Name: Sklerale Vernetzungs Mit Riboflavin und UV-A-Strahlung-für Prävention von Axial Myopie in einem Kaninchenmodell (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-04-03T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 56 s
Description: Erfahren Sie die sklerale Vernetzung mit Riboflavin und UV-A-Strahlung zur Prävention der axialen Myopie im Kaninchenmodell. Diese Methode ermöglicht gezielte UVA-Behandlung spezifischer Sklerabereiche.

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Die Autoren sind dankbar, dass Frau Dalia Sela und Herr Emi Sharon für ihre professionelle und ausgezeichnete technische Arbeit im Labor.

Die Tiere wurden in Übereinstimmung mit der ARVO Resolution über die Verwendung von Tieren in der Forschung behandelt. Das Studienprotokoll wurde von den institutionellen Ausschuss für Labortierforschung (Zulassung Nr 022-4598-2. 021.211) zugelassen. 1. Vorbereitung für Chirurgie # 1 <ol><li> Wiegen und betäuben einen 13 Tage alten weißen Neuseeland-Kaninchen mit einer intramuskulären Injektion von Ketamin-Hydrochlorid 100 mg / ml (100 mg / kg) und Xylazinhydrochlorid 25 mg / ml (12,5 mg / kg). Diese Dosen werden wegen der Länge des chirurgischen Eingriffs verwendet. Assure angemessene Höhe der Anästhesie durch den Mangel an Schmerzreflex. </li><li> Mit einem sterilen Baumwolltupfer, eine kleine Menge von ophthalmischen Salbe auf die nicht-operierten Auge um die Hornhaut zu verhindern, vor dem Austrocknen. Anwenden 0,9% normale Kochsalzlösung fällt auf das operierte Auge Hornhaut während des Betriebs der Cornea zu verhindern das Austrocknen. </li><li> Führen Sie drei axiale Längenmessungen in jedem Auge nach topischer Anästhesie (Oxybuprocaine-Hydrochlorid 0,4%) unter Verwendung eines Ultraschall-A-Scanner und im Durchschnitt dann die Messungen. Tragen Sie die Sonde senkrecht zur zentralen Hornhaut. </li></ol> 2. Chirurgie # 1 - Pre Vernetzung Schritt <ol><li> Mit chirurgischen Augen Pinzette und Schere unter einer Augenoperationsmikroskop, machen Sie eine 360 ​​° konjunktivaler Peritomie mit chirurgischen Augen Pinzette und Schere. </li><li> Mit einem abgewinkelten Zange oder einen Muskel Haken die vier extraocular Rektusmuskeln identifizieren und zu isolieren, um sie mit einem 2-0 geflochtenen Seide nicht genadelt Nähten. HINWEIS: Die Seidenfäden mit Bewegung der Kugel in die gewünschte Richtung zu helfen. Der Augapfel ist unterteilt in Quadranten zwischen den vier Rektusmuskeln (vier Quadranten). <ol><li> Mark mit einer Hautmarkierungs zwei Zonen in jedem Quadranten, einer an der äquatorialen Sklera und eine an der posterioren Sklera. Dies sind die Bestrahlungszonen. </li></ol></li><li> Bereiten Sie eine 3 ml bis 5 ml Spritze mit 0,1% Dextran freien Riboflavin-5-phosphate. Verbinden Sie die Spritze mit einer 26 G Kanüle Tränen- oder 25 G verjüngte hydrodelineator. </li><li> Bereiten Sie die Bestrahlungsvorrichtung, die eine UV-A (370 nm) Lichtquelle auf einen abgeschrägten unten maßgeschneiderte Faseroptik verbunden ist. Im Anschluss an die Messung des Energieleistung und Kalibrierung (siehe Anmerkung unten), stellen Sie das Gerät auf 57 mW / cm². HINWEIS: Die Kalibrierung wurde vom Hersteller im Handel durchgeführt. Dieses Verfahren stellt eine Gesamt UVA Lichtdosis von 57 J / cm². (57 mW / cm 2 auf 0,2 cm 2 beträgt 11,4 mW / 0,2 cm 2 unter Verwendung von 11,4 mW / 0,2 cm 2 für 200 sec ist eine kumulative Belastung von 2,2 J pro 0,2 cm 2 spot) </li></ol> 3. Chirurgie # 1 - Cross Linking <ol><li> Den Augapfel bewegen , indem sie die Seidenfäden in die entgegengesetzte Richtung des gewählten Quadranten ziehen behandelt werden (zB nach oben ziehen und nasal , wenn die unteren temporalen Quadranten der Behandlung). Führen Sie die Augapfelbewegung 2-0 geflochtenen Seide nicht fädelten Nahtmaterials unter Verwendung der isolates jeden Rektusmuskel. </li><li> Anwenden Photosensibilisator Lösung 0,1% Dextran freien Riboflavin-5-phosphat auf die Bestrahlungszone 20 sec vor der Bestrahlung beginnt, enthält. </li><li> Bestrahlen, um die Bestrahlungszone eine abgeschrägte unten nach Maß Faseroptik für eine Bestrahlungszeit von 200 s verwendet wird. Messen der Fläche jeder Zone als 0,2 cm² mit einem Radius von 4 mm. </li><li> Anwenden Photosensibilisator Lösung 0,1% Dextran freien Riboflavin-5-phosphat auf die Bestrahlungszone alle 20 sec während der 200 sec Bestrahlungsperiode enthält. HINWEIS: Führen Sie die Bestrahlung und den Abwurf von zwei Chirurgen gleichzeitig Riboflavin. </li><li> Wiederholen Sie die Schritte 3,1-3,4 für jeden der vier Quadranten Augapfel. </li></ol> 4. Chirurgie # 1 - Post-Cross Verknüpfung Schritt <ol><li> Rasieren Sie das Fell rund um das Auge. Schneiden Sie die Lidrändern mit chirurgischen Augen Schere und dann Naht vorsichtig die oberen und die unteren Augenlider mit 4-0 geflochtener Seide Elfenbeinfarbe - 3/8 Kreis reVers Schneide- 13 mm Länge C-3-Nadel (Tarsorrhaphie). Eine kleine Menge von Augensalbe auf dem Lidrand am Ende des Verfahrens (Chloramphenicol 5%). </li></ol> 5. Chirurgie # 1 - Postoperative Pflege <ol><li> Halten Sie die Tiere unter einer Wärmelampe während der Wiederherstellung. Verwenden Sie kein Tier unbeaufsichtigt lassen, bis es genügend Bewusstsein zu halten Brustlage wiedergewonnen hat. </li><li> Legen Sie das Tier in einem sauberen Käfig mit neuen Betten, bis es vollständig zurückgewonnen wird. Nach der Wiederherstellung wird das Tier zum Tierraum zurückgeführt werden. Bringen Sie das Tier zu seiner Mutter nur wach, als. </li><li> Während der ersten 48 Stunden, untersucht die Tiere den allgemeinen Zustand und Anzeichen von Krankheit oder Infektionen betreffen. Verwalte Analgesie gemäß Abschnitt 1. administrieren Analgesie nach Bedarf, wenn eine Änderung in dem Kaninchen Verhalten beobachtet wird. (Metamizol Tropfen 50 mg / kg alle 6 h). </li></ol> 6. Chirurgie # 2 <ol><li> Fünfundfünfzig Tage nach surgery # 1, wiegen und das Kaninchen mit einer intramuskulären Injektion von Ketamin-Hydrochlorid 100 mg / ml (100 mg / kg) und Xylazinhydrochlorid 25 mg / ml (12,5 mg / kg) anästhesiert. </li><li> Mit chirurgischen Augen Schere unter einer Augenoperationsmikroskop, entfernen Sie die Tarsorrhaphie. Führen Sie drei axiale Längenmessungen an jedem Auge nach topischer Anästhesie (Oxybuprocainhydrochlorid 0,4%) unter Verwendung eines Ultraschall-A-Scanner und im Durchschnitt dann die Messungen. Tragen Sie die Sonde senkrecht zur zentralen Hornhaut. </li><li> Euthanize die Kaninchen mit intraperitoneal Phenobarbital-Natrium (200 mg / 1,5 kg Körpergewicht). </li></ol>

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Die Autoren erklären, dass sie keine finanziellen Interessen haben.

Wir stellen die ersten in vivo Untersuchung der Verhinderung von axialen Myopie in einem Kaninchenmodell verwendet Vernetzungstechnik mit Riboflavin und UVA - Bestrahlung. Obwohl verschiedene Versuchstiere in dieser Art von Studie verwendet werden kann, wählten wir Kaninchen vor allem aufgrund der Größe der Augen und der Notwendigkeit Vernetzung auf der Skleraoberfläche auszuführen. Wir fanden, dass das Kaninchen Lederhaut Belichtungs- und Vernähen der oberen und unteren Augenlider ...

Myopie ist die häufigste der Brechungsstörungen. Die Prävalenz der Kurzsichtigkeit in den USA und Europa wird berichtet , um 30% zu sein, und in den asiatischen Ländern wirkt sich dies auf 60% der Gesamtbevölkerung 1,2 auf. Myopic Progression tritt bei bis zu 50% der Kurzsichtigen in der Regel mit einer Rate von rund -0,5 Dioptrien über einen Zwei-Jahres - Intervall 3. Die Gesundheitskosten durch Kurzsichtigkeit auferlegt sind beträchtlich, einschließlich der Kosten für Brillen, Kontaktlinsen und der refraktiven Chirurgie und der erhöhten Gesundheitsrisiken des Glaukoms bezogenen Kosten, Katarakt, Netzhautablösung und Sehstörungen 4-6. In Tierstudien der Kurzsichtigkeit wird Anblick Reduktion von Augenlid Vernähen 7-10, Platzierung eines Okkluders in einem kurzen Abstand vom Auge und Keratographie 11 induziert. Doch für künstliche Kurzsichtigkeit in diesen Studien zu kommen, muss der Okklusion Prozess, da keine Sicht Deprivation Experimente auf sehr jungen Tieren, zu carried heraus wachsene Exemplare haben sich bewährt. Eine der wichtigen Funktionen von schwerer Myopie ist eine krankhafte Veränderung der Sklera mit progressiver Verdünnung der Sklera, wahrscheinlich aufgrund einer gestörten Rückkopplungsmechanismus von emmetropization nach visueller deprivation 12 oder aufgrund eines Stoffwechselstörung der Sklera, wie in Ehlers Danlos - Syndrom 13. Letztlich führen beide Mechanismen zur Dehnung und Ausdünnung der Lederhaut, Netzhaut und Aderhaut aufgrund von strukturellen Anomalien des kurzsichtigen Lederhaut wie eine verringerte Kollagenfaserdurchmesser 14,15 und Störungen in Fibrillogenese 16. Mehrere Studien haben gezeigt , dass eine beeinträchtigte Kollagenvernetzung ein wichtiger Faktor in der Schwächungsprozess des myopischen Sklera 17-18 ist. Wollensak et al. 19-21 induzierten Kollagenvernetzung durch den Photosensibilisator Anwendung Riboflavin und ultraviolett-A (UVA) Bestrahlung (370 nm)und stellten eine signifikante, 157% Erhöhung der Steifigkeit von Schwein und Mensch Sklera in vitro 19 und eine 465% ige Steigerung in Kaninchen Sklerarigidität in vivo (Young-Modul) 20. Crosslinking hatte auch eine langfristige Wirkung auf Kaninchen Sklera in vivo: Steifigkeit von 320,4% erhöht nach 3 Tagen, 277,6% nach 4 Monaten und 502% nach 8 Monaten (Young-Modul) 22. Therapeutische Versuche kurzsichtig Progression zu verhaften wurden 23-26 veröffentlicht , aber der Erfolg dieser Methoden ist umstritten. Keine effiziente Mittel zur Verhinderung von progressiver Myopie wurde bisher gefunden. Die Ätiologie der Kurzsichtigkeit ist nach wie vor umstritten, und seine Behandlung stellt eine Herausforderung dar. Auf der Grundlage dieser Ergebnisse wird angenommen, dass skleralen Vernetzung als Mittel zur Sklera-basierten Behandlung von myopischen Progression dienen kann. Das Ziel dieser Studie ist es, die scleral Kollagen crosslinki zu untersuchenng Wirkung auf die Entwicklung der Achsenmyopie durch Sehachse Okklusion induziert.

<table><tbody><tr><td>2-0 geflochtene Seidennähte ohne Nadeln&nbsp;</td><td>ETHICON</td><td>W193</td><td></td></tr><tr><td>4-0 geflochtene Seide elfenbeinfarben&nbsp;</td><td>ETHICON</td><td>W816</td><td></td></tr><tr><td>0,1 % dextranfreies Riboflavin-5-phosphat 1 mg:1 ml</td><td>Konzept für Pharmacy Ltd</td><td>D2-5025</td><td></td></tr><tr><td>UV A (370 nm) Lichtquelle&nbsp;</td><td>O/E LAND Inc</td><td>NCSU033B</td><td></td></tr><tr><td>Abgeschrägte Glasfaser nach Maß&nbsp;</td><td>Prizmatix Ltd</td><td></td><td></td></tr><tr><td>26 G Tränenkanüle&nbsp;</td><td>Beaver-visitec International Ltd.&nbsp;</td><td></td><td></td>REF581276</tr><tr><td>25 G konischer Hydrodelineator [Blumenthal]&nbsp;</td><td>Beaver-visitec International Ltd.&nbsp;</td><td></td><td></td>REF585107</tr><tr><td>13 Tage alten Kaninchen</td><td>Harlan&nbsp;</td><td>1NZWR40</td><td></td></tr><tr><td>Ultraschall-Biometer</td><td>Allergan-Humphrey</td><td>820-519</td><td></td></tr><tr><td>Hautmarker</td><td>Devon</td><td>4237101664X</td><td></td></tr></tbody></table>

sklerale vernetzungs mit riboflavin und uv-a-strahlung-für prävention von axial myopie in einem kaninchenmodell

Scleral Cross-linking Using Riboflavin and Ultraviolet-A Radiation for Prevention of Axial Myopia in a Rabbit Model

Kurzsichtige Menschen, vor allem diejenigen mit starker Kurzsichtigkeit, sind bei höheren als normalen Risiko von Katarakt, Glaukom, Netzhautablösung und chorioretinale Anomalien. Darüber hinaus ist pathologischen Myopie eine häufige Ursache für irreversible Sehbehinderung und Blindheit 1-3. Unsere Studie zeigt die Wirkung der skleralen Vernetzungs unter Verwendung von Riboflavin und Ultraviolett-A-Strahlung auf die Entwicklung von Achsenmyopie in einem Kaninchenmodell. Die axiale Länge des Augapfels wurde von A-Scan Ultraschall in weißen Neuseeland-Kaninchen gemessen im Alter von 13 Tage (männlich und weiblich). Das Auge unterzog sich dann um 360 ° konjunktivaler Peritomie mit scleral Vernetzung, gefolgt von Tarsorrhaphie. Axial Dehnung wurde in 13 Tage alte Neuseeland-Kaninchen induziert durch ihr rechtes Auge Augenlider Vernähen (Tarsorrhaphie). Die Augen wurden in Quadranten unterteilt, und jeder Quadrant hatte zwei skleralen Bestrahlungszonen, die jeweils mit einer Fläche von 0,2 cm² und einem Radius von 4 mm. Die Vernetzung wurde durch Eintropfen von 0,1% durchgeführtDextran freien Riboflavin-5-phosphat auf die Bestrahlungszonen 20 sec vor Ultraviolett-A-Bestrahlung und alle 20 sec bei 200 sec-Bestrahlungszeit. UVA-Strahlung (370 nm) wurde senkrecht zur Sklera bei 57 mW / cm² (Gesamt UVA-Licht-Dosis, 57 J / cm²) aufgetragen. Tarsorrhaphies wurden am Tag 55 entfernt, durch wiederholte axiale Längenmessungen verfolgt. Diese Studie zeigt, dass skleralen Vernetzung mit Riboflavin und Ultraviolett-A-Strahlung wirksam Okklusion induzierten axialen Dehnung in einem Kaninchenmodell verhindert.

Figuren 1 und 2 graphisch die axiale Längenmessungen von zwei Gruppen zu demonstrieren. Gruppe 1 Kaninchen unterzog skleralen Vernetzungs- und Tarsorrhaphie auf das rechte Auge , während das linke Auge nicht auf (Abbildung 1) betrieben wurde. Gruppe 2 Kaninchen unterzog sich nur Peritomie und Tarsorrhaphie auf dem rechten Auge , während das linke Auge nicht auf (Abbildung 2) betrieben wurde. <p class="jove_content" f...

Wir zeigen die Wirkung von scleral Vernetzung mit Riboflavin und UVA auf einer axialen Verlängerung Kaninchenaugen. Axial Dehnung wurde in 13 Tage alte Neuseeland-Kaninchen (männlich und weiblich), induziert durch ihr rechtes Auge Augenlider Vernähen (Tarsorrhaphie).

Sklerale Vernetzungs Mit Riboflavin und UV-A-Strahlung-für Prävention von Axial Myopie in einem Kaninchenmodell

Myopic individuals, especially those with severe myopia, are at higher-than-normal risk of cataract, glaucoma, retinal detachment and chorioretinal ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens besteht darin, die Wirkungen einer skleralen Vernetzung mithilfe von Riboflavin und UVA-Strahlung zur Induktion einer axialen Myopie in einem Kaninchenmodell zu beobachten. Diese Methode kann helfen, zentrale Fragen im Bereich der skleralen Vernetzung zu beantworten, beispielsweise, wie UVA-Strahlung gezielt auf bestimmte sklerale Bereiche gerichtet werden kann. Der Hauptvorteil dieser Technik liegt darin, dass sie UVA-Strahlung, Faseroptik und chirurgische Eingriffe nutzt, um gezielte sklerale Areale zu erreichen.Bei dem chirurgischen Eingriff wird Orly Gal-Or, eine Assistenzärztin der Augenabteilung des Rabin Medical Center, unterstützen. Vor Beginn des Eingriffs muss die Abwesenheit einer Schmerzreflexreaktion bestätigt werden; anschließend wird mit einem sterilen Wattestäbchen eine kleine Menge Augensalbe auf das nicht operierte Auge aufgetragen. Danach wird eine topische Anästhesie auf jedes Auge appliziert.Und indem die Sonde senkrecht zur zentralen Hornhaut positioniert wird, führen Sie mithilfe eines Ultraschall-A-Scanners drei Achslängenmessungen der Augen durch. Anschließend führen Sie unter einem ophthalmologischen Operationsmikro

scleral-cross-linking-using-riboflavin-ultraviolet-radiation-for

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Hornhautkollagen-Vernetzung (CXL) ist die einzige derzeit verfügbare konservative Behandlung, um das Fortschreiten des Keratokonus zu stoppen, indem die biomechanische Steifigkeit des Hornhautstromas verbessert wird. Das Ziel dieses Manuskripts ist es, die Methoden von drei verschiedenen CXL-Protokollen hervorzuheben: konventionelle CXL (C-CXL), beschleunigte CXL (A-CXL) und Iontophorese CXL (I-CXL).

Drei Verschiedene Protokolle der Hornhautkollagenvernetzung in Keratokonus: Konventionelle, beschleunigte und Iontophorese

Retinalen Pigmentepithel (RPE) Ersatzstrategien und Gen-Therapie für mehrere degenerativen Retina Bedingungen betrachtet. Für die klinische Übersetzung werden große Auge Tiermodellen erforderliche chirurgische Techniken anwendbar bei Patienten zu untersuchen. Hier präsentieren wir eine Kaninchenmodell für subretinalen Chirurgie zu RPE-Transplantation ausgerichtet, die vielseitig und kosteneffizient ist.

Eine Schritt für Schritt-Protokoll für Subretinale Chirurgie in Kaninchen

Dieses Protokoll beschreibt Techniken für die Bewertung der chemische Vernetzung von den Kaninchen Sklera mit Erzeugung der zweiten harmonischen Bildgebung und differential scanning Kalorimetrie.

Zweite harmonische Generation Signale in Kaninchen Sklera als Instrument für die Bewertung des therapeutischen Gewebes Vernetzung (TXL) für Kurzsichtigkeit

Retinalen Pigment Epithelzellen könnte als eine Zelle-Ersatz-Therapie für die fortgeschrittene Form der trockene altersbedingte Makuladegeneration dienen. Dieses Protokoll beschreibt die Erzeugung eines großen Augen Modells der geografischen Atrophie und die subretinale Transplantation von menschlichen embryonalen Stammzellen gewonnenen retinalen Pigment Epithelzellen auf dieses Modell der Krankheit.

Subretinale Transplantation von humanen embryonalen Stammzellen abgeleitet retinalen Pigment Epithelzellen zu einem großen Augen geographische Atrophie

Dieses Manuskript beschreibt der Roman Aufbau und Arbeitsweise einer photoakustischen Mikroskopie und optische Kohärenz Tomographie Dual-Modalität System für die nicht-invasive, markierungsfreie chorioretinalen Bildgebung von größeren Tieren wie Kaninchen.

Neuartige photoakustische Mikroskopie und optische Kohärenztomographie Dual-Modalität chorioretinalen Bildgebung in lebenden Kaninchen Augen

Dieses Protokoll beschreibt eine zuverlässige Methode zur Gewinnung hochwertiger Kryoschnitte ganzer Kaninchenaugen. Es beschreibt Verfahren zur Dissektion, Fixierung, Einbettung und Sektion von Kaninchenaugen, die leicht für den Einsatz in jeder Studie angepasst werden können, bei der die Immunhistochemie bei größeren Augen eingesetzt wird.

Gewinnung hochwertiger Kryoschnitte von ganzem Kaninchenauge 

In diesem Artikel werden detaillierte Anweisungen zur Durchführung einer Sehnervenquetschung in einem Kaninchenmodell unter Verwendung von Standard-ophthalmochirurgischen Techniken vorgestellt.

Ein chirurgischer Ansatz zur Quetschung des Sehnervs in einem Kaninchenmodell

Ein reproduzierbares Protokoll wird für die Herstellung, Anreicherung und Anwendung eines in situ blaulicht-kreuzvernetzbaren Gelatine-Ribollavin-Hydrogels zur Reparatur von hornhautstromaler Wunden bei Kaninchen vorgestellt, einschließlich prozeduraler Schritte für chirurgische Handhaben, partielle Tarsorrhaphie und postoperative Betreuung.

Herstellung und chirurgische Anwendung von angereicherten, fotovernetzten Gelatine-Riboflavin-Hydrogelen zur Reparatur von Hornhautwunden bei Kaninchen

Biolumineszenz-Bildgebung des Hypoxie-induzierbaren Faktors-1α Aktivität wird angewandt, um intrakranielle Tumorhypoxie Entwicklung in einer Brustkrebs Hirnmetastasen Mausmodell zu überwachen.

In-vivo-Biolumineszenz-Bildgebung von Tumorhypoxie Dynamics of Breast Cancer Hirnmetastasen in einem Mausmodell

Wir beschreiben eine integrierte Methode für die präzise, ​​stereotaktische Implantation von humanen Glioblastom multiforme Zellen in den Gehirnen von Nacktmäusen und anschließende...

Stereotaktische Intrakranielle Implantation und<em&gt; In vivo</em&gt; Bioluminescent Imaging der Tumorxenotransplantaten in einem Maus-Modell-System des Glioblastoma multiforme

Erfahren Sie die sklerale Vernetzung mit Riboflavin und UV-A-Strahlung zur Prävention der axialen Myopie im Kaninchenmodell. Diese Methode ermöglicht gezielte UVA-Behandlung spezifischer Sklerabereiche.

Sklerale Vernetzungs Mit Riboflavin und UV-A-Strahlung-für Prävention von Axial Myopie in einem Kaninchenmodell

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