Name: Intravitalmikroskopie der Leukozyten-Endothel und Plättchen-Leukozyten-Wechselwirkungen in Mesenterialvenen in Mice (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-08-13T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 12 s
Description: Erfahren Sie die Intravitalmikroskopie zur Untersuchung von Leukozyten-Endothel- und Plättchen-Leukozyten-Wechselwirkungen in Mesenterialvenen von Mäusen. Diese Methode ermöglicht Echtzeitbildgebung entzündlicher Prozesse in vivo.

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Diese Arbeit wurde von der Deutschen Forschungsgemeinschaft (DU 1190/3-1) unterstützt.

Alle Tierversuche wurden in Übereinstimmung mit dem Deutschen Tierschutzgesetz (TierSchG) durchgeführt. Die Mäuse wurden untergebracht ist und in Übereinstimmung mit der guten Tierpraxis gehandhabt wie FELASA (www.felasa.eu/guidelines.php) und der nationalen Tierschutzkörper GV-SOLAS (www.gv-solas.de/index.html) definiert. Die Tierschutzkomitee der Universität Freiburg sowie die lokalen Behörden (Regierungspräsidium Freiburg) stimmten allen Tierversuchen. 1. Tier Handhabung, Vorbereitung und Induktion der Entzündung <ol><li> Verwenden Sie 4 - 6 Wochen alte männliche Mäuse mit einem Gewichtsbereich von 16 bis 20 g. Hinweis: Wenn die Mäuse älter sind oder schwerer präsentieren sie überschüssiges Fett rund um das Schiff, die Begrenzung der mikroskopischen Beobachtung. </li><li> Sterilisieren Sie alle Werkzeuge und Mikroskoptisch vor der Operation. </li><li> Injizieren Sie 20 mg / kg LPS (Lipopolysaccharid) intraperitoneal 4 Stunden vor der in den Wohn Maus Mikroskopie, eine bakterielle Inflamm induzierenation. </li><li> Vorwärmen eines 0,9% igen Kochsalzlösung in einem Wasserbad bei 37 ° C, um die Kunststoffkammer und Mesenterium Gewebe zu befeuchten. </li><li> Betäuben die Maus mit einer intraperitonealen Injektion von Ketamin (100 mg / kg) und Xylazin (5 mg / kg) unmittelbar vor der Mikroskopie Verfahren. Alternative Anästhesie verwendet werden kann, beispielsweise 2% Isofluran Einatmen. Überprüfen Sie die ordnungsgemäße Betäubung durch den Verlust der Reaktion auf Reflexstimulation (toe Prise oder Schwanz mit festem Druck). </li><li> Enthaaren den Bauch mit einem Rasierer und entfernen Sie lose Haare mit Gaze mit Ethanol 70% gesättigt. </li><li> Gelten vet Salbe auf die Augen der Maus an Trockenheit zu verhindern, während sie unter Anästhesie. </li></ol> 2. Chirurgie <ol><li> Sterilisieren Sie den Bauch mit 70% Ethanol. Dieses Verfahren ist kein Verfahren und sterile könnte tödliche am Ende des Experiments. </li><li> Führen Sie eine mediane Laparotomie: Öffnen Sie die Bauchhaut mit kleinen, gebogenen Pinzette und eine kleine Schere. Identifizieren Sie die epigastrical Gefäße und öffnen Sie das Peritoneum im Bereich der Linea alba, um die Schiffe zu schützen. </li><li> Geben Sie einige Tropfen von Kochsalzlösung vorgewärmt in die Bauchhöhle, um das Gewebe feucht zu halten. </li><li> Label von Leukozyten und Blutplättchen durch die Injektion fluoreszenz 50 ul Rhodamin 6G (1 mg / ml) retroorbital wie zuvor beschrieben 9,10. </li><li> Exteriorisieren eine Schleife von ileumand Ort in einem Petrischale mit einem Durchmesser von 10 cm und stellen Sie sicher, um das Gewebe feucht durch Anlegen der 37 ° C vorgewärmt halten Kochsalzlösung (0,9%) alle zwei Minuten. </li></ol> 3. Intravitalmikroskopie <ol><li> Platzieren Sie die Maus unter dem Mikroskop und bringen das Gekröse Vene mit einem Durchmesser von 200 bis 300 &amp; mgr; m in der Mitte der Ansicht. Wählen Sie ein Schiff ohne sichtbare Fett Umgebung. </li><li> Berühren Sie nicht die Gekröse Gefäße, wodurch die Stimulation des Endothels zu vermeiden. Behandeln Sie das Ileum Schleife vorsichtig. </li><li> Visualisieren Blutkörperchen-Endothel-Interaktionenmit einem invertierten oder aufrechten Mikroskop und eine Kamera mit einem Mikroskop-Software. Nehmen Blutkörperchen-Endothel-Interaktionen für 1 min in 4 verschiedenen Adern pro Maus. </li><li> Euthanize die Maus durch zervikale Dislokation nach Abschluss der Bildgebung Experimente. </li></ol> 4. Analyse <ol><li> Durchführung der Analyse offline und für alle Parameter geblendet. Durchführung von Analysen unter Verwendung einer geeigneten Software-Programm. </li><li> Bestätigen stabile und inter vergleichbare Blutströmungsverhältnisse in hoher Zeitauflösung cine-Clips (maximale Bildrate) auf intraluminale Blutzellenstrom konzentriert. </li><li> Quantifizierung der Anzahl von Roll Leukozyten. Dazu ziehen Sie eine vertikale Linie durch die Vene und zählen alle Leukozyten Überschreiten dieser Linie in 1 min. </li><li> Bestimmen Sie Walzgeschwindigkeit durch Messen der Zeit eine einzige Leukozyten muss einen Abstand von 50 &amp; mgr; m passieren, während stabil Rollen auf Endothel. Um dies zu tun, ziehen zwei vertikale Linien in einem Abstand von 50 &amp; mgr; turch die Vene. <ol><li> Die Zeit messen, ein Vertreter Leukozyten muss von einer Zeile zur other.Calculate die Geschwindigkeit der Leukozyten durch Teilen 50 um über den Zeitraum (&amp; mgr; m / s) zu erhalten. </li></ol></li><li> Messen Leukozytenadhäsion in einem Bereich von 0,04 mm 2. Dazu zeichnen Sie ein Quadrat mit der Seitenlänge von 200 &amp; mgr; m in die Vene. <ol><li> Zählen Sie die fest haftenden Leukozyten, definiert als ohne sichtbare Bewegung für 30 Sekunden, in diesem Platz. </li></ol></li><li> Zählen Sie die Anzahl von Blutplättchen an einem Leukozyten verpflichtet, Plättchen-Leukozyten-Wechselwirkungen zu quantifizieren. </li></ol>

<ol><li>Lehr, H. A., Vollmar, B., Vajkoczy, P., Menger, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravital+fluorescence+microscopy+for+the+study+of+leukocyte+interaction+with+platelets+and+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+enzymology%22%5BJournal%5D)">Intravital fluorescence microscopy for the study of leukocyte interaction with platelets and endothelial cells.</a> Methods in enzymology. 300, 462-481 (1999).</li>
<li>Atherton, A., Born, G. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+investigations+of+the+adhesiveness+of+circulating+polymorphonuclear+leucocytes+to+blood+vessel+walls%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+physiology%22%5BJournal%5D)">Quantitative investigations of the adhesiveness of circulating polymorphonuclear leucocytes to blood vessel walls.</a> The Journal of physiology. 222, 447-474 (1972).</li>
<li>Duerschmied, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serotonin+stimulates+platelet+receptor+shedding+by+tumor+necrosis+factor-alpha-converting+enzyme+%28ADAM17%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+thrombosis+and+haemostasis+%3A+JTH%22%5BJournal%5D)">Serotonin stimulates platelet receptor shedding by tumor necrosis factor-alpha-converting enzyme (ADAM17).</a> Journal of thrombosis and haemostasis : JTH. 7, 1163-1171 (2009).</li>
<li>Chauhan, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ADAMTS13%3A+a+new+link+between+thrombosis+and+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+experimental+medicine%22%5BJournal%5D)">ADAMTS13: a new link between thrombosis and inflammation.</a> The Journal of experimental medicine. 205, 2065-2074 (1084).</li>
<li>Baez, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+open+cremaster+muscle+preparation+for+the+study+of+blood+vessels+by+in+vivo+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Microvascular+research%22%5BJournal%5D)">An open cremaster muscle preparation for the study of blood vessels by in vivo microscopy.</a> Microvascular research. 5, 384-394 (1973).</li>
<li>Leister, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+peritoneal+cavity+chamber+for+intravital+microscopy+of+the+liver+under+conditions+of+pneumoperitoneum%5BTitle%5D)+AND+%22Surgical+endoscopy%22%5BJournal%5D)">A peritoneal cavity chamber for intravital microscopy of the liver under conditions of pneumoperitoneum.</a> Surgical endoscopy. 17, 939-942 (2003).</li>
<li>Duerschmied, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet+serotonin+promotes+the+recruitment+of+neutrophils+to+sites+of+acute+inflammation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Platelet serotonin promotes the recruitment of neutrophils to sites of acute inflammation in mice.</a> Blood. 121, 1008-1015 (2013).</li>
<li>Herr, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+fluoxetine+treatment+induces+slow+rolling+of+leukocytes+on+endothelium+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Acute fluoxetine treatment induces slow rolling of leukocytes on endothelium in mice.</a> PloS one. 9, e88316(2014).</li>
<li>Yardeni, T., Eckhaus, M., Morris, H. D., Huizing, M., Hoogstraten-Miller, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retro-orbital+injections+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+animal%22%5BJournal%5D)">Retro-orbital injections in mice.</a> Lab animal. 40, 155-160 (2011).</li>
<li>Steel, C. D., Stephens, A. L., Hahto, S. M., Singletary, S. J., Ciavarra, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+the+lateral+tail+vein+and+the+retro-orbital+venous+sinus+as+routes+of+intravenous+drug+delivery+in+a+transgenic+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+animal%22%5BJournal%5D)">Comparison of the lateral tail vein and the retro-orbital venous sinus as routes of intravenous drug delivery in a transgenic mouse model.</a> Lab animal. 37, 26-32 (2008).</li>
<li>Duerschmied, D., Bode, C., Ahrens, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+functions+of+platelets%5BTitle%5D)+AND+%22Thrombosis+and+haemostasis%22%5BJournal%5D)">Immune functions of platelets.</a> Thrombosis and haemostasis. 112, 678-691 (2014).</li>
<li>Wagner, D. D., Frenette, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+vessel+wall+and+its+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">The vessel wall and its interactions.</a> Blood. 111, 5271-5281 (2008).</li>
<li>Gawaz, M., Fateh-Moghadam, S., Pilz, G., Gurland, H. J., Werdan, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet+activation+and+interaction+with+leucocytes+in+patients+with+sepsis+or+multiple+organ+failure%5BTitle%5D)+AND+%22European+journal+of+clinical+investigation%22%5BJournal%5D)">Platelet activation and interaction with leucocytes in patients with sepsis or multiple organ failure.</a> European journal of clinical investigation. 25, 843-851 (1995).</li>
<li>Sarma, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+platelet+binding+to+circulating+monocytes+in+acute+coronary+syndromes%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Increased platelet binding to circulating monocytes in acute coronary syndromes.</a> Circulation. 105, 2166-2171 (2002).</li>
<li>Sumagin, R., Sarelius, I. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TNF-alpha+activation+of+arterioles+and+venules+alters+distribution+and+levels+of+ICAM-1+and+affects+leukocyte-endothelial+cell+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22American+journal+of+physiology.+Heart+and+circulatory+physiology%22%5BJournal%5D)">TNF-alpha activation of arterioles and venules alters distribution and levels of ICAM-1 and affects leukocyte-endothelial cell interactions.</a> American journal of physiology. Heart and circulatory physiology. 291, H2116-H2125 (2006).</li>
</ol>

Die Autoren haben nichts offenzulegen.

Hier beschreiben wir die Vorbereitung und Durchführung der Intravitalmikroskopie der Gekröse Venen von Mäusen in vivo. Diese Methode gibt uns die Möglichkeit, Leukozyten-Endothel und Thrombozyten-Endothel-Interaktionen 11 direkt im lebenden Organismus zu beobachten. Als einer der ersten Reaktion auf das Endothel Entzündung aktiviert wird und interagiert mit von Leukozyten und Blutplättchen, was zu rollen, Adhäsion und Trans 12. Aber auch Leukozyten mit Thromboz...

Der Zweck dieses Protokolls ist es, ein vereinfachtes Verfahren der Intravitalmikroskopie der Gekröse Adern in lebenden Mäusen für die direkte Beobachtung der Leukozyten-Endothel und Leukozyten-Thrombozyten-Wechselwirkungen unter entzündlichen Erkrankungen zu beschreiben. Intravitalmikroskopie wurde entwickelt, um Leukozyten-Endothel-Interaktionen in vivo unter entzündlichen Erkrankungen 1,2, das ist nicht trivial, aber wichtig für das Verständnis entzündlicher Leukozytenrekrutierung und Funktion zu untersuchen. Die Methode beschreiben wir in diesem Protokoll wurde auf der Grundlage zuvor veröffentlichten Publikationen entwickelt. Ähnlich Visualisierung Thrombozyten Einbau in eine wachsende Thrombus 3 und parallel zu dem, was bereits früher veröffentlicht 4 ist ein exteriorisierten Mesenterium Venendurchlichtmikroskopie untersucht. Es gibt verschiedene andere Modelle von intra-Vitalmikroskopie wie dem Cremastermuskel von Ratten 5 oder Leber der Maus und Ratten 6. Intravitalmikroskopie Mesenterium Vene wurde entwickelt und in früheren Studien durch verschiedene Gruppen angewandt. Wir haben diese Technik verwendet werden, um Unterschiede in der Rekrutierung von Leukozyten zwischen Wildtyp-Mäusen und Tryptophan hydroxylase1 (Tph1) beobachten - / - Mäusen, die einen Mangel an nicht-neuronalen Serotonin und verglichen die Ergebnisse an Mäusen, deren Blutplättchen-Serotonin wurde pharmakologisch durch langfristige aufgebraucht sind Anwendung der ein selektiver Serotonin-Wiederaufnahmehemmer Fluoxetin 7. Wir haben auch Leukozyten-Endothel-Interaktionen nach akutem Fluoxetin-Behandlung 8 untersucht. In diesem Protokoll konzentrieren wir uns auf Intravitalmikroskopie Mesenterium Venen, weil dieses Modell kann schnell durchgeführt werden und ermöglicht gültigen Messungen der Leukozyten-Endothel und Blutplättchen-Leukozyten-Wechselwirkungen. Dies ist viel schwieriger und zeitraub in Intravitalmikroskopie an anderen Organen, wie etwa Knochen, Leber, Haut oder M. cremaster. Der Modushier beschriebene l ist nach herausforderndes mit einem entzündlichen Stimulus, wie beispielsweise eine intraperitoneale Injektion von Lipopolysaccharid ideal zur reproduzierbaren Beurteilung von entzündlichen Zell-Zell-Interaktion.

<table><tbody><tr><td>Rhodamin 6G</td><td>Sigma-Aldbsp</td><td>; 989-38-8</td><td></td></tr><tr><td>Lipopolysaccharide aus Escherichia coli 055:B5</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L2637&nbsp;</td><td></td></tr></tbody></table>

intravitalmikroskopie der leukozyten-endothel und plättchen-leukozyten-wechselwirkungen in mesenterialvenen in mice

Intravital Microscopy of Leukocyte-endothelial and Platelet-leukocyte Interactions in Mesenterial Veins in Mice

Intravitalmikroskopie ist eine Methode, die verwendet werden können, um verschiedene Prozesse in verschiedenen Regionen und Gefäße in lebenden Tieren zu untersuchen. In diesem Protokoll beschreiben wir Intravitalmikroskopie der Gekröse Adern. Dies kann in einem kurzen Zeitraum mit reproduzierbaren Ergebnissen, die Leukozyten-Endothel-Interaktionen in vivo durchgeführt werden. Wir beschreiben eine entzündliche Einstellung nach der LPS-Exposition des Endothels. Aber in diesem Modell kann man viele verschiedene Arten von entzündlichen Erkrankungen wie Bakterien, chemische oder biologische gelten, und untersuchen die Verabreichung von Arzneimitteln und deren direkte Auswirkungen auf die lebenden Tier und seine Auswirkungen auf die Rekrutierung von Leukozyten. Dieses Protokoll wurde erfolgreich in einer Reihe von verschiedenen Behandlungen von Mäusen und ihre Wirkungen auf entzündliche Reaktion in den Gefäßen eingesetzt. Hier beschreiben wir die Visualisierung von Leukozyten und Blutplättchen durch Fluoreszenzmarkierung diese mit Rhodamin 6G. Zusätzlich kann jede spezifische Bildgebung pe seinrformed durch gezielte fluoreszenzmarkierte Moleküle.

Ein Überblick über die in diesem Protokoll beschriebenen experimentellen Anordnung ist in Abbildung 1 dargestellt. Es zeigt eine Maus mit einem exteriorisierten Ileum-Loop und ihre Gefäße, die in Intravitalmikroskopie beobachtet werden kann, Fig. 2 zeigt bestimmte Aktivierungsgrad bei unbehandelten Tieren durch das Verfahren selbst. Aber es gibt fast keinen langsamen Rollen oder feste Adhäsion von Leukozyten im Vergleich zu LPS-behandelten Mäusen. 2 zeigt auch die versc...

Diese vereinfachte Anwendung der Intravitalmikroskopie von Mesenterialvenen bei Mäusen kann in verschiedenen Entzündungsmodellen verwendet werden, um Leukozyten-Endothel- und Thrombozyten-Leukozyten-Wechselwirkungen zu beobachten.

Intravitalmikroskopie der Leukozyten-Endothel und Plättchen-Leukozyten-Wechselwirkungen in Mesenterialvenen in Mice

Intravital microscopy is a method that can be used to investigate different processes in different regions and vessels in living animals. In this ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens besteht darin, die Wechselwirkungen zwischen Leukozyten, Endothelzellen und Plättchen-Leukozyten während einer Entzündung in vivo zu untersuchen. Dies wird erreicht, indem zunächst eine Maus mit den Substanzen der Untersuchung vorbehandelt und die Blutzellen markiert werden; anschließend wird eine Ileumschleife sowie die zugehörigen mesenterialen Gefäße ausgelagert, und die in einer ausgewählten mesenterialen Vene stattfindenden STO-Zellwechselwirkungen werden mittels intravitalem Mikroskopieren abgebildet. Letztendlich können die Wechselwirkungen zwischen den Leukozyten und den Thrombozyten mit den Endothelzellen oder untereinander analysiert werden.Mit dieser Methode lassen sich zentrale Fragen auf dem Gebiet der Entzündungsforschung beantworten, beispielsweise welche Arten von Leukozyten-Endothel- oder Thrombozyten-Leukozyten-Wechselwirkungen in vivo während unterschiedlicher Entzündungsmodelle oder nach verschiedenen interessierenden Vorbehandlungen auftreten. Injizieren Sie vier Stunden vor der intravitale Bildgebung 20 Milligramm pro Kilogramm LPS i.p. in eine 16 bis 20 Gramm schwere männliche Maus im Alter von vier bis sechs Wochen, um eine bakterielle Entzündungsreaktion vorzutäuschen. Prewarmen Sie zu diesem Zeitpunkt außerdem eine 0,9-%-Salzlösung in einem 37-Grad-Celsius-Wasserbad, um die Plastikkammer und das Mesenteriumgewebe zu befeuchten.Als Nächstes bestätigen Sie die geeignete Anästhesietiefe durch das Fehlen einer Reaktion auf das Zupinnen der Zehen bei der mit LPS behandelten Maus und tragen dann Salbe auf die Augen auf, rasieren den Bauch und entfernen loses Haar mit mit 70 % Ethanol getränkter Gaze. Anschließend öffnen Sie mit einer kleinen gebogenen Pinzette und einer Schere den Bauch, identifizieren die epigastrischen Gefäße und öffnen das Peritoneum im Bereich der Linea alba, um die Gefäße zu schützen. Geben Sie einige Tropfen vorgewärmte Kochsalzlösung in die Bauchhöhle, um das Gewebe feucht zu halten, gefolgt von einer retroorbitalen Injektion von 50 µL Rod Domine six G zur Markierung der zirkulierenden Blutzellen.Danach die Maus in eine 10 cm große Petrischale legen, eine Dünndarmschleife ausstülpen und alle zwei Minuten vorgewärmte Kochsalzlösung verabreichen, um das Gewebe feucht zu halten. Um die entzündliche Reaktion mittels Intravitalmikroskopie zu visualisieren, platzieren Sie die Maus unter dem Mikroskop und bringen eine Mesentericavehne mit einem Durchmesser von 200 bis 300 Mikrometern und möglichst wenig sichtbarem umgebenden Fettgewebe in den Sichtbereich. Verwenden Sie dazu die entsprechende Mikroskop-Software.Notieren Sie die Wechselwirkungen zwischen Blutzellen und Endothelzellen für eine Minute in jeweils vier verschiedenen Venen pro Maus. Anschließend analysieren Sie die zellulären Reaktionen, um stabile Bedingungen mit individuellem Blutfluss zu bestätigen. Um die Anzahl rollender Leukozyten zu quantifizieren, zeichnen Sie eine vertikale Linie durch die Vene und zählen manuell alle Leukozyten, die diese Linie innerhalb einer Minute überqueren.Um die Rollgeschwindigkeit zu bestimmen, zeichnen Sie zwei vertikale Linien durch die Vene im Abstand von 50 Mikrometern und messen Sie die Zeit, die ein einzelnes Leukozyt benötigt, um zwischen den Linien hindurchzuwandern, während es stabil auf dem Endothel rollt. Um die Leukozytenadhäsion zu messen, zeichnen Sie ein 200 mal 200 Mikrometer großes Quadrat in die Vene. Zählen Sie anschließend manuell die festhaftenden Leukozyten, die innerhalb des Quadrats 30 Sekunden lang keine sichtbare Bewegung zeigen.Abschließend quantifizieren Sie die Thrombozyten-Leukozyten-Interaktionen, indem Sie die Anzahl der an einen Leukozyten gebundenen Thrombozyten manuell zählen. Obwohl unbehandelte Tiere aufgrund des Eingriffs selbst einen gewissen Grad an Aktivierung aufweisen, kommt es bei unbehandelten Leukozyten nahezu zu keinem langsamen Rollen oder festen Adhäsion. Tatsächlich werden bei mit LPS behandelten Mäusen höhere Zahlen an rollenden und adhärenten Leukozyten beobachtet, verbunden mit einer Verringerung der Rollgeschwindigkeit der zirkulierenden Blutzellen.In diesem Experiment wurde unmittelbar nach einer akuten intraperitonealen Behandlung mit Fluoxetin eine intravitale Mikroskopie ohne weitere LPS-Herausforderung durchgeführt. Beachten Sie die höheren Zahlen festhaftender Leukozyten und die niedrigeren Rollgeschwindigkeiten bei den mit Fluoxetin behandelten Tieren, was auf einen Einfluss der akuten Fluoxetin-Behandlung auf die Interaktionen zwischen Leukozyten und Endothelzellen hinweist. Außerdem ist, wie in diesem repräsentativen Bild der Wechselwirkungen zwischen Thrombozyten und Leukozyten in einer mesenterischen Vene während einer LPS-induzierten Peritonitis zu sehen, eine Umhüllung der Leukozyten durch Thrombozyten sowie die Interaktionen dieser Komplexe mit der Gefäßwand erkennbar.Nachdem Sie sich dieses Video angesehen haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie man die intravitale Mikroskopie durchführt, um die Interaktionen zwischen Leukozyten, Endothelzellen und Plättchen-Leukozyten zu untersuchen.

intravital-microscopy-leukocyte-endothelial-platelet-leukocyte

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Forschung

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie und Infektion

Intravitalmikroskopie zur zeitlichen und räumlichen hämodynamischen und entzündliche Ereignisse in der Pia Mikrozirkulation folgen.

Intravitalmikroskopie von Gehirn der Maus Mikrozirkulation mit einem Closed Cranial Fenster

In diesem Video demonstrieren wir die Echtzeit-Visualisierung von Blutzell-Endothel-Wechselwirkungen in den Mesenterialvenen eines Mausmodells, das intraperitoneal mit Lipopolysaccharid injiziert wurde.

Intravitalmikroskopie zur Analyse von Wechselwirkungen zwischen Blutzellen und Endothel in einem Entzündungs-Mausmodell

Hier berichten wir über eine experimentelle Technik der Fluoreszenz-Intravitalmikroskopie um heterotypische Thrombozyten-Neutrophilen-Interaktionen auf dem aktivierten Endothel während der vaskulären Entzündungen und Thrombusbildung in lebenden Mäusen sichtbar zu machen. Diese mikroskopische Technik wird wertvoll sein, um die molekularen Mechanismen der vaskulären Erkrankungen zu studieren und pharmakologische Mittel unter pathophysiologischen Bedingungen zu testen.

Real-time Imaging der heterotypische Platelet-Neutrophilen-Interaktionen auf aktiviertem Endothel Während Vascular Entzündung und Thrombusbildung in lebenden Mäusen

Wir beschreiben ein Protokoll zur Überwachung des Verhaltens von Neutrophilen und Monozyten in Mesenterialvenen unter stationären und entzündlichen Bedingungen mittels intravitaler konfokaler Mikroskopie an anästhesierten Mäusen.

Abbilden Neutrophilen und Monozyten in Mesenterialvenen von Intravitalmikroskopie an narkotisierten Ratten in Echtzeit

Monozyten sind wichtige Vermittler des Arteriogenesis im Rahmen der peripheren arteriellen Verschlusskrankheit. Mit einem Basalmembran-wie Matrix und intravitalen Mikroskopie, untersucht dieses Protokoll Monocyte homing und im Zusammenhang mit Tumor-Angiogenese nach Monocyte-Injektion in die Femoral Arterie Ligatur Mausmodell.

Intravitalen Mikroskopie Monocyte Homing und Tumor-bezogene Angiogenese in einem Mausmodell der peripheren arteriellen Verschlusskrankheit

Hier zeigen wir, wie man eine intravitale Mikroskopie auf postkapillaren Venulen des Maus-Cremaster-Muskels durchführt. Häufig angewendet auf verschiedene Modelle von Entzündungen und Sepsis, insbesondere solche, die durch Chemokine und Zytokine induziert werden, heben wir ihre Relevanz in der Untersuchung von Muskopathien mit übertriebener Muskel-Leukozyten-Infiltration hervor.

Leukozyten-Infiltration von Cremaster-Muskeln bei Mäusen bewertet durch Intravital-Mikroskopie

Die Rekrutierung von Leukozyten und Blutplättchen stellt eine wesentliche Komponente dar, die für das effektive Wachstum von Kollateralarterien während der Arteriogenese notwendig ist. Die Multiphotonenmikroskopie ist ein effizientes Werkzeug zur Verfolgung der Zelldynamik mit hoher räumlicher und zeitlicher Auflösung in vivo und geringerer Phototoxizität, um die Rekrutierung und Extravasation von Leukozyten während der Arteriogenese zu untersuchen.

Multiphotonen-Intravital-Bildgebung zur Überwachung der Leukozytenrekrutierung während der Arteriogenese in einem murinen Hintergliedmaßenmodell

Dieses Protokoll stellt eine Methode zur Induktion einer mesenterialen Ischämie-Reperfusionsverletzung und zur Visualisierung neutrophiler extrazellulärer Fallen (NETs) in mesenterialen Venolen mittels intravitaler Mikroskopie vor. Der Blutfluss in der Arteria mesenterica superior war für 1 h eingeschränkt, gefolgt von einer Reperfusion, was eine direkte Quantifizierung der Leukozytenadhäsion und NETose ermöglichte.

Visualisierung von neutrophilen extrazellulären Traps in mesenterialen Venolen nach mesenterialer Ischämie-Reperfusionsverletzung mittels intravitaler Mikroskopie

Eine Technik für die Durchführung Intravitalmikroskopie der Leistengegend Lymphknoten (LN) wird skizziert. Solche Technik ermöglicht in...

Intravitalmikroskopie der Leistenbruch Lymph Node

Wir beschreiben ein Protokoll von Hellfeld Intravitalmikroskopie zur Messung dynamischer Neutrophilen-Endothel-Zell-Interaktionen während der neutrophilen Granulozyten Rekrutierung in Reaktion auf die Quelle eines neutrophilen Lockstoff in vivo. Neutrophile intraluminale Krabbeln, transendotheliale Migration und Chemotaxis in Maus cremaster Muskelgewebe visualisiert mit Zeitraffer-Video Fotografie und verfolgt mit ImageJ.

Tracking-Neutrophil Intraluminale Crawling, transendotheliale Migration und Chemotaxis in Tissue durch Intravital Video-Mikroskopie

Erfahren Sie die Intravitalmikroskopie zur Untersuchung von Leukozyten-Endothel- und Plättchen-Leukozyten-Wechselwirkungen in Mesenterialvenen von Mäusen. Diese Methode ermöglicht Echtzeitbildgebung entzündlicher Prozesse in vivo.

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