A thrombotischer Schlaganfall Modell basierend auf Transient zerebrale Hypoxie-Ischämie

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, ein einfaches thrombotisches Schlaganfallmodell mit einem stabilen Hirninfarkt zu etablieren und die protektive Wirkung einer Gewebeplasminogen-, Aktivator- oder TPA-Therapie zu evaluieren. Zunächst wird die Induktion einer transitorischen zerebralen Hypoxie-Ischämie oder THI über die doppelte Ligatur der rechten Arteria carotis communis (RCCA) und die Exposition des ligierten Tieres gegenüber hypoxischen Bedingungen zur Induktion einer Thrombose demonstriert. Nach einem 30-minütigen hypoxischen Zustand werden die beiden Knoten an der Halsschlagader gelöst.

Im letzten Schritt wird die Verabreichung und Bewertung der Wirkungen der TPA-Therapie aufgezeigt. Alternativ kann eine Echtzeitaufzeichnung des zerebralen Blutflusses, der Entstehung der Thrombose und des Grades der Gefäßobstruktion untersucht werden. Dieser Master kann bei erwachsenen Mäusen einen thrombotischen Schlaganfall auslösen und sich mit seinem eigenen Gerinnungssystem ausruhen.

Wir wollen diesen Master nutzen, um zu untersuchen, wie das Gehirn seinen eigenen Blutfluss unter der Hypothese einer Ischämie reguliert. Verwenden Sie es auch, um zu untersuchen, wie wir die thrombotische Therapie verbessern können. Die visuelle Demonstration dieser Methode ist von entscheidender Bedeutung, da es schwierig sein kann, die richtige Körpertemperatur und die sanfte Atmung während der Gehirninfektion aufrechtzuerhalten.

Einführungsschritte: Mindestens 15 Minuten vor Beginn des Eingriffs. Stellen Sie die Operationsliege auf eine Wärmeunterlage, stellen Sie eine Temperatur von 37 Grad Celsius ein und legen Sie eine Nackenrolle aus dem Zylinder einer Drei-Milliliter-Spritze auf das Bett. Stellen Sie das Hypoxiesystem so ein, dass es 2 % Fluor in 7,5 % Sauerstoff liefert, ausgeglichen durch 92,5 % Stickstoff, und stellen Sie die Temperaturregler ein.

Setzen Sie eine 10 bis 13 Wochen alte, 22 bis 30 Gramm schwere, C 57 schwarze Sechsermaus auf die Operationsliege. Nachdem Sie die Anästhesie durch Zehenkneifen bestätigt haben, tragen Sie Salbe auf die Augen des Tieres auf. Strecken Sie die vier Gliedmaßen entlang des Halses, rollen Sie sie ein und sichern Sie sie mit medizinischem Klebeband.

Entfernen Sie dann mit einer Enthaarungscreme die Haare am Hals des Tieres und reinigen Sie die Operationsstelle. Schieben Sie nun die Operationsliege unter ein Präpariermikroskop und machen Sie einen 0,5 Zentimeter großen rechten zervikalen Schnitt in der Haut entlang der Mittellinie. Ziehen Sie mit einer feinen Pinzette die Luftröhre und den Muskel auseinander, um die rechte Halsschlagader freizulegen, und legen Sie zwei vorgeschnittene Nähte aus fünf oh Seide unter die Arterie.

Achten Sie darauf, die Halsschlagader lebend vom Vagusnerv zu trennen, nicht zwei vorgeschnittene lösbare Fünf-Oh-Seidennähte auf dem RCCA. Verwenden Sie dann vier monofile Nylon-Nähte, um die Haut zu schließen und die Maus schnell in das Hypoxie-System zu übertragen. Legen Sie die Gesichtsmaske über Nase und Mund des Tieres und eine rektale Sonde, so dass während der gesamten Hypoxie-Abgabe eine Körpertemperatur von 37,5 Grad Celsius aufrechterhalten wird.

Stellen Sie die Wärmelampen nach 30 Minuten ein. Bringen Sie die Maus zurück auf die Operationsliege und lösen Sie die beiden Nähte. Verschließen Sie dann die Wunde mit Gewebekleber und bringen Sie die Maus in ihren Käfig zurück, um das Tier zu überwachen, bis es vollständig genesen ist.

Alternativ kann die Laser-Speckle-Kontrastbildgebung verwendet werden, um den zerebralen Blutfluss während und nach einer Hypoxie-Ischämie zu untersuchen. Positionieren Sie das Tier in Bauchlage. Öffnen Sie als Nächstes die Kopfhaut mit einem einen Zentimeter langen Schnitt in der Mittellinie, um den Schädel freizulegen, aber öffnen Sie nicht den Schädel.

Übertragen Sie dann das Tier sofort in den Blutfluss-Imager und beginnen Sie mit der Aufzeichnung des zerebralen Blutflusses. Betrachten Sie die Bilder des zerebralen Blutflusses gemäß den Anweisungen des Herstellers mit der FLPI-Software, um die ausgewählten Regionen in Echtzeit zu analysieren. Um die Wirkung der TPA-Therapie zu bewerten, injizieren Sie den Tieren zu gegebener Zeit nach vorübergehendem einseitigem Karotisverschluss und Hypoxie intravenös in die Schwanzvene.

Quantifizieren Sie dann das Infarktvolumen durch in vivo TTC 24 Stunden nach der vorübergehenden zerebralen hypoxischen Ischämie. Am nächsten Tag verwenden Sie ein Vibram, um einen Millimeter dicke Abschnitte zu erhalten. Schließlich erhalten Sie eine Serie von vier geschnittenen Hirnbildern durch digitale Mikroskopie und verwenden Sie die entsprechende Bildgebungssoftware, um das Infarktvolumen als Verhältnis des weißen Infarktbereichs zum Bereich der unbeschädigten kontralateralen Hemisphäre zu quantifizieren.

Neben diesem Verfahren können auch andere Methoden der Thrombolyse verwendet werden, um deren Wirkung und klinisches Potenzial zu bewerten. Diese Technik ebnete den Weg für Forscher auf dem Gebiet des ischämischen Schlaganfalls, um die thrombolytische Therapie im Gehirn zu erforschen.