Name: Denver Papillen Protokoll für objektive Analyse der pilzförmige Papillen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-06-08T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 50 s
Description: Lernen Sie das Denver-Papillen-Protokoll zur objektiven Analyse pilzförmiger Papillen auf der Zunge. Diese standardisierte Methode mit dichotomen Schlüssel reduziert Subjektivität und ermöglicht verlässliche Dichtemessungen.

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Diese Arbeit wurde teilweise durch Science Education Partnership Award (SEPA) R25 RR025066 zwischen 2008 bis 2012 von den National Institutes of Health und der National Center for Research Resources finanziert. Wir danken Ihnen, den Kollegen in den Geschmacksfeld für nachdenkliche Erörterung der Literatur, unsere Ergebnisse und Rückmeldungen über die Verwendung der DPP in verschiedenen Laborszenarien: John Hayes, Sue Coldwell, Paul Breslin, Carla Schubert. Vielen Dank auch an Führung im Denver Museum of Nature &amp; Science und das Personal zur Unterstützung der Bürger der Wissenschaft innerhalb der Genetik der Taste Lab innerhalb Expedition Gesundheit. Schließlich, ich danke Ihnen für alle unsere ehrenamtliche Bürger Wissenschaftler für ihre Zeit und das Engagement für die Entwicklung und die dieses Protokoll verwenden, einschließlich: Bären Aragon, Mike Archer, Su Ataman, Michael Bagley, A&#39;nette Bertrand, Diana Boyles, Wendy Covert, Sasha Dooley , Patty Drever, Jessica Ern, Laura Harmacek, Sean Hibbard, Joyce Hutchens, Matt Joo, Leta Keane, Willem Leenhouts, Stephania Lukjan, Ashley Matthews, Mike Mauser, Stephanie Miller, Hallie Morgan-Rodriguez, Griffin Scherma, Alyssa Schickedanz, Terri Simon, Dylan Thomas, Rudy Torres, Tyler Wilson, Diane Woltkamp.

Die in dieser Studie erzielte Bilder wurden als Teil einer größeren Studie Geschmack in der Genetik der Taste Lab im Denver Museum of Nature &amp; Science (das Museum) 10 durchgeführt gesammelt. Themen der größeren Studie waren Museumsbesucher (n = 1195) im Alter von 18 bis 93. Während Themen aus sechs der sieben Kontinente kamen, waren die Teilnehmer vor allem europäischer Abstammung. Daten jedes Thema wurde in einem 30 Minuten Labor-Sitzung gesammelt. The Western Institutional Review Board genehmigt das Protokoll, informiert schriftliche Einwilligung erteilt wurde und Untertanen freiwillig ihre Zeit und wurden nicht für ihre Teilnahme an der Studie kompensiert. 1. Data Collection <ol><li> Bilderfassung <ol><li> Themen anzeigen eine Fotografie, wie sie sich darstellen (Abbildung 1), und was das aufgenommene Bild aussehen wird. <img alt="Abbildung 1" src="/files/ftp_upload/52860/52860fig1.jpg" /> Abbildung 1: Bildaufnahme Pose. </strong&gt; Dies ist das Foto, um Themen in der Got Lab, um vollständig für ihre Zunge Foto Pose gezeigt. </li><li> Direkter Themen, ihre Zunge mit einem Papierhandtuch trocken und lassen Sie die Zunge aus dem Mund herausragt. </li><li> Ca. 3 ml blauer Lebensmittelfarbstoff in einer Konzentration 1.36 bis zum Scheitelpunkt der Zunge mit Hilfe einer sterilen, Rayon Applikator mit einem 1-Zoll-Spitze. Haben Themen zurückkehren Zunge, den Mund und schlucken, um überschüssigen Farbstoff zu entfernen. </li><li> Haben Themen stellen sich, wie in Abbildung 1 dargestellt ist, mit ihren Kinn auf ihre Hände und Ellbogen auf einen Tisch für Stabilität gestützt. Direkter Themen, ihre Zunge einen komfortablen Abstand zu verlängern und befestigen Sie sie vorsichtig zwischen den Zähnen. </li><li> Erfüllen, ist eine 2,5 cm großes Stück Filterpapier mit einem Durchmesser von 10 mm kreisförmigen Ausschnitt in tanzt bis zur Spitze der vorderen von der linken Seite der Zunge neben der Mittellinie (siehe Abbildung 1). </li><li> Nehmen Sie sich mindestens drei Nahaufnahmen der Zunge, capturing die gesamte 10 mm kreisförmigen Ausschnitt zu Visualisierung aller FP in diesem Gebiet zu gewährleisten. Verwenden Sie die Makro-Einstellung eines hochwertigen digitalen Punkt und schießen Kamera auf einem Stativ für Stabilität befestigt. <ol><li> Zoom hinein in dem Maße, dass die gesamte Aussparung, während noch in der Kamera empfohlen Zoombereich fotografiert. Sicherzustellen, daß die Ebene des Objektivs parallel zur Ebene der Zunge, und dass die Aussparung kreisförmig erscheint im Bild anstatt länglich. Bewertung Fotos, um sicherzustellen, sie sind von hoher Qualität und nützlich für die Zählung. </li></ol></li></ol></li><li> Bildauswahl und Vorbereitung <ol><li> Laden Sie die Fotos auf den Computer. </li><li> Der Bilder desselben Motivs der Zunge aufgenommen, wählen Sie nur eine für die weitere Analyse auf der Grundlage klarer Definition von Strukturen auf der Zunge an der höchsten Zoom und der mindestens verzerrte Winkel so die Zunge ist breit und flach in Richtung der Kamera. </li><li> Öffnen Sie den ausgewählten Rohbild in der Open-Source-software, ImageJ. Klicken Sie auf &quot;Plugins&quot; und im Dropdown-Menü zu blättern und &quot;Analysieren&quot; und klicken Sie auf &quot;Zellzähler.&quot; Wenn der Zellenzähler wird, klicken Sie &quot;Initialisieren&quot;, um das Bild an die Zellzähler verbinden. Hinweis: Hier verwenden ImageJ 1,45 sec mit Java 1.6.0_10 32-Bit-Version. <ol><li> Verwenden Sie eine Standardvergrößerung von 50% für die Kohärenz zwischen Torschützen und für den Einsatz in den nachfolgenden Schritten zu punkten FP. Verschieben Sie das Bild auf der linken Seite des Bildschirms neben dem Zellzähler. Dieses Bild wird als Kopie A (siehe Abbildung 2, linke Seite des Bildschirms) bezeichnet werden. </li></ol></li></ol></li><li> Öffnen Sie eine zweite Kopie des rohen Bild (Kopie B) zum Messen der Durchmesser der Papillen quantifiziert. Vergrößern und Verkleinern, um den Vorlieben des einzelnen Torschützenkönig in der gesamten Bewertungsprozess benötigt. Bewegen Sie diese Kopie auf der rechten Seite des Bildschirms, so die beiden Kopien sind nicht zufällig durcheinander. (Siehe Abbildung 2, rechte SeiteBildschirm) </li><li> Klicken Sie auf das Werkzeug Linie. Verwenden Kopie B, vergrößern so viel wie nötig, um genau zu zeichnen einen Durchmesser über der 10 mm Innenkreis des Filterpapiers in einem beliebigen Winkel und klicken Sie auf &quot;Analysieren&quot; und &quot;Set-Skala&quot;. Füllen Sie das &quot;bekannte Strecke&quot; sein &quot;10 . &quot;Stellen Sie sicher durch die Messung eine alternative Winkel korrekt die Waage und sorgen für die Durchmesserbereich zwischen 9,8 bis 10,2 mm. Wenn es nicht ist, wiederholen Sie diesen Schritt. </li></ol><img alt="Figur 2" src="/files/ftp_upload/52860/52860fig2.jpg" /> Abbildung 2: Kopieren Sie A und B. Copy Copy A (links) mit dem Zellzähler Fenster verknüpft und bleibt mit 50% Vergrößerung auf Konsistenz von Torschützenkönig, um Torschützenkönig, während Kopie B (rechts) kann auf die Vorlieben des Einzelnen vergrößert werden. 2. Scoring FP Mit der Denver Papillen Protocol Dichotome Key <ol><li> Für jeden Kandidaten Papilla, verwenden Sie die folgende dichotome Schlüssel (Schritt 2,2-2,5) detailliert die Kriterien zu bestimmen, ob es sich um eine FP. Beziehen sich auf eine visuelle Papillen, die als FP klassifiziert und für diejenigen, die bei jedem Schritt in dem Verfahren zurückgewiesen werden, Figur 3. <img alt="Figur 3" src="/files/ftp_upload/52860/52860fig3.jpg" /> Abbildung 3: FP vs. Abgelehnt Papillen. 3a ist eine Zunge mit mehreren Qualifikations FP während 3b-3e sind Bereiche, die jede Regel verstoßen eingekreist. (3b) Bereich amorph; (3c) Papillen sind zu klein; 3d) Papille ist blau im Vergleich zu den umgebenden, (3e) Papille ausgespart im Vergleich zu denen um ihn herum. </li><li> Form <ol><li> Bestimmen Sie, ob der Kandidat Papille amorph (formlos). Bei 50% Zoom sehen, ob es eine allgemein anerkannte geometrische Form (oval, quaderförmig, rund). </li><li> Wenn es eine geometrische Form (siehe Abbildung 3a), fahren Sie mit Schritt 2.3. </li><li> Wenn there keine geometrische Form (siehe Abbildung 3b), gehen Sie auf die Zellenzähler-Fenster und klicken Sie auf &quot;Typ 1&quot; auf Kopie A (50% Zoom), klicken Sie auf die Kandidaten Papille zu markieren Sie ihn als amorphe und nicht ein FP. Mit einem Klick auf Typen 1-4 in diesem und den folgenden Schritten können Torschützen zu wissen, dass sie alle Bewerber Papillen angesprochen und kategorisiert, welche Regel verletzt wurde, wenn die Zurückweisung einer Struktur, die in der Diskussion in Schritt 2.7.2 helfen werden. </li></ol></li><li> Farbe <ol><li> Beziehen sich auf eine auf 50% zoomen kopieren und zu bestimmen, ob es einen Farbunterscheidung über die Oberfläche der Zunge. Wenn ja, weiter zum nächsten 2.3.2. Wenn nicht, verwenden Sie nicht die Farbe als entscheidender Faktor; fahren Sie mit Schritt 2.4. </li><li> Bestimmen Sie, ob der Kandidat Papille ist leichter als das Gewebe oder Papillen umgibt (siehe Abbildung 3a). Wenn ein Teil des Kandidaten Papille hat rosa geblieben oder gebeizt leichter, fahren Sie mit Schritt 2.4. </li><li> Wenn der Kandidat Papille ist blau und die umgebenden PapillenFeuerzeug (siehe Abbildung 3c), gehen Sie auf die Zellenzähler-Fenster und klicken Sie auf &quot;Typ 2&quot; auf der Zellzähler. Am Kopie A, klicken Sie auf die Kandidaten Als zu blau und nicht eine FP. </li></ol></li><li> Größe <ol><li> Verwenden Kopie B, vergrößern, um den Abstand in dem man bequem die Umrisse des Kandidaten Papille. </li><li> Klicken Sie auf das Zeilenwerkzeug und messen in der längsten Abmessung des Kandidaten Papille. Klicken Sie auf &quot;Analysieren&quot; und dann &quot;Maßnahme&quot;. Wenn die gemessene Länge beträgt 0,5 mm oder mehr (siehe Abbildung 3a), fahren Sie mit Schritt 2.5. </li><li> Wenn die gemessene Länge 0.499 mm oder weniger, noch einmal zu messen, um die Genauigkeit zu gewährleisten. Wenn es noch 0,499 mm oder weniger (siehe B ild 3d), klicken Sie auf &quot;Typ 3&quot; auf der Zellzähler-Fenster und auf Kopie A, klicken Sie auf die Kandidaten Papille zu markieren Sie ihn als zu klein und kein FP. </li></ol></li><li> Rezession <ol><li> Verwenden Kopie A, zu beurteilen, ob der Kandidat Papille entweder Uniform, die eright mit dem Rest der Zunge oder erhöht. Wenn die Papille in einem Spalt bestimmen, verglichen mit den anderen Strukturen in den Spalt, nicht die Oberfläche der Zunge seiner Höhe. Wenn der Papille niedriger als die umgebenden Papillen ist (siehe Abbildung 3e), verwenden Sie &quot;Type 4&quot; und auf Kopie A, klicken Sie auf die Kandidaten Papille um sie zu markieren und als Einbau kein FP. </li><li> Wenn der Kandidat Papille entweder von gleichmäßiger Höhe mit dem Rest der Zunge oder erhöhten (siehe Abbildung 3a), verwenden Sie &quot;Typ 5&quot; es zu klicken, und markieren Sie, dass dies ein FP. Diese Art 5 Gesamt ist die rohe FP-Score. Die Kopien an dieser Stelle nicht schließen, wie ImageJ nicht auf Kopie A. speichern Sie die Werte auf der Zellzähler noch die farbigen Markierungen von Typen 1-5 </li></ol></li><li> Saving Copy A <ol><li> Notieren Sie sich in Notebook raw FP-Score. </li><li> Auf der Zellenzähler-Fenster auf &quot;Bild exportieren&quot;. Speichern Sie mit der gewünschten Namenssystem des Labors. Dadurch wird die Öffnung der Polizist ermöglicheny A in die Zukunft, um die farbigen Markierungen von Typen 1-5 zu halten. Es wird nicht speichern Sie die raw FP-Score. </li></ol></li><li> Qualitätskontrolle <ol><li> Ergebnis jedes Foto von zwei einzelnen Torschützen und vergleichen Sie 7. </li><li> Wenn die höhere FP Rohwert innerhalb von 10% der unteren FP Rohwert, der Mittelwert der beiden Noten zusammen für einen Konsens FP-Score. Wenn die beiden FP Rohwerte sich um mehr als 10%, ziehen beide erzielte Fotos auf den Bildschirm. <ol><li> Verwenden Zählertypen 1-4, um auf einem endgültigen Konsens Punktzahl in die Diskussion über Abweichungen unterstützen und beraten. Wird kein Konsens in der Diskussion zu erreichen, machen Sie eine Pause von Scoring. Zu einem späteren Zeitpunkt, rescore das Bild und diskutieren. Wenn ein Konsens noch nicht erreicht werden kann, ziehen Sie in einem Dritt traf. Bitten Sie sie, um das Bild und den Dialog mit den anderen beiden punkten. </li></ol></li></ol></li></ol> 3. Ausbildung Torschützenkönige zu DPP Verwenden <ol><li> Hintergrund für die Ausbildung <ol><li> Haben zwei Torschützen zählen eine Vielzahl von Bildern,individuell Scoring und verleihen regelmäßig, um sicherzustellen, dass sie mit den gleichen Kriterien wurden. Nur wenn einzelne zählt durchweg innerhalb von 10% voneinander für jeweils die Bilder, wenn erzielte war die Methode (oben abgeschlossen) als akzeptabel angesehen und bezeichnet DPP. </li><li> Wählen Sie 15 offizielle Bilder und 15 Trainingsbilder (Supplemental Figuren 2-17) in der angegebenen Reihenfolge zu punkten. Wenn ein Bild wurde während der Auswahl als unzählige, überspringen Sie das Bild und wählen nächstfolgende Bild. Hinweis: Diese Bilder unterscheiden sich in Qualität und Größe, wie sie gewählt wurden, während das Lab noch die Beherrschung der richtigen Technik Fotografie. Einer der ausgewählten Bilder wurde durch diese Primär Zählvorgang als unzählige, wurde aber in links, um sicherzustellen, dass Torschützen konnten zeigen, dass Anruf, wenn nötig. Daher gibt es 16 Bilder zu Auszubildende gegeben, obwohl nur 15 erzielte Bilder. </li><li> Verwendung DPP haben die oben genannten Torschützen zählen die 15 Trainingsbilder und ein KonsensGäste für jede. </li><li> Geben Sie die 15 Auszubildenden offizielle Bilder und bitten, auswerten Miller &amp; Reedy, um eine Basis zu schaffen. Rekordergebnisse. Führen Sie eine Gruppentraining, das Schritt 3.2 gefolgt. Sobald Schritt 3.2 abgeschlossen wurde, haben die Torschützenliste stand es 15 offizielle Bilder wieder und nehmen ihre Noten. </li></ol></li><li> Schulung Nachfolgende Torschützenkönige auf DPP <ol><li> Geben Ausbildung Torschützen des ersten Bildes Ausbildung und zeigen DPP für einige Papillen zu diesem Bild. Diskutieren Begründung für die Auswahl oder Ablehnung jeder Papille als FP. Ermöglichen Auszubildenden weiter praktizieren Scoring für den Rest des Foto und verleihen mit dem Konsens Nummer (der Got Lab Konsens Anzahl und Art 1-5 Marker, siehe Zusatz Abbildung 1). Dieses Foto diskutieren Abweichungen unabhängig von der 10%, um das Verständnis der DPP gewährleisten. </li><li> Geben nachfolgenden Torschützen des zweiten Bildausbildungs ​​und sie auswerten DPP. </li><li> Wenn der Auszubildende raw FP-Score ist innerhalb von zehnProzent der etablierten Konsens zählen von Abschnitt 3.1.3., ermöglichen Auszubildenden bis zum nächsten Bild zu bewegen und wiederholen Sie die Schritte. </li><li> Wenn die Gäste außerhalb der Zehn-Prozent-Bereich, verwenden des Auszubildenden farbigen Markierungen, die Typen 1-5, zu verstehen und zu identifizieren, die Inkonsistenz und dann adressieren abweichenden Verständnis der DPP. </li><li> Geben Sie dem Praktikanten die Möglichkeit, die Bild rescore und überprüfen Sie die neue Partitur noch einmal. Wenn dies gelingt, auf das nächste Bild bewegt Trainee bis alle Bilder fertig sind. </li></ol></li></ol>

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</ol>

Die Autoren erklären, dass sie keine konkurrierenden finanziellen Interessen.

Verwendung DPP, die Varianz innerhalb image zählt über unabhängige Torschützen und zählt innerhalb Torschützenkönig deutlich zurückgegangen. Während dieses Verfahren macht visuelle FP Dichteanalyse ohne Videomikroskopie weniger subjektiv ist anzumerken, dass dieses Verfahren nur Partituren FP werden. DPP kann nicht garantieren, dass Strukturen wie FP eingestuft haben Geschmack Poren und sind daher Geschmackspapillen, noch, dass die zählt, sind repräsentativ für echte Geschmacksknospe Dichte 20,23 .Die Natur dieser Methode ist, dass sie feststellt, Sicherheit durch Konsistenz und Präzision; jedoch kann es sein Vorspannen ergibt eine einheitliche Richtung. Um die Genauigkeit im Vergleich zu anderen Methoden zu testen mit einem wahre Maß Geschmacksknospe Dichte (zB Videomikroskopie), würde den Rahmen dieses study.However erstrecken, durch die Charakterisierung der Morphologie der FP strenger und die Schaffung einer dichotomen Schlüssel, diese Methode richtet Miller &amp; Reedy die Ladung auf dem Gebiet, dass weitere Charakterisierung von FPmuss, um einen Konsens über ihre Morphologie und Quantifizierung 2 müssen durchgeführt werden. Außerdem gaben sie an, dass diese Charakterisierung könnten &quot;einige der Unterschiede zwischen den Themen zu klären und einige der unterschiedlichen Ergebnisse erklären unter Ermittler 2.&quot; Durch die Bereitstellung einer einheitlichen Methode zur Quantifizierung, viele der Abweichungen über die Rolle der FP in Geschmack und ernährungs Forschung kann behoben werden. Die dichotomen Schlüssel kann für die unterschiedlichen Bildaufnahmetechniken angepasst werden. Die bekannten Abstand zur Messskala kann leicht an die in jedem Labor und Rezession verwendet werden, können ausgeschlossen werden, wenn Frischhaltefolie oder Glas wurden über die Zunge für die Bilderfassung platziert Durchmesser eingestellt werden. In der Got Lab wurde festgestellt, dass die neutrale Zunge die beste Definition der Papillen. Dies kann aufgrund der Menge an Licht in der Lab, die Frischhaltefolie oder Glas verursacht, um Licht in die Kamera zu reflektieren die Schaffung einer Blendung, die Esel gemacht werdensment schwierig. Einige Labors haben gesagt, sie der Farbstoff eine größere Herausforderung zu zählen, zu finden, aber der Got Lab fand eine verdünnte blauer Lebensmittelfarbstoff in einer Konzentration von 1.36 bot den idealen Kontrast zwischen pilzförmige und fadenförmigen Papillen auf der Mehrzahl von Zungen. Die Schaffung einer dichotomen Schlüssel für FP Charakterisierung wird für Forscher in verschiedenen Labors zu ermöglichen, mit einer Vielzahl von Bildaufnahmeverfahren, um konsequent zu analysieren Strukturen auf der Zunge und das Vertrauen in die Berichterstattung über die Ergebnisse. Schließlich kann die Verwendung eines dichotomen Schlüssel Zwecke in anderen Bereichen der wissenschaftlichen Methodologie, wo Eigenschaften von Strukturen oder Objekten bieten inkonsistente Zahlen von Studie zu Studie.

Papillen sind die sichtbaren Unebenheiten auf der Zungenoberfläche. Es gibt vier Arten von Papillen: pilzförmigen (FP), foliate, circumvallate und fadenförmig. Während fadenförmigen Papillen sind über die Oberfläche der Zunge verteilt sind circumvallate nur auf der Rückseite der Zunge lokalisiert und Blatt sind an den Seiten gefunden. Im Gegensatz dazu sind FP in Richtung der Vorderseite der Zunge entfernt. FP, foliate und Wallpapillen werden als Geschmacks, weil sie das Potenzial, Geschmacksknospen enthalten, während filiform nicht haben. Gaumen sind Cluster von Zellen zum Nachweis chemischer tastants und Transduzieren der Reize in einen gustatorischen Signals im Gehirn verantwortlich. Speichel und Nahrungsmoleküle treten in den Gaumen durch Öffnungen genannt Geschmack Poren, wo Geschmack Moleküle haben dann die Möglichkeit der Aktivierung Geschmackszellen. Interessanterweise gibt es große individuelle Unterschiede in der Geschmacksknospe Dichte, als erste in einer histologischen Untersuchung der Zunge beobachtetab 18 Leichen (Miller, 1988) 1. Gaumen selbst nicht auf der Zungenoberfläche sichtbar sind jedoch sichtbar Geschmack Poren bei der Verwendung von richtigen Vergrößerung, Beleuchtung und Färbetechniken, die Miller &amp; Reedy (1990) führte zu einer Methode, um Geschmack Poren und die pilzförmigen Papillen mit Videomikroskopie in lebenden identifizieren zu entwickeln Menschen 2. Eine Reihe von Labors haben ihren ursprünglichen Videomikroskopie Technik modifiziert, mit immer noch Fotografie und wenig oder keine Vergrößerung. Da jedoch pilzförmigen Papillen sind viel einfacher zu visualisieren sind als Poren mit diesen letzteren Techniken, wandte Labors zu zählen pilzförmige Papillen Geschmack anstelle von Poren. Dabei wird angenommen, dass pilzförmigen Papillen Dichte ist eine angemessene Ersatzgröße für den Geschmack Porendichte, auch wenn viele pilzförmigen Papillen enthalten keine Geschmacks Poren oder Geschmacksknospen 3; nicht nur FP sichtbarer und zugänglicher als circumvallate und foliate Papillen, aber ihre Bilderfassung weniger timich in Anspruch als Geschmack Porenanalyse durch die alternative Methode der Videomikroskopie 2,4. Im Jahr 1990, Miller &amp; Reedy verwendet diese Technik, um den Geschmack Porendichten mit FP Dichten 3, die in Bartoshuk et al. 5 weiter bestätigt wurde Zusätzlich zu dieser anatomischen Beziehung korreliert finden, Miller &amp; Reedy auch festgestellt, dass die 8 Personen in der oberen Hälfte der Geschmack Porendichteverteilung auch bewertet Saccharose, NaCl, und Propylthiouracil (PROP) als deutlich intensiver als die anderen taten 8 Personen 3. Nachfolgende Arbeiten von Bartoshuk et al. (1994) beobachteten eine Korrelation zwischen überschwellige PROP Geschmack Intensität und pilzförmigen Papillen Dichte sowie Geschmack Porendichte, in 42 Themen 5. Diese bequeme Methode führte zu einflussreichen Studien berichten, dass Patienten, deren Zungen haben viele Papillen entlocken eine stärkere Reaktion auf viele Geschmacksstoffe, einschließlich der bitteren Geschmacksstoffe Phenylthiocarbamid (PTC) und PROP 6,7. PTC und PROP sind gut recherchierte Geschmacksstoffe durch die klare Verbindung zwischen einer Person Geschmack Empfindlichkeit Phänotyp und Genotyp ihrer oft verwendet. Bevölkerungsstudien haben gezeigt, dass Menschen, die homozygot rezessiv Diplotyp des Gens TAS2R38 haben, haben eine deutlich geringere Empfindlichkeit gegen PROP als Träger der dominant oder heterozygote Variante des Gens 8-10. Diese vererbbare Phänomen wurde zuerst im Jahr 1932 gemeldet, wenn Arthur L. Fox kündigte seine Entdeckung der &quot;Geschmack Blindheit&quot; zu PTC 11. Unter den Menschen in der Lage, diese Bitterstoffe schmecken, die Intensität des Geschmacks berichtet kann überall von ein wenig unangenehm, unerträglich bitter 6 variieren. Um die Varianz, die nicht durch TAS2R38 erklärt werden kann entfallen, wurde die Theorie vorgebracht, dass es mit der Dichte des FP auf der Zunge 4 zurückzuführen. Als Geschmacksforschung fortgeschritten ist, das field wurde in zwei Denkschulen, um diese Theorie über die Rolle der FP und bitteren Geschmack Empfindlichkeit unterteilt. Obwohl viele Studien bestätigt die ursprüngliche Behauptung, dass FP Dichte ist ein Faktor in PROP Empfindlichkeiten 4,6,12,13, gab es einen kleinen, aber wichtigen Kontingenz, die gefunden hat Beweise zu widerlegen, den Hinweis auf die Unfähigkeit, die Rolle 10 zu replizieren, 14,15,16. Delwiche et al. (2001) warnte davor, dass der Trend ist sehr variabel; FP Dichte nicht gleichmäßig Konto für Unterschiede in der Bitterkeit Empfindlichkeit über Themen, und war nur für Patienten mit mindestens einem moderaten Sensitivität PROP 7 nachweisbar. Zusätzlich zu der Verwendung der weniger streng definierten Miller &amp; Reedy Methode, wie man FP zu quantifizieren, ist es wichtig zu beachten, dass mit Ausnahme des Beaver Dam Nachkommen Study 15 durch Fischer geführt et al., Die meisten der oben genannten Studien hatten kleine Proben Größen, die auch zu inkonsistenten Befunde beitragen könnendie Rolle von FP im Geschmack. Kurz gesagt, in Miller &amp; Reedy brechenden Methodik Papier (1990), die Autoren gefärbten Zungen blau zu quantifizieren, weil FP FP bleiben rosa während fadenförmigen Papillen absorbieren den Farbstoff und blau. Sie klassifiziert FP als &quot;abgerundeten rosa Strukturen etwa 0,5 mm Durchmesser&quot; 2. Während die Autoren darauf hingewiesen, dass, bevor Sie dieses Verfahren für weitere Analysen, FP Merkmale sollten genauer definiert werden und festgestellt, dass die Variation in der Literatur bereits angemerkt, 2, &quot;könnte auf verschiedene Themengruppen, verschiedenen Methoden und verschiedenen Forschern als&quot; ihre Forschung hat auf die allgemein anerkannten Eigenschaften, die FP sind rund 17,18, große 2, rosa geführt oder gebeizt leichter 2 und 4 erhöhten. Bare Münze genommen scheinen diese Eigenschaften sehr geradlinig. In der Genetik der Taste Lab (GOT Lab oder Lab), die Verwendung der trafhod wurde von einzelnen Versuche der Torschützenkönige in der Qualifikation komplizierte und Priorisierung der Bedeutung der oben genannten Merkmale, wenn einige, aber nicht alle, der die Merkmale vorhanden waren. Diese Komplikationen waren kleine Papillen, die rosa in der Mitte viel größere Papillen erschienen; die gesamte Zunge zu absorbieren den blauen Farbstoff wodurch Klassifizierung nach Farbvariation; Lang Papillen statt rund; und Federn, die keine Veränderung in der Höhe, die alle dazu beigetragen, scorers Berichts weit variiert FP Zählungen des gleichen Bildes. Diese Variationen in der Analyse führte uns zu der Literatur, um die Subjektivität zu lokalisieren, identifizieren keine Ausnahmen von den allgemein anerkannten FP Eigenschaften und letztlich entwickeln ein Protokoll genau und objektiv zu definieren und zu punkten FP überprüfen. Zuerst wird FP Form in der Literatur als eine abgerundete, pilzartige Struktur 17,18 beschrieben. Allerdings bemerkenswerte AusnahmeIonen wurden ebenfalls genannt. Miller betont, daß der Ausdruck &quot;pilzförmige&quot; ist eine Fehlbezeichnung ist und dass viele FP nicht pilzförmig, sondern kann in der Größe und Morphologie 18 variieren. Melis et al. (2013) beschrieben mehrere Papillen, die berücksichtigt wurden &quot;verzerrt&quot;, wobei die FP-Durchmesser in einer Richtung mindestens zwei Standardabweichungen mehr als in einer anderen Richtung 19 war. Außerdem Cheng &amp; Robinson festgestellt, dass bei der Angabe von FP-Färbung, reichten sie aus, um längliche abgeflachte in Erscheinung 20. In Anbetracht der oben genannten Ausnahmen, die Charakterisierung eines FP ist rund und pilzförmigen erscheint eine zu enge Definition. Zweitens wird FP Farbe &quot;rosa Kreise vor einem blauen Hintergrund&quot; 7 nach Färbung der Zunge mit blauen Farbstoff beschrieben. Obwohl Färbung leichter war der konsequenteste Kriterium der FP in der gesamten Literatur war es noch kein einheitliches Qualifikationsspiel. Cheng &amp;<html> ; Robinson beobachtet, dass FP nicht immer leicht ver- schmutzt, so dass Identifizierung schwierig und unsicher 20. Es scheint also, dass Zungen absorbieren Farbstoff anders und während der Kontrast ist offensichtlich auf viele Sprachen, einige werden ohne Unterscheidung ganz blau, während andere sofort verlieren jede Spur von blauem Farbstoff 21. Die dritte Eigenschaft, FP Größe war ziemlich konsistent unter den Papieren, die von 0,5 mm bis 0,97 mm 6,18. In der Literatur Miller merkt, dass es zwei Größenbereichen von Papillen auf der dorsalen anterioren der Zunge. Die Papillen mit größeren Durchmessern sind in erster Linie fungiform und konisch Papillen, während die Papillen mit einem kleineren Durchmesser waren zumeist fadenförmig 18. Jedoch mit Ausnahme der Beaver Dam Nachkommen Study 21, Größe nicht erscheinen, um zu bestimmen, ob eine Struktur ein FP in der Literatur, aber war für Papillen bereits als &quot;pilzförmige&quot; klassifiziert ist. _content &quot;&gt; schließlich Erhebung wird hier nur als vierten charakteristischen FP 4 obwohl Miller wies darauf hin, dass die Unterscheidung zwischen fadenförmig und pilzförmigen Papillen ist schwierig, wenn Sie diese Kriterien in der Nähe des Randes der Zunge. Er gab zwei Beispiele von FP, die sich stark in der Höhe variiert, einer 0,8 mm in der Höhe, während eine andere betrug weniger als 0,1 mm in der Höhe, aber immer noch zwei Geschmacks Poren deutlich beobachtet wurden 18. Diese Beobachtung wurde auch verfolgt und durch Shahbake et al. 4 bestätigt Diese Definitionen und deren berichteten Ausnahmen zeigen, dass das Geschmacksfeld ist seit langem bei der Charakterisierung von FP und die Mängel der häufig verwendete Protokoll von Miller &amp; Reedy erkannte die Inkonsistenz. In der Tat, Miller &amp; Reedy ermahnte das Feld, um die Eigenschaften FP 2 weiter zu definieren. Wir vermuten, dass Torschützenkönige gaben unterschiedliche Gewicht auf die Eigenschaften und Priorisierung ihrer Bedeutung unterschiedlich, wenn papillae versäumt, jedes Kriterium, beispielsweise wenn ein Papille war groß und pilzförmigen treffen, aber blau gefärbt. Es wurde argumentiert, dass die Ermittler von den bisher veröffentlichten Studien wahrscheinlich tat das gleiche, die, wenn sie mit kleinen Stichproben kombiniert werden, können für die vielfältigen Ergebnisse aus Anwendung dieses Verfahrens Rechnung zu tragen. Die taiwanische Lab adressiert diese Lücke in der FP-Methodik durch die Entwicklung einer Leitlinie, die jedes Merkmal definiert mit objektiven Messungen und priorisiert die Eigenschaften anzugeben, welche Vorrang in Analyse dauert. Diese Methode ist die Denver Papillen Protocol (DPP), eine dichotome Schlüssel mit klaren und deutlichen Merkmale von FP, um genaue und wiederholbare zählt von den digitalen Fotografien der Zunge zu gewährleisten. DPP ist ein vorgeschlagenes Verfahren, um die zuvor verwendeten Miller &amp; Reedy Verfahren, wodurch das Entfernen individuelle Interpretation und sicherzustellen, konsistentere Ergebnisse bei der Analyse von FP Dichte standardisieren. Auf diese Weise kann DPP zu mehr Zuversicht d verwendet werdenetermine die Rolle von FP im Geschmack. Die Zunge Bilder der Probanden entnommen wurden durch die Bürger Wissenschaftler (Torschützen) des Lab, die die wahren Themen dieser Studie untersucht. Kern der Bürger Wissenschaftler des Labors wird der Mitglieder aus der Community, die im Alter (Jahre) von 16 bis Mitte der 80er Jahre zusammen. Eine summative Evaluation Bericht des Museums im Jahr 2012 in Auftrag beschreibt Bürger Wissenschaftler wie mit einem starken Interesse an der Wissenschaft und mit zwei Dritteln mit einem Hochschulabschluss in einem wissenschaftlichen Gebiet 22 verdient. Kandidat Bürger Wissenschaftler derzeit via Mundpropaganda rekrutiert, muss erfolgreich abgeschlossen werden ein Interview-Prozess mit Veteran Freiwilligen im Museum, und eine Probezeit in Dauergesundheitsausstellung des Museums, Expedition Gesundheit, unterziehen, bevor sie die Möglichkeit, für eine Position in beantragen Labor. Einmal in die Lab akzeptiert, Bürger Wissenschaftler einen 12-wöchigen Ausbildung absolvieren, um zertifiziert zu werden, um menschliche Subjekt einschreibens. Im Anschluss an diese Zertifizierung, in der Lage, Trainingsmodule auf verschiedenen Techniken im Labor (zB Papillen Zählung, DNA-Extraktion) und zusätzlich folgende Zertifizierungen und regelmäßige Qualitätskontrollmaßnahmen sind, haben diese Bürger Wissenschaftler die Möglichkeit, aktiv in die Datenanalyse zu beteiligen. Citizen Wissenschaftler ehrenamtlich und werden nicht für ihre Beiträge zum Museum kompensiert.

<table><tbody><tr><td>Bild J</td><td>National Institutes of Health</td><td><a href="http://rsb.info.nih.gov/ij">http://rsb.info.nih.gov/ij</a></td><td></td></tr><tr><td>Lebensmittelfarbe, Deep Blue Shade</td><td>Esco</td><td>http://escofoods.com/blue-food-coloring.html</td><td></td></tr><tr><td>Sterile Rayon Tiped OB/GYN Applikatoren</td><td>Puritan</td><td>25-808 1PR</td><td></td></tr><tr><td>Grade 1 Filterpapier</td><td>Whatman</td><td>Nr.: 1001-325</td><td></td></tr><tr><td>Coolpix P100 (10,3 Megapixel) und P500 (12,1 Megapixel)</td><td>Nikon</td><td>http://imaging.nikon.com/lineup/coolpix/</td> <td>keines der beiden Modelle scheint mehr auf der Website erhältlich zu sein</td></tr><tr><td>Papierhandtücher</td><td>Kleenex</td><td>https://www.kleenex.com/HandTowelsDetail.aspx</td><td></td></tr></tbody></table>

denver papillen protokoll für objektive analyse der pilzförmige papillen

Denver Papillae Protocol for Objective Analysis of Fungiform Papillae

Das Ziel des Denver Papillen Protokoll ist es, eine dichotome Schlüssel verwenden, um zu definieren und zu priorisieren die Eigenschaften von pilzförmigen Papillen (FP), um konsistente Scoring zwischen Torschützen gewährleisten. Dieses Protokoll baut auf der Notwendigkeit, die von den letzten zwei Jahrzehnten des Geschmacks Forschung mit FP als Proxy für Geschmack Porendichte entstanden ist. FP Dichte war in der Vergangenheit mit Miller &amp; Reedy ist 1990 Charakterisierungen ihrer Morphologie analysiert: rund, gefärbt Feuerzeug, groß, und erhöhten. In dieser Arbeit vorgewarnt die Autoren, dass strengere Definitionen FP Morphologie notwendig skizziert. Trotz dieser Aufruf zum Handeln hat verfolgen Literatur war knapp, mit den meisten Studien weiter zu Miller &amp; Reedy ursprünglicher Arbeit zu zitieren. Folglich haben FP Dichte Berichte sehr unterschiedlich gewesen, und in Kombination mit kleinen Stichproben, können zu den abweichenden Schlussfolgerungen über die Rolle der FP in Geschmacksempfindlichkeit beizutragen. Die Genetik der Taste Lab erforscht diesen scheinbaren inconKonsistenz der Zählung und gefunden, daß scorers wurden einzeln Priorisieren der Bedeutung dieser Eigenschaften unterschiedlich und hatte keine Anleitung zur wenn eine Papille hatten einige, aber nicht alle, der berichtet Qualitäten FP. Das Ergebnis dieser Subjektivität ist sehr variabel FP Zählungen des gleichen Bildes Zunge. Die Denver Papillen Protokoll wurde entwickelt, um diese Folge durch die Verwendung eines dichotomen Schlüssel, dass weitere definiert und priorisiert die Bedeutung der Merkmale her von Miller &amp; Reedy setzen beheben. Das vorgeschlagene Verfahren kann dazu beitragen, eine standardisierte Möglichkeit, FP für Forscher im Bereich der Geschmacks- und Ernährungsstudien zu quantifizieren.

Hier ist eine repräsentative Fotografie durch zwei einzelne Torschützen bei der Verwendung der häufig verwendete Miller &amp; Reedy Methodik zur Identifizierung FP auf der Grundlage der Feldstandards rund, groß, rosa erzielt oder gebeizt leichter und erhöht, und dann das gleiche Foto von zwei Torjäger erzielte mit DPP. Die gezeigten zählt, sind repräsentativ für die Verwendung des ursprünglichen Verfahrens im Vergleich zum unteren Varianz mit DPP beobachtete hohe Varianz. <img alt="Figur 4" src="/files/ftp_upload/52860/52860fig4.jpg" /> Abb. 4: Miller &amp; Reedy Quantifizierung vs DPP Quantifizierung Das Bild auf der linken repräsentativen Zählungen zwei scorers &#39;mit dem Miller &amp; Reedy Verfahrens geeignet ist. Das Bild auf der rechten Seite stellt zwei Torschützenkönige zählt mit DPP. Red ist Torschützenkönig 1, ist Yellow Torschützen 2, Grün Torschützen 1 &amp; 2. Statistische Zuverlässigkeit der DPP wurde zuvor unter Verwendung einer gemischten linearen Modell, um die Variabilität zu bewerten 10 untersucht. Kurz gesagt, die Daten, die Rolle spielt DPP in Konsistenz von Partituren beurteilen zu erzeugen, wurden fünfzehn Bilder zweimal erzielt. In der ersten Partie von Partituren, verwendet DPP naiv Torschützen die Miller &amp; Reedy Methode 2. Die Torschützen wurden geschult, um DPP verwenden und die Bilder wurden einzeln ohne die in Abschnitt 2.7 detailliert Quality Control (Abbildung 5) beschrieben endgültigen Konsens Schritt rescored. Die FP-Score Datensatz wurde dann in der Mischmodell verwendet, um die kombinierten Unterschiede aufgrund Protokoll (Abbildung 6), in-Torschützenkönig Variabilität und die Wechselwirkung zwischen den beiden zu bewerten. Dieses Modell zeigte einen signifikanten Unterschied in Scoring bei Verwendung der Miller &amp; Reedy Verfahrens gegenüber DPP (p-Wert von &lt;1 x 10 -6) mit DPP und damit ein höherer Zählwert um 6,99 (SE = 0,99); 5,2% der Variabilität in der Partitur war auf Ausbildung, 25,9% aufgrund von Torschützenkönig, und die restlichen auf GrundUm die Variabilität der spezifisch auf die Bild 10. Als nächstes wird, um Daten zu erzeugen, die in-Torschützenkönig Variabilität zu bestimmen, wurden eine Reihe von dreißig Bilder in zufälliger Reihenfolge von 11 Personen erzielt. Unbemerkt von Torschützen, diese Serie von Bildern enthalten drei Bilder, die wiederholt wurden. Wir beobachteten eine drastische Unterschied in der Partitur Variabilität Vergleich deutliche Bilder versusrepeated Bilder. <img alt="Figur 5" src="/files/ftp_upload/52860/52860fig5.jpg" /> Abb. 5: DPP-Naive vs Beitrag DPP Ausbildung Panels bieten Boxplots der Rezensent Partituren für 15 Bilder vor und nach Denver Papillen Protocol Ausbildung. Für jede boxplot, ein im Kreis gefüllt gibt den Mittelwert der Erwägung, dass ein offener Kreis zeigen einen Ausreißer. <img alt="Figur 6" src="/files/ftp_upload/52860/52860fig6.jpg" /> Abb. 6: Veränderung der Scorer Variance Der graue stellt ter Varianz für einzelne Torschützen vor der DPP-Training. Schwarz ist die gleiche Torschütze Post DPP Ausbildung.

Hier präsentieren wir ein Protokoll, um pilzförmige Papillen Dichte von digitalen Fotos zu messen. Diese Methode baut Priorisierung und objektives Merkmal Metriken in den ursprünglichen Beschreibungs Arbeit an pilzförmigen Papillen von Miller &amp; Reedy (1990).

Denver Papillen Protokoll für objektive Analyse der pilzförmige Papillen

The goal of the Denver Papillae Protocol is to use a dichotomous key to define and prioritize the characteristics of fungiform papillae (FP) to ensure ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens besteht darin, Pilzform-Papillen mithilfe eines dichotomen Schlüssels einheitlich zwischen verschiedenen Bewertern und Laboratorien zu quantifizieren. Dies wird erreicht, indem zunächst die Zunge des Probanden mit einer Lebensmittelfarbe blau angefärbt und ein Filterpapier mit einem Ausschnitt von einem Zentimeter Durchmesser auf der Zunge befestigt wird. Der zweite Schritt besteht darin, ein hochwertiges Nahbild der Zunge des Probanden aufzunehmen.Danach verwendet der Auswerter den dichotomen Schlüssel, um Form, Größe, Farbe und Erhebung der infrage kommenden Papille zu untersuchen. Eine Papille, die nicht amorph ist, mindestens 0,5 Millimeter rosaer als der Hintergrund und nicht eingezogen ist, wird als Pilzformpapille gewertet. Der letzte Schritt besteht darin, die Zählergebnisse zwischen zwei Auswertern abzugleichen und sicherzustellen, dass die Zahlen innerhalb von 10 % zueinander liegen.Schließlich wird das Denver-Papillen-Protokoll verwendet, um die Merkmale von Pilzformpapillen zu definieren und zu priorisieren, um eine konsistente Zählung über verschiedene Bewertungen und Labore hinweg sicherzustellen. Der Hauptvorteil dieser Technik gegenüber bestehenden Methoden, wie dem Miller- und Read-Protokoll, besteht darin, dass sie die Subjektivität der Bewertungen bei der Quantifizierung von Pilzformpapillen verringert. Dies erreicht sie durch eine klare Definition jedes Merkmals sowie durch die Verwendung eines dichotomen Schlüssels, um sicherzustellen, dass alle als Pilzformpapillen klassifizierten Strukturen sämtliche Kriterien erfüllen.Diese Methode hilft dabei, zentrale Fragen im Geschmacksforschungsbereich zu beantworten, beispielsweise welche Rolle, falls vorhanden, die Dichte der Pilz-Formm-Papillen bei der Geschmackswahrnehmung spielt. Die Idee zu dieser Methode entstand, als unsere Bürgerwissenschaftler*innen die Pilz-Formm-Papillen nach der Miller-und-Reading-Methode zählten, wobei uns auffiel, dass die Zählungen für dasselbe Zungenbild stark variierten. Bei Gesprächen mit den Auswerter*innen zeigte sich, dass sie die Merkmale unterschiedlich gewichtet und ungleichartig entschieden hatten, wie Papillen zu zählen waren, die einige, aber nicht alle Kriterien erfüllten.Der Ablauf wird von Rudy Torres demonstriert, einem ehrenamtlichen Bürgerwissenschaftler im Labor für die Genetik des Geschmacks. Um die Probanden auf diesen Vorgang vorzubereiten, zeigen Sie ihnen ein Foto, das zeigt, wie sie sich positionieren sollen, und wie das aufgenommene Bild aussehen wird. Weisen Sie den Probanden an, ihre Zunge mit einem Papiertuch abzutrocknen und die Zunge aus dem Mund herausstehen zu lassen.Unter Verwendung eines sterilen Wattetupfers mit einem Zoll langem Ende etwa drei Milliliter blaue Lebensmittelfarbe in einer Verdünnung von 1 zu 36 auf die Zungenspitze auftragen. Die Versuchsperson wird angewiesen, ihre Zunge wieder in den Mund zurückzunehmen und den überschüssigen Farbstoff zu schlucken. Danach wird die Versuchsperson angewiesen, sich wie auf der Abbildung dargestellt hinzusetzen, mit dem Kinn auf den Händen und den Ellenbogen auf einem Tisch abgestützt, um Stabilität zu gewährleisten.Weisen Sie die Versuchsperson an, ihre Zunge um eine bequeme Distanz herauszustrecken, und halten Sie sie sanft zwischen den Zähnen fest. Befestigen Sie ein 2,5 cm langes Stück Filterpapier, in das ein kreisförmiger Ausschnitt mit einem Durchmesser von 10 mm gestanzt wurde, an der Spitze der Unterseite der linken Zungenhälfte. Befestigen Sie neben der Mittellinie eine hochwertige digitale Kompaktkamera zur besseren Stabilität auf einem Stativ.Verwenden Sie die Makrofunktion, um mindestens drei Nahaufnahmen der Zunge anzufertigen, wobei der gesamte 10 mm durchmessende kreisförmige Ausschnitt erfasst wird, um sämtliche Pilze, Formen, Papillen oder FP innerhalb dieses Bereichs sichtbar zu machen. Zoomen Sie so weit heran, dass der gesamte Ausschnitt fotografiert wird, jedoch noch innerhalb des empfohlenen Zoombereichs der Kamera bleibt. Stellen Sie sicher, dass die Ebene der Kameraoptik parallel zur Zungenebene ist und der Ausschnitt auf dem Foto kreisförmig erscheint.Anstelle von langgezogenen Überprüfungsfotos stellen Sie sicher, dass diese von hoher Qualität sind und sich zur Zählung eignen. Beginnen Sie dieses Verfahren, indem Sie die Fotos auf den Computer hochladen, die von der Zunge desselben Probanden aufgenommen wurden. Wählen Sie nur eines für die weitere Analyse aus, und zwar basierend auf einer klaren Abgrenzung der Strukturen auf der Zunge bei höchster Vergrößerung und dem am wenigsten verfälschten Blickwinkel, sodass die Zunge breit und flach zur Kamera hin ausgerichtet ist.Öffnen Sie das ausgewählte Rohbild in der Open-Source-Software ImageJ. Klicken Sie auf Plugins und scrollen Sie im Dropdown-Menü zu Analyze, dann klicken Sie auf Cell Counter. Wenn der Cell Counter geöffnet ist, klicken Sie auf Initialize, um das Bild mit dem Cell Counter zu verbinden. Verwenden Sie zur Vereinheitlichung der Bewertungen und für die Nutzung in nachfolgenden Schritten eine Standardvergrößerung von 50 %.Um fp zu bestimmen, verschieben Sie dieses Bild auf die linke Seite des Bildschirms neben den Zellzähler. Dieses Bild wird als Kopie bezeichnet. Öffnen Sie eine zweite Kopie des Rohbilds, um die Durchmesser der zu quantifizierenden Papillen zu messen. Verschieben Sie diese Kopie auf die rechte Seite des Bildschirms, damit beide Kopien nicht versehentlich verwechselt werden.Das zweite Bild wird als Kopie B bezeichnet. Zoomen Sie nach Belieben während des gesamten Bewertungsprozesses heran oder heraus. Klicken Sie auf das Linienwerkzeug, indem Sie Kopie B verwenden. Zoomen Sie so weit heran, wie nötig, um einen Durchmesser über den 10 Millimeter großen inneren Kreis des Filterpapiers in beliebigem Winkel genau einzuzeichnen, und klicken Sie dann auf Analysieren und Skalierung festlegen. Geben Sie die bekannte Distanz als 10 ein.Überprüfen Sie die Korrektheit der Skalierung durch die Messung eines alternativen Winkels und stellen Sie sicher, dass der Durchmesser im Bereich von 9,8 bis 10,2 Millimetern liegt. Das Denver PAPALE-Protokoll oder DPP berücksichtigt Form, Farbe, Größe und Rückbildung jeder in Frage kommenden Papille, um zu bestimmen, ob es sich um eine fp handelt. Das Verfahren zur Schulung der Bewertungsergebnisse zur Anwendung des dichotomen Schlüssels wird in diesem Video nicht gezeigt, ist jedoch im begleitenden Protokolltext verfügbar, um mit der Bewertung zu beginnen.Bestimmen Sie, ob die infrage kommende Papille bei 50 % Vergrößerung amorph oder formlos ist. Prüfen Sie, ob eine allgemein anerkannte geometrische Form wie oval, kubisch oder rund vorliegt. Wenn keine geometrische Form erkennbar ist, wechseln Sie zum Fenster des Zellzählers und klicken Sie Typ eins an.Kopie A. Klicken Sie die kandidierende Papille an, um sie als amorph zu markieren und keine fp zu sein. Durch Anklicken der Typen eins bis vier in diesem und den folgenden Schritten wird sichergestellt, dass alle kandidierenden Papillen bewertet wurden, und es wird kategorisiert, welche Regel bei der Ablehnung einer Struktur verletzt wurde. Falls die kandidierende Papille eine geometrische Form aufweist, fahren Sie mit dem nächsten Schritt zur Untersuchung ihrer Farbe fort, beziehen Sie sich auf Kopie A und bestimmen Sie, ob eine Farbunterscheidung über die Zungenoberfläche vorhanden ist.Wenn eine Farbdifferenzierung vorliegt, aber die betreffende Papille blau ist und die umgebenden Papillen heller sind, wechseln Sie zum Fenster des Zellzählers und klicken Sie auf „Typ zwei“ am Zellzähler in Kopie A. Klicken Sie die betreffende Papille an, um sie als zwei blaue und nicht als fp zu markieren. Wenn keine Farbdifferenzierung vorhanden ist oder wenn irgendein Teil der betreffenden Papille rosa geblieben ist oder heller angefärbt wurde, fahren Sie mit dem nächsten Schritt zur Größenbestimmung fort. Verwenden Sie dazu Kopie B und zoomen Sie so heran, dass man bequem die Kontur der betreffenden Papille erkennen kann.Klicken Sie auf das Linienwerkzeug und messen Sie entlang der längsten Dimension der Papilla candidata. Klicken Sie auf „Analysieren“ und anschließend auf „Messen“, wenn die gemessene Länge 0,499 Millimeter oder weniger beträgt. Messen Sie ein weiteres Mal, um die Genauigkeit zu bestätigen.Falls der Wert weiterhin 0,499 Millimeter oder weniger beträgt, klicken Sie im Zellzählerfenster auf Typ drei und anschließend auf den Knopf „Kandidat Pela“, um festzustellen, dass er zu klein ist und kein FP darstellt. Wenn die gemessene Länge 0,5 Millimeter oder größer ist, fahren Sie mit der Untersuchung des Rückzugs fort, indem Sie prüfen, ob die Kandidat-Papille gleich hoch mit den übrigen Zungenbereichen ist oder erhöht liegt. Befindet sich die Papille in einer Furche, bestimmen Sie ihre Höhe im Vergleich zu den anderen Strukturen innerhalb der Furche, nicht zur Oberfläche der Zunge.Wenn die Papille niedriger ist als die sie umgebenden Papillen, klicken Sie im Zellzählerfenster auf Typ vier und anschließend auf Kopie A; klicken Sie auf die betreffende Papille, um sie als vertieft und keine fp zu markieren. Wenn die betreffende Papille entweder gleich hoch wie der übrige Zungenbereich oder erhöht ist, klicken Sie auf Typ fünf und kennzeichnen Sie sie als fp. Diese Gesamtanzahl von Typ fünf ergibt die rohe FP-Wertung.Notieren Sie die rohen FP-Werte in einem Laborbuch, um eine Kopie zu speichern, klicken Sie auf „Bild exportieren“ im Fenster des Zellzählgeräts und speichern Sie es mit dem gewünschten Benennungssystem des Labors. Dies ermöglicht es, in Zukunft Kopie A zu öffnen, um die farbigen Markierungen von Typ eins bis fünf beizubehalten. Die rohen FP-Werte zur Qualitätskontrolle werden dabei jedoch nicht gespeichert.Jedes Foto muss durch zwei unabhängige Bewertungen bewertet und die Ergebnisse verglichen werden. Liegt die höhere FP-Rohwertung innerhalb von 10 % des niedrigeren FP-Rohwerts, wird aus beiden Bewertungen gemeinsam eine konsensbasierte FP-Wertung gebildet. Unterscheiden sich die beiden FP-Rohwerte um mehr als 10 %, werden beide bewerteten Fotos am Bildschirm angezeigt.Verwenden Sie die Zählerarten eins bis vier, um bei der Diskussion von Abweichungen zu helfen und eine endgültige Konsensbewertung zu erzielen. Falls kein Konsens erzielt werden kann, ziehen Sie eine dritte Bewertung hinzu, um das Bild zu bewerten, und führen Sie anschließend einen Dialog mit den beiden anderen Bewertungen. Eine repräsentative Fotografie wurde zunächst von zwei unabhängigen Bewertern anhand der gängigen Miller- und 3D-Methode zur Identifizierung von FP bewertet.Dasselbe Foto wurde anschließend von zwei Bewertenden mithilfe der DPP ausgewertet. Rot steht für Bewertenden eins, Gelb für Bewertenden zwei und Grün für die Übereinstimmung zwischen Bewertenden eins und zwei. Die Zählungen zeigen ein Beispiel für die hohe Varianz, die bei Verwendung der ursprünglichen Methode beobachtet wurde, verglichen mit der geringeren Varianz bei Verwendung der DPPA, bei einem Vergleich der Bewertungen von Varianten für 11 einzelne Bewertungen.Die vor der DPP-Schulung in grau dargestellten und die nach der DPP-Schulung in schwarz dargestellten Werte zeigten eine signifikante Abnahme der Varianzpunktzahl nach der DPP-Schulung. Sobald diese Technik beherrscht ist, kann sie pro Bild innerhalb von fünf Minuten durchgeführt werden. Während des Durchführens dieses Verfahrens ist es wichtig, regelmäßig Pausen einzulegen, um bei jeder Aufnahme einen frischen Blick zu haben, und sicherzustellen, dass jede in Betracht kommende Papille erfasst wird.Nachdem Sie sich dieses Video angesehen haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie man Pilze, die Papillen bilden, mithilfe eines dichotomen Schlüssels konsistent quantifizieren kann.

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Forschung

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowissenschaften

Die Kenntnis der zugrunde liegenden molekularen Mechanismen Geschmacks Transduktion hat kürzlich bedeutende Fortschritte genossen, vor allem aufgrund der Verwendung von Tiermodellen. Doch die große Vielfalt in Geschmack Sensitivität und Spezifität bei Säugetieren Optionsscheinen Studien in menschlichem Gewebe. Wir beschreiben eine Biopsie-Technik auf lebende Geschmack Zellen aus der Papillen auf die menschliche Zunge zu sammeln.

Technik zu pilzförmigen (Taste) Papillen aus menschlichen Zunge sammeln

Wir wollten eine reproduzierbare Protokoll für die Isolierung und die Pflege langfristiger Kulturen von humanen pilzförmigen Papillen Geschmack Zellen zu entwickeln. Zellen aus menschlichen fungiformen Papillen durch Biopsie gewonnen wurden erfolgreich in der Kultur mehr als acht Durchgängen (12 Monate) aufrecht erhalten, ohne Verlust der Lebensfähigkeit.

Isolierung und Kultivierung humaner Zellen pilzförmige Papillen Geschmack

In diesem Video beschreiben wir die Isolierung von zirkumvallaten Papillen (CVP) Epithel aus einer Mauszunge.

Isolierung von zirkumvallaten Papillen (CVP) Epithel aus Mausmodell: Ein enzymatisches Verfahren zur Trennung von CVP-Epithel aus der Mauszunge

Oral Chemorezeption von Fettsäuren und die Verbindung mit Diät und fetthaltige Lebensmittel Präferenzen können die Identifizierung von Mechanismen, mit der Entwicklung von Übergewicht und warum Veränderungen in der Ernährung kann es schwierig für viele Menschen beteiligt sein können.

Mess Oral-Fettsäure-Schwellenwerte, Fett Wahrnehmung, Fatty Essen gefallen, und Papillen Dichte in Humans

Studium der Gaumen Entwicklung werden durch das Auftreten von Gaumenspalte, einem Geburtsfehler, die eine enorme gesundheitliche Belastung auferlegt und hinterlassen bleibende Entstellung motiviert. Wir zeigen hier eine Technik zur Kultur palatinalen Regalen, die verwendet werden können, um verschiedene Signalwege in palatinalen Entwicklung und Fusion studieren.

Methode der Untersuchung Palatal Fusion mit statischen Organ Culture

Änderungen in der mündlichen Microbiome während der gesamten Kindheit sind von wachsendem Interesse. Vergleich der verschiedenen Microbiome Studien zeigt einen Mangel an standardisierten Probenahme Protokolle. Begrenzten Raum macht Probenahme Ton subgingivalen Sulcus von schwierigen Kindern. Papier Punkt Probenahme präsentiert sich hier im Detail als die Methode der Wahl für diesen Bereich.

Oralen Biofilm Sampling für Microbiome Analyse bei gesunden Kindern

Dieses Protokoll menschlichen Geschmack Antworten und umfasst eine kurze anatomische Einschätzung und eine kurze Geschmackstest eine Validierungsmethode über das Thema berichteten Gefühl und Geschmack-Rezeptor-Genotyp.

Geschmack-Prüfung: Eine kurze und validierten Test

Diese Arbeit beschreibt Methoden zur Gewebevorbereitung, Färbung und Analyse von ganzen Fungiform-, Zirkumvallat- und Gaumengeschmacksknospen, die konsistent ganze und intakte Geschmacksknospen (einschließlich der Nervenfasern, die sie innervieren) ergeben und die Beziehungen zwischen Strukturen innerhalb der Geschmacksknospen und der umgebenden Papille aufrechterhalten.

Färbung, Visualisierung und Analyse von Fungiform-, Circumvallate- und Gaumengeschmacksknospen

Dieser Artikel beschreibt im Detail, ein Protokoll zur in utero elektroporieren die Hirnrinde und im Hippocampus bei E14.5 bei Mäusen. Wir zeigen auch, dass dies eine wertvolle Methode, um Dendriten und Dornen in diesen beiden Hirnregionen zu untersuchen ist.

Visualisierung und genetische Manipulation von Dendriten und Dornen in der Maus Hirnrinde und im Hippocampus mit<em&gt; In utero</em&gt; Die Elektroporation

Menschen neuroprogenitor Zellen (NPCs) wurden unter proliferierenden Bedingungen erweitert. NSC wurden in Neuron-reiche Kulturen in der Gegenwart einer Kombination von Neurotrophinen unterscheiden. Neuronale Marker wurden durch Immunfluoreszenz-Färbung nachgewiesen. Um eine reine Population von Nervenzellen zu isolieren, wurden NPCs auf PEN-Membran-Folien differenziert und Laser-Mikrodissektion durchgeführt wurde.

Laser Capture Mikrodissektion von Neuronen aus Differenzierte Menschen Neuroprogenitor Zellen in Kultur

Lernen Sie das Denver-Papillen-Protokoll zur objektiven Analyse pilzförmiger Papillen auf der Zunge. Diese standardisierte Methode mit dichotomen Schlüssel reduziert Subjektivität und ermöglicht verlässliche Dichtemessungen.

Denver Papillen Protokoll für objektive Analyse der pilzförmige Papillen

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