Name: Entschlüsselung und Imaging Pathogenese und Cording von Mycobacterium abscessus In Zebrafischembryonen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-09-09T15:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 38 s
Description: Erfahren Sie die Virulenz verschiedener Mycobacterium abscessus-Stämme in transparenten Zebrafischembryonen. Diese Methode ermöglicht die Echtzeit-Visualisierung von Bakterien-Makrophagen-Interaktionen mittels Fluoreszenzmikroskopie.

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Die Autoren danken K. Kissa für hilfreiche Diskussionen und für die Bereitstellung von Lipo-Clodronat und L. Ramakrishnan für die großzügige Gabe der pTEC27 und pTEC15, die die Expression tdTomato und Wasabi zu ermöglichen sind. Diese Arbeiten sind Teil der Projekte des Französisch National Research Agency (ZebraFlam ANR-10-MIDI-009 und DIMYVIR ANR-13-BSV3-007-01) und Siebte Rahmenprogramm der Europäischen Gemeinschaft (FP7-PEOPLE-2011-ITN) unter Finanzhilfevereinbarung Nr. PITN-GA-2011-289209 für die Marie-Curie Initial Training Network FishForPharma. Wir möchten auch die Vereinigung von Gregory Lemarchal und Vaincre La Mucoviscidose (RF20130500835) für die Finanzierung CM Dupont danken.

<ol><li>Brown-Elliott, B. A., Wallace, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+and+taxonomic+status+of+pathogenic+nonpigmented+or+late-pigmenting+rapidly+growing+mycobacteria%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Microbiology+Reviews%22%5BJournal%5D)">Clinical and taxonomic status of pathogenic nonpigmented or late-pigmenting rapidly growing mycobacteria.</a> Clinical Microbiology Reviews. 15 (4), 716-746 (2002).</li>
<li>Aitken, M. L., Limaye, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Respiratory+outbreak+of+Mycobacterium+abscessus+subspecies+massiliense+in+a+lung+transplant+and+cystic+fibrosis+center%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Respiratory+and+Critical+Care+Medicine%22%5BJournal%5D)">Respiratory outbreak of Mycobacterium abscessus subspecies massiliense in a lung transplant and cystic fibrosis center.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 185 (2), 231-232 (2012).</li>
<li>Gilljam, M., Lindblad, A., Ridell, M., Wold, A. E., Welinder-Olsson, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+epidemiology+of+Mycobacterium+abscessus%2C+with+focus+on+cystic+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Molecular epidemiology of Mycobacterium abscessus, with focus on cystic fibrosis.</a> Journal of Clinical Microbiology. 45 (5), 1497-1504 (2007).</li>
<li>Roux, A. -L., Catherinot, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multicenter+study+of+prevalence+of+nontuberculous+mycobacteria+in+patients+with+cystic+fibrosis+in+France%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Multicenter study of prevalence of nontuberculous mycobacteria in patients with cystic fibrosis in France.</a> Journal of Clinical Microbiology. 47 (12), 4124-4128 (2009).</li>
<li>Lee, M. -R., Cheng, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CNS+infections+caused+by+Mycobacterium+abscessus+complex%3A+clinical+features+and+antimicrobial+susceptibilities+of+isolates%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Antimicrobial+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">CNS infections caused by Mycobacterium abscessus complex: clinical features and antimicrobial susceptibilities of isolates.</a> The Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 67 (1), 222-225 (2012).</li>
<li>Talati, N. J., Rouphael, N., Kuppalli, K., Franco-Paredes, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spectrum+of+CNS+disease+caused+by+rapidly+growing+mycobacteria%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Spectrum of CNS disease caused by rapidly growing mycobacteria.</a> The Lancet Infectious Diseases. 8 (6), 390-398 (2008).</li>
<li>Medjahed, H., Gaillard, J. -L., Reyrat, J. -M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mycobacterium+abscessus%3A+a+new+player+in+the+mycobacterial+field%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Mycobacterium abscessus: a new player in the mycobacterial field.</a> Trends in Microbiology. 18 (3), 117-123 (2010).</li>
<li>Griffith, D. E., Girard, W. M., Wallace, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+features+of+pulmonary+disease+caused+by+rapidly+growing+mycobacteria.+An+analysis+of+154+patients%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Review+of+Respiratory+Disease%22%5BJournal%5D)">Clinical features of pulmonary disease caused by rapidly growing mycobacteria. An analysis of 154 patients.</a> The American Review of Respiratory Disease. 147 (5), 1271-1278 (1993).</li>
<li>Nessar, R., Cambau, E., Reyrat, J. M., Murray, A., Gicquel, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mycobacterium+abscessus%3A+a+new+antibiotic+nightmare%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Antimicrobial+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">Mycobacterium abscessus: a new antibiotic nightmare.</a> The Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 67 (4), 810-818 (2012).</li>
<li>Sanguinetti, M., Ardito, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fatal+pulmonary+infection+due+to+multidrug-resistant+Mycobacterium+abscessus+a+patient+with+cystic+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Fatal pulmonary infection due to multidrug-resistant Mycobacterium abscessus a patient with cystic fibrosis.</a> Journal of Clinical Microbiology. 39 (2), 816-819 (2001).</li>
<li>Griffith, D. E., Aksamit, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+official+ATS%2FIDSA+statement%3A+diagnosis%2C+treatment%2C+and+prevention+of+nontuberculous+mycobacterial+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Respiratory+and+Critical+Care+Medicine%22%5BJournal%5D)">An official ATS/IDSA statement: diagnosis, treatment, and prevention of nontuberculous mycobacterial diseases.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 175 (4), 367-416 (2007).</li>
<li>Howard, S. T., Rhoades, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spontaneous+reversion+of+Mycobacterium+abscessus+a+smooth+to+a+rough+morphotype+is+associated+with+reduced+expression+of+glycopeptidolipid+and+reacquisition+of+an+invasive+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiology+%28Reading%2C+England%29%22%5BJournal%5D)">Spontaneous reversion of Mycobacterium abscessus a smooth to a rough morphotype is associated with reduced expression of glycopeptidolipid and reacquisition of an invasive phenotype.</a> Microbiology (Reading, England). 152 (Pt 6), 1581-1590 (2006).</li>
<li>Chardi, A., Olivares, F., Byrd, T. F., Julián, E., Brambilla, C., Luquin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Demonstration+of+cord+formation+by+rough+Mycobacterium+abscessus+variants%3A+implications+for+the+clinical+microbiology+laboratory%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Demonstration of cord formation by rough Mycobacterium abscessus variants: implications for the clinical microbiology laboratory.</a> Journal of Clinical Microbiology. 49 (6), 2293-2295 (2011).</li>
<li>Byrd, T. F., Lyons, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preliminary+characterization+of+a+Mycobacterium+abscessus+mutant+in+human+and+murine+models+of+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+Immunity%22%5BJournal%5D)">Preliminary characterization of a Mycobacterium abscessus mutant in human and murine models of infection.</a> Infection and Immunity. 67 (9), 4700-4707 (1999).</li>
<li>Catherinot, E., Clarissou, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypervariance+of+a+rough+variant+of+the+Mycobacterium+abscessus+type+strain%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+Immunity%22%5BJournal%5D)">Hypervariance of a rough variant of the Mycobacterium abscessus type strain.</a> Infection and Immunity. 75 (2), 1055-1058 (2007).</li>
<li>Catherinot, E., Roux, A. -L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+respiratory+failure+involving+an+R+variant+of+Mycobacterium+abscessus%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Acute respiratory failure involving an R variant of Mycobacterium abscessus.</a> Journal of Clinical Microbiology. 47 (1), 271-274 (2009).</li>
<li>Bernut, A., Le Moigne, V., Lesne, T., Lutfalla, G., Herrmann, J. -L., Kremer, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+assessment+of+drug+efficacy+against+Mycobacterium+abscessus+using+the+embryonic+zebrafish+test+system%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrobial+Agents+and+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">In vivo assessment of drug efficacy against Mycobacterium abscessus using the embryonic zebrafish test system.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 58 (7), 4054-4063 (2014).</li>
<li>Oh, C. -T., Moon, C., Jeong, M. S., Kwon, S. -H., Jang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+melanogaster+for+Mycobacterium+abscessus+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Microbes+and+Infection+%2F+Institut+Pasteur%22%5BJournal%5D)">Drosophila melanogaster for Mycobacterium abscessus infection.</a> Microbes and Infection / Institut Pasteur. 15 (12), 788-795 (2013).</li>
<li>Bernut, A., Herrmann, J. -L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mycobacterium+abscessus+cording+prevents+phagocytosis+and+promotes+abscess+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Mycobacterium abscessus cording prevents phagocytosis and promotes abscess formation.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111 (10), E943-E952 (2014).</li>
<li>Dubée, V., Bernut, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%CE%B2-Lactamase+inhibition+by+avibactam+in+Mycobacterium+abscessus%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Antimicrobial+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">β-Lactamase inhibition by avibactam in Mycobacterium abscessus.</a> Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 70 (4), 1051-1058 (2015).</li>
<li>Torraca, V., Masud, S., Spaink, H. P., Meijer, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage-pathogen+interactions+in+infectious+diseases%3A+new+therapeutic+insights+from+the+zebrafish+host+model%5BTitle%5D)+AND+%22Disease+Models+Mechanisms%22%5BJournal%5D)">Macrophage-pathogen interactions in infectious diseases: new therapeutic insights from the zebrafish host model.</a> Disease Models Mechanisms. 7 (7), 785-797 (2014).</li>
<li>Alibaud, L., Rombouts, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Mycobacterium+marinum+TesA+mutant+defective+for+major+cell+wall-associated+lipids+is+highly+attenuated+in+Dictyostelium+discoideum+and+zebrafish+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Microbiology%22%5BJournal%5D)">A Mycobacterium marinum TesA mutant defective for major cell wall-associated lipids is highly attenuated in Dictyostelium discoideum and zebrafish embryos.</a> Molecular Microbiology. 80 (4), 919-934 (2011).</li>
<li>Clay, H., Volkman, H. E., Ramakrishnan, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+necrosis+factor+signaling+mediates+resistance+to+mycobacteria+by+inhibiting+bacterial+growth+and+macrophage+death%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Tumor necrosis factor signaling mediates resistance to mycobacteria by inhibiting bacterial growth and macrophage death.</a> Immunity. 29 (2), 283-294 (2008).</li>
<li>Palha, N., Guivel-Benhassine, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+whole-body+visualization+of+Chikungunya+Virus+infection+and+host+interferon+response+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+pathogens%22%5BJournal%5D)">Real-time whole-body visualization of Chikungunya Virus infection and host interferon response in zebrafish.</a> PLoS pathogens. 9 (9), e1003619(2013).</li>
<li>Mostowy, S., Boucontet, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+zebrafish+as+a+new+model+for+the+in+vivo+study+of+Shigella+flexneri+with+phagocytes+and+bacterial+autophagy%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+pathogens%22%5BJournal%5D)">The zebrafish as a new model for the in vivo study of Shigella flexneri with phagocytes and bacterial autophagy.</a> PLoS pathogens. 9 (9), e1003588(2013).</li>
<li>Prajsnar, T. K., Cunliffe, V. T., Foster, S. J., Renshaw, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+vertebrate+model+of+Staphylococcus+aureus+reveals+phagocyte-dependent+resistance+of+zebrafish+to+non-host+specialized+pathogens%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+Microbiology%22%5BJournal%5D)">A novel vertebrate model of Staphylococcus aureus reveals phagocyte-dependent resistance of zebrafish to non-host specialized pathogens.</a> Cellular Microbiology. 10 (11), 2312-2325 (2008).</li>
<li>Van der Sar, A. M., Appelmelk, B. J., Vandenbroucke-Grauls, C. M. J. E., Bitter, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+star+with+stripes%3A+zebrafish+as+an+infection+model%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Microbiology%22%5BJournal%5D)">A star with stripes: zebrafish as an infection model.</a> Trends in Microbiology. 12 (10), 451-457 (2004).</li>
<li>Vergunst, A. C., Meijer, A. H., Renshaw, S. A., O’Callaghan, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Burkholderia+cenocepacia+creates+an+intramacrophage+replication+niche+in+zebrafish+embryos%2C+followed+by+bacterial+dissemination+and+establishment+of+systemic+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+Immunity%22%5BJournal%5D)">Burkholderia cenocepacia creates an intramacrophage replication niche in zebrafish embryos, followed by bacterial dissemination and establishment of systemic infection.</a> Infection and Immunity. 78 (4), 1495-1508 (2010).</li>
<li>Levraud, J. -P., Disson, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+observation+of+Listeria+monocytogenes-phagocyte+interactions+in+living+zebrafish+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+Immunity%22%5BJournal%5D)">Real-time observation of Listeria monocytogenes-phagocyte interactions in living zebrafish larvae.</a> Infection and Immunity. 77 (9), 3651-3660 (2009).</li>
<li>Meijer, A. H., Spaink, H. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Host-pathogen+interactions+made+transparent+with+the+zebrafish+model%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Drug+Targets%22%5BJournal%5D)">Host-pathogen interactions made transparent with the zebrafish model.</a> Current Drug Targets. 12 (7), 1000-1017 (2011).</li>
<li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWesterfield%2C+M+%22The+Zebrafish+Book%3A+A+Guide+for+the+Laboratory+Use+of+Zebrafish+%28Danio+Rerio%29%22">The Zebrafish Book: A Guide for the Laboratory Use of Zebrafish (Danio Rerio)</a>. , (2007).</li>
<li>Benard, E. L., van der Sar, A. M., Ellett, F., Lieschke, G. J., Spaink, H. P., Meijer, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Infection+of+zebrafish+embryos+with+intracellular+bacterial+pathogens%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Infection of zebrafish embryos with intracellular bacterial pathogens.</a> Journal of Visualized Experiments. (61), e3781(2012).</li>
<li>Van Rooijen, N., Sanders, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liposome+mediated+depletion+of+macrophages%3A+mechanism+of+action%2C+preparation+of+liposomes+and+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunological+Methods%22%5BJournal%5D)">Liposome mediated depletion of macrophages: mechanism of action, preparation of liposomes and applications.</a> Journal of Immunological Methods. 174 (1-2), 83-93 (1994).</li>
<li>Adams, K. N., Takaki, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug+tolerance+in+replicating+mycobacteria+mediated+by+a+macrophage-induced+efflux+mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Drug tolerance in replicating mycobacteria mediated by a macrophage-induced efflux mechanism.</a> Cell. 145 (1), 39-53 (2011).</li>
<li>Ramakrishnan, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Looking+within+the+zebrafish+to+understand+the+tuberculous+granuloma%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+Experimental+Medicine+and+Biology%22%5BJournal%5D)">Looking within the zebrafish to understand the tuberculous granuloma.</a> Advances in Experimental Medicine and Biology. 783, 251-266 (2013).</li>
<li>Davis, J. M., Clay, H., Lewis, J. L., Ghori, N., Herbomel, P., Ramakrishnan, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+visualization+of+Mycobacterium-macrophage+interactions+leading+to+initiation+of+granuloma+formation+in+zebrafish+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Real-time visualization of Mycobacterium-macrophage interactions leading to initiation of granuloma formation in zebrafish embryos.</a> Immunity. 17 (6), 693-702 (2002).</li>
<li>Lamason, R. L., Mohideen, M. -A. P. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SLC24A5%2C+a+putative+cation+exchanger%2C+affects+pigmentation+in+zebrafish+and+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Science+%28New+York%2C+NY%29%22%5BJournal%5D)">SLC24A5, a putative cation exchanger, affects pigmentation in zebrafish and humans.</a> Science (New York, NY). 310 (5755), 1782-1786 (2005).</li>
<li>Renshaw, S. A., Loynes, C. A., Trushell, D. M. I., Elworthy, S., Ingham, P. W., Whyte, M. K. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+transgenic+zebrafish+model+of+neutrophilic+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">A transgenic zebrafish model of neutrophilic inflammation.</a> Blood. 108 (13), 3976-3978 (2006).</li>
<li>Hall, C., Flores, M. V., Storm, T., Crosier, K., Crosier, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+zebrafish+lysozyme+C+promoter+drives+myeloid-specific+expression+in+transgenic+fish%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+developmental+biology%22%5BJournal%5D)">The zebrafish lysozyme C promoter drives myeloid-specific expression in transgenic fish.</a> BMC developmental biology. 7, 42(2007).</li>
<li>Takaki, K., Davis, J. M., Winglee, K., Ramakrishnan, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+the+pathogenesis+and+treatment+of+Mycobacterium+marinum+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Evaluation of the pathogenesis and treatment of Mycobacterium marinum in zebrafish.</a> Nature Protocols. 8 (6), 1114-1124 (2013).</li>
<li>Stoop, E. J. M., Schipper, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+embryo+screen+for+mycobacterial+genes+involved+in+the+initiation+of+granuloma+formation+reveals+a+newly+identified+ESX-1+component%5BTitle%5D)+AND+%22Disease+Models+Mechanisms%22%5BJournal%5D)">Zebrafish embryo screen for mycobacterial genes involved in the initiation of granuloma formation reveals a newly identified ESX-1 component.</a> Disease Models Mechanisms. 4 (4), 526-536 (2011).</li>
<li>Carvalho, R., de Sonneville, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+high-throughput+screen+for+tuberculosis+progression%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">A high-throughput screen for tuberculosis progression.</a> PloS One. 6 (2), e16779(2011).</li>
</ol>

Die Autoren haben nichts offenzulegen.

Der Zebrafisch hat vor kurzem als eine ausgezeichnete Wirbeltiermodellsystem zur Untersuchung der Dynamik von bakteriellen Infektionen mit breiten Feld und konfokale Bildgebung in Echtzeit 36. Die Kombination aus verteilt mykobakteriellen Suspensionen (Protokoll 2.2) zusammen mit Mikro-Injektionsverfahren (Protokoll 4) ermöglicht reproduzierbare systemische Infektionen und eine spätere Überwachung und Visualisierung des Verlaufs der Infektion mit einem besonderen Fokus auf den bakteriellen Interaktionen mit H...

Mycobacterium abscessus ist eine aufstrebende Erreger, die ein breites Spektrum von Krankheitsbildern in den Menschen verursacht. Dazu gehören Hautinfektionen sowie schwere chronische Lungeninfektionen, vor allem bei immungeschwächten und Fibrose-Patienten 1,2,3,4 zystische aufgetreten. M. abscessus wird auch als Haupt schnell wachsenden Mykobakterienarten für nosokomiale und iatrogene Infektionen beim Menschen verantwortlich gemacht. Darüber hinaus hob mehrere jüngsten Berichten die Möglichkeit, daß M. abscessus kann die Blut-Hirn-Schranke zu überwinden und induzieren wichtig Läsionen im zentralen Nervensystem (CNS) 5,6. Obwohl er eine schnelle Bauer, M. abscessus Exponaten auch einige pathogene Eigenschaften, die denen von Mycobacterium tuberculosis verwandt sind, einschließlich der Fähigkeit, schwieg Jahren innerhalb granulomatöse Strukturen bleiben und käsige Läsionen in der Lunge 7 zu erzeugen. Noch alarmierender ist die geringe senlichkeit von M. abscessus gegen Antibiotika, wodurch diese Infektionen extrem schwierig zu behandeln, die zu einer signifikanten therapeutischen Ausfallrate 8,9. Die wichtige Bedrohung dieser Art ist vor allem seiner intrinsischen Resistenz gegen Antibiotika, die zu großer Besorgnis in der öffentlichen Gesundheitseinrichtungen 10 und einer Kontraindikation für eine Lungentransplantation 11 ist. M. abscessus Displays glatt (S) oder rauhe (R) Kolonie Morphotypen, die unterschiedlichen klinischen Ergebnissen führen. Im Gegensatz zu dem S-Stamm haben R Bakterien eine Tendenz zu einem Ende zum anderen zunehmen, was zu einem Seil oder schnurartigen Struktur 12,13. Mehrere unabhängige Studien, die entweder auf Zell- oder Tiermodellen ergeben, die hyper-Virulenz Phänotyp der R Morphotyp 14,15. Aus epidemiologischen Studien, den schwersten Fällen von M. abscessus Lungeninfektionen scheinen mit R verbunden sein Varianten 16, die die einzige Variante ist, dasshat sich gezeigt, für viele Jahre in einem infizierten Wirt 3 bestehen. Die Morphotyp Unterschied beruht auf der Gegenwart (in s) oder Verlust (in F) des oberflächenassoziierten glycopeptidolipids (GPL) 12. Jedoch aufgrund der inhärenten Beschränkungen der derzeit verfügbaren zellularen / Tiermodelle verwendet, um M. studieren abscessus Infektion bleibt unser Wissen über die pathophysiologischen Ereignisse der R- oder S-Varianten im Dunkeln. Die Infektion von immunkompetenten Mäusen durch intravenöse oder Aerosol-Routen führt zu vorübergehenden Kolonisierung, behindern die Verwendung von Mäusen zu persistenten Infektionen und für die in vivo Arzneimittelempfindlichkeitsprüfung 17 zu studieren. Daher ist die Entwicklung von Tiermodellen offen für die Manipulation der Wirtsantwort ist eine große Herausforderung. In diesem Zusammenhang haben die Nicht-Säugetiermodellen der Infektion vor kurzem entwickelt worden, einschließlich Drosophila melanogaster 18, die mehrere Vorteile, wie beispielsweise Kosten, Geschwindigkeit und ethischen Akzeptanz o bietetn den Maus-Modell. Der Zebrafisch (Danio rerio) Modell der Infektion wurde ebenfalls untersucht, um sichtbar zu machen, durch nicht-invasive Bildgebung, das Fortschreiten und die Chronologie der M. abscessus Infektion in einem lebenden Tier 19. Wichtig ist, dass ein Proof of Concept auch gegründet, um seine Tauglichkeit für die in vivo-Antibiotikum, Einschätzungen gegen M. demonstrieren abscessus 17,20. Der Zebrafisch wurden weit verbreitet in den letzten zwei Jahrzehnten verwendet, um die Wechselwirkungen zwischen verschiedenen Krankheitserregern und dem Immunsystem des Wirts 21 zu studieren. Der zunehmende Erfolg dieses alternativen Wirbeltiermodell stützt sich auf große und einzigartige Möglichkeiten, die motiviert und validiert seine Verwendung für ein besseres Verständnis der zahlreichen viralen und bakteriellen Infektionen 19,22,23,24,25,26,27,28,29. Wie die meisten anderen Tiermodellen gegenüberliegen, sind Zebrafischembryonen optisch transparent, so dass nicht-invasive Fluoreszenzbildgebung 30 ha. Dieses führte zu M. studieren abscessus infiziert Zebrafischembryonen mit beispiellosen Details, die ihren Höhepunkt mit der Beschreibung der extrazellulären Aufzeichnung, die ein Beispiel der bakteriellen morphologische Plastizität zu vertreten. Cording stellt einen neuen Mechanismus der Subversion des Immunsystems und einen Schlüsselmechanismus zur Förderung Pathogenese der akuten M. abscessus Infektion 19. Dieser Bericht beschreibt neue Werkzeuge und Methoden unter Verwendung des Zebrafischembryo, um die pathophysiologischen Merkmale des M. entziffern abscessus Infektion und die intime Wechselwirkungen zwischen der Bazillen und das angeborene Immunsystem zu untersuchen. Zuerst wird ein detailliertes Protokoll, das die Mikroinjektion Verarbeitung des bakteriellen Inokulums Embryo Herstellung und Infektion per se beinhaltet, wird vorgestellt. Methoden spezifisch angepasst, um M. bewerten abscessus Virulenz durch Messung verschiedener Parameter, wie beispielsweise Wirts Überleben und bakterielle Belastung, werden vorgestellt. Ein besonderer Fokus liegt auf, wie angegebenzur Überwachung, in einem räumlich-zeitlichen Ebene das Schicksal und die Progression der Infektion und dem Wirtsimmunantwort auf M. abscessus mittels Videomikroskopie. Darüber hinaus, um den Beitrag und die Rolle von Makrophagen bei M. untersuchen abscessus Infektion, Methoden, um Makrophagen verarmten Embryonen (entweder genetically- oder chemisch basierte Ansätze) beschrieben zu erzeugen. Schließlich Protokolle, um die spezifischen Wechselwirkungen mit Makrophagen oder Neutrophile mit festen oder lebenden Embryonen dokumentiert sind zu visualisieren. Das Ziel dieses Berichts ist es, weitere Untersuchungen anzuregen, neue Licht in M. vergossen abscessus Virulenzmechanismen und insbesondere die Rolle der Aufzeichnung in der Einrichtung einer akuten und unkontrollierte Infektionsprozess.

<table><tbody><tr><td>BBL MGIT PANTA</td><td>BD Biosciences</td><td>245114</td><td></td></tr><tr><td>Rinderserumalbumin&nbsp;</td><td>Euromedex</td><td>04-100-811-E</td><td></td></tr><tr><td>Katalase aus Rinderleber&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C40</td><td></td></tr><tr><td>Difco Middlebrook 7H10 Agar</td><td>BD Biosciences</td><td>262710</td><td></td></tr><tr><td>Difco Middlebrook 7H9 Bouillon</td><td>BD Biosciences</td><td>271310</td><td></td></tr><tr><td>Ethyl-3-aminobenzoat-Methansulfonatsalz (Tricain)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A5040</td><td></td></tr><tr><td>Ölsäure</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>O1008</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyd</td><td>Delta Mikroskopie</td><td>15710</td><td></td></tr><tr><td>Phenolrot</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>319244</td><td></td></tr><tr><td>Tween 80</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P4780</td><td></td></tr><tr><td>Agar</td><td>Gibco Life Technologie</td><td>30391-023</td><td></td></tr><tr><td>Niedrigschmelzende Agarose</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Instant Ocean Meersalze</td><td>Aquarium Systems Inc</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kapillaren aus Borosilikatglas&nbsp;</td><td>Sutter instrument Inc</td><td>BF100-78-10</td><td>1 mm Außendurchmesser x 0,78 mm Innendurchmesser</td></tr><tr><td>Mikropipetten-Abzieher-Vorrichtung&nbsp;</td><td>Sutter Instrument Inc</td><td></td><td>Flamming/Brown Mikropipettenabzieher p-87</td></tr><tr><td>Mikroinjektor</td><td>Tritech Research&nbsp;</td><td></td><td>Digitaler Mikroinjektor, minj-d</td></tr><tr><td>Pinzette</td><td>Sciences Tools inc</td><td></td><td>Dumont # M5S&nbsp;</td></tr><tr><td>Microloader Tipps</td><td>Eppendorf</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

entschlüsselung und imaging pathogenese und cording von<em&gt; mycobacterium abscessus</em&gt; in zebrafischembryonen

Deciphering and Imaging Pathogenesis and Cording of Mycobacterium abscessus in Zebrafish Embryos

Zebrafischembryonen (Danio rerio) werden zunehmend als Infektionsmodell verwendet, um die Funktion des angeborenen Immunsystems von Wirbeltieren bei Wirt-Pathogen-Interaktionen zu untersuchen. Die Leichtigkeit, eine große Anzahl von Embryonen zu erhalten, ihre Zugänglichkeit aufgrund der äußeren Entwicklung, ihre optische Transparenz sowie die Verfügbarkeit einer breiten Palette von genetischen/immunologischen Werkzeugen und transgenen Reporterliniensammlungen, tragen zur Vielseitigkeit dieses Modells bei. In diesem Zusammenhang beschreibt das vorliegende Manuskript die Verwendung des Zebrafisches als in vivo Modellsystem zur Untersuchung der Chronologie der Mycobacterium abscessus-Infektion. Dieser humane Krankheitserreger kann je nach Zellwandzusammensetzung entweder als glatte (S) oder raue (R) Variante vorliegen, und ihre jeweilige Virulenz kann in Zebrafischembryonen und -larven abgebildet und verglichen werden. Die Mikroinjektion von entweder S- oder R-fluoreszierenden Varianten direkt in den Blutkreislauf über die Schwanzvene führt zu chronischen bzw. akuten/letalen Infektionen. Dieses biologische System ermöglicht eine hochauflösende Visualisierung und Analyse der Rolle der mykobakteriellen Cording bei der Förderung der Abszessbildung. Darüber hinaus bietet die Verwendung von fluoreszierenden Bakterien zusammen mit transgenen Zebrafischlinien, die fluoreszierende Makrophagen beherbergen, eine einzigartige Möglichkeit für die mehrfarbige Bildgebung der Wirt-Erreger-Interaktionen. In diesem Artikel werden detaillierte Protokolle für die Aufbereitung eines homogenen M. abscessus-Inokulums und für die intravenöse Injektion von Zebrafischembryonen für die anschließende Fluoreszenzbildgebung der Interaktion mit Makrophagen beschrieben. Diese Techniken eröffnen den Weg für zukünftige Untersuchungen mit Mutanten, die bei der Nabelschnurbildung defekt sind, und dienen dazu, zu verstehen, wie sich dies auf die Pathogenität von M. abscessus bei einem ganzen Wirbeltier auswirkt.

Obwohl verschiedene anatomische Stellen injiziert 32 werden, sind Schwanzvene Injektionen oft verwendet, um eine systemische Infektion für spätere Analysen einschließlich Überlebensexperimente, bakterielle Belastung Bestimmung Phagozytoseaktivität oder Schnur Bildung zu erzeugen. Injektionen in die Schwanzmuskeln werden verwendet, um die Rekrutierung von Makrophagen an der Stelle der Injektion (3A) zu beurteilen. Zu untersuchen und zu vergleichen, die Virulenz von R- und S-Varianten von M...

Optisch transparente Zebrafischembryonen werden häufig verwendet, um die Wechselwirkungen zwischen pathogenen Mikroorganismen und den angeborenen Immunzellen in Echtzeit zu untersuchen und zu visualisieren. Die Mikroinjektion von Mycobacterium abscessus, kombiniert mit Fluoreszenzbildgebung, wird verwendet, um wesentliche pathogene Merkmale wie die Nabelschnurbildung in Zebrafischembryonen zu untersuchen.

Entschlüsselung und Imaging Pathogenese und Cording von<em&gt; Mycobacterium abscessus</em&gt; In Zebrafischembryonen

Zebrafish (Danio rerio) embryos are increasingly used as an infection model to study the function of the vertebrate innate immune system in host-pathogen ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens besteht darin, die Virulenz von Mycobacterium abscessus-Stämmen zu untersuchen und zu vergleichen sowie die Wechselwirkungen zwischen diesen Bakterien und dem angeborenen Immunsystem des Wirts in vivo mithilfe durchsichtiger Zebrafischembryonen zu beschreiben. Dies wird erreicht, indem zunächst homogene Bakterieninokulate hergestellt werden. Anschließend werden die Embryonen 30 Stunden nach der Befruchtung intravenös mit den bakteriellen Suspensionen injiziert.Außerdem wird zur genaueren Untersuchung der Rolle von Makrophagen bei der Infektkontrolle ein auf Lipochorat basierendes Injektionsverfahren verwendet, um makrophagenfreie Embryonen zu erzeugen. Schließlich werden die infizierten Embryonen zur Beobachtung des Infektionsverlaufs vorbereitet und mittels Fluoreszenz- und konfokaler Mikroskopie abgebildet. Letztendlich zeigen die erzielbaren Ergebnisse die spezifischen Wechselwirkungen zwischen den fluoreszierenden phagozytierenden Zellen und M. abscessus, entweder als einzelne Bazillen oder als schlangenförmige Stränge innerhalb eines transparenten Embryos.Der Hauptvorteil der Verwendung von Zebrafischen gegenüber anderen Tiermodellen wie Mäusen besteht darin, dass der Infektionsprozess in Echtzeit spezifisch untersucht und die spezifischen Wechselwirkungen zwischen Mycobacterium abscessus und Makrophagen oder Neutrophilen bildlich dargestellt werden können. Dieser Schritt ist entscheidend für den anschließenden Injektionsdruck bei Zebrafischen. Aufgrund der hohen Neigung von Mycobacterium abscessus, große Aggregate zu bilden und Biofilme zu produzieren, ist eine spezifische Behandlung notwendig, um vor der Mikroinjektion homogene und quantitativ kontrollierte Inokula herzustellen.Um m. abscessus vorzubereiten, entnehmen Sie inokulare Zellen aus exponentiell wachsenden Kulturen von 150 Quadratzentimeter Zellkulturgefäßen in 50 Milliliter sterile Kunststoffröhrchen und zentrifugieren 15 Minuten bei 4.000 × g und Raumtemperatur. Verwenden Sie ein Milliliter Middlebrook 7H9, ergänzt mit dem OADC-Anreicherungsmittel sowie Tween 80, im Folgenden als 7H9-Medium bezeichnet, um das Pellet aufzuschwemmen und zu homogenisieren. Geben Sie 200 Mikroliter der bakteriellen Suspensionen in 1,5-Milliliter-Röhrchen und homogenisieren Sie jede ALI-Quad-Aliquot der bakteriellen Suspension 15-mal mit einer 26-Gauge-Nadel.Danach dreimal für jeweils 10 Sekunden mit zehnsekündigen Pausen im Wasserbad beschallen. Dazwischen jeweils ein Milliliter 7H9-Medium hinzufügen, kurz verwirbeln und dann drei Minuten bei 100 × g zentrifugieren. Die Mykobakterien enthaltenden Überstände vorsichtig sammeln, um Klumpen zu vermeiden, und die homogenen Suspensionen in einem 50-Milliliter-Sterilplastikröhrchen aufziehen.Zentrifugieren Sie die Suspension bei 4.000 × g für fünf Minuten und verwenden Sie 200 Mikroliter Medium 7H9, um das Pellet erneut aufzuschwemmen, um den endgültigen bakteriellen Inokulum zu bestimmen. Laut Textprotokoll ist die visuelle Demonstration dieser Methode entscheidend, da die Schritte schwer zu erlernen sind, insbesondere die präzise, schonende Handhabung der Injektion in Zebrafischembryonen unter dem Mikroskop sowie der Erwerb der Mikroinjektionstechnik, die Zeit erfordert. Um die Mikroinjektion von M. abscessus etwa 24 Stunden nach der Befruchtung oder hpf durchzuführen, verwenden Sie Pinzetten, um die Embryonen in einer 100-Millimeter-Petrischale auszulegen, und halten Sie sie bei 28,5 Grad Celsius.Überführen Sie 30–48 HPF-Embryonen mit einer abgeschnittenen Mikroladert Spitze in eine V-förmige Positionierungskammer, die mit 25 Millilitern Fischwasser gefüllt ist, das 270 Milligramm pro Liter Trica enthält. Legen Sie die Embryonen ordnungsgemäß in die Kanäle, um die Handhabung zu erleichtern. Verdünnen Sie den mikrobiellen Inokulum mit PBST mit 0,05 % zwischen 80 und der gewünschten CFU-Menge, die verabreicht werden soll, und fügen Sie 10 % Phenolrot hinzu, um die korrekte Injektion mit einer Mikroladert Spitze zu überprüfen.Laden Sie eine Mikroinjektionsnadel mit fünf bis 10 Mikrolitern der bakteriellen Inokulumlösung auf. Befestigen Sie die Mikroinjektionsnadel in der Halterung eines Mikromanipulators, der mit dem Injektor verbunden ist, und verwenden Sie feine Pinzetten, um die Spitze der Nadel abzubrechen. Um einen Öffnungsdurchmesser von fünf bis 10 Mikrometern zu erhalten.Kalibrieren Sie das Injektionsvolumen, indem Sie den Mikroinjektionsdruck und die Zeit anpassen. Messen Sie dann den Durchmesser eines Tröpfchens, das in das Eiweiß eines Embryos ausgestoßen wird, um das erforderliche Injektionsvolumen zu ermitteln, bevor Sie in die Coddle-Vene injizieren. Positionieren Sie den Embryo mit der Bauchseite zur Nadel hin und platzieren Sie die Nadelspitze nahe der urogenitalen Öffnung.Und schieben Sie die Nadelspitze vorsichtig in das Embryo, bis gerade die Region der Coddle-Vene durchstoßen ist. Dann injizieren Sie das gewünschte Volumen der Bakteriensuspension, üblicherweise ein bis drei Nanoliter, die etwa 100 KBE pro Nanoliter enthalten. Inkubieren und beobachten Sie die Embryonen gemäß dem schriftlichen Protokoll, um die Lipo-Choate-Durchführung, die Ausschöpfung der Makrophagen und die Embryonen bei 24 HP.Fate durchzuführen, und überführen Sie sie anschließend in eine Injektionsschale, die mit Fischwasser mit Trica gefüllt ist.Danach ausrichten, sodass die dorsale Seite nach unten zeigt. Nach dem Vortexen der Liposomen-encapsulierten Clodronat-Lösung die Mikrokappillarnadel befüllen und das Injektionsvolumen kalibrieren. Den Coddle-Venenbereich durchstechen, wie zuvor demonstriert, und zwei bis drei Liter der Lösung injizieren.Wiederholen Sie die Injektion dreimal. Inkubieren Sie die Embryonen bei 28,5 Grad Celsius und verwenden Sie die Fluoreszenzmikroskopie, um die korrekte Ausschaltung der Makrophagen vor der Infektion zu überprüfen. Wie zuvor in diesem Video gezeigt, zählen Sie die koloniebildenden Einheiten oder CFUs zum gewünschten Zeitpunkt.Sammeln Sie fünf Embryonen pro Infektionsbedingung und überführen Sie jeden Embryo in ein 1,5-Milliliter-Mikrozentrifugenröhrchen. Kryobetäuben Sie die Embryonen durch 10-minütige Inkubation auf Eis, nachdem Sie die Embryonen mit 300 bis 500 Milligramm pro Liter Trica euthanasiert haben. Waschen Sie die Embryonen mit steriler Wasser zweimal in einem neuen Röhrchen.Anschließend nach dem Entfernen des Wassers bei 2 % Triton X-100 in jeweils einem XPBS pro Embryo das Gewebe mit einer 26-Gauge-Nadel homogenisieren, um eine vollständige Lyse zu erzielen. Nach dem Zentrifugieren der Suspension das Pellet mit einem X-P-B-S-T resuspendieren. Anschließend serielle Verdünnungen des Homogenats auf Middlebrook 7H10 OADC ausplattieren.Versetzte die Platten mit B-B-L-M-G-I-T Panta und inkubiere sie bei 30 Grad Celsius für vier Tage, bevor die Kolonien gezählt werden. Für die Live-Bildgebung der M. abscessus-Infektion montiere die mit Trica anesthetisierten Embryonen in 1 % niedrigschmelzendem Agarose in einer 35-Millimeter-Petrischale mit Glasboden für ein inversiertes Mikroskop oder in einer Einzelmulden-Objektträger für die aufrechte konfokale Mikroskopie. Orientiere den Embryo in die gewünschte Position und bedecke die erstarrte Agarose mit Fischwasser, das Trica enthält. Für die fixierte Bildgebung der M. abscessus-Infektion überführe die Embryonen nach der Tötung in 1,5-Milliliter-Mikrozentrifugenröhrchen und fixiere sie in 4 % Paraformaldehyd in 1× PBS-T für zwei Stunden.Entfernen Sie bei Raumtemperatur den Paraformaldehyd, indem Sie die Embryonen zweimal nacheinander jeweils zehn Minuten lang mit 1× P-B-S-T waschen, um die Integrität des Gewebes und die Fluoreszenz zu erhalten. Inkubieren Sie die Embryonen in glycerolhaltigen Lösungen mit zunehmender Konzentration jeweils zehn Minuten pro Bedingung. Legen Sie den in 50 % Glycerol eingebetteten Embryo in eine Betrachtungskammer.Verwenden Sie abschließend ein Fluoreszenzmikroskop mit einem 10x-Objektiv oder ein fluoreszenzkonfokales Mikroskop mit 40x- oder 63x-Objektiven für die sequenzielle Fluoreszenzaufnahme und die Transmissionsabbildung des Embryos. Um die Virulenz von rauen und glatten M. abscessus-Varianten zu untersuchen und zu vergleichen, wurden fluoreszierende Bakterien in 30 HPFC-profiziente Embryonen intravenös injiziert. Im Gegensatz zur glatten Variante verursacht die raue Variante eine stärkere und letale Infektion mit der Bildung von Abszessen im zentralen Nervensystem.Unterschiede in der Virulenz wurden entweder durch Zählung der KBE oder durch Bestimmung der fluoreszierenden Pixelanzahlen quantifiziert, die miteinander korrelieren. Dies deutet auf höhere bakterielle Belastungen für die raue Variante hin. Wie in dieser Abbildung zu sehen ist, können die Kinetik der Schnurbildung und die Schnurbildung selbst mittels Videomikroskopie auf nichtinvasive Weise überwacht und abgebildet werden, was die Neigung der rauen Variante zur extrazellulären Replikation zeigt. Die Infektion makrophagenarmer Embryonen mit dem rauen M. abscessus führt zu einem massiven Anstieg der bakteriellen Belastung und der Schnurbildung sowie zum schnellen Larventod.Dies zeigt eindeutig, dass Makrophagen erforderlich sind, um die M. abscessus-Infektion zu kontrollieren, um die Wechselwirkungen zwischen Makrophagen und M. abscessus in Echtzeit zu beobachten. Die EGFP-M-Cherry-transgene Linie, die rote fluoreszierende Makrophagen hervorbringt, kann verwendet werden. Infektionen führen zu einer deutlichen Rekrutierung von Makrophagen mit effizienter Phagozytose einzelner Bakterien, während mykobakterielle Stränge eine von M. abscessus entwickelte Strategie darstellen, der Phagozytose zu entgehen, nachdem sie sich gebildet haben.Diese Technik ebnete den Weg, um die wichtige Rolle der Kodierung als neuem Mechanismus der Immunflucht zu untersuchen. Mithilfe des Zebrafisch-Modells der Infektion wird es nun möglich, den in-vivo-Beitrag von Codes bei der Pathogenese von Mycobacterium abscessus zu beobachten und zu beschreiben.

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Research

Forschung

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie und Infektion

Transparente Zebrafischembryonen haben nützliches Modell Gastgeber zu visualisieren und funktionell Studie Wechselwirkungen zwischen Zellen des angeborenen Immunsystems und intrazelluläre bakterielle Erreger wie...

Die Infektion von Zebrafisch-Embryos mit Intrazelluläre bakterielle Krankheitserreger

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Dieses Video beschreibt eine Mikroinjektionsmethode für die Verabreichung von Brustkrebszellen in den perivitellinischen Raum von transgenen Zebrafischembryonen. Nach der Inkubation visualisieren wir den Embryo unter einem Fluoreszenzmikroskop, um die Invasion, Verbreitung und Metastasierung von Krebszellen zu beobachten.

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Quelle: Zhang, X., et al. Ein Zebrafisch-Embryomodell für die In-vivo-Visualisierung und Intravitalanalyse von Biomaterial-assoziierten Staphylococcus aureus-Infektionen . J. Vis. Exp. (2019)Dieses Video zeigt die Fluoreszenzbildgebung von Zebrafischembryonen, die mit Staphylococcus aureus injiziert wurden, was eine Quantifizierung des Infektionsverlaufs und der bakteriellen Verteilung ermöglicht, um den Einfluss von Biomaterial-Mikrosphären auf Wirt-Pathogen-Interaktionen in vivo zu bewerten.

 Fluoreszenzbildgebung von Biomaterial-assoziierten bakteriellen Infektionen in Zebrafischembryonen

Quelle: Niu, L., et al. Visualisierung des Makrophagen-lytischen Zelltodes während einer mykobakteriellen Infektion in Zebrafisch-Embryonen mittels intravitaler Mikroskopie. J. Vis. Exp. (2019)Dieses Video demonstriert den Einsatz der intravitalen konfokalen Mikroskopie, um den Makrophagen-lytischen Zelltod in Zebrafischembryonen nach einer Mycobacterium marinum-Infektion zu visualisieren.

Live-Bildgebung des Makrophagenzelltods während einer mykobakteriellen Infektion in Zebrafisch-Embryonen

Quelle: Bernut, A., et al., Entschlüsselung und Bildgebung der Pathogenese und Cording von Mycobacterium abscessus in Zebrafisch-Embryonen. J. Vis. Exp. (2015).Dieses Video demonstriert ein Protokoll zur Isolierung und Quantifizierung des Mycobacterium abszescessus aus einem infizierten Zebrafischembryo. Das Verfahren umfasst Embryonen-Euthanasie, Gewebelyse und Homogenisierung zur Freisetzung der Bakterien, gefolgt von Zentrifugation und Resuspension in einem Tensidpuffer. Abschließend wird...

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Quelle: Bernut, A. et al. Entschlüsselung und Bildabbildung der Pathogenese sowie der Sicherung von Mycobacterium abscessus in Zebrafischembryonen. J. Vis. Exp. (2015)Dieses Video demonstriert ein Protokoll, das transgene Zebrafischembryonen verwendet, die fluoreszierende Makrophagen exprimieren und mit fluoreszierendem Mycobacterium abscessus rough strain infiziert sind, um Wirts-Pathogen-Interaktionen zu visualisieren. Es zeigt, wie extrazelluläre Korde die Immunausweichung ermöglichen,...

Live-Bildgebung von Wirts-Pathogen-Interaktionen in Zebrafisch-Embryonen, die mit Mycobacterium abscessus infiziert sind,

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Die Abbildung des dynamischen Verhaltens von Organellen und anderen subzellulären Strukturen in vivo kann Aufschluss über ihre Funktion unter physiologischen und Krankheitsbedingungen geben. Hier stellen wir Methoden vor, mit denen zwei Organellen, Zentrosomen und Mitochondrien, genetisch markiert und ihre Dynamik in lebenden Zebrafischembryonen mittels Weitfeld- und Konfokalmikroskopie abgebildet werden können.

Imaging subzellulärer Strukturen in der Living Zebrafischembryo

Die vorliegende Studie beschreibt ein Zebrafish Embryos Modell zur in-vivo Visualisierung und intravitalen Analyse von Biomaterial-assoziierten Infektionen im Laufe der Zeit anhand der Fluoreszenz-Mikroskopie. Dieses Modell ist ein viel versprechende Ergänzung Säugetier-Tiermodellen wie Maus-Modellen für das Studium Biomaterial-Infektionen in-vivo.

Zebrafish Embryos Modell für bei Vivo Visualisierung und intravitalen Analyse von Biomaterial-assoziierte Staphylococcus Aureus Infektion

Dieses Protokoll beschreibt eine Technik zur Visualisierung des Makrophagenverhaltens und des Todes bei embryonalen Zebrafischen während einer Mycobacterium marinum-Infektion. Schritte zur Herstellung von Bakterien, Infektionder tenatierter Embryonen und intravitale Mikroskopie sind enthalten. Diese Technik kann auf die Beobachtung von Zellverhalten und Tod in ähnlichen Szenarien mit Infektion oder sterile Entzündung angewendet werden.

Visualisierung des Makrophagen-Lytic Zelltodes während der mykobakteriellen Infektion bei Zebrafischembryonen mittels Intravital-Mikroskopie

Erfahren Sie die Virulenz verschiedener Mycobacterium abscessus-Stämme in transparenten Zebrafischembryonen. Diese Methode ermöglicht die Echtzeit-Visualisierung von Bakterien-Makrophagen-Interaktionen mittels Fluoreszenzmikroskopie.

Entschlüsselung und Imaging Pathogenese und Cording von

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