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Verwendung digitaler Droplet PCR zu BRAF V600E Mutationen in Formalin-fixierte Paraffin Reference...
Verwendung digitaler Droplet PCR zu BRAF V600E Mutationen in Formalin-fixierte Paraffin Reference...
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Biology
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JoVE Journal Biology
Employing Digital Droplet PCR to Detect BRAF V600E Mutations in Formalin-fixed Paraffin-embedded Reference Standard Cell Lines

Verwendung digitaler Droplet PCR zu BRAF V600E Mutationen in Formalin-fixierte Paraffin Reference Standard-Zelllinien Detect

Full Text
13,685 Views
10:16 min
October 8, 2015

DOI: 10.3791/53190-v

Nirmal Rajasekaran1, Myung Ryurl Oh3, Sung-Su Kim1, Si Eun Kim3, Young Deug Kim4, Hyun-Jeung Choi2, Bohyun Byun2, Young Kee Shin1,2

1Research Institute of Pharmaceutical Science, Department of Pharmacy, College of Pharmacy,Seoul National University, 2The Center for Anti-Cancer CDx, N-Bio,Seoul National University, 3ABION CRO, 4ABION Inc., R&D Center

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Das Ziel dieses Video ist zu zeigen, wie automatisierte DNA-Extraktion aus Formalin fixierten und in Paraffin eingebetteten (FFPE) Referenz-Standard-Zelllinien und digitale Tröpfchen PCR (ddPCR) Analyse seltene Mutationen in einer klinischen Umgebung detektieren auszuführen. Nachweis von Mutationen in FFPE-Proben zeigt, die den klinischen Nutzen ddPCR in FFPE-Proben.

Das übergeordnete Ziel dieses Experiments ist es, humane genomische DNA aus formalen und fixierten paraffineingebetteten Referenzstandardzelllinien unter Verwendung eines Gewebepräparationssystems zu isolieren, gefolgt von der Analyse der bra V 600 E-Mutationen in der genomischen DNA mit digitalen Tröpfchen. P-C-R-D-D-P-C-R Kann helfen, Schlüsselfragen in der molekularen Onkologie zu beantworten, wie z. B. das Vorhandensein und die Häufigkeit von RA-Sequenzmutationen und die Quantifizierung von Nukleinsäuren bei niedrigen Template-Kopienzahlen. Obwohl diese Methode bei AEP seit Standardzelllinien demonstriert wird, können sie auch in anderen Bioproben verwendet werden, um sicherzustellen, dass Sie die Bedingungen für die Isolierung Ihrer interessierenden DNA optimieren.

Dieses Gewebevorbereitungssystem kann verwendet werden, um bis zu 48 Proben kontaminationsfreier menschlicher genomischer DNA innerhalb von vier Stunden im Vergleich zu anderen manuellen Verfahren zu isolieren. Dieses System ist aufgrund der Verwendung von magnetischen Kügelchen etwas teuer in der Vorbereitung. Es ist jedoch sicherer und produziert und von hoher Qualität. Der Nachweis des Drucks wird von ssu A und einem Techniker aus unserem Labor durchgeführt.

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