Name: Modellierung Enzephalopathie praematurorum Mit Prenatal Hypoxie-Ischämie mit Intra-Frucht Lipopolysaccharide bei Ratten (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-11-20T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 36 s
Description: Erfahren Sie die Modellierung von Frühgeborenen-Enzephalopathie durch pränatale Hypoxie-Ischämie und LPS-Entzündung bei Ratten. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung perinataler Hirnverletzungsmechanismen.

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Die Autoren danken Dan Firl, Chris Corbett und Jesse Denson, PhD. Die Finanzierung wurde von NIH NINDS R01 NS060765 SR vorgesehen, die P30 Cobre Pilotprogramm zur LJ und die Kindergesundheit Signature-Programm zu LJ an der Universität von New Mexico.

Institutional Care und Verwenden Ausschüsse an beiden Boston Kinderkrankenhaus und der Universität von New Mexico Health Sciences Center stimmten allen experimentellen Verfahren. HINWEIS: Vor Beginn des Verfahrens, Dichtung, Sterilisieren und Autoklavieren alle chirurgischen Instrumenten und OP-Abdeckungen. Darüber hinaus bereiten postoperative Medikamente in sterile Fläschchen einschließlich 0,125% bipivucaine und 0,1 mg / kg Buprenorphin. Auch bereiten das Lipopolysaccharid (LPS) Lösung steril: 0,04 mg / ml LPS (0111: B4) in steriler Kochsalzlösung mit verdünnter Evans blauen Farbstoff. 1. Anästhesie <ol><li> Induzieren Anästhesie in einem embryonalen Tag 18 (E18) schwangere Sprague Dawley Ratten mit einem Gemisch aus 3% Isofluran ausgeglichen 70% Stickstoff und 30% Sauerstoff. </li><li> Entfernen Ratte aus der Induktionskammer und legen Sie die Ratte in Rückenlage auf drapiert chirurgische zirkulierende Wasser Decke bei 37 ° C eingestellt. Bringen Anästhesie Bugnase und reduzieren isoflurane Ebene, um 2%. </li><li> Augensalbe sanft gelten für jedes Auge zu Hornhaut Austrocknen zu verhindern. Während des Verfahrens kontinuierlich überwacht Temperatur, Atemfrequenz und die Herzfrequenz des Tieres. Mütterlichen Physiologie sollten während des gesamten Verfahrens stabil bleiben. </li></ol> 2. Surgical Prep und Scrub <ol><li> Mit Hilfe von kleinen Tierschermaschinen nehmen Sie das gesamte Haar in der unteren Bauchregion. Shave in einem rechteckigen Muster mit Sorgfalt zu vermeiden Nicking die Brustwarzen oder Erzeugung gestochen Hautausschlag, der irritierend sein kann für die künftige Pflege der lebend geborenen Welpen. </li><li> Bereiten Bauchhaut durch abwechselnde Anwendung von PVP-Jod und 70% Ethanol-Peeling mit sterilen Wattestäbchen. Wiederholen Sie den Peeling, dass PVP-Jod und 70% Ethanol jeweils angewendet 3x abwechselnd. Trocknen lassen. </li><li> Bestätigen Narkosetiefe über Abwesenheit von Zehen Prise Reflex. In Abwesenheit von Reflex und Reize, um Schmerzen zu reduzieren Isofluran Ebene bis 1%. </li><li> Mit einer sterilen Operationstücher,drapieren das Tier. Achten Sie darauf, die Vorhänge in einem geeigneten Winkel zu platzieren, so dass sie die Menge an Spülflüssigkeit absorbieren sie zwar nicht zu behindern den Blutfluss in die Gebärmutterhörner zu maximieren. </li></ol> 3. Bauch Laparotomie <ol><li> Mit einem Skalpell einen 3 cm Mittellinienschnitt in der vorbereiteten Bauchhaut. Stumpf sezieren die Hautschicht von der Bauchbinde mit einer Schere. Mit einer Pinzette und chirurgische Scheren, heben die Bauch Faszienschicht und einen Einschnitt der avaskulären Linea alba, um Zugriff auf die Bauchhöhle zu gewinnen. </li><li> Platzieren chirurgische Gaze an der Außenseite des Einschnittes und befeuchten mit steriler Kochsalzlösung. Verwendung stumpfen Pinzette und externe Druck auf den Bauch, entfernen Sie vorsichtig die Gebärmutterhörner aus der Bauchhöhle und vereinbaren auf der befeuchteten Gaze. </li><li> Verschränkung sorgfältig zu vermeiden und mit Darm zu kontaktieren. Vereinbaren Föten mit einer Pinzette, indem Sie nur das Muskelgewebe in zwischen einzelnen Fruchtblasen.Aufzudecken und zu isolieren, die 4 Gebärmutterarterien mit stumpf. HINWEIS: Es muss darauf geachtet, um die Gebärmutterarterien sezieren werden. Umliegende Gewebe und Gefäße selbst sind sehr empfindlich. Schäden an mütterlichen Gefäßen kann zu Blutungen, und in schweren Fällen, fetalen und Müttersterblichkeit. </li></ol> 4. Platzierung von Aneurysmen Clips <ol><li> Legen Sie eine Ratte 30 G Aneurysmen-Clip auf jedem Gebärmutterarterie. Sicherzustellen Aufhören des Blutflusses, einschließlich proximaler und distaler Impulsen und Verdunkelung der Uteringefäße einschließlich einzelner Plazenten. Decken Sie die freiliegende Hörner und gesamte Operationsfeld mit Gaze und Bewässerung mit steriler Kochsalzlösung. Achten Sie darauf, um das Feld zu feucht mit Bewässerung etwa alle 10 min zu halten. </li><li> Nach 60 min, entfernen Sie die Gaze und Bewässerung das Feld. Stellen Sie sicher, dass die Gebärmutterhörner und Behälter ausreichend für eine erfolgreiche Clip Entfernung befeuchtet. Entfernen Sie vorsichtig jede Aneurysmen-Clip mit einer Pinzette. Achten Sie darauf, Trauma des Schiffes und maint verursachenain Gewebeintegrität während der Entnahme. </li><li> Spülen Sie gründlich die Gebärmutterhörner und Feld, wobei darauf zu jede streunende Themen aus Gaze von den Fruchtblasen zu entfernen. </li></ol> 5. Die Injektion von Lipopolysaccharid in den Fruchtblasen <ol><li> An der Basis jedes einzelnen Fruchtblase, knapp vor die Plazentaplatte, injizieren 100 ul LPS (4 ug / EWG), verdünnt mit Evans-Blau-Farbstoff in den Fruchtwasser. Verwenden stumpfen Pinzette zu stabilisieren und zu drehen jeden Fruchtblase in einer optimalen Position für die Injektion. Verdünnter Evans blauen Farbstoff ist ein Kontrastmittel, die hilfreich bei der Bestätigung richtige Spritze Platzierung und Injektion ist. HINWEIS: Verwenden Sie nur eine ultrafeine 0,3 ml Insulinspritze mit aufgesetztem 8 mm 31 G-Nadel für die intraFrucht Injektionen. Verwendung größerer Gauge-Nadeln wird bei chronischen Fruchtwasserverlust, fetalen Tod und Wiederaufnahme von der Schwangerschaft führen. Geringe Mengen an Fruchtwasser Leckage beim Entfernen der Spritze kann mitig seinated durch direkten Druck auf die Fruchtblase. Einige Rattenföten in gewissen Maße eine Oligohydramnion tolerieren. Allerdings akuten Fruchtwasserverlust durch Punktion mit großem Gauge-Nadeln, oder versehentliche Punktion mit nachfolgender chronischer Flüssigkeitsaustritt führt zu Fehlgeburten und in schweren Fällen, Verlust des Nachbar Schwangerschaften. </li><li> Spülen Sie die Gebärmutterhörner 3x mit steriler Kochsalzlösung. </li></ol> 6. Schließen der Laparotomie <ol><li> Mit Hilfe einer Pinzette, die Gebärmutterhörner sorgfältig in die Bauchhöhle zurück. Sicherstellung einer angemessenen Raum zwischen den Fruchtblasen und der Mittellinienschnitt, Wieder annähernd den musculofascial Schicht Kanten mit Hilfe eines Lauf 3-0 Seidennaht. Achten Sie auf die Platzierung der Fruchtblasen beim Schließen des Muskel Einschnitt. Seien Sie vorsichtig, um nicht in oder durch einen Sack nähen. </li><li> Re-nähern der Hautschicht, mit einem Lauf 3-0 Seidennaht, Schließen der Hautschicht. HINWEIS: Der Bauchschnitt sollte in zwei Schichten von kontinuierlichen Fäden, damit geschlossen werdenfür Haut und Muskel-Expansion mit zunehmender Trächtigkeit. Kontinuierliche Nähte ermöglichen gleichmäßig verteilt Wunde Spannung. Nähten sind weniger erwünscht als mehrere Knoten sind irritierend und kann leicht mit der Ratte nach der Genesung von Anästhesie gekaut werden. Chirurgischen Klammern sind nicht erwünscht. Schwänze der chirurgischen Knoten sollte sehr kurz (&lt;3 mm) geschnitten werden. </li><li> Injizieren Sie 1 ml 0,125% Bupivacain subkutan rund Wundränder mit einer 26 G-Nadel. Eine Dosis von 0,1 mg / kg Buprenorphin subkutan im Nacken. </li><li> Schalten Sie Isofluran und abtrocknen Ratte nach Bedarf. Legen Sie in einem sauberen Käfig und Überwachung aus der Narkose. Stellen Sie sicher, Ratte nicht unterkühlt zu werden. </li></ol> 7. postoperative Erholung und Pflege <ol><li> Überwachen Sie die Ratten alle 8-12 h für 72 Stunden und dann täglich bis Jungtiere geboren werden (ungefähr E22 oder E23). Verabreichen zusätzlichen Dosen von Buprenorphin q8-12 h / 72 h oder prn wie vom IACUC diktiert. </li><li> Überwachen Ratten Anzeichen von Schmerzen, Beschwerden, Blutungen aus der Scheide oder Blutungen von der Operationsstelle. Untersuchen Sie die Nähte und Schnittführung und darauf achten, Ratte ist nicht kauen oder Entfernen von ihren Nähten vorzeitig. Obwohl außerordentlich selten, Ratten, die ihre Nähte Kompromiss mit einem Risiko für Wunddehiszenz. HINWEIS: Gelegentlich Ratten können übermäßige Mengen von Bettzeug oder Non-Food-Produkte einnehmen, genannt pica, als Nebenwirkung von Buprenorphin Verwaltung. Obwohl sehr selten, müssen Ratten pica und mögliche anschließende Darmverschluss überwacht werden. </li></ol> 8. Gewebeverarbeitung und Kryoschneiden <ol><li> Um Hematoxylin &amp; Eosin (H &amp; E) Färbung der postnatalen Gehirn vorzubereiten, Jungtiere von ihren eigenen Käfig zu entfernen am postnatalen Tag 2 (P2). Verwendung chirurgische Scheren enthaupten Rattenjungen und entfernen Sie vorsichtig das Gehirn aus dem Schädel. </li><li> Drop fix Gehirn in einem konischen 15 ml-Röhrchen mit 7 ml 4% Paraformaldehyd in phosphatgepufferter Salzlösung(PBS). Zeigen Gehirn bei 4 ° C und 72 Stunden zu beheben. </li><li> Nach 72 Stunden, Transfer Gehirn in ein steriles PBS-Lösung, die 30% Saccharose (w / v) und zum 4 ° C. HINWEIS: Sobald Gehirn fallen in der Saccharose-Lösung sie bereit sind, auf einem Kryostat geschnitten werden sollen. </li><li> Schnell einfrieren Gehirne und Montage auf Kryostaten Stampfe für Übernahme von gefrorenen Koronalschnitte. Cut 20 um gefrorene Koronalschnitte und montieren Sie auf Objektträger. Stellen Sie sicher, Abschnitte seriell gesammelt. </li><li> Die Objektträger bei Raumtemperatur über Nacht trocknen. Objektträger bei 20 ° C. </li></ol> 9. Hematoxylin &amp; Eosin-Färbung <ol><li> Nehmen Schlitten montiert Gefrierschnitten und auf Raumtemperatur erwärmt. HINWEIS: Bereiten Sie alle Lösungen frisch. </li><li> Die Objektträger auf einer Folie wärmeren Satz bis 50 ° C für 2 Stunden. </li><li> Objektträger auf eine Färbung Rack. Dip Slides 10x in doppelt destilliertem entionisiertem Wasser (ddH 2 O). </li><li> Objektträger in 100% Hämatoxylin Inkubation für 5 min. Timich in Hämatoxylin kann je nach Grad der lila Färbung optimiert werden. </li><li> Dip Slides 4x in Leitungs H 2 O, und stehen lassen in sauberem Leitungs H 2 O für 1 min. </li><li> Die Objektträger 15x in saurem Alkohol (250 ml 70% igem Ethanol + 1 ml konzentrierte Chlorwasserstoffsäure). </li><li> Dip Slides 4x in Leitungs H 2 O, und stehen lassen in sauberem Leitungs H 2 O für 1 min. </li><li> Inkubieren in 1% Lithiumkarbonat für 2 min. </li><li> Dip Slides 4x in Leitungs H 2 O, und stehen lassen in sauberem Leitungs H 2 O für 1 min. </li><li> Inkubieren in 95% Ethanol für 1 min. </li><li> Dip Slides 7x in 100% Eosin. Anzahl der Einbrüche in Eosin kann je nach Grad der rosa Färbung geändert werden. </li><li> Dip Slides 5x in 95% Ethanol. </li><li> Dip Schiebe 5x in einem frischen Wechsel 95% Ethanol. </li><li> Objektträger in 100% Ethanol nach 1 min. </li><li> Die Objektträger in eine frische Änderung von 100% Ethanol für 1 min. </li><li> Objektträger in 100% Xylol Proben für 15 min. HINWEIS: Xylol Schritte undEindecken sollte in einem Abzug erfolgen. </li><li> Inkubieren Objektträger in frischen Veränderungen Xylol für 15 min. </li><li> Deckglas mit Permount und trocknen lassen in Abzug. </li><li> Bildträger mit einem Lichtmikroskop. </li></ol>

<ol><li>Blencowe, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preterm+birth+associated+neurodevelopmental+impairment+estimates+at+regional+and+global+levels+for+2010%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Res%22%5BJournal%5D)">Preterm birth associated neurodevelopmental impairment estimates at regional and global levels for 2010.</a> Pediatr Res. 74, Suppl 1. 17-34 (2013).</li>
<li>Mwaniki, M. K., Atieno, M., Lawn, J. E., Newton, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long+term+neurodevelopmental+outcomes+after+intrauterine+and+neonatal+insults+a+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Long term neurodevelopmental outcomes after intrauterine and neonatal insults a systematic review.</a> Lancet. 379, 445-452 (2012).</li>
<li>Dammann, O., Leviton, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intermittent+or+sustained+systemic+inflammation+and+the+preterm+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Res%22%5BJournal%5D)">Intermittent or sustained systemic inflammation and the preterm brain.</a> Pediatr Res. 75, 376-380 (2014).</li>
<li>Leviton, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbiologic+and+histologic+characteristics+of+the+extremely+preterm+infant%27s+placenta+predict+white+matter+damage+and+later+cerebral+palsy%5BTitle%5D)+AND+%22the+ELGAN+study+Pediatr+Res%22%5BJournal%5D)">Microbiologic and histologic characteristics of the extremely preterm infant's placenta predict white matter damage and later cerebral palsy.</a> the ELGAN study Pediatr Res. 67, 95-101 (2010).</li>
<li>Redline, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammatory+responses+in+the+placenta+and+umbilical+cord%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Fetal+Neonatal+Med%22%5BJournal%5D)">Inflammatory responses in the placenta and umbilical cord.</a> Semin Fetal Neonatal Med. 11, 296-301 (2006).</li>
<li>Lee, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+chorioamnionitis+is+the+most+common+placental+lesion+in+late+preterm+birth%5BTitle%5D)+AND+%22Placenta%22%5BJournal%5D)">Chronic chorioamnionitis is the most common placental lesion in late preterm birth.</a> Placenta. 34, 681-689 (2013).</li>
<li>Lee, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+histologic+chorioamnionitis+is+a+risk+factor+for+adverse+neonatal+outcome+in+late+preterm+birth+after+preterm+premature+rupture+of+membranes%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Acute histologic chorioamnionitis is a risk factor for adverse neonatal outcome in late preterm birth after preterm premature rupture of membranes.</a> PloS one. 8, e79941(2013).</li>
<li>Pappas, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chorioamnionitis+and+early+childhood+outcomes+among+extremely+low+gestational+age+neonates%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA+Peds%22%5BJournal%5D)">Chorioamnionitis and early childhood outcomes among extremely low gestational age neonates.</a> JAMA Peds. 168, 137-147 (2014).</li>
<li>Gaillard, R., Arends, L. R., Steegers, E. A., Hofman, A., Jaddoe, V. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Second+and+third+trimester+placental+hemodynamics+and+the+risks+of+pregnancy+complications+the+Generation+R+Study%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Epidemiol%22%5BJournal%5D)">Second and third trimester placental hemodynamics and the risks of pregnancy complications the Generation R Study.</a> Am J Epidemiol. 177, 743-754 (2013).</li>
<li>Trivedi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fetal+placental+inflammation+but+not+adrenal+activation+is+associated+with+extreme+preterm+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Obstet+Gynecol%22%5BJournal%5D)">Fetal placental inflammation but not adrenal activation is associated with extreme preterm delivery.</a> Am J Obstet Gynecol. 206, 236(2012).</li>
<li>Yanowitz, T. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hemodynamic+disturbances+in+premature+infants+born+after+chorioamnionitis+association+with+cord+blood+cytokine+concentrations%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Res%22%5BJournal%5D)">Hemodynamic disturbances in premature infants born after chorioamnionitis association with cord blood cytokine concentrations.</a> Pediatr Res. 51, 310-316 (2002).</li>
<li>Jantzie, L. L., Corbett, C. J., Firl, D. J., Robinson, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postnatal+Erythropoietin+Mitigates+Impaired+Cerebral+Cortical+Development+Following+Subplate+Loss+from+Prenatal+Hypoxia+Ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Cereb+Cortex%22%5BJournal%5D)">Postnatal Erythropoietin Mitigates Impaired Cerebral Cortical Development Following Subplate Loss from Prenatal Hypoxia Ischemia.</a> Cereb Cortex. , (2014).</li>
<li>Jantzie, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Erythropoietin+attenuates+loss+of+potassium+chloride+co+transporters+following+prenatal+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Erythropoietin attenuates loss of potassium chloride co transporters following prenatal brain injury.</a> Mol Cell Neurosci. 61, 152-162 (2014).</li>
<li>Jantzie, L. L., Miller, R. H., Robinson, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Erythropoietin+signaling+promotes+oligodendrocyte+development+following+prenatal+systemic+hypoxic+ischemic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+Res%22%5BJournal%5D)">Erythropoietin signaling promotes oligodendrocyte development following prenatal systemic hypoxic ischemic brain injury.</a> Pediatric Res. 74, 658-667 (2013).</li>
<li>Mazur, M., Miller, R. H., Robinson, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postnatal+erythropoietin+treatment+mitigates+neural+cell+loss+after+systemic+prenatal+hypoxic+ischemic+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosurg+Peds%22%5BJournal%5D)">Postnatal erythropoietin treatment mitigates neural cell loss after systemic prenatal hypoxic ischemic injury.</a> J Neurosurg Peds. 6, 206-221 (2010).</li>
<li>Robinson, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+changes+induced+by+graded+prenatal+systemic+hypoxic+ischemic+insults+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Dis%22%5BJournal%5D)">Developmental changes induced by graded prenatal systemic hypoxic ischemic insults in rats.</a> Neurobiol Dis. 18, 568-581 (2005).</li>
<li>Delcour, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroanatomical+sensorimotor+and+cognitive+deficits+in+adult+rats+with+white+matter+injury+following+prenatal+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Pathol%22%5BJournal%5D)">Neuroanatomical sensorimotor and cognitive deficits in adult rats with white matter injury following prenatal ischemia.</a> Brain Pathol. 22, 1-16 (2012).</li>
<li>Delcour, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+prenatal+ischemia+on+behavior+cognitive+abilities+and+neuroanatomy+in+adult+rats+with+white+matter+damage%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Impact of prenatal ischemia on behavior cognitive abilities and neuroanatomy in adult rats with white matter damage.</a> Behav Brain Res. 232, 233-244 (2012).</li>
<li>Delcour, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mild+musculoskeletal+and+locomotor+alterations+in+adult+rats+with+white+matter+injury+following+prenatal+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Intl+J+Devel+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Mild musculoskeletal and locomotor alterations in adult rats with white matter injury following prenatal ischemia.</a> Intl J Devel Neurosci. 29, 593-607 (2011).</li>
<li>Jantzie, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complex+pattern+of+interaction+between+in+utero+hypoxia+ischemia+and+intra+amniotic+inflammation+disrupts+brain+development+and+motor+function%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuroinflam%22%5BJournal%5D)">Complex pattern of interaction between in utero hypoxia ischemia and intra amniotic inflammation disrupts brain development and motor function.</a> J Neuroinflam. 11, 131(2014).</li>
<li>Back, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+vulnerability+of+late+oligodendrocyte+progenitors+to+hypoxia+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Selective vulnerability of late oligodendrocyte progenitors to hypoxia ischemia.</a> J Neurosci. 22, 455-463 (2002).</li>
<li>Jantzie, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+Expression+of+N+Methyl+d+Aspartate+%28NMDA%29+Receptor+Subunits+in+Human+White+and+Gray+Matter+Potential+Mechanism+of+Increased+Vulnerability+in+the+Immature+Brain%5BTitle%5D)+AND+%22Cereb+Cortex%22%5BJournal%5D)">Developmental Expression of N Methyl d Aspartate (NMDA) Receptor Subunits in Human White and Gray Matter Potential Mechanism of Increased Vulnerability in the Immature Brain.</a> Cereb Cortex. 25, 482-495 (2015).</li>
<li>Jantzie, L. L., Robinson, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+Models+of+Encephalopathy+of+Prematurity%5BTitle%5D)+AND+%22Devel+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Preclinical Models of Encephalopathy of Prematurity.</a> Devel Neurosci. , (2015).</li>
<li>Workman, A. D., Charvet, C. J., Clancy, B., Darlington, R. B., Finlay, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+transformations+of+neurodevelopmental+sequences+across+mammalian+species%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Modeling transformations of neurodevelopmental sequences across mammalian species.</a> J Neurosci. 33, 7368-7383 (2013).</li>
<li>Herlenius, E., Lagercrantz, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+neurotransmitter+systems+during+critical+periods%5BTitle%5D)+AND+%22Exper+Neurol%22%5BJournal%5D)">Development of neurotransmitter systems during critical periods.</a> Exper Neurol. 190, S8-S21 (2004).</li>
<li>Kelsom, C., Lu, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+specification+of+GABAergic+cortical+interneurons%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Biosci%22%5BJournal%5D)">Development and specification of GABAergic cortical interneurons.</a> Cell Biosci. 3, 19(2013).</li>
<li>Kinney, H., Back, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+oligodendroglial+development+Relationship+to+periventricualr+leukomalacia%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Pediatr+Neuro%22%5BJournal%5D)">Human oligodendroglial development Relationship to periventricualr leukomalacia.</a> Semin Pediatr Neuro. 5, 180-189 (1998).</li>
<li>Robinson, S., Li, Q., DeChant, A., Cohen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neonatal+loss+of+gamma+amino+butyric+acid+pathway+expression+after+human+perinatal+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosurg+Peds%22%5BJournal%5D)">Neonatal loss of gamma amino butyric acid pathway expression after human perinatal brain injury.</a> J Neurosurg Peds. 104, 396-408 (2006).</li>
<li>Xu, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Late+development+of+the+GABAergic+system+in+the+human+cerebral+cortex+and+white+matter%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuropathol+Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Late development of the GABAergic system in the human cerebral cortex and white matter.</a> J Neuropathol Exp Neurol. 70, 841-858 (2011).</li>
<li>Segovia, K. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Arrested+oligodendrocyte+lineage+maturation+in+chronic+perinatal+white+matter+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Neurol%22%5BJournal%5D)">Arrested oligodendrocyte lineage maturation in chronic perinatal white matter injury.</a> Ann Neurol. 63, 520-530 (2008).</li>
<li>Robinson, S., Li, Q., Dechant, A., Cohen, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neonatal+loss+of+gamma+aminobutyric+acid+pathway+expression+after+human+perinatal+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosurg%22%5BJournal%5D)">Neonatal loss of gamma aminobutyric acid pathway expression after human perinatal brain injury.</a> J Neurosurg. 104, 396-408 (2006).</li>
<li>Boksa, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+prenatal+infection+on+brain+development+and+behavior+a+review+of+findings+from+animal+models%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Behav+Immun%22%5BJournal%5D)">Effects of prenatal infection on brain development and behavior a review of findings from animal models.</a> Brain Behav Immun. 24, 881-897 (2010).</li>
<li>Burd, I., Brown, A., Gonzalez, J. M., Chai, J., Elovitz, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+of+term+chorioamnionitis+unraveling+causes+of+adverse+neurological+outcomes%5BTitle%5D)+AND+%22Repro+Sci%22%5BJournal%5D)">A mouse model of term chorioamnionitis unraveling causes of adverse neurological outcomes.</a> Repro Sci. 18, 900-907 (2011).</li>
<li>Bergeron, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((White+matter+injury+and+autistic+like+behavior+predominantly+affecting+male+rat+offspring+exposed+to+group+B+streptococcal+maternal+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Devel+Neurosci%22%5BJournal%5D)">White matter injury and autistic like behavior predominantly affecting male rat offspring exposed to group B streptococcal maternal inflammation.</a> Devel Neurosci. 35, 504-515 (2013).</li>
<li>Uchida, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+Ureaplasma+parvum+lipoprotein+multiple+banded+antigen+on+pregnancy+outcome+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Reprod+Immunol%22%5BJournal%5D)">Effects of Ureaplasma parvum lipoprotein multiple banded antigen on pregnancy outcome in mice.</a> J Reprod Immunol. 100, 118-127 Forthcoming.</li>
</ol>

Die Autoren haben nichts zu offenbaren.

Enzephalopathie bei Frühgeborenen ist schwierig, bei Tieren aufgrund der komplexen Zusammenspiel von Ursachen, neurologische Entwicklungszeit natürlich, Kompliziertheit der menschlichen Hirnnetzwerkbildung, überlappenden Mechanismen der Schädigung zu modellieren und die diversen Phänotypen von CNS beleidigt manifest in der menschlichen Frühgeborenen. EOP mit spezifischen Zelltyp Lücken zugeordnet (dh unreifen Oligodendrozyten) 21, sowie verschiedene entwicklungsregulierte Wege (dh Unterplatt...

Mit über 12% der Kinder in den Vereinigten Staaten vor der 37. Woche geschätzt Gestationsalter 1 geboren, ist perinatalen Hirnschädigung (PBI) von Frühgeborenen eine wesentliche Ursache für bleibende Behinderung. PBI von Frühgeburten, die auch als Enzephalopathie praematurorum (EOP), wirkt das gesamte zentrale Nervensystem (ZNS). ZNS-Verletzung oft beginnt in utero und durch vorgeburtliche Verfahren einschließlich chorioamnionitis und postnatalen Komplikationen wie Hypoxie und Sepsis verstärkt. PBI von systemischen Beleidigungen ändert Entwicklung des Nervensystems und führt zu Zerebralparese, Epilepsie, kognitive Verzögerung und zahlreichen neuropsychiatrischen Störungen, die emotionale Regulation, Gedächtnis und exekutive Funktion 1,2. Obwohl große Fortschritte erzielt wurden, bleibt, wie die zellulären und molekularen Folgen der ZNS-Verletzung von Frühgeburten zu übersetzen, um die Vielzahl der neurologischen Folgen bei Kindern, die Frühgeborenen geboren werden ein begrenztes Verständnis. Dieser Mangel an Wissen HinterInnen Echtzeit-Diagnose von ZNS-Verletzungsschwere und informierte Dosierung von Schwellen Interventionen. Zusätzlich altersgerechte therapeutische Strategien für diese gefährdete Patientengruppe bleibt schwer fassbar. Intrauterine Entzündung ist sehr häufig in extremen Frühgeburt und eine komplexe fetalen-mütterlichen Plazenta-Entzündungskaskade 3. Intrauterine Infektion oft subklinisch. Spezifische Plazenta Ergebnisse stehen im Einklang mit einer akuten Entzündung oder histologische Chorioamnionitis, sind entscheidend für den fetalen Entzündungsreaktion und fallen mit Hirnverletzung mit Frühgeburt 3-5 verbunden. Tatsächlich hat die fetale Entzündungsreaktion deutliche klinische Implikationen für die langfristigen Ergebnisse von Frühgeburten. Säuglinge, die klein für das Gestationsalter (SGA), der Erfahrung oder Infektion sind besonders anfällig für neurologische Defizite 3,4. Chorioamnionitis ist eine typische pathologische Diagnose folgenden Frühgeburt <sup&gt; 6,7, und die histologische Untersuchung zeigt Anzeichen einer Entzündung in 70% der Plazenten von Säuglingen sehr frühgeborenen 4 geboren. Ferner wird Chorioamnionitis mit kognitiven Beeinträchtigungen nach zwei Jahren 8 verbunden. Der Nachweis der mütterlichen Gefäßminder in der Plazenta von Säuglingen extrem Frühgeborenen geboren wird auch mit zerebraler Lähmung in der Kindheit 9 verbunden. Die synergistische Wirkung der Chorioamnionitis und Plazenta Perfusionsdefekte ist gut mit dem bemerkenswert hohen Risiko für abnorme neurologische Ergebnisse in dieser Patientengruppe bei zwei Jahren 10,11 dargestellt. Die menschliche systemische Plazentaperfusion Mängel und Chorioamnionitis mit pathogen-induzierten Entzündung zu imitieren, entwickelten wir ein Modell der pränatalen transiente systemische Hypoxie-Ischämie (TSHI) in Kombination mit intraFrucht Lipopolysaccharid (LPS) bei Ratten. Unser Ziel war es unser Modell der TSHI allein bei Ratten 12-16 Anpassung an intrauterine Entzündung sind,In den präklinischen Modellierung von ZNS-Verletzung mit Frühgeburt assoziiert zu erleichtern. TSHI allein hat anhaltende Verlust von Oligodendrozyten Linie Zellen, kortikalen Neuronen zeigte, erhöhte Zelltod und erhöhten proinflammatorische Zytokin Ebenen, mit fortschrittlichen ischämischen Intervalle, die zu einer abgestuften Verletzungsmuster im Einklang mit der pränatalen Hirnverletzung 16. Änderungen an den ischämischen Komponenten dieses Modells haben auch gezeigt, Defizite in der Speichercodierung, Kurz- und Langzeitgedächtnis und einem milden Muskel-Skelett-Veränderungen bei Ratten, wenn sie 17-19 altern. In der Tat haben wir bereits gezeigt, dass die Kombination von TSHI + LPS rekapituliert die pathophysiologischen Markenzeichen EoP, einschließlich Oligodendrozyten und Neuronenverlust, axonalen Schädigung, zelluläre Entzündung und Funktionsstörungen 20.

<table><tbody><tr><td>Kochsalzlösung, 0,9%</td><td>Sigma</td><td>S8776</td><td></td></tr><tr><td>LPS 011B4</td><td>Sigma</td><td>L2630</td><td></td></tr><tr><td>Evan's Blue Dye</td><td>Sigma</td><td>E2129</td><td></td></tr><tr><td>OP-Handschuhe</td><td>Biogel</td><td>40870</td><td></td></tr><tr><td>ODER Handtücher</td><td>Cardinal Health</td><td>287000-008</td><td>Sterile</td></tr><tr><td>PDI Alkoholvorbereitungspads</td><td>Fisherbrand</td><td>06-669-62</td><td></td></tr><tr><td>Mini Arco Wiederaufladbare Haarschneidemaschine</td><td>Kent Scientific Corp.</td><td>CL8787</td><td></td></tr><tr><td>Betadine OP-Peeling</td><td>Purdue Products L.P.</td><td>67618-151-17</td><td></td></tr><tr><td>Augenschmiermittel</td><td>Refresh Lacri Lube</td><td>00023-0312</td><td></td></tr><tr><td>Stumpfe Pinzette</td><td>Roboz</td><td>RS-8100</td><td></td></tr><tr><td>Schere</td><td>Roboz</td><td>RS-6808</td><td></td></tr><tr><td>Chirurgische Schere</td><td>Roboz</td><td>RS-5880</td><td></td></tr><tr><td>Chirurgische Schere</td><td>F.S.T.</td><td>14002-16</td><td></td></tr><tr><td>Spritze</td><td>BD</td><td>309628</td><td>1 ml</td></tr><tr><td>Nadel</td><td>BD</td><td>305122</td><td>25G 5/8</td></tr><tr><td>Nadel</td><td>BD</td><td>305128</td><td>30G 1</td></tr><tr><td>Applikatoren mit Wattespitze</td><td>Fisherbrand</td><td>23-400-114</td><td>Kleiner, 6 Zoll steriler</td></tr><tr><td>Baumwoll-Mullschwamm</td><td>Fisherbrand</td><td>22-362-178</td><td></td></tr><tr><td>Nadelhalter</td><td>Kent Wissenschaftliche Kor.</td><td>INS600109</td><td>12,5 cm STR</td></tr><tr><td>Gefäßklemmen</td><td>Kent Scientific Corp.</td><td>INS600120</td><td>30G Druck</td></tr><tr><td>3-0 Perma Handseidennähte</td><td>Ethicon</td><td>1684G</td><td>Schwarz geflochten, 3-0 (2 metrisch), 18", nicht resorbierbar,&nbsp; PS-1 24 mm Nadel, 3/8 Kreis</td></tr><tr><td>Insulinspritzen</td><td>BD</td><td>328438</td><td>0,3 cc 3 mm 31G</td></tr><tr><td>Pentobarbital</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Buprenorphin</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Bupivacain</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Isofluran</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Lithiumcarbonat</td><td>Acros Chemicals</td><td>554-13-2</td><td></td></tr><tr><td>Superfrost Plus Objektträger</td><td>VWR</td><td>48311-703</td><td></td></tr><tr><td>Hämatoxylin</td><td>Leica</td><td>3801521</td><td>Surgipath Gill II Hämatoxylin</td></tr><tr><td>Eosin</td><td>Leica</td><td>3801601</td><td>Surgipath Eosin</td></tr><tr><td>Xylole</td><td>Fisherbrand</td><td>X3S-4</td><td>Histologischer Grad</td></tr><tr><td>Permount</td><td>Fisherbrand</td><td>SP15-100</td><td></td></tr><tr><td>Deckglas</td><td>Fisherbrand</td><td>12-548-5P</td><td>Fisher Finest Premium Deckglas</td></tr></tbody></table>

modellierung enzephalopathie praematurorum mit prenatal hypoxie-ischämie mit intra-frucht lipopolysaccharide bei ratten

Modeling Encephalopathy of Prematurity Using Prenatal Hypoxia-ischemia with Intra-amniotic Lipopolysaccharide in Rats

Enzephalopathie bei Frühgeborenen (EOP) ist eine Bezeichnung, die das zentrale Nervensystem (ZNS) umfasst Anomalien mit Frühgeburt assoziiert. Um beste Voraus translationale Ziele und entdecken Sie neue therapeutische Strategien für Hirnverletzung mit Frühgeburt assoziiert, müssen präklinischen Modellen EoP ähnliche Mechanismen gehören der pränatalen globalen Verletzungen bei Menschen beobachtet und beinhalten mehrere Komponenten der mütterlichen Plazenta und Fötus-System. Im Idealfall sollten Modelle ein ähnliches Spektrum von funktionellen Defiziten in der reifen Tier zu produzieren und zu rekapitulieren mehrere Aspekte der Pathophysiologie. Die menschliche systemische Plazentaperfusion Fehler, Minder Plazenta und / oder Chorioamnionitis mit pathogen-induzierten Entzündung in der frühen Frühgeburt assoziiert imitieren, entwickelten wir ein Modell der pränatalen transiente systemische Hypoxie-Ischämie (TSHI) in Kombination mit intraFrucht Lipopolysaccharid (LPS). Bei trächtigen Sprague Dawley Ratten, TSHI über Gebärmutterarterien-Okklusionsvorrichtung on embryonalen Tag 18 (E18) induziert eine abgestufte Plazentaminder Defekt mit zunehmender ZNS-Schäden in den Fötus verbunden. Wenn bei innerFrucht LPS-Injektionen kombiniert wird Plazenta Entzündungen erhöht und ZNS-Schäden ist mit assoziierten weißen Substanz, Gang- und Abbildungs ​​Anomalien verschärft. Pränatale TSHI und TSHI + LPS pränatalen Beleidigungen treffen mehrere der Kriterien eines EoP Modell einschließlich rekapituliert die intrauterine Beleidigung, was zu Verlust von Neuronen, Oligodendrozyten und Axone, Verlust der Anschlussplatte und Funktionsdefizite bei erwachsenen Tieren, die denen bei Kindern extrem geboren beobachtet imitieren Früh. Darüber hinaus ermöglicht die Präparation der Entzündung, die durch divergierende Verletzungstypen induzierten dieses Modell.

Folgende TSHI + LPS bei E18, Hämatoxylin und Eosin-Färbung zeigt deutliche histopathologische Anomalien sowohl in der Plazenta (Figur 1) und im Gehirn (Figur 2). Plazenten auf E19 und E21 untersucht sind grob ödematösen mit Mikro-Blutungen und Nekrose der gesamten decidua und des Labyrinths. Signifikante Entzündungsinfiltrat und erhöhte Durchblutung wird auch beobachtet. Brains auf P2 sucht offenbaren Ventrikulomegalie sowie weißen Substanz und Anschlussplatte Verlust von Nervenzellen i...

Die Frühgeborenen-Enzephalopathie umfasst die Anomalien des Zentralnervensystems, die mit Verletzungen durch Frühgeburten verbunden sind. Dieser Bericht beschreibt ein klinisch relevantes Rattenmodell der in utero transienten systemischen Hypoxie-Ischämie und der intraamniotischen Lipopolysaccharid-Verabreichung (LPS), das die Chorioamnionitis nachahmt, und den damit verbundenen Einfluss von infektiösen Reizen und Plazenta-Unterperfusion auf die ZNS-Entwicklung.

Modellierung Enzephalopathie praematurorum Mit Prenatal Hypoxie-Ischämie mit Intra-Frucht Lipopolysaccharide bei Ratten

Encephalopathy of prematurity (EoP) is a term that encompasses the central nervous system (CNS) abnormalities associated with preterm birth. To best ...

Das übergeordnete Ziel dieses chirurgischen Eingriffs besteht darin, ein reproduzierbares Modell einer Gehirnverletzung im Zusammenhang mit extrem frühgeborener Geburt bereitzustellen, indem eine vorübergehende systemische Hypoxie, Ischämie und intraamniale Entzündung in utero induziert werden, um Plazentainsuffizienz und Chorioamnionitis bei Ratten nachzubilden. Diese Methode kann helfen, zentrale Fragen zur Pathogenese perinataler Gehirnschäden zu beantworten, die aus intrauterinen Prozessen hervorgehen, und so die Entwicklung gezielter therapeutischer Strategien zu fördern. Der Hauptvorteil dieser Technik liegt darin, dass sie eine systemische Schädigung hervorruft, die intrauterine Noxen infolge von Infektion sowie Hypoxie und Ischämie nachahmt und funktionelle neurologische Defizite bei ausgewachsenen Ratten verursacht.Dieses Modell eignet sich besonders gut zur Untersuchung der Mechanismen von entzündungsbedingten Verletzungen. Da Hypoxie, Ischämie und infektiöse Reize einzeln oder als kombinierte Verletzung getestet werden können, wird den Vorgang Lindsey Chan, eine Technikerin aus unserem Labor, demonstrieren. Vor Beginn des Verfahrens verwenden Sie Kleintier-Schermaschinen, um alle Haare aus dem unteren Bauchbereich eines embryonalen Tages zu entfernen.18 schwangere Ratte in rechteckiger Anordnung, wobei darauf geachtet werden muss, die Brustwarzen nicht zu verletzen und Rasurirritationen zu vermeiden. Anschließend die Haut mit sterilen Wattestäbchen durch drei abwechselnde Anwendungen von Povidon-Iod und 70 %igem Ethanol abreiben. Wenn die Haut trocken ist, die ausreichende Anästhesietiefe durch Zehenquetschung überprüfen und das Tier abdecken.Verwenden Sie dann ein Skalpell, um einen drei Zentimeter langen medianen Schnitt im Bauch des Tieres vorzunehmen, gefolgt von einer stumpfen Präparation der Hautschicht von der Bauchfascia mit einer Schere. Heben Sie mithilfe von Pinzette und Operationschere die Bauchfascia an und führen Sie einen Schnitt durch die avaskuläre Linea alba.Wenn die Bauchhöhle freigelegt ist, legen Sie chirurgische Gaze auf die Außenseite des Schnitts und befeuchten Sie die Gaze mit steriler Kochsalzlösung. Entfernen Sie dann vorsichtig mithilfe einer stumpfen Pinzette und durch äußeren Druck auf den Bauch die Gebärmutterhörner aus der Bauchhöhle und ordnen Sie die Hörner auf der angefeuchteten Gaze an. Achten Sie darauf, eine Verflechtung und Berührung mit dem Darm zu vermeiden, und ordnen Sie die Föten ausschließlich über das Muskelgewebe zwischen den einzelnen Fruchtblasen an.Danach mittels stumpfer Dissektion die vier Uterusarterien freilegen und isolieren. Dabei darauf achten, die mütterlichen Gefäße nicht zu beschädigen, nachdem die Arterien isoliert wurden. Einen Aneurysmabinder für Ratten mit 30 Gauge an jedem Gefäß anbringen. Vor dem Anlegen der Klammern ist sicherzustellen, dass das gesamte umgebende Gewebe vollständig freigelegt ist.Beim Platzieren der Clips diese mit der stumpfen Pinzette fixieren und anschließend parallel anbringen. Die Beobachtung des Pulscesus ist entscheidend, um eine vollständige Hypoxie-Ischämie sicherzustellen, nachdem alle Clips platziert wurden. Bestätigen Sie den Ausfall der proximalen und distalen Pulse sowie die Verdunkelung der Uterusgefäße, einschließlich der einzelnen Plazentagefäße.Dann bedecken Sie das gesamte Operationsfeld mit Mull und spülen Sie das Gewebe mit steriler Kochsalzlösung aus. Entfernen Sie alle 10 Minuten über eine Stunde hinweg nach 60 Minuten den Mull und spülen Sie das Feld erneut aus. Wenn die Uterushörner und Gefäße ausreichend befeuchtet sind, entfernen Sie vorsichtig mit einer Pinzette jeden Aneurysmakenklemme, wobei Sie darauf achten, das Gefäß nicht zu verletzen und die Gewebeintegrität aufrechtzuerhalten.Danach die H&ouml;rner und das Feld gr&uuml;ndlich sp&uuml;len. Ein letztes Mal darauf achten, eventuelle lose Gazef&auml;den aus den Amnionh&uuml;llen zu entfernen. Um die F&ouml;ten mit LPS zu behandeln, stumpfe Pinzette verwenden, um jede Amnionh&uuml;lle zu stabilisieren und zu drehen, sodass die Basis jeder einzelnen Amnionh&uuml;lle sichtbar ist.Füllen Sie dann eine ultrafeine 0,3-Milliliter-Insulinspritze mit einer angesetzten 8-Millimeter-31-Gauge-Nadel mit LPS-Lösung und injizieren Sie jeweils 100 Mikroliter der Lösung unmittelbar vorne an jede Plazentaplatte. Während die Nadel entfernt wird, üben Sie direkten Druck auf den Fruchtblasen aus, um jegliches Austreten von Flüssigkeit zu verhindern. Die Einführung einer ultrafeinen 31-Gauge-Nadel an der Basis der Fruchtblase ist entscheidend für eine korrekte LPS-Applikation, ohne dass Fruchtwasser entweichen kann.Nachdem die Uterushörner dreimal mit steriler Kochsalzlösung gespült wurden, verwenden Sie eine Pinzette, um die Hörner in die Bauchhöhle zurückzulegen. Anschließend nähen Sie die Ränder der muskulo-faszialen Schicht mit einer fortlaufenden Seidennaht (3-0) zusammen, wobei Sie nicht in oder durch einen Sack nähen. Danach schließen Sie die Haut mit einer weiteren fortlaufenden 3,0-Seidennaht. Als Nächstes verwenden Sie eine 26-Gauge-Nadel, um subkutan zu injizieren.Injizieren Sie ein Milliliter 0,125 % Bupivacain um die Wundränder herum. Trocknen Sie die Ratte nach Bedarf mit einem Handtuch ab und injizieren Sie 0,1 Milligramm pro Kilogramm Buprenorphin am Nacken. Stellen Sie das Tier in einen sauberen Heimkäfig und überwachen Sie es, bis es vollständig erholt ist.Nach vorübergehender systemischer Hypoxie-Ischämie und Gabe von LPS am 18. embryonalen Tag zeigen, wie gerade demonstriert, Hämatoxylin- und Eosin-Färbungen signifikante histopathologische Veränderungen sowohl in der Plazenta als auch im Gehirn. Tatsächlich weisen Plazenten, die am 19. und 21. embryonalen Tag untersucht wurden, makroskopische Auffälligkeiten mit Mikrohämorrhagien und Nekrosen im gesamten Dezidua- und Labyrinthbereich auf. Zudem werden signifikante entzündliche Infiltrate und eine erhöhte Gefäßdichte beobachtet.Weitere am zweiten Tag nach der Geburt untersuchte Gehirne zeigen eine Ventrikelerweiterung sowie einen Verlust von weißer Substanz und Subplattenneuronen im Vergleich zu Kontrolltieren. Transiente systemische Hypoxie, Ischämie und LPS verringerten zudem signifikant die Expression des Kalium-Chlorid-Cotransporters 2, eines für die Entwicklung der GABAergen Hemmung im Kortex zentralen Chloridcotransporters, am 15. Tag nach der Geburt, was mit der beeinträchtigten entwicklungsbedingten Hochregulation übereinstimmt, die während der kritischen postnatalen Phase der Schaltkreisreifung beobachtet wurde. Nach dem Anschauen dieses Videos sollten Sie ein solides Verständnis dafür haben, wie man diese Operation an trächtigen Ratten durchführt und wie man pränatale transiente Hypoxie-Ischämie mittels Okklusion der Uterusarterien sowie intrauterine Entzündung durch intraamniotische Injektion einer Lipopolysaccharidlösung induziert. Sobald die Technik beherrscht ist, kann sie bei korrekter Durchführung innerhalb von 90 Minuten abgeschlossen werden.

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Research

Forschung

JoVE Journal

Medicine

Medizin

Die postnatale Rattenmodell für hypoxisch-ischämischen Hirn-Trauma ist ein gut etabliertes Modell der menschlichen Neugeborenen hypoxisch ischämischen Enzephalopathie (HIE). In diesem Artikel beschreiben wir das Modell der HIE in postnatalen Rattenjungen.

Die hypoxische ischämischen Enzephalopathie Model of Perinatal Ischämie

Wir haben festgestellt, Mausmodellen periventrikuläre Leukomalazie (PVL), die vorherrschende Hirn-Trauma bei Frühgeborenen durch periventrikulären Läsionen der weißen Substanz gekennzeichnet. Hypoxie / Ischämie mit / ohne systemische Infektion sind die primären Ursachen der PVL. Einseitige carotis Ligation und Hypoxie Exposition mit / ohne Lipopolysaccharid Injektion schafft PVL-Läsionen in P6 Mäusen.

Mausmodellen periventrikuläre Leukomalazie

Dieses Video zeigt den Prozess der Induktion von Störungen der Blut-Hirn-Schranke (BHS) und zerebralen Mikroblutungen in einem Rattenmodell unter Verwendung von Lipopolysaccharid (LPS). Es zeigt die Abfolge von Immunantworten, die zu einer erhöhten BHS-Permeabilität und einer anschließenden Schädigung des Hirngewebes führen.

Induktion von zerebralen Mikroblutungen in einem Rattenmodell mit Lipopolysaccharid

Quelle: Jantzie, L. L., et. al. Modellierung der Frühgeborenen-Enzephalopathie unter Verwendung der pränatalen Hypoxie-Ischämie mit intraamniotischem Lipopolysaccharid bei Ratten. J. Vis. Exp. (2015)Dieses Video zeigt ein Protokoll zur Induktion hypoxisch-ischämischer und entzündlicher Zustände bei fötalen Ratten durch Einschränkung des uterinen Blutflusses und Injektion von LPS, Modellierung von Neuroinflammation und gestörter Gehirnentwicklung, die für Frühgeburtenstudien relevant sind.

Induktion hypoxisch-ischämischer und entzündlicher Zustände zur Modellierung der Enzephalopathie bei pränatalen Ratten

Hypoxisch-ischämische Enzephalopathie nach perinataler Asphyxie kann mit Tiermodellen untersucht werden. Wir demonstrieren die Verfahren, die zur Etablierung eines Ferkelmodells der neonatalen hypoxisch-ischämischen Enzephalopathie erforderlich sind.

Ein Ferkel Modell Neonatal hypoxischischämischer Enzephalopathie

Milde intrauterine Hypoperfusion produzierte Arterie Stenose mit Metall Microcoils um die Gebärmutter und Eierstöcken Arterien bei Ratten bei embryonalen Tag 17 gewickelt. Dieses Verfahren produziert pränatale Hypoperfusion und intrauterine Wachstumsretardierung.

Einem Rattenmodell der milden Intrauterine Hypoperfusion mit Microcoil Stenose

Die Methode beschreibt entzündungsempfindliche hypoxisch-ischämische und hyperoxische Hirnverletzungen im P17-Ferret, um die komplexe Wechselwirkung zwischen längeren Entzündungen und oxidativen Hirnverletzungen bei einer Reihe von späten Frühgeborenen zu modellieren.

Ein Frettchenmodell einer entzündungssensibilisierten spätpräfristifernen hypoxischen-ischämischen Hirnverletzung

Wir präsentieren ein Modell der neonatalen intraventrikulären Blutung mit Rattenwelpen, das die Pathologie beim Menschen nachahmt.

Modellierung neonataler intraventrikulärer Blutungen durch intraventrikuläre Injektion von Hämoglobin

Der posthämorrhagische Hydrozephalus der Frühgeburt (PHHP) kann bei neugeborenen Ratten durch Kombination von Chorioamnionitis und intraventrikulärer Blutung modelliert werden. Die Kombination dieser pränatalen und postnatalen Ereignisse rekapituliert genau die klinischen Merkmale von PHHP, einschließlich Makrozephalie, Ventrikulomegalie und erhöhtem Hirndruck, über die gesamte Lebensspanne.

Modellierung des posthämorrhagischen Hydrozephalus der Frühgeburt bei Ratten

Filamentous Verschluss der mittleren Hirnarterie ist ein gemeinsames Modell für die Untersuchung einen ischämischen Schlaganfall bei Mäusen.

Modeling Stroke in Mice - Middle Zerebralarterie mit dem Filament-Modell

Erfahren Sie die Modellierung von Frühgeborenen-Enzephalopathie durch pränatale Hypoxie-Ischämie und LPS-Entzündung bei Ratten. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung perinataler Hirnverletzungsmechanismen.

Modellierung Enzephalopathie praematurorum Mit Prenatal Hypoxie-Ischämie mit Intra-Frucht Lipopolysaccharide bei Ratten

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