitung 5 x 10 6 BNL 1ME A.7R.1 Maus HCC-Zellen für die Implantation per Maus: <ol><li> Saugen Sie Medien aus einem 10 ml 60% - 70% konfluente Zellkulturschale BNL 1ME A.7R.1 Maus HCC-Zellen. Waschen zweimal mit 5 ml PBS. 2 ml Trypsin, in die Schale und bei 37 ° C in einem befeuchteten Inkubator mit Luft und 5% CO 2 für 5 min. </li><li> Anschließend trypsiniert Pipette 10 ul Zellen in einer manuellen Zählkammer zur Zellzählung unter dem Mikroskop bei einer Vergrößerung von 10x. Zählen Sie die Gesamtzahl der Zellen in den vier großen Eckquadrate gefunden und multiplizieren Sie den Verdünnungsfaktor durch die Gesamtzahl der Zellen. Dann dividieren durch die Anzahl der Quadrate gezählt und mit 10 multiplizieren, 6 für die Zellkonzentration (Zellen pro ml). </li><li> Mit den Programmen, sammeln 5 Millionen Zellen pro Maus in sterile1,5 ml Mikrozentrifugenröhrchen. Beschriften von 1,5 ml Mikrozentrifugenröhrchen. </li></ol></li><li> Resuspendieren der 5 x 10 6 BNL 1ME A.7R.1 Maus HCC-Zellen in 100 ul phosphatgepufferter Salzlösung (PBS). Bewahren Sie diese Zellen auf Eis, bis die Implantation in der Chirurgie. </li><li> Führen Sie Aktivitäten für die Vorbereitung von Mäusen für die Operation, wie Narkose und Haarschneide weg vom sterilen Geräten und Materialien, um eine Kontamination zu vermeiden. </li><li> Induzieren Narkose bei Mäusen durch Inhalation von Isofluran mit einem Isofluran Verdampfer zusammen mit Sauerstoff bei einer konstanten Konzentration Flussrate von 1 l pro min (ca. 2,1%). Anmerkung: Das System ist selbstständig und enthält eine Präzisions-Verdampfer, eine Sauerstoffversorgung und einen Aktivkohlebehälter, die mit einem Atmungskreislauf für Gas / Anästhetikum Abfangen benötigte verknüpft ist. </li><li> Sicherzustellen, dass der Anästhesie geeignet ist, um das Tier unterzogen Schmerzen während der Operation zu verhindern. Führen Zehen Prise und beobachten Tier für nicht-Verantsiveness Anästhesie zu bestätigen. </li><li> Zu dieser Zeit, schalten Sie die Ventilleitung, Siegel an die Box und offen für die Nasenkegel. </li><li> Sobald die Maus betäubt, tragen Sie eine kleine Menge einer Augensalbe auf die Hornhaut als vorbeugende Maßnahme vor dem Austrocknen und Schäden. </li><li> Anschließend bewegen Sie den Tier zum Vorbereitungsbereich, mit dem Nasenkegel ordnungsgemäß aufgestellt und angeschlossen (zur Aufrechterhaltung der Narkose). Bereiten Sie die Website des chirurgischen Einschnitt für die Chirurgie durch Depilation an diesem Vorbereitungsbereich. </li><li> Sicherzustellen, dass der Bereich der Operation ist an einer Stelle frei von anderen Aktivitäten. </li><li> Stellen Sie sicher, dass die Arbeitsoberfläche stabil und angemessen desinfiziert, unverschmutzten und aufgeräumten vor der Operation ist. Legen Sie eine sterile Stück Leinen oder OP-Tray darüber. </li><li> Stellen Sie sicher, dass das Operationsfeld sind nur verfügbar für Personen, die Durchführung der Operation. Stellen Sie sicher, dass die chirurgische Raum wird gereinigt und mit einem geeigneten Reinigungsmittel gewischt und mit einem geeigneten Desi gesprühtctant. </li><li> Stellen Sie sicher, dass es auch von Türen und Fenstern, wie Luftströmungen positioniert kann Staub, was zu Kontamination der Website zu verbreiten. </li><li> Führen Sie die Überlebenszeit der Operation mit sterilen Instrumenten. Entweder genießen Instrumente in einem Desinfektionsmittel nach Empfehlung oder Autoklav-Herstellers. Verwenden Sie sterile Grundversorgung, die betriebsbereit sind. </li><li> Separate Instrumente nach Funktion, um zu verhindern Verunreinigung der sterilen Bereichen. </li><li> Rasur ungefähr 1 Zoll rund um die Seite des Einschnitts (Mittelschnitt), um die Leber des Tieres gelangen. Entfernen der Haare von dem Tier entfernt von der Stelle der Operation. </li><li> Nach der Rasur, reiben Sie die Fläche mit einem seifigen Desinfektionsmittel (betadine chirurgische Macchia) und waschen Sie die überschüssige Desinfektions weg mit sterilem PBS-Lösung. Führen Sie dies mehrmals, mit dem gesamten Prozess Peeling Dauer ca. 5 min. Entfernen und die verwendeten Handschuhe verworfen. </li><li> Danach, um Schutzkleidung zu ändern, wie Surgical Kleid, Gestrüpp top und Gesichtsmaske. Als nächstes desinfizieren Hände mit der richtigen Peeling-Lösung vor, die sich OP-Handschuhe. Anmerkung: Dies ist ein notwendiger Schritt Abwurf und Verunreinigung der Operationsstelle mit möglichen Verunreinigungen zu verhindern. </li></ol> 2. Chirurgie <ol><li> Geben Sie eine externe Wärmequelle für Wärme während der gesamten Dauer der Anästhesie. Das Tier kann eine Unterkühlung zu erleben, weil Anästhesie verursacht Störungen der Thermoregulation; Daher halten die Körpertemperatur. </li><li> Legen Sie die Maus auf dem Rücken in der gesamten Operation. </li><li> Befestigen Sie die Vorderbeine, Hinterbeine und der Schwanz der Maus auf dem OP-Tisch mit Stücken von chirurgische Bänder. </li><li> Stellen Sie eine gerade Linie Einschnitt unmittelbar schlechter als die xyphisternum. </li><li> Verwenden Sie eine sterile selbsthaltender Retraktor, die Leber zu schützen. </li><li> Mit einer Spritze mit einer 20G Nadel langsam und vorsichtig zu injizieren 100 ul PBS, enthaltend 5 × 10 6 BNL 1ME A.7R.1Maus HCC-Zellen in den rechten Leberlappen. </li><li> Nach dem Entfernen der Nadel, tragen Sie eine sterile Wattestäbchen für mindestens 1 min, um eine mögliche Blutung zu stoppen wegen der hohen Durchblutung der Leber. </li><li> Schließen Sie das subkutane Gewebe mit einer absorbierbaren Naht, gefolgt von Hautverschluss mit chirurgischen Klammern. Anschließend reinigen Sie die Wunde noch einmal mit Betadin-Peeling. Anmerkung: Dies wird den Verschluß der Operationswunde zu gewährleisten. </li><li> Subkutan geben 100 ul physiologischer Kochsalzlösung. </li></ol> 3. Post-Chirurgie <ol><li> Unmittelbar nach der Operation, übertragen Sie die Maus, um einen sauberen Käfig mit einem postoperativen Identifikationskarte, um Hausmeister des Maus-Zustand zu informieren. Geben Sie Nahrung und Wasser. Hinweis: Nach unserer Erfahrung, eine Maus, die gerade durchgemacht hat Chirurgie am besten abschneiden, wenn allein mit nassen Nahrung und Wasser für die erste 24-Stunden-Periode nach der Operation untergebracht. </li><li> Halten Sie das Tier warm mit einer Wärmelampe, die Hitze abstrahlen nicht übertraf 38 ºC. USE-Thermometer, um die Temperatur zu messen, bis die Maus vollständig wiederhergestellt wird. </li><li> Haus das Tier in einem Käfig vorzugsweise mit Papierbettwäsche, um Komfort zu gewährleisten. </li><li> Nach anfänglichen Erholung, überwachen das Tier Anzeichen von Unwohlsein, Blutungen, Schmerzen und Leiden. Geben Buprenorphin (0,05 -0,1 mg / kg), um Schmerzen zu lindern. Die Aktivität, Verhalten und Aussehen, sowie Wasser und der Nahrungsaufnahme für ca. 2 h genau zu überwachen. Wenn ambulante, bewegen Sie das Tier wieder in die Gegend für regelmäßige normale Gehäuse von Mäusen und weiterhin auf 6-12 h Intervalle für 24 Stunden nach der Operation zu überwachen. Führen Sie eine Gewichtskontrolle, falls gewünscht. </li><li> Allerdings, wenn das Tier ist mit Problemen erholt, geeignete unterstützende Behandlung Aktionen. Wenn Mäuse sind nicht in der Lage sich zu erholen, mit Menschlichkeit einschläfern Mäusen über CO 2 Ersticken und Genickbruch. Folgen Sie genehmigten Richtlinien des Instituts für die Euthanasie. </li><li> Nach der Operation, überprüfen Sie für die klinische Beweise für HCC in der Regel observab istle als signifikante Reduktion der Körperkondition. Anmerkung: An diesem Punkt wurde ein Primärtumor wahrscheinlich in der Leber entwickelt und metastatischen Ablagerungen wahrscheinlich in der Lunge entwickelt. </li><li> An dieser Stelle opfern alle Mäuse (Versuchs- und Kontroll) im Experiment durch humane Sterbehilfe beteiligt. Betreff die Mäuse zu Erstickung mit Kohlendioxid: sehr langsam setzen Kohlendioxid in die Kammer über einen Zeitraum von 5 bis 10 min. Dies führt dazu, Atemstillstand. </li></ol>

<ol><li>Sheng, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Capture%2C+release+and+culture+of+circulating+tumor+cells+from+pancreatic+cancer+patients+using+an+enhanced+mixing+chip%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+on+a+Chip%22%5BJournal%5D)">Capture, release and culture of circulating tumor cells from pancreatic cancer patients using an enhanced mixing chip.</a> Lab on a Chip. 14, 89-98 (2014).</li>
<li>Ogunwobi, O. O., Liu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+and+prognostic+importance+of+epithelial-mesenchymal+transition+in+liver+cancers%3A+insights+from+experimental+models%5BTitle%5D)+AND+%22Critical+Reviews+in+Oncology%2FHematology%22%5BJournal%5D)">Therapeutic and prognostic importance of epithelial-mesenchymal transition in liver cancers: insights from experimental models.</a> Critical Reviews in Oncology/Hematology. 83, 319-328 (2012).</li>
<li>Ogunwobi, O. O., Puszyk, W., Dong, H. J., Liu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epigenetic+upregulation+of+HGF+and+c-Met+drives+metastasis+in+hepatocellular+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Epigenetic upregulation of HGF and c-Met drives metastasis in hepatocellular carcinoma.</a> PloS One. 8, e63765(2013).</li>
<li>Ogunwobi, O. O., Liu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatocyte+growth+factor+upregulation+promotes+carcinogenesis+and+epithelial-mesenchymal+transition+in+hepatocellular+carcinoma+via+Akt+and+COX-2+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+and+Experimental+Metastasis%22%5BJournal%5D)">Hepatocyte growth factor upregulation promotes carcinogenesis and epithelial-mesenchymal transition in hepatocellular carcinoma via Akt and COX-2 pathways.</a> Clinical and Experimental Metastasis. 28, 721-731 (2011).</li>
<li>Fujiwara, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+animal+model+for+in+vivo+study+of+liver+cancer+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22World+Journal+of+Gastroenterology+%3A+WJG%22%5BJournal%5D)">A novel animal model for in vivo study of liver cancer metastasis.</a> World Journal of Gastroenterology : WJG. 18, 3875-3882 (2012).</li>
<li>Wirtz, D., Konstantopoulos, K., Searson, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+physics+of+cancer%3A+the+role+of+physical+interactions+and+mechanical+forces+in+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Cancer%22%5BJournal%5D)">The physics of cancer: the role of physical interactions and mechanical forces in metastasis.</a> Nature Reviews Cancer. 11, 512-522 (2011).</li>
<li>Heindryckx, F., Colle, I., Van Vlierberghe, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+mouse+models+for+hepatocellular+carcinoma+research%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Experimental+Pathology%22%5BJournal%5D)">Experimental mouse models for hepatocellular carcinoma research.</a> International Journal of Experimental Pathology. 90, 367-386 (2009).</li>
<li>Zhang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+in+vivo+mouse+model+of+metastatic+human+thyroid+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Thyroid+Official+Journal+of+the+American+Thyroid+Association%22%5BJournal%5D)">An in vivo mouse model of metastatic human thyroid cancer.</a> Thyroid Official Journal of the American Thyroid Association. 24, 695-704 (2014).</li>
<li>Menezes, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetically+engineered+mice+as+experimental+tools+to+dissect+the+critical+events+in+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Genetically engineered mice as experimental tools to dissect the critical events in breast cancer.</a> Advances in Cancer Research. 121, 331-382 (2014).</li>
<li>Ogunwobi, O. O., Wang, T., Zhang, L., Liu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cyclooxygenase-2+and+Akt+mediate+multiple+growth-factor-induced+epithelial-mesenchymal+transition+in+human+hepatocellular+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Gastroenterology+and+Hepatology%22%5BJournal%5D)">Cyclooxygenase-2 and Akt mediate multiple growth-factor-induced epithelial-mesenchymal transition in human hepatocellular carcinoma.</a> Journal of Gastroenterology and Hepatology. 27, 566-578 (2012).</li>
<li>Hanahan, D., Weinberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+hallmarks+of+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">The hallmarks of cancer.</a> Cell. 100, 57-70 (2000).</li>
<li>Chambers, A. F., Groom, A. C., MacDonald, I. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissemination+and+growth+of+cancer+cells+in+metastatic+sites%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Cancer%22%5BJournal%5D)">Dissemination and growth of cancer cells in metastatic sites.</a> Nature Reviews Cancer. 2, 563-572 (2002).</li>
<li>Kim, M. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+self-seeding+by+circulating+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Tumor self-seeding by circulating cancer cells.</a> Cell. 139, 1315-1326 (2009).</li>
<li>Stolpe, A., Pantel, K., Sleijfer, S., Terstappen, L. W., den Toonder, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circulating+tumor+cell+isolation+and+diagnostics%3A+toward+routine+clinical+use%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Circulating tumor cell isolation and diagnostics: toward routine clinical use.</a> Cancer Research. 71, 5955-5960 (2011).</li>
<li>Saad, F., Pantel, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+current+role+of+circulating+tumor+cells+in+the+diagnosis+and+management+of+bone+metastases+in+advanced+prostate+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Future+Oncology%22%5BJournal%5D)">The current role of circulating tumor cells in the diagnosis and management of bone metastases in advanced prostate cancer.</a> Future Oncology. 8, 321-331 (2012).</li>
</ol>

Die Autoren erklären, dass sie keine konkurrierenden finanziellen Interessen haben.

In diesem Artikel eine ausführliche Beschreibung des Verfahrens gegeben, dass kürzlich von Ogunwobi und Kollegen der erfolgreichen Etablierung eines orthotopen syngenen Mausmodell der HCC Metastase berichtet (Abbildung 2) 3. Die Entnahmerate von Tumoren, für dieses Verfahren ist im Allgemeinen hoch. Wir haben früher beobachteten eine Tumoraufnahmerate von 100% 3. Allerdings kann die Aufnahmerate variabel, abhängig von der Kompetenz der Prüfer sein. In einer aktuellen Experiment dur...

Hepatozelluläres Karzinom (HCC) ist eine der tödlichsten Krebsarten, mit schlechter Prognose und geringer Lebenserwartung. Fast alle krebsbedingten Todesfälle sind auf die metastasierende Ausbreitung der Krankheit vom Ursprungsorgan auf weitere entfernte Organezurückzuführen 2-6. Die HCC-Progression ist ein komplexer Prozess. Daher kann sich die Möglichkeit, die Tumormikroumgebung, die natürlicherweise in metastasiertem HCC vorkommt, in Tiermodellen zu modellieren, als erfolgreicher und nützlicher Weg erweisen, um relevante Mechanismen beim Menschen aufzudecken. 7Leider sind die Mechanismen der Krebsmetastasierung noch weitgehend unklar. Daher besteht die Notwendigkeit, Tiermodelle zu etablieren, die es uns ermöglichen, die zugrunde liegenden molekularen Mechanismen von Metastasen von Krebserkrankungen wie HCC3,5 aufzuklären.
Mausmodellsysteme sind ein sehr nützlicher Ansatz zur Beschreibung von Mechanismen und zur Bewertung neuartiger Strategien zur Behandlung von metastasierten menschlichen Krebserkrankungen5,8. Die verschiedenen Mausmodellsysteme, die es derzeit gibt, sind ein Beweis für die Bemühungen der Forscher, die Komplexität der Krankheit korrekt abzubilden5,8,9.
Ogunwobi und Kollegen haben kürzlich einen überlebenschirurgischen Ansatz verwendet, um die Etablierung eines neuartigen orthotopen syngenen Mausmodells für die Untersuchung der Metastasierung bei HCC3 zu demonstrieren. Ihre Arbeit etablierte ein "patientenähnliches" Mausmodell, das Merkmale von aggressiven und metastasierten HCCs rekapituliert3. Darüber hinaus zeigten sie, dass dieses Mausmodellsystem zur Untersuchung der Biologie zirkulierender Tumorzellen verwendet werden kann und dass dies das Potenzial birgt, neue Einblicke in die Mechanismen der Krebsmetastasierung zu gewinnen3.
Das Ziel dieser Arbeit ist es, die Methodik detailliert zu beschreiben, die bei der Etablierung dieses "patientenähnlichen" orthotopen syngenen Mausmodells der HCC-Metastasierung3 verwendet wurde. Es wird die Methodik beschrieben, wie BNL 1ME A.7R.1 Maus-HCC-Zellen direkt in die Leber (das Ursprungsorgan) des Inzucht-Wildtyp-Immun-kompetenten Labormausstamms BALB/c3 mittels Überlebenschirurgie implantiert werden können. Im Gegensatz zu anderen Maus-Xenotransplantat-Tumormodellen, bei denen menschliche Tumorzellen in immundefiziente Mäuse implantiert werden, ist dieses System syngen und eignet sich daher für die Untersuchung der Rolle des Immunsystems bei der Tumormetastasierung3,5,8. Dieser Ansatz wird wahrscheinlich breite Anwendung finden, um die Mechanismen der Metastasierung bei Krebserkrankungen solider Organe zu untersuchen.

<table><tbody><tr><td>Mikro-Präparierpinzette&nbsp;</td><td>Roboz</td><td>(RS-5040)</td><td>Spitze 0,20 x 0,12 mm</td></tr><tr><td>Graefe Mikro-Präparierzange, gezackte, gebogene Spitze</td><td>Roboz</td><td>(RS-5111)</td><td>1 x 2 Zähne, gebogene Spitze Breite 0,6 mm</td></tr><tr><td>Mikro-Präparierretraktor-Agricola (3 x 3 Zinken)</td><td>Roboz</td><td>(RS-6501)</td><td>Stumpf 3 x 3 Zinken, Tiefe 4 mm, Spreizung 25 mm</td></tr><tr><td>Mikro-Präparierzange-Goldstein (3 x 3 Zinken)</td><td>Roboz</td><td>(RS-6503)</td><td>Stumpf, 3 x 3 Zinken, Tiefe 4 mm, Spreizung 19 mm</td></tr><tr><td>Jameson Messschieber (misst Tumore)</td><td>Roboz</td><td>(RS-6466)</td><td>80 mm/3 Zoll Skala, verchromt&nbsp;</td></tr><tr><td>Mikro-Präparierschere, große Ringschere, gerade und scharfe</td><td>Roboz</td><td>(RS-5852)</td><td>23 mm Klingen, Länge 4 Zoll, flache Schäfte und große</td></tr><tr><td>Ringe Skalpell mit Klingen, für filigrane Präpariereingriffe</td><td>Roboz</td><td>(RS-9861-36)</td><td></td></tr><tr><td>Skalpellgriff&nbsp;</td><td>Roboz</td> <td>(RS-9884)</td> <td>Solid</td></tr><tr><td>Littauer Stitch Sissors</td><td>Roboz</td> <td>(RS-7074)</td> <td>Länge 4,5 Zoll</td></tr><tr><td>Brauner Nadelhalter, zum einfachen Fadenbinden</td><td>Roboz</td> <td>(RS-7960)</td> <td>Konvexer Kiefer, feine Zacken</td></tr><tr><td>Reflex 7MM Wundclips mit Reflex 7 Clip Applier</td><td>Roboz</td> <td>(RS-9262)</td> <td>sichere, sichere alternative Methode zum Wundverschluss</td></tr><tr><td>Instrumententablett und Deckel</td><td>Roboz</td><td>RT-1350S</td><td></td></tr><tr><td>Mini-Clipper mit abnehmbarer Klinge</td><td>Roboz</td> <td>(RS-5903)</td><td></td></tr><tr><td>Germinator 500 (der Keim-Terminator) Trockensterilisator</td><td>Roboz</td><td>Ds-400, Ds-401, DS-501</td><td>Für die schnelle Dekontamination von Mikro-Präparierinstrumenten. &nbsp; Die Instrumente dekontaminieren innerhalb von 15 Sekunden.</td></tr><tr><td>Mikroinjektionsnadeln</td><td>VWR</td><td>BD305125</td><td>25G Nadel</td></tr></tbody></table>

ein &quot;patient-like&quot; orthotope syngene maus-modell der leberzellkarzinom metastasen

A "Patient-Like" Orthotopic Syngeneic Mouse Model of Hepatocellular Carcinoma Metastasis

Die Mehrzahl der krebsbedingten Todesfälle wird durch die Metastasierung des Krebses und nicht durch den Primärtumor selbst verursacht. Die zugrundeliegenden Mechanismen der Krebsmetastasierung sind jedoch noch unklar. Tiermodelle sind unerlässlich, um die Mechanismen aufzuklären und neue Strategien zur Behandlung von metastasierenden Krebserkrankungen zu evaluieren. In dieser Arbeit wird eine detaillierte Beschreibung eines "patientenähnlichen" orthotopen syngenen Mausmodells zur Erforschung der Mechanismen der Metastasierung von Tumoren solider Organe gegeben. Die überlebenschirurgische Implantation von hepatozellulären Karzinomzellen der BNL 1ME A.7R.1 Maus direkt in die Leber (das Ursprungsorgan) des Inzucht-Wildtyp-immunkompetenten Labormausstamms BALB/c wird beschrieben. Der Erfolg und die Reproduzierbarkeit dieser Methodik empfehlen einen breiten Einsatz bei der Aufklärung der biologischen Mechanismen der Metastasierung von Krebs in soliden Organen.

Die Leber von Balb / c-Mäuse wurden mit 5 × 10 6 BNL 1ME A.7R.1 Maus HCC-Zellen implantiert. Klinische Beweise für HCC Entwicklung zu beobachten war 63 Tage nach der Operation. Demzufolge wurden die Mäuse auf humane Weise eingeschläfert. Autopsie wurde auf die eingeschläfert Mäusen durchgeführt. Die Lunge und Leber wurden reseziert und eine sorgfältige Brutto Prüfung durchgeführt, um makroskopischen Tumoren zu identifizieren. In einer Maus wurde ein oberflächlicher Tumor auf der Oberfläche der Leber mit irgen...

Die Metastasierung von Krebs ist die Hauptursache der durch Krebs verursachten Todesfälle. Wir bieten eine eingehende Beschreibung der unser Überleben Chirurgie Methodik für die Festlegung eines &quot;Patienten-like&quot; orthotopen syngenen Mausmodellsystem zur Untersuchung der Mechanismen der Metastasierung bei soliden Organtumoren.

Ein &quot;Patient-Like&quot; Orthotope Syngene Maus-Modell der Leberzellkarzinom Metastasen

The majority of cancer-related deaths are caused by the metastasis of the cancer rather than the primary tumor itself. Yet, the underlying mechanisms of ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens besteht darin, ein patientenähnliches orthotopisches syngenes Mausmodell-System zur Untersuchung der Metastasemechanismen beim hepatozellulären Karzinom zu etablieren. Dies wird erreicht, indem zunächst Maushepatozytenkarzinomzellen für die Implantation vorbereitet werden. Im zweiten Schritt wird der Bauch einer empfängenden syngenetischen Maus geöffnet und die Zellen vorsichtig in das rechte Leberlappen injiziert.Letztlich empfiehlt sich der Erfolg und die Reproduzierbarkeit dieser Methodik für eine breite Anwendung bei der Aufklärung der biologischen Mechanismen der hepatozellulären Karzinom-Metastasierung. Der Hauptvorteil dieser Technik gegenüber bestehenden Techniken wie Maus-Xenotransplantat-Tumor-Modellen besteht darin, dass unser syn-genetisches Tumormodell die Untersuchung der Rolle der Immunantwort bei der Tumormetastasierung ermöglicht. Michelle Nadu, eine Studentin aus unserem Labor, wird mir bei der Demonstration dieses Verfahrens assistieren. Um die Zellen für die Implantation vorzubereiten, spülen Sie eine 60 bis 70 % konfluente Kultur von hepatozellulären Karzinomzellen zwei Mal mit je fünf Milliliter PBS aus.Inkubieren Sie die Zellkultur mit zwei Milliliter Trypsin bei 37 Grad Celsius. Zählen Sie nach fünf Minuten die Zellen und verdünnen Sie sie auf fünf mal 10 hoch fünf Zellen pro Milliliter PBS. Überführen Sie danach 100 Mikroliter-Aliquots der Zellen in je ein steriles 1,5-Milliliter-Mikrozentrifugenröhrchen pro Maus und stellen Sie die Zellen auf Eis.Bevor Sie mit dem chirurgischen Eingriff beginnen, überprüfen Sie die korrekte Anästhesietiefe durch Zehenquetschung. Tragen Sie Augensalbe auf die Augen einer gesunden erwachsenen bsy-Maus mit einem Gewicht von 16 bis 20 Gramm auf und rasieren Sie einen Bereich von etwa einem Zoll Durchmesser um die Bauchmitte des Tieres. Anschließend ziehen Sie ein Paar Latexhandschuhe an und waschen die freigelegte Haut mehrmals mit einem desinfizierenden Seifenreiniger, gefolgt von einer sterilen PBS-Spülung für etwa fünf Minuten.Nach der Vorbereitung der Haut entsorgen Sie die Handschuhe und ziehen die geeignete persönliche Schutzausrüstung an. Stellen Sie während des Eingriffs eine externe Wärmequelle bereit, um eine anästhetische Hypothermie zu verhindern, und befestigen Sie dann chirurgisches Klebeband an den Gliedmaßen und am Schwanz des Tieres, um die Maus in Rückenlage zu fixieren. Anschließend führen Sie einen geraden Schnitt unmittelbar unterhalb des Xiphoidfortsatzes des Sternums durch und öffnen den Bauchraum mit einem sterilen selbsthaltenden chirurgischen Retraktor.Wenn die Leber sichtbar ist, saugen Sie eine Portion der Zellen in eine Eins-Milliliter-Spritze mit einer 20-Gauge-Nadel auf und injizieren langsam und vorsichtig alle 100 Mikroliter der hepatzellulären Karzinomzellen in das rechte Leberlappen. Nach dem Entfernen der Nadel wird mindestens eine Minute lang ein steriler Tupfer auf die Einstichstelle gedrückt, um eventuelle Blutungen zu stoppen. Anschließend wird das subkutane Gewebe mit einer resorbierbaren Naht verschlossen, gefolgt von der Verschließung der Haut.Reinigen Sie die Wunde mit einem weiteren Desinfektionsmittel und verabreichen Sie subkutan 100 Mikroliter physiologische Kochsalzlösung. Überführen Sie die Maus anschließend unverzüglich nach der Operation in einen sauberen Käfig ohne Artgenossen und mit Papierunterlage für mindestens 24 Stunden. In diese BSY-Mauslebern wurden fünfmal 10 hoch 6 ME.A-Maus-hepatozelluläre Karzinomzellen wie gerade gezeigt implantiert.Klinische Anzeichen für die Entwicklung eines hepatozellulären Karzinoms waren 63 Tage später sichtbar, wie durch den Pfeil bei einer Maus angezeigt. Auf der Oberfläche der Leber war ein oberflächlicher Tumor mit einigen Verbindungen zur Bauchwand zu beobachten. Die Lungen dieser Maus wiesen ebenfalls eine abnormale Morphologie auf und zeigten Bereiche sichtbarer hämorrhagischer Nekrose.Bei einer zweiten Maus zeigte sich die Leber makroskopisch auffällig verändert, wobei die Veränderung stark einem oberflächlichen Tumor ähnelte, wie es bei der erwarteten Kontrolle der Fall ist. Mäuse, die nicht implantiert wurden, entwickelten weder in der Leber noch in der Lunge Tumoren. Sobald die Technik beherrscht ist, kann dieses orthotopische syn-genetische Mausmodell eine gute Grundlage bieten, um die biologischen Mechanismen der Metastasierung und des hepatzellulären Karzinoms aufzuklären.

a-patient-like-orthotopic-syngeneic-mouse-model-hepatocellular

Research

Forschung

JoVE Journal

Medicine

Medizin

Zwei Techniken können verwendet werden, um dieses Modell zu etablieren werden: Injektion einer Krebszelle Suspension in den Blinddarm Wand oder Transplantation von einem Stück des subkutanen Tumor auf den Blinddarm. Dieses Modell ist nützlich für die Untersuchung der natürlichen Entwicklung von Darmkrebs und Erprobung neuer Therapeutika gegen den Darmkrebs.

Orthotopen Mausmodell der Darmkrebs-

Dieses Modell der orthotopen menschlichen Prostatakrebs ermöglicht die Quantifizierung der Tumorgröße, zirkulierenden Tumorzellen und die Bildung von Metastasen in unterschiedlichen Lungen. Wie Zellen müssen das primäre Organ zu entkommen, in die Blutbahn, und implantieren in einem sekundären Standort dieses Modell effektiv rekapituliert das Szenario in den Menschen.

Ein orthotopen Mausmodell der menschlichen Prostatakrebs-Metastasen

Eine präklinische, Mausmodell der Lebermetastasen über eine hemispleen Injektionstechnik durchgeführt.

Einer präklinischen Mausmodell der Lebermetastasen

Eine orthotope Brustkrebs primären Tumormodell und die operative Entfernung des Primärtumors Maus Lebensdauer zu verlängern spontane Metastasierung zu erzeugen, werden beschrieben. Das Tumorwachstum und Progression werden überwacht und durch Luciferase Fluoreszenzbildgebung quantifiziert.

Ein orthotopen Mausmodell des Spontan Metastasierung von Brustkrebs

Prostatakrebs ist die zweithäufigste krebsbedingte Todesursache in den Vereinigten Staaten. Ein orthotopes Krebsmodell bietet einen nützlichen Ansatz, um die Biologie des Prostatakarzinoms zu verstehen und die Wirksamkeit von Therapieschemata zu bewerten. Dieses Protokoll beschreibt detaillierte Schritte, die zur Etablierung eines orthotopen Prostatakrebs-Mausmodells erforderlich sind.

Präklinische Orthotopische Mausmodell der menschlichen Prostata-Krebs

Umsetzung eines orthotopischen Modell des Nierenzellkarzinoms in immunkompetenten Mäusen liefert den Ermittler ein klinisch relevantes System durch das Vorhandensein einer primären Nierentumor und Lungenmetastasen im gleichen Tiere definiert. Dieses System kann verwendet werden , um präklinisch eine Vielzahl von Behandlungen in vivo zu testen.

Ein Syngenetische Maus-Modell von metastasierendem Nierenzellkarzinom für Quantitative und Longitudinal Beurteilung der vorklinischen Therapien

Hier beschreiben wir die Entwicklung eines klinisch relevanten murinen Modells von Leberkrebs, das die typischen Immunmerkmale von hepatozellulärem Krebs (HCC) rekapituliert.

Ein onkogenes Hepatozyten-induziertes orthotopisches Mausmodell von hepatozellulärem Krebs, der bei der Einstellung von Leberentzündungen und Fibrose entsteht

Orthotopische humane Leber metastasierenuvealmelanom xenograft MausModelle wurden mit chirurgischen orthotopischen Implantationstechniken mit Patienten-abgeleiteten Tumorstück und Nadelinjektionstechniken mit kultivierten menschlichen uvealen Melanom-Zelllinien erstellt.

Generierung einer Leber orthotopischen Human Enuveal Melanom Xenograft Plattform bei immundefizienten Mäusen

Hier stellen wir ein Protokoll zur Erstellung orthotoper hepatozellulärer Karzinom-Xenotransplantate mit und ohne Leberarterienligatur vor und führen eine nicht-invasive Positronen-Emissions-Tomographie (PET)-Bildgebung der Tumorhypoxie unter Verwendung von [18 F]Fluoromisonidazol ([18 F]FMISO) und [18 F]Fluordesoxyglucose ([18F]FDG) durch.

Nicht-invasive PET/MR-Bildgebung in einem orthotopen Mausmodell des hepatozellulären Karzinoms

Syngene orthotope Allotransplantate der Maus des duktalen Adenokarzinoms der Bauchspeicheldrüse (PDAC) rekapitulieren die Biologie, die Phänotypen und das therapeutische Ansprechen von Krankheitssubtypen. Aufgrund ihrer schnellen, reproduzierbaren Tumorprogression sind sie in präklinischen Studien weit verbreitet. In dieser Arbeit zeigen wir gängige Praktiken zur Generierung dieser Modelle, indem wir syngene murine PDAC-Kulturen in die Bauchspeicheldrüse injizieren.

Syngene orthotope Allotransplantate der Maus zur Modellierung von Bauchspeicheldrüsenkrebs

Erfahren Sie die orthotope syngene Maus-Modellierung für Leberzellkarzinom-Metastasen. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung immunologischer Tumorinteraktionen mit hoher Relevanz für die Onkologie.

Ein "Patient-Like" Orthotope Syngene Maus-Modell der Leberzellkarzinom Metastasen

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