Name: Instillation und Fixationsmethoden Nützlich in Maus Lung Cancer Research (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-08-31T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 57 s
Description: Lernen Sie Methoden zur Instillation und Fixation von Mäuselungen für Krebsforschung. Diese Techniken ermöglichen präzise Volumenmessungen und verbessern die Reproduzierbarkeit onkologischer Studien signifikant.

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Das folgende Protokoll beschreibt ein System, das gut funktioniert in 20-35 g Mäusen. Das Verfahren könnte problemlos an größeren oder kleineren Mäusen, indem einfach die Kathetergröße. Alle Tier Protokolle wurden von der Johns Hopkins University Animal Care und Verwenden Committee genehmigt. 1. Lung Instillation <ol><li> Wählen Kommerzielle Ein-Zoll-langen 20 g intravenöse Kanüle für die Intubation zu verwenden. </li><li> Ändern die Katheterspitze manuell gebogen wird, um eine leichte Krümmung in der Spitze zu erzeugen, wie in 1 dargestellt. </li><li> Betäuben die Maus mit einem Gemisch aus Ketamin (100 mg / kg) und Xylazin (15 mg / kg) ip injiziert, und bestätigen Anästhesie durch das Fehlen von Rückbewegung. Bewerben Veterinär Salbe auf die Augen unmittelbar nach der Narkose. Unmittelbar nach der Narkose gelten veterinär Salbe auf die Augen und geben Carprofen (5-10 mg / kg SQ) zur postoperativen Analgesie und Instillation. </li><li> Legen Sie die mouse in Rückenlage auf einer geneigten Plattform. Wie in 2 gezeigt, ein großes Büro Binder mit Nahtschlaufen mit Klebeband am funktioniert sehr gut. </li><li> Rasieren Sie die ventralen Teil des Halses und reinigen und desinfizieren die Hals-Bereich mit 70% Alkohol. Mit neuen Latex- und puderfreie Handschuhe, verwenden chirurgische Instrumente mit 70% Alkohol desinfiziert. </li><li> Mit Hilfe einer scharfen Schere einen kleinen chirurgischen Schnitt in den Hals ca. 12 mm unterhalb der unteren Schneidezähne. </li><li> Mit einer Pinzette vorsichtig die Haut im Nacken kaudal, bis die ventrale Wand der Luftröhre zu sehen. </li><li> Vorsichtig einfahren Zunge und legen Sie die Kanüle mit der gebogene Spitze in Richtung der ventralen Oberfläche der Maus geneigt. Wie in 1.4, ziehen Sie vorsichtig auf die Haut im Nacken, und legen Sie die Kanüle in die Luftröhre. HINWEIS: Mit ein wenig Übung, der Katheter wird sichtbar nach unten bewegen die Luftröhre. Wenn sie in die Speiseröhre geht, dann wird es keine visuelle Beobachtung der Bewegung des Katheters zu sein. Keine Schnittewerden in die Trachea vorgenommen. </li><li> Sobald der Katheter in der Luftröhre im Hals gesehen brachte er etwa 5 mm bis zuverlässig übergeben die Stimmbänder, aber immer noch deutlich über der Carina. </li><li> Bereiten Sie vermitteln bis zu 50 &amp; mgr; l der Flüssigkeit durch die Injektion durch den Katheter mit einem Gel Ladepipettenspitze. Setzen Sie die Spitze in der Luer-Anschluss, aber vor der Injektion genau hinschauen, um die Bewegung der Flüssigkeit in der Spitze synchron mit der Maus die Atmung beobachten. Dann spritzen den instillate. </li><li> Mit einer 1-ml-Spritze, sofort zu tun ein relativ schnelles Aufblasen von 0,6 ml Luft in die Lungen durch den Katheter zu verteilen die Flüssigkeit tief in der Lunge. Entfernen Sie die Kanüle. </li><li> Entfernen Sie die Kanüle. </li><li> Verwenden Sie eine kleine Menge von Cyanacrylat-Klebstoff, um die kleine Operationswunde nach Packungsbeilage Anleitung zum Vetbond schließen. Zeigen Mäuse in Einzelkäfigen und optisch zu überwachen, bis sie aufwachen und normal zu verhalten ohne Angabe von discomfort. </li></ol> 2. Lung Fixation HINWEIS: Wenn alle experimentellen Verfahren werden in einer Maus durchgeführt, können die Lungen zur histologischen Verarbeitung durch Fixierung mit Formaldehyd (oder einem beliebigen anderen Fixiermittel) vorbereitet werden. <ol><li> Opfern Sie die Maus mit einem IACUC akzeptablen Verfahren. Für die Vertreter der Maus im Video gezeigt wird Genickbruch eines betäubten Maus. </li><li> Führen Sie eine Tracheotomie (falls noch nicht geschehen) durch chirurgisches Freilegen der Bauchseite der Luftröhre, indem Sie einen kleinen Schnitt und Einfügen einer 18 G-Stub Nadelspitze in die Luftröhre, und band ihn mit Gewinde. </li><li> Öffnen Sie vorsichtig den Brustkorb mit einem Mittellinienschnitt, schneiden Sie das Zwerchfell, und entfernen Sie die seitlichen Brustwand, um die Lungen aus. </li><li> Verbinden Sie den Luer-Ende der Nadel in ein Reservoir an einem Ringständer Formaldehyd enthält. Siehe Abbildung 3. </li><li> Stellen Sie die Oberseite des Formaldehyds 25 cm über dem Niveau des mouse. Siehe Abbildung 3. Als nächstes stellen Sie sicher, dass sich keine Luft in der Fixierschlauch indem Flüssigkeit aus dem Ende einer Sperrhahn. Verbinden den Luer Ende der Luftröhrenkanüle zum Reservoirschlauch. Öffnen Sie den Wasserhahn, um die Lungen mit dem Formaldehyd aufzublasen. Lassen Sie die Lunge unter Druck für mindestens 20 min. </li><li> Öffnen Sie den Wasserhahn, um die Lungen mit dem Formaldehyd aufzublasen. Lassen Sie die Lunge unter Druck für mindestens 20 min. </li><li> Als nächstes binden Sie die Luftröhre über das Ende der Stichleitung Nadel. Es kann helfen, langsam zurück auf die Nadel ziehen, um mehr von der uncannulated Luftröhre freizulegen. Wenn fest zusammengezogen, entfernen Sie den Wasserhahn. </li><li> Sorgfältig sezieren die Lunge. </li><li> Zeigen die Lunge in Formaldehyd über Nacht. Längere Zeiten sind in Ordnung, und einige Flecken oder Verfahren können bestimmte Zeiten festlegen. Auch andere Flüssigkeiten Fixiermittel wie z-fix kann für die Instillation und Eintauchen verwendet werden. </li><li> Bevor weitere histologische Verarbeitung, zu messendie feste Lungenvolumen als nächstes beschrieben. </li></ol> 3. Messung der Fest Lung Volume <ol><li> Messen Sie das Lungenvolumen mit Archimedes Prinzip wie in 4 dargestellt ist. Entfernen Sie den Fest Lunge aus dem Formaldehyd und sezieren das Herz und andere nicht-Lungengewebe. </li><li> Verwenden Sie einen zuvor konstruierten einfache hausgemachte Drahtstützeinrichtung, die verwendet wird, um die Lungen vollständig unter Wasser zu halten. HINWEIS: Dieses Gerät muss mit je nachdem, was Balance verwendet wird in Einklang gebracht werden. Eine in 5 gezeigte typische Vorrichtung ist aus Plastikpipetten und dünn (20 G) Draht. Dieses System funktioniert gut, wobei der Rest in dem Video verwendet, könnte aber leicht an die meisten Laborwaagen angepaßt werden. </li><li> Stellen Sie ein Becherglas mit ≈200 ml Wasser auf die Waage und tarieren mit dem Tragkäfig anstelle im Wasser. Siehe Abbildung 6 Entfernen Sie den Metallkäfig. legen Sie die Lunge auf der Wasseroberfläche und drücken Sie unter Wassermit dem Käfig. </li><li> Das Gewicht auf die Waage. Diese Zahl entspricht dem Volumen Wasser versetzt und ist somit ein direktes Maß für die Lungenvolumen. Seien Sie vorsichtig, um sicherzustellen, dass die Lunge oder Nahtmaterial oder einen Teil der Drahtkäfig nicht die Seiten oder Boden des Bechers berühren zu machen. </li><li> Für Richtigkeit, wiederholen Sie diese Messung. Entfernen Sie die Lunge aus dem Wasser, und trocknen auf einem Gewebe. Tarieren das Becherglas mit Käfig in Position und wiederholen Sie den Lungenvolumenmessung. Die beiden Volumenmessungen sollte dann gemittelt werden. HINWEIS: Wenn die Lungen im Formalin für mehr als eine Woche bleibt, wird die Luft in der Lunge in der Flüssigkeit gelöst werden. Wenn dies geschieht, wird der Lungen sinken, so ist es nicht mehr notwendig, irgendeine Vorrichtung wie in Figur 5 zu verwenden, um die Lunge eingetaucht zu lassen. In einem solchen Fall kann die Lautstärke einfach durch Halten der Lunge von einer der Naht Strings, bis es vollständig eingetaucht ist, wie in Figur 4 dargestellt, gemessen werden. </li></ol>

<ol><li>Brown, R. H., Walters, D. M., Greenberg, R. S., Mitzner, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+of+endotracheal+intubation+and+pulmonary+functional+assessment+for+repeated+studies+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">A method of endotracheal intubation and pulmonary functional assessment for repeated studies in mice.</a> J Appl Physiol. 87, 2362-2365 (1999).</li>
<li>Walters, D. M., Wills-Karp, M., Mitzner, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+cellular+profile+and+lung+function+with+repeated+bronchoalveolar+lavage+in+individual+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Genomics%22%5BJournal%5D)">Assessment of cellular profile and lung function with repeated bronchoalveolar lavage in individual mice.</a> Physiol Genomics. 2, 29-36 (2000).</li>
<li>Hamacher, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microscopic+wire+guide-based+orotracheal+mouse+intubation%3A+description%2C+evaluation+and+comparison+with+transillumination%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+animals%22%5BJournal%5D)">Microscopic wire guide-based orotracheal mouse intubation: description, evaluation and comparison with transillumination.</a> Laboratory animals. 42, 222-230 (2008).</li>
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<li>Hastings, R. H., Summers-Torres, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+Laryngoscopy+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Contemporary+topics+in+laboratory+animal+science+%2F+American+Association+for+Laboratory+Animal+Science%22%5BJournal%5D)">Direct Laryngoscopy in Mice.</a> Contemporary topics in laboratory animal science / American Association for Laboratory Animal Science. 38, 33-35 (1999).</li>
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<li>MacDonald, K. D., Chang, H. Y., Mitzner, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+improved+simple+method+of+mouse+lung+intubation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">An improved simple method of mouse lung intubation.</a> J Appl Physiol. 106, 984-987 (2009).</li>
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<li>Bishai, J., Fields, M. J., Mitzner, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+Mouse+Lung+Volumes+Inflated+with+Air+and+Instilled+Fixatives%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Am+Thorac+Soc%22%5BJournal%5D)">Comparison of Mouse Lung Volumes Inflated with Air and Instilled Fixatives.</a> Proc Am Thorac Soc. 3, A549(2006).</li>
<li>Mitzner, W., Brown, R., Lee, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+measurement+of+lung+volumes+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Genomics%22%5BJournal%5D)">In vivo measurement of lung volumes in mice.</a> Physiol Genomics. 4, 215-221 (2001).</li>
</ol>

Die hier beschriebenen Verfahren haben mehrere Vorteile. Zuerst die erforderliche Ausrüstung ist einfach und kostengünstig. Zweitens kann die Intubation schnell mit wenigen Fehlern durchgeführt werden. Drittens erlaubt die Fähigkeit, in die Lunge bei einem konstanten Druck zu fixieren, und dann den Festlungenvolumen korrekte Quantifizierung von Strukturen oder Zellen in der Lunge 10. Ein möglicher Nachteil der Intubation ist die kleine Chirurgie. Dies kann die Möglichkeit, das Ver...

Für eine Reihe von Gründen, Lungenkrebs, nicht sehr stark bei der Maus untersucht. Ein Grund dafür ist, dass der Zugang zu der Lunge in vivo ist sehr schwierig, und die quantitative Analyse von festen Lungen ist nicht allgemein üblich ist. Die in diesem Dokument beschriebenen Methoden wurden entwickelt, um hier Abhilfe zu schaffen. Die Ziele hier sind einfache Methoden, die sich stark in den Aufbau und die Analyse von Mauslungen mit Lungenkrebs oder anderen Pathologien helfen werden zu beschreiben. Während keiner dieser Ansätze völlig neu sind, haben sie nicht gemeinsam als eigenständiges Verfahren in der vereinfachten Weise, wie hier beschrieben dargestellt worden. Es wurden eine Reihe von Handschriften, die Verfahren zur Intubation der Mauslunge in erster Linie für den Zweck dieser Wiederholungslungenfunktion oder bronchoalveoläre Lavage in einzelnen Mäusen in Langzeitstudien beschrieben wurden. Seit diesem ursprünglichen Papier, gab es mehrere andere Papiere, die verschiedenen Ansätze zur mous beschrieben haben,e Intubation 1 -9. Während alle diese Verfahren erfolgreich verwendet werden können, erfordern sie in der Regel erhebliche Ausbildung und sind oft nicht ohne eine nichttriviale Ausfallrate. Darüber hinaus, um die Durchführung Lungenfunktionsmessungen, muss die Kanüle in die Luftröhre fest genug passen, so dass es keine Luftleckage. Allerdings ist eine weitere praktische Verwendung zur Intubation gegenüber spezifischen Agenzien (Krebszellen oder andere Beleidigungen) oder therapeutische Wirkstoffe direkt in die Lunge zu liefern. Ein solches Verfahren erfordert keine eng anliegende Kanüle noch eine anspruchsvolle Lungenfunktionsgeräten. Das neuartige Merkmal dieser hier gezeigten Verfahren eine kleinere chirurgische Prozedur, die die Intubation ermöglicht, ohne die Möglichkeit der Kanüle in die Speiseröhre. Dieser einfache Ansatz ermöglicht erfolgreiche Intubation mit relativ wenig Ausbildung oder Erfahrung. Nicht weniger als 30 Mäusen / h können mit diesem Ansatz mit einer Ausfallrate gegen Null behandelt werden. Sobald ter Mäuse sind bereit, geopfert werden, die verletzt oder Krebs Lunge kann dann zur histologischen und pathologischen Analyse entfernt werden. Um alle histologischen Variablen richtig zu quantifizieren für den Vergleich mit anderen Lunge, ist es jedoch wichtig, die Fixierung Verfahren zu standardisieren und ordnungsgemäß zu quantifizieren, die feste Lungenvolumen 10. Dieses Papier beschreibt im Detail die einfachen Verfahren, standardisierte Befestigungsverfahren sowie eine Möglichkeit, die Festlungenvolumen zu messen, zu ermöglichen. Das Volumen ist ein wesentlicher Metrik bei der Quantifizierung der Histologie, da ohne eine solche Volumenbestimmung kann nur relative Dichten gemessen werden 10. Sobald das Lungenvolumen ist jedoch bekannt, absolute Messungen von Zellen und anderen strukturellen Messungen in der Lunge kann dann quantifiziert werden.

<table><tbody><tr><td>Laborwaage</td><td>Ohaus</td><td>Adventurer Pro Modell AV 313&nbsp;</td><td>Andere Waagen können verwendet werden, wenn sie einen Bereich von 1-300 g haben</td></tr><tr><td>20 g Luer intravenöser Katheter</td><td>Insylte</td><td></td><td>Mehrere andere mögliche Anbieter, z.B. , Jelco Optiva</td></tr><tr><td>500 ml Laborflasche</td><td>Diverse</td><td></td><td>Andere mögliche Anbieter</td></tr></tbody></table>

instillation und fixationsmethoden nützlich in maus lung cancer research

Instillation and Fixation Methods Useful in Mouse Lung Cancer Research

Die Möglichkeit, Live-Agenten, Zellen oder Chemikalien direkt in die Lunge zu vermitteln, ohne zu verletzen oder die Tötung der Mäuse ist ein wichtiges Werkzeug bei Lungenkrebs Forschung. Zwar gibt es eine Reihe von Methoden, die veröffentlicht wurden, die zeigen, wie Mäusen Lungenfunktionsmessungen zu intubieren, gibt keine ohne potentielle Probleme für den schnellen Instillation großen Kohorten von Mäusen. In der vorliegenden Arbeit wird eine einfache und schnelle Methode beschrieben, die ein Ermittler ermöglicht die Durchführung einer solchen Instillationen in einer effizienten Weise. Das Verfahren erfordert keine besonderen Werkzeuge oder Beleuchtung erforderlich und kann mit sehr wenig Praxis erlernt werden. Es geht um Anästhesie eine Maus, einen kleinen Schnitt in den Hals, um die Luftröhre sichtbar zu machen, und dann direkt Einfügen einer intravenösen Katheter. Der kleine Einschnitt rasch mit Gewebekleber verschlossen und die Mäuse werden sich erholen gelassen. Ein erfahrener Student oder Techniker kann Instillationen mit einer durchschnittlichen Rate von 2 min / Maus zu tun. Sobald ter Krebs festgestellt, gibt es oft eine Notwendigkeit für quantitative histologische Analyse der Lungen. Pathologen traditionell in der Regel nicht die Mühe, Lunge Inflation während der Fixierung zu standardisieren und Analysen sind oft auf einem Punktesystem, das sehr subjektiv sein kann, basiert. Während dies einmal für grobe Schätzung der Größe eines Lungentumors ausreichend ausreichend sein, jedes richtige stereo Quantifizierung von Lungenstruktur oder Zellen erfordert eine reproduzierbare Fixierung und der nachfolgenden Lungenvolumenmessung. Hier beschreiben wir einfache zuverlässige Verfahren sowohl für die Festsetzung der Lunge unter Druck und dann die genaue Messung der Festlungenvolumen. Die einzige Voraussetzung ist eine Laborwaage, die genau über einen Bereich von 1 mg-300 g ist. Die hier so vorgestellt Verfahren könnten die Fähigkeit, in den Mäusen zu erstellen, zu behandeln und zu analysieren Lungenkrebs deutlich verbessern.

Das Verfahren beschreibt in dem ersten Protokoll nicht von selbst zu irgendeinem generali Ergebnissen führen. Es beschreibt nur ein sehr zuverlässiges Mittel zur Substanzen direkt in die Luftröhre zu vermitteln. Figur 7 zeigt ein Beispiel einer Lunge, in dem Trypanblau wurde mit dem hier beschriebenen Verfahren eingeimpft. Gibt es weit verbreitete Verteilung des Farbstoffs, ähnlich wie es mit anderen Farbstoffen oder Tracer direkt in die Trachea oder Mäusen 11,12 gegeben gese...

Das Ziel dieser Arbeit ist es, einfache Methoden, die sich stark in den Aufbau und die Analyse von Mauslungen mit Lungenkrebs oder anderen Pathologien helfen werden zu beschreiben. Wir stellen 3-Protokolle, um einfach und zuverlässig durchführen Lungen Instillationen, Fixierung, und Lungenvolumenmessungen.

Instillation und Fixationsmethoden Nützlich in Maus Lung Cancer Research

The ability to instill live agents, cells, or chemicals directly into the lung without injuring or killing the mice is an important tool in lung cancer ...

Das übergeordnete Ziel des hier gezeigten Verfahrens besteht darin, einfache Methoden zu demonstrieren, die die Einrichtung und Analyse von Mäusen mit Lungenkrebs oder anderen Lungenerkrankungen erheblich erleichtern. Zunächst wird eine Methode beschrieben, mit der Krebszellen oder chemische Substanzen direkt in die Lunge eingebracht werden können. Anschließend werden die postmortale Fixierung und die Messung des Lungenvolumens erläutert.Dies wird erreicht, indem man zunächst die Maus mit einer leicht modifizierten intravenösen Kanüle intubiert. Anschließend wird die gewünschte Flüssigkeit über die Kanüle in die Lunge appliziert. Danach, nachdem alle In-vivo-Experimente abgeschlossen sind und die Maus verstorben ist.Die Lungen werden mit einem Reservoir für die Fixierung verbunden. Im letzten Schritt werden die Lungen präpariert und das Lungenvolumen gemessen. Abschließend kann die quantitative Morphologie des fixierten Lungengewebes zwischen experimentellen Lungenproben verglichen werden.Der Hauptvorteil dieser neuen Implantationstechnik gegenüber bestehenden Methoden liegt darin, dass bei unserer Methode nahezu keine Gefahr besteht, die Kanüle falsch in die Luftröhre zu platzieren. Das Verfahren zur Fixierung der Lungen unter konstantem Druck ist einfach und führt zu einer konsistenten Fixierung bei verschiedenen Lungen. Schließlich ermöglicht die Methode zur Messung des fixierten Mauslungen-Volumens eine korrekte Normalisierung zur Quantifizierung von Lungenzellen und strukturellen Elementen.Verwenden Sie diese Methode. Stellen Sie sowohl eine direkte Applikation des Wirkstoffs oder anderen interessierenden Mittels in die Lunge sicher als auch eine genaue und präzise Messung der Lunge. Biegen Sie vor Beginn des Verfahrens manuell die Spitze einer handelsüblichen, einen Zoll langen, 20-Gauge-Intravenöskanüle zu einer leichten Kurve.Danach, nach Bestätigung der Anästhesie durch fehlende Reaktion auf eine Zehenquetschung, Augensalbe auf die Augen einer erwachsenen Maus auftragen und die Maus in Rückenlage auf einer schrägen Plattform mit einem großen Bürohefter und Nahtschlaufen fixieren. Den ventralen Teil des Halses rasieren und die Haut mit 70 %igem Alkohol desinfizieren. Anschließend mit einer scharfen Schere einen kleinen chirurgischen Schnitt im Halsbereich etwa 12 Millimeter unterhalb des unteren Schneidezahns anlegen.Verwenden Sie anschließend eine Pinzette, um die Haut im Nackenbereich sanft zu ziehen, bis die ventrale Wand der Luftröhre sichtbar ist. Ziehen Sie dann die Zunge vorsichtig zurück und führen Sie die Kanüle mit einer nach vorne gebogenen Spitze in Richtung der ventralen Fläche der Maus ein. Ziehen Sie erneut vorsichtig an der Nackenhaut, wie gerade gezeigt.Führen Sie die Kanüle in die Luftröhre ein, sobald der Katheter in der Luftröhre sichtbar ist, und schieben Sie den Katheter etwa fünf Millimeter vor, um die Stimmbänder zu passieren. Setzen Sie nun die Spitze einer mit 50 Mikrolitern der Applikationslösung gefüllten Gel-Ladepipette in das Luer-Anschlussstück des Katheters ein. Überprüfen Sie die synchron zur Atmung der Maus erfolgende Bewegung der Flüssigkeit in der Spitze.Anschießend das Injektat mit einer Ein-Milliliter-Spritze injizieren. Unmittelbar danach die Lungen durch den Katheter mit 0,6 Milliliter Luft aufblasen, um die Verteilung der Flüssigkeit zu unterstützen und die Lungen zu erweitern. Danach die Kanüle entfernen.Schließen Sie die chirurgische Wunde mit einer kleinen Menge Cyanacrylat-Klebstoff und stellen Sie die Maus in einen Einzelkäfig mit Überwachung, bis sie sich vollständig erholt hat. Nach dem letzten experimentellen Zeitpunkt führen Sie einen kleinen Schnitt am Hals des Tieres durch, um die ventrale Seite der Luftröhre freizulegen. Stecken Sie dann eine stumpfe Nadel der Größe 18 Gauge in die Luftröhre.Binden Sie mit Faden die Nadel in die Trachea ein und öffnen Sie vorsichtig den Thorax mit einem medianen Schnitt. Anschließend entfernen Sie das Zwerchfell und die seitlichen Brustwandabschnitte, um die Lungen freizulegen. Danach stellen Sie sicher, dass sich keine Luft in der Fixierleitung befindet, indem Sie Formaldehyd aus dem Ende des Hähns laufen lassen.Verbinden Sie anschließend den Formalinbehälter mit dem Reservoir und dem gefüllten Schlauch direkt mit dem Luer-Anschluss der Tracheakanüle. Bringen Sie die Oberfläche des Formalins 25 Zentimeter über dem Niveau des Mundes an und öffnen Sie das Hähnchen, um die Lunge mit dem Fixans mittels Überdruck aufzufüllen. Nachdem die Lunge mindestens 20 Minuten unter Druck stand, ziehen Sie die Kanüle langsam zurück, um mehr von der nicht kanierten Trachea freizulegen, und ligieren Sie die Trachea hinter dem Ende der Stumpfkanüle ab.Wenn die Luftröhre sicher abgebunden ist, entfernen Sie den Hahn und dissezieren Sie vorsichtig die Lungen aus. Anschließend werden die Lungen über Nacht in Formaldehyd gelegt. Hier ist eine typische Vorrichtung zur Fixierung der Lungen während der Bestimmung des fixierten Lungenvolumens gezeigt, die aus Plastikpipetten und dünnem 20-Gauge-Draht hergestellt ist. Zunächst wird das fixierte Lungenvolumen gemessen, danach werden Herz und anderes, nicht zum Lungengewebe gehörendes Gewebe von den Lungen disseziert.Stellen Sie anschließend einen Becher, der etwa 200 Milliliter Wasser enthält und mit der Drahtabstützung ausgestattet ist, auf eine Waage und tarieren Sie die Ausrüstung. Entfernen Sie danach die Vorrichtung. Legen Sie die Lunge auf die Wasseroberfläche und drücken Sie das Gewebe mit der Vorrichtung unter Wasser.Stellen Sie sicher, dass die Lungennaht oder irgendein Teil des Geräts die Seitenwände oder den Boden des Bechers nicht berührt, und notieren Sie das Gewicht auf der Waage. Diese Zahl spiegelt das verdrängte Wasservolumen wider und ist somit ein direktes Maß für das Lungenvolumen. Anschließend trocknen Sie die Lunge mit einem Tuch ab, tauchen den Becher erneut mit dem Gerät ein und wiederholen die Messung des Lungenvolumens. Die beiden Volumenmessungen sollten hier anschließend gemittelt werden. Ein Beispiel für eine Lunge, in die Trypanblau instilliert wurde, wie gerade gezeigt, ist dargestellt. Beachten Sie die weite Verteilung des Farbstoffs, vergleichbar mit dem, was zuvor bei anderen Farbstofftracern beobachtet wurde, die direkt in die Mausetrachea verabreicht wurden. Bei der Durchführung dieses Verfahrens ist es wichtig, vorsichtig bei der Einführung der Kanüle vorzugehen und die Spitze stets mit der ventralen Seite nach oben zu halten.Die hier beschriebenen Techniken sind nützlich für Studien zum Lungenkrebs, können aber auch auf die meisten anderen Mausmodelle von Lungenerkrankungen angewendet werden.

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Forschung

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Medizin

Intratracheale Instillationen liefern Solute direkt in die Lunge. Dieses Verfahren zielt auf die Lieferung der instillate in den distalen Regionen der Lunge, und wird daher oft in Studien am Studium Alveolen gerichtet eingebaut. Wir bieten Ihnen eine detaillierte Überleben Protokoll für die Durchführung intratracheale Instillationen in Mäusen.

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Verbesserte Visualisierung von Lungenmetastasen bei Single Cell Auflösung in Mäusen durch kombinierte<em&gt; In-situ</em&gt; Perfusion des Lungengewebes und X-Gal Färbung von<em&gt; LacZ</em&gt;-Tagged Tumor Cells

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Adenokarzinom-Transplantation: Eine Methode zur Implantation von Krebszellen in die Lunge von Mäusen

Dieses Video beschreibt eine einfache und zuverlässige Methode zum Einbringen von Flüssigkeit in die Luftröhre zur Lungeninstillation, Fixierung und Lungenvolumenmessung.

Lungeninstillation und -fixierung: Einbringen von Flüssigkeit in die Luftröhre und Fixieren der Lunge zur Messung des fixierten Lungenvolumens

Dieses Papier beschreibt eine striaghforward und effiziente Methode zur Intubation Mäusen Lungenfunktion Messungen oder pulmonale Instillation, dass die Mäuse sich zu erholen und zu späteren Zeitpunkten untersucht werden können. Das Verfahren beinhaltet eine kostengünstige LWL-Lichtquelle, die direkt beleuchtet die Luftröhre.

Eine einfache Methode der Maus Lung Intubation

Wir beschreiben eine Methode zur orthotopen Engraftment der Lungenkrebszellen in murinen Lungen deutlich zu verbessern, indem Vorklimatisierung die Atemwege mit Verletzungen. Dieser Ansatz kann auch angewendet werden, um die Stromale Interaktionen innerhalb der Lunge Mikroumgebung, metastasierendem Verbreitung, Lunge Krebs Komorbiditäten zu untersuchen und um effizienter Patient erzeugen Xenotransplantate abgeleitet.

Die Atemwege von Mäusen mit Bleomycin Vorklimatisierung erhöht die Effizienz der Orthotopen Lung Cancer Cell Engraftment

Hier wird ein nützliches Protokoll zur Lungenfixierung vorgestellt, das einen stabilen Zustand für die histologische Auswertung von Lungenproben aus einem Mausmodell von Emphysem schafft. Der Hauptvorteil dieses Modells ist, dass es viele Lungen mit dem gleichen konstanten Druck ohne Lungenkollaps oder Deflation reparieren kann.

Lungenfixierung unter konstantem Druck zur Beurteilung von Emphysem bei Mäusen

Die intratracheale (IT) Verabreichung von Versuchsmitteln bei Mäusen führt oft zu einer asymmetrischen Abgabe in die distale Lunge.  In diesem Bericht beschreiben wir einen direkten intrabronchialen (IB) Ansatz, um jede Lunge bei lebenden Mäusen nicht operativ zu nulaten.  Dieser Ansatz kann verwendet werden, um Wirkstoffe selektiv in eine Lunge zu verabreichen, oder kann angepasst werden, um die symmetrische Wirkstoffabgabe in beide Lungen zu verbessern.

Direkte intrabronchiale Verabreichung zur Verbesserung der selektiven Agentenablagerung innerhalb der Mauslunge

Der Zweck dieser Methode ist es, eine einfache und effiziente Methode für die Perfusion, Inflation und Fixierung von Mauslungen für die Untersuchung der Lungentumorpathologie und die Bewertung von Metastasen an der Lunge zu präsentieren.

Perfusion und Inflation der Mauslunge für Tumorhistologie

Wir stellen eine Methode für ein Pilzpathogenesemodell vor, das die natürliche Positionierung von Pilzsporen in den Lungenatemwegen für die Analyse mittels Fluoreszenzmikroskopie beibehält.

Effiziente Methode zur Bildgebung der Lunge von Mäusen, die die räumliche Dynamik von Pilzsporen in den Atemwegen bewahrt

Eine große Herausforderung bei der Entwicklung neuer Therapien für Lungenkrebs besteht darin, die Mikroumgebung des Tumors zu modellieren, wenn die regionale Erkrankung zu einer metastasierenden Erkrankung fortschreitet. Hier beschreiben wir eine einfache Methode zur Etablierung eines orthotopen syngenen Modells von Lungenkrebs, das eine In-vivo-Verfolgung der Krankheit im Zeitverlauf ermöglicht.

Eine minimalinvasive Methode zur Generierung eines syngenen orthotopen Mausmodells für Lungenkrebs

Lernen Sie Methoden zur Instillation und Fixation von Mäuselungen für Krebsforschung. Diese Techniken ermöglichen präzise Volumenmessungen und verbessern die Reproduzierbarkeit onkologischer Studien signifikant.

Instillation und Fixationsmethoden Nützlich in Maus Lung Cancer Research

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