Name: Bedingungen, die sozialen Raum, in Drosophila melanogaster (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-11-05T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 4 s
Description: Erfahren Sie, wie Sie das bevorzugte Sozialverhalten von Drosophila melanogaster quantifizieren. Diese Methode nutzt eine Sozialraum-Kammer zur Analyse genetischer und Umweltfaktoren im Verhalten.

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Die Autoren danken Dr. Tadmiri Venkatesh für seine Ermutigung, dieses Manuskript vorzubereiten, Dova Brenman und Selwyn Chui für ihre konstruktiven Kommentare, Elyssa Burg und Wayne Rasband für das Design des Makros in ImageJ für alle Zwischenfliegenabstände und für die nächsten Nachbarabstände. Die Autorinnen und Autoren danken auch den Gutachterinnen und Gutachtern für ihre konstruktiven Kommentare.
A.A.A., M.C.C. und A.F.S waren für das Forschungsdesign verantwortlich; S.N.J., A.A.A., M.N., Z.R. und A.J.M. führten die Experimente durch. A.A.A., M.N., A.J.M. und M.C.C und A.F.S. analysierten die Daten; A.R.M. und A.F.S. schrieben das Manuskript.
Diese Arbeit wurde durch PSC-CUNY-Forschungspreise unterstützt, gemeinsam finanziert vom Professional Staff Congress und der City University of New York an A.F.S.; durch interne Finanzierung der Western University an A.F.S.; durch ein Stipendium für die Hauptfächer Mathematik, Biologie, Chemie und Geologie für angehende Lehrer und durch ein Stipendium der Louis Stokes Alliance for Minority Participation an A.A.A.

1. Geräte und Reagenzien Erstellt In-house (siehe Liste der Materialien für Others) <ol><li> Bereiten Sie eine Drosophila kalten Narkosegerät wie zuvor beschrieben, 8. </li><li> Bereiten Sie eine Fliege Aspirator wie zuvor beschrieben 13. </li><li> Bereiten sozialen Raum Kammern und Inhaber. <ol><li> Bestellen oder Glasscheiben und Acrylabstandshalter, um die sozialen Raum Kammern erstellen. Jeder Sozialraumkammer besteht aus zwei quadratischen Glasscheiben (17,6 cm x 17,6 cm, mit einer Dicke von 0,3 cm), zwei rechtwinkligen Dreiecks Acryldistanzstücke (mit einer Höhe von 16,5 cm, einer Basis von 8,9 cm, mit einer Dicke von 0,3 cm ) und zwei rechteckige Räume (9 cm × 1,5 cm mit einer Dicke von 0,3 cm) (1A). </li><li> Montieren Sie das Glas und Acryl sozialen Raum Kammer, dass sie identisch mit der Kammer in 1B ist. Um dies zu tun, starten Sie, indem Sie eine dreieckige Abstandshalter flach auf einem Quadratglasscheibe, so dass die rechten Winkeldes dreieckigen Abstandshalter ist mit einer der Ecken der quadratischen Scheibe ausgerichtet ist. Als nächstes legen Sie die zweite dreieckige Abstands flach auf der Oberseite des quadratischen Bereich Spiegelung der ersten dreieckigen Abstandshalter. HINWEIS: Stellen Sie sicher, Handschuhe zu tragen, um nicht die Stücke mit Ölen und Gerüche von Ihren Händen zu verunreinigen. </li><li> Legen Sie zwei kleine rechteckige Abstandshalter flach auf dem Platz Bereich entlang der Seite der Scheibe, die nicht abgedeckt ist. Die Acryl-Abstandshalter auf der Oberseite des quadratischen Ebene sollte jetzt bilden eine dreieckige Arena. </li><li> Legen Sie einen zweiten quadratischen Glasscheibe auf der Oberseite der Acrylabstandshalter, so dass sie über der ursprünglichen Glasscheibe unten ausgerichtet ist. </li><li> Verwenden Sie vier Binder Clips, um die Scheiben und Abstandshalter zu sichern zusammen, um den sozialen Raum Kammer zu bilden. Platzieren eines Clips in der Nähe der Ecke, über die lange Seite von jedem der dreieckigen Abstandshalter, Sichern sie im Inneren der Glasscheiben. Auf diesen gleichen Seiten, legen Sie einen Clip in der benachbarten Ecke, gegenüber jedem der rechteckigen Abstandhalter und sichern Sie sie inSeite der Glasscheiben. </li><li> Bauen Sie ein Stativ und eine Flasche Klemme, so dass die Klemm den sozialen Raum Kammer in einer aufrechten Position zu halten, wie der soziale Raum Kammer ruht auf seinem Rand auf der Oberseite der Arbeitsfläche. </li><li> Für jede Wiederholung in dem Experiment, montieren einen sozialen Raum Kammer und unterstützen zu stehen. </li></ol></li><li> Bereiten Sie eine Kletter Assay Antwortgerät, um die Steigfähigkeit der getesteten Fliegen zu überprüfen. <ol><li> Verwenden Sie einen Gegenstromapparat, wie zuvor beschrieben, 14,15. </li></ol></li><li> Stellen Sie sicher, homogene Lichtverhältnisse, indem das Experiment auf eine Arbeitsfläche mit einer weißen Bank Abdeckung und vor einem weißen Hintergrund. </li></ol> 2. Vorbereitung die Fliegen vor dem Experiment <ol><li> Pflegen Fliegen in Flaschen mit Standard Drosophila Fliegen Essen. Halten Sie sie in einer Inkubationskabine bei 25 ° C auf einem 12 h Hell / Dunkel-Zyklus. </li><li> Ein bis zwei Tage vor der Experiment, sammeln und Sex fliegt unter kaltem Anästhesie, wie zuvor beschrieben, 8. <ol><li> Chill die kalte Narkosegerät bei -4 ° C. Platz fliegt in 50 ml Kunststoffröhrchen. Vollständig versenken die Kunststoffröhrchen, die Fliegen in Eis in einem isolierten Eiskübel, warten Sie mindestens 5 Minuten für Fliegen unbeweglich zu werden. </li><li> Legen Sie die Fliegen an der Polyethylenfolie des kalten Narkosegerät. Bei RT, verwenden Sie ein Stereomikroskop, um Männer von Frauen zu trennen. Pflegen Fliegen, in Gruppen, in Durchstechflaschen mit Standard Drosophila Fliegen Essen, nicht mehr als 40 Fliegen pro Fläschchen. </li></ol></li><li> Zwei Stunden vor Beginn des Experiments zu gewährleisten, dass die Temperatur des Raums, wo das Experiment durchgeführt werden zwischen 24-25 ° C und einer Luftfeuchtigkeit von ca. 50%. </li><li> Übertragen Sie die Fliegen in neue Phiolen haltige Speisen, und legen Sie sie für 2 Stunden auf der Arbeitsfläche, wo das Experiment durchgeführt. HINWEIS: Für diese experiments, die Fliegenstämme verwendet wurden, waren Drosophila melanogaster Stämme: Canton-Spezial oder Canton-S (CS), w 1118 Cs 10 (oder W - w 1118 Canton-S ausgekreuzt 10 Mal) waren Oregon und Samarkand entfernt alle aus unserem Labor Aktien 16; Elwood Fliegen wurden im Herbst 2011 in der Nachbarschaft von Elwood Huntington auf Long Island, New York, USA 8 gesammelt. Außer, wenn nicht anders angegeben, wurden die Ergebnisse vorgestellt erhalten mit Canton-S fliegt (in den Farben rot). </li></ol> 3. Durchführung des Experiments <ol><li> Führen Sie das Experiment von 12.00 bis 03.00 Uhr (Zeitgeber-Zeit - die Zeit in Stunden nach dem Beginn der Licht - der ZT 4 bis 7). </li><li> Bereiten Sie den sozialen Raum Kammer für den Transfer von Fliegen. <ol><li> Legen Sie einen sozialen Raum Kammer flach auf eine Arbeitsfläche, mit der Seite enthalten rechteckige Abstandshalter, die am nächsten zu Ihrem Körper. </li><li> Entfernen Sie one Clip nächst Ihren Körper und schieben Sie eine rechteckige Abstandshalter nach außen, wodurch ein Abstand von ca. 1 cm zwischen den rechteckigen Abstandhalter. </li><li> Mit Klebeband und eine Markierung, zu kennzeichnen den sozialen Raum Kammer in einer oberen Ecke mit Sex, Dehnung, und wiederholen Sie die Nummer. Achten Sie darauf, das Band nicht Teil des inneren dreieckigen Arena Fall Rechnung zu tragen. </li></ol></li><li> Übertragen Sie die Fliegen in den sozialen Raum Kammer. <ol><li> Transfer fliegt von ihrem Fläschchen, das Essen in ein neues, leeres Fläschchen. Saugen Sie fliegt von der leeren Durchstechflasche und überführen sie in der sozialen Raum Kammer. <ol><li> Atmen Sie ein, um die Fliegen in die Spitze der Saugvorrichtung zu ziehen. Setzen Sie die Spitze in die 1 cm Abstand zwischen den rechteckigen Abstandshalter der sozialen Raum Kammer und Ausatmen mit einer konsistenten Rate, um die Fliegen in den inneren dreieckigen Arena zu erzwingen. </li><li> Unmittelbar schieben Sie die rechteckige Abstandshalter wieder an seinen Platz und schloss die Basis des inneren dreieckigen Arena, und platzieren Sie den Binder Clip wieder ein. </li></ol></li&gt; </ol></li><li> Auf einem stampfenden Unterlage, die auf unterschiedlichen Bank als dort, wo die experimentelle Arbeit erfolgt befindet, halten Sie die sozialen Raum Kammer aufrecht, so dass die rechteckige Abstandshalter auf der Unterseite. Pfund dreimal alle Fliegen zu gewährleisten, hat an der Unterseite der Arena gefallen. HINWEIS: Aufgrund der Acryldistanz ragte aus dem kleinsten Kammergröße (1D), schlagen die Ellbogen auf die Arbeitsfläche und gleichzeitig einen sicheren Halt am Gerät, um sicherzustellen, die Fliegen wurden auf den Boden gefallen ist. </li><li> Starten Sie einen Timer. </li><li> Setzen Sie den sozialen Raum Kammer auf der Arbeitsfläche und verwenden Sie das Stativ und Kolben Klammer, um sie aufrecht zu halten. Legen Sie ein Lineal oder einen Aufkleber der bekannten Länge flach gegen den sozialen Raum Kammer, aber nicht zur Deckung etwaiger Teil des inneren dreieckigen Arena. <ol><li> Für horizontal Experimenten, stellen Sie den sozialen Raum Kammer in dem Stützgestell; stattdessen legen den sozialen Raum Kammer flach auf die Arbeitsfläche. </li></ol&gt; </li><li> Wenn die Fliegen niedergelassen haben, in der Regel nach etwa 30 Minuten, nehmen Sie ein Bild von der sozialen Raum Kammer. Stellen Sie sicher, dass der Rahmen enthält die gesamte innere dreieckige Arena, das Lineal, und das Etikett. </li><li> Wiederhole das Experiment für jeden Genotyp und Zustand (idealerweise 3 internen Wiederholungen und 3 unabhängige Wiederholungen). </li></ol> 4. Analyse der Sozialraumdaten <ol><li> Importieren Sie die folgenden Makros in ImageJ 17 <ol><li> ImageJ finden Sie hier: http://rsbweb.nih.gov/ij/. </li><li> Sie können einen Befehl &#39;Messen Sie Entfernungen &quot;im Plugins-Menü zu erstellen, indem Sie die Makros unter in einer Datei mit dem Namen&#39; Measure_Distances.txt &#39;im Ordner ImageJ / plugins, in der Makro-Unterordner, und mit der Hilfe&gt; Update Menüs Befehl.&quot; </li><li> Kopieren Sie in einer TXT-Datei, die Makros, die in Zusatzdaten zur Verfügung gestellt werden und wurden ursprünglich in 3 veröffentlicht. </li></ol></li><li> Laden Sie die Bilder auf einen Computer, und öffnen Sie eine picture mit ImageJ. <ol><li> Eröffnen Sie ein Maßstab durch eine Linie von der 0 cm bis 1 cm Markierungen auf dem Lineal in das Bild, und auf der Registerkarte Analysieren, wählen Sie die Set-Skala Funktion, um eine Skala von 1 cm für den Abstand eingestellt (gleiche Ansatz für den Aufkleber von bekannt Länge). Wählen Sie die globale Option, bevor die Waage auf dem Bild. </li><li> Schneiden Sie das Foto mit der Crop-Funktion unter der Registerkarte Bild, so dass es alle der Fliegen, während das Entfernen so viel von dem Rest des Bildes wie möglich. </li><li> Machen Sie das Bild schwarz und weiß, indem Sie 8-Bit aus dem Optionstyp auf der Registerkarte Bild. </li><li> Entfernen Sie alle Hintergrundgeräusche aus dem Bild, indem Sie auf der Schwelle Funktion unter der Option Anpassen der Registerkarte Bild. Ziehen Sie die Regler zu erhöhen oder zu entfernen Sie den Kontrast, so dass der Körper jedes fly deutlich ohne weitere Markierungen im Bild zu sehen ist. Wenn es Markierungen, die nicht fliegen, fangen sie mit dem Rechteckwerkzeug und löschen. </li><li> Stellen Sie dieMessungen mit Hilfe der Messungen Tool Set unter der Registerkarte Analysieren. Wählen Bereich, Schwerpunkt, Centroid und Anzeigebezeichnung. Als nächstes wählen Sie die Analyze Partikel verfügen auf der Registerkarte Analysieren, um eine nummerierte Liste aller schwarzen Flecken, die Fliegen zu erstellen. <ol><li> Bei Verwendung Analysieren Teilchen; Set-Größe von 0,01 bis 0,1 (Wählen Sie keine Pixeleinheit); Rundheit von 0,00 bis 1,00; Show Konturen; Ergebnisse darstellen, und fügen Sie den Manager. </li><li> Stellen Sie sicher, dass jeder schwarze Punkt (jedes Teilchen) ist eine genaue Darstellung der Fliegen, die im Originalbild sind, durch den Vergleich der nummerierten Liste zu dem Originalbild. HINWEIS: Wenn einige Fliegen, die sehr nahe beieinander liegen als ein Teilchen gezählt, manuell zeichnen eine weiße Linie, die zwei Fliegen auf dem binären Bild zu trennen. </li></ol></li><li> Während die Liste ausgewählt ist, verwenden Sie den Nearest Neighbor - Liste Entfernungen Makro im Rahmen des zweiten Makros Optionen auf der Registerkarte Plugins, um eine neue Liste der Entfernungen enthält erstellen, in cm, von EAch zu fliegen, um ihre nächsten Nachbarn. </li></ol></li><li> Kopieren Sie die nächsten Nachbarn Entfernungen von ImageJ und fügen Sie ihn in eine Säule mit einem Tabellenkalkulationsprogramm. <ol><li> Kompilieren Sie alle Daten von jeder Wiederholung auf denselben Tabellenkalkulation und die Organisation von Genotyp und Zustand. </li></ol></li><li> Führen Sie die Datenanalyse unter Verwendung von Statistik-Software. In diesem Experiment Graph Pad Prism (Version 6 für MacOSX, GraphPad Software, San Diego Kalifornien USA, www.graphpad.com) wurde verwendet, um one-way ANOVA und Kruskal-Wallis-Tests, Tukey und Dunnet Post-Hoc-Tests durchzuführen. </li><li> Die Verteilung der Abstände folgt eine nichtparametrische Verteilung 1, und Daten werden als Box und Tukey-Whisker (Ausreißer zu eliminieren) vertreten. </li></ol> 5. Klettern Assay (Führungsverhalten) <ol><li> Verwenden Sie einen Kletter Test als Kontrolle, um Testfliegen Steigfähigkeit 14,15,18. <ol><li> Verwenden Sie die Gegenstromapparat, so dass drei Versuche cparallel ein ausgeführt werden. </li></ol></li><li> Transfer 50 bis 100 naiv Fliegen (Fliegen, die vorher nicht getestet wurden) in drei verschiedenen Teströhrchen, und rasten sie in der 1., 3. und letzten Schlitze an der Unterseite des Gegenstromapparat, mit frischen leeren Ampullen in den gegenüberliegenden Stellen. </li><li> Legen Sie frische, leere Durchstechflaschen in den leeren Slots an der Unterseite des Geräts. </li><li> Tippen Sie unten das Gerät drei Mal, so dass alle Fliegen sind an der Unterseite eines jeden Rohres, um das Experiment zu initiieren. </li><li> Starten Sie den Timer für 15 Sekunden (Zeit, die ausreichend für ~ 100% der 3-7 Tage alten Canton-S, um die Top-Ampulle zu erreichen - siehe Abbildung 3F). </li><li> Schieben Sie den oberen Teil des Gegenstromgerät, um die Randflaschen um einen Schlitz zu verdrängen. </li><li> Sammeln Sie fliegt durch Tippen auf das Gerät nach unten, bis alle Fliegen in den unteren Durchstechflaschen zu bringen. <ol><li> 1 und 2. Rohre (oder 3. und 4., 5. </sup&gt; und 6.) entsprechen jeweils den Fliegen, die nicht erreichte nach oben und die Fliegen, die die Top-Ampulle erreicht. </li></ol></li><li> Berechnen Sie die Performance Index (PI). <ol><li> Zählen Sie die Anzahl der Fliegen in jedem Fläschchen. </li><li> Der PI ist der Prozentsatz von Fliegen in der Lage, auf dem oberen Rohr zu klettern. </li><li> Die mittels der PI einer Normalverteilung folgen 1, und Daten werden als Spalten Graphen der Mittelwert plus oder minus Standardfehler auf den Mittelwert (SEM) dargestellt. HINWEIS: Alternativ kann die PI als der Prozentsatz von Fliegen in der Lage, den oberen Teil des unteren Ampulle (für ältere Linie erreichen, berechnet werden kann, ist 5 sec die Zeit, die ausreicht, um einen Unterschied in der Steigfähigkeit zwischen infizierten und nicht quantifizieren infiziert 12 Tage alt Canton-S aus einem Standbild quantifiziert: siehe Ergebnisse). Andere haben verschiedene Maßnahmen der Leistung in Schreck-induzierten negativen Geotaxis, die auch angemessen zu quantifizieren Steigfähigkeit von 19 bis 22 verwendet. </li></ol></li></ol>

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</ol>

Die Autoren erklären, dass sie keine konkurrierenden finanziellen Interessen haben.

In diesem Protokoll wurde ein detailliertes Verfahren für die Quantifizierung von sozialen Raum beschrieben. Einige wichtige Schritte, um das Experiment zu gewährleisten erfolgreich sind: 1) immer Schutzhandschuhe verwenden bei der Reinigung und die Einrichtung der Vorrichtung, die eigenen Öle und Düfte aus der Innenkammer der Vorrichtung zu halten, 2) sicherzustellen, Fliegen werden mindestens einen Tag gesammelt, bevor das Experiment damit die möglichen Auswirkungen von kaltem Narkose zu verringern, 3) 2 h vor dem Exp...

Soziale Interaktionen sind entscheidend für die richtige Entwicklung und Gesundheit von Personen innerhalb einer Gruppe als Ganzes, und kann auf zahlreiche Arten von Menschen (Homo sapiens) zu einfacheren Organismen wie Fruchtfliegen (Drosophila melanogaster) 5,6 beobachtet werden. Akustische, visuelle, Geruchs-, Tast- oder gustation: Eine individuelle Fruchtfliege oder Mensch haben gemeinsame Mittel zur sensorischen Informationen, die während dieser Interaktionen, sei es zu verarbeiten. Wir und andere Hypothese ist, dass es ein möglicherweise freigegebenen neurocircuitry Basiswert Verhaltensreaktionen auf soziale Interaktionen, und dass die neuronalen Zellen und Genen beteiligt sein könnten evolutionär konservierten 7. Sobald die erste Wechselwirkung stattgefunden hat, wird die soziale Raum zwischen den interagierenden Individuen entweder erhöhen (soziale Vermeidung 8) oder verringern (Gruppenbildung / Aggregation 5). Komplizierter Wechselwirkungen, wie Aggression oder Balz, kann dann. <p class = &quot;jove_content&quot;&gt; Weder anspruchsvolle Werkzeuge und Methoden, noch große Investitionen in Zeit und Training sind erforderlich, um diese einfache Form der Sozialverhalten zu quantifizieren, so dass es ein leistungsstarkes analytisches Werkzeug. Hier erläutern wir eine einfache Protokoll, das inter-fly Entfernung oder sozialen Raum quantifiziert, um die soziale Interaktion in stabilen Gruppen von Drosophila melanogaster zu bewerten, wie in den folgenden Studien 1-4,9 verwendet. Sozialraum bezieht sich auf ein Maß für die Entfernung zwischen einer Fliege und seine nächsten Nachbarn 10. Sozialen Raum ist konsistent für eine bestimmte Population von D. melanogaster als Versuchsbedingungen werden beibehalten (durchschnittlich etwa in 1-2 Körperlängen) und variiert in Bezug auf die soziale Erfahrung der Fliegen und erhöht, wenn das Individuum isoliert 1 gehalten. Proper Vision ist es notwendig, normale soziale Distanz zu halten, aber nicht klassische Riechstoffe bzw. CVA Wahrnehmung 1. Maß der sozialen Raum kann somitals diagnostisches Werkzeug, um soziale Interaktionen zu analysieren und zu quantifizieren, das soziale Verhalten in D. verwendet melanogaster 1. Wir beschreiben hier in Einzelheiten, wie Sie diese Quantifizierung durchzuführen, und in welchem ​​Umfang gemeinsame experimentelle Variablen beeinflussen dieses Verhalten. Wir zeigen, dass die Ausrichtung der Kammer, in der der Test durchgeführt wird, sowie die Anzahl der Fliegen - in einem Ausmaß - zu tun beeinflusst sozialen Raum. Es wurde bereits gezeigt, dass die Kammergeometrie wirkt sich spontan explorativen Bewegung Fliegen 11,12, und dieses Phänomen kann letztendlich auswirken, wo sie sich niederlassen wollen. Doch solange die Flugdichte (fly / cm 2) und Kammer Orientierung gleich gehalten wird, bleibt auch der soziale Raum der Fliegen konstant. Die Robustheit dieses Tests wird durch die Tatsache, dass unabhängige Laboratorien mit unterschiedlichen Kammergrößen, die Form und Orientierung kann das Ergebnis durch Mutanten des wh angezeigt replizieren illustriertite-Gen (betrifft Auge Pigmentierung), was einer Steigerung sozialer Raum ist (vertikale Dreieck oder Horizontalkreis in 1, horizontal Platz mit Luftstrom in 3). Unsere Ergebnisse zeigen auch, dass die Aufrechterhaltung der Zeitpunkt, zu dem der soziale Raum-Experiment durchgeführt wird ist entscheidend für die Konsistenz der Ergebnisse, wie wir zeigen, dass Männer, nicht aber Frauen, weiter auseinander in den Abendstunden gibt. Die Unterschiede zwischen Tages- und Abendstunden zu sehen sind jedoch nicht aufgrund von Aktivitätsunterschiede der Fliegen, und wir Argumente angibt, dass die Aktivitätsniveaus nicht mit sozialen Raum korreliert zu diskutieren. Schließlich gibt es genetischen Grundlagen für die Bestimmung des sozialen Raums, wie sie in der weißen Mutante angegebenen bereits beschriebenen 1,3, und die Unterschiede zwischen verschiedenen Inzucht und wild gefangenen Stämme von Fliegen, die wir hier präsentieren. Daher macht dieser Test ein ausgezeichnetes Werkzeug foder die Untersuchung der Auswirkungen von genetischen als auch Umweltfaktoren.

<table><tbody><tr><td>Stereo-Zoom-Mikroskop&nbsp;</td><td>Nikon&nbsp; &nbsp;</td><td>SMZ-645</td><td>Jedes andere Standard-Zielfernrohr für die Handhabung von Fliegen würde funktionieren</td></tr><tr><td>Kleine Pinsel&nbsp;</td><td></td><td></td><td>zum Schieben von Fliegen</td></tr><tr><td>Jazz-mix</td><td>Fisher</td><td>33545</td><td>jedes andere Standard-Drosophila-Futter würde funktionieren</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mini-Wecker Timer/Stoppuhr</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>&nbsp; Sharpie-Stifte</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Klebeband</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mittelgroße Heftklammern</td><td>Klammern</td><td>, um die Kammern zusammenzuhalten: 1-1/4" (32 mm) mittlere Clips mit 5/8" Kapazität</td>, kleine Stützständer, Carolina&nbsp;<td></td></tr><tr><td></td><td></td><td>707161</td><td>, um die Kammern in einer vertikalen Ausrichtung zu halten</td></tr><tr><td>Bürettenklemmen</td><td>Carolina</td><td>707362</td><td></td></tr><tr><td>Digitalkamera</td><td>Nikon</td><td>&nbsp; Coolpix S8000&nbsp;</td><td>So nehmen Sie die Standbilder auf</td></tr><tr><td>Kleines Lineal</td><td></td><td></td>, <td>um das Bild</td></tr> skalieren zu können <tr><td>Trifold-Brett und weiße Bankabdeckung</td><td></td><td></td><td>, um einen weißen Hintergrund und ein homogenes Licht zu schaffen.</td></tr><tr><td>Pounding Pad</td><td></td><td></td>: <td>Jedes Mauspad funktioniert.</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Prism 6</td><td>GraphPad Software Inc.</td><td>Prism 6 für Mac OS X</td><td>Jede statistische Analysesoftware mit t-Test, Einweg und zwei ANOVA funktioniert</td></tr></tbody></table>

bedingungen, die sozialen raum, in<em&gt; drosophila melanogaster</em

Conditions Affecting Social Space in Drosophila melanogaster

Die hier beschriebene sozialen Raum Test kann verwendet werden, um soziale Interaktionen von Drosophila melanogaste r quantifizieren - oder andere kleine Insekten - auf einfache Weise. Wie wir früher gezeigt 1, in einem zweidimensionalen Raum, wir zuerst zwingen die entfernt, um eine feste Gruppe zu bilden, anschließend so ihre bevorzugte Abstand voneinander einnehmen. Nachdem die Fliegen angesiedelt haben, messen wir den Abstand zum nächsten Nachbarn (oder sozialer Raum), die Verarbeitung ein statisches Bild mit kostenlosen Online-Software (ImageJ). Die Analyse der Abstand zum nächsten Nachbarn ermöglicht es den Forschern, die Auswirkungen der genetischen und Umweltfaktoren auf die soziale Interaktion zu bestimmen, bei der Kontrolle für potenzielle Störfaktoren. Diverse Faktoren wie Steigfähigkeit, Tageszeit, Geschlecht und Anzahl der Fliegen, können soziale Abstand von Fliegen zu ändern. Wir schlagen daher vor, eine Reihe von experimentellen Kontrollen, diese verwirrende Auswirkungen zu mildern. Dieser Test kannfür wenigstens zwei Zwecke verwendet werden. Erstens können die Forscher bestimmen, wie ihre Lieblingsklimaverschiebung (wie Isolation, Temperatur, Spannung oder Toxine) werden soziale Abstand 1,2 auswirken. Zweitens können die Forscher die genetischen und neuronalen Grundlagen von dieser Grundform des Sozialverhaltens 1,3 zu sezieren. Insbesondere haben wir es als ein diagnostisches Werkzeug, um die Rolle von orthologen Genen vermutlich im Sozialverhalten in anderen Organismen, wie zum Beispiel Kandidatengene für Autismus bei Menschen 4 einbezogen werden studieren.

Der soziale Raum Kammer kann als Werkzeug verwendet, um das Sozialverhalten von Drosophila melanogaster zu quantifizieren. Acrylabstandshaltern und Glasscheiben zusammengeklemmt, um eine innere Dreiecks Arena, die einen zweidimensionalen Bereich, in dem Fliegen können stabile Gruppen ohne die Anwesenheit von vielen potentiell verwirrende Cues Formular bilden. Beim Fliegen auf die vertikale Arena übertragen, werden sie von herunter abgegriffen erschreckt, und sie durch eine Escape-Verhalten zu reagieren: negativ...

Die Wirkung von Genen und Umwelt auf den sozialen Raum von Drosophila melanogaster kann durch ein leistungsfähiges, aber einfaches analytisches Paradigma quantifiziert werden. Wir zeigen hier verschiedene Faktoren, die diesen sozialen Raum beeinflussen können und daher bei der Gestaltung von Experimenten in diesem Paradigma berücksichtigt werden müssen.

Bedingungen, die sozialen Raum, in<em&gt; Drosophila melanogaster</em

The social space assay described here can be used to quantify social interactions of Drosophila melanogaster &#8212; or other small insects &#8212; in a ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens besteht darin, einen Aspekt des sozialen Verhaltens von Fliegen zu quantifizieren, nämlich ihren bevorzugten sozialen Abstand. Dies wird erreicht, indem zunächst die Kammer für den sozialen Raum zusammengestellt wird. Gleichzeitig werden eine Gruppe von Fliegen an den umweltkontrollierten Testraum gewöhnt, indem sie in ein neues Gefäß dort transferiert werden.Nach zwei Stunden wird die Fliegengruppe in die Sozialraumkammer überführt. Sie werden abgeklopft und dann mit einem Klemmständer vertikal positioniert. Sobald sich die Fliegen beruhigt haben, werden ihre Positionen dokumentiert und die Abstände zwischen den Fliegen anhand der fotografierten Aufnahme durch eine Software berechnet.Letztlich quantifiziert der Sozialraum-Test eine Form sozialen Verhaltens, die zur Untersuchung einflussreicher Umweltfaktoren und der Neurogenetik dieses Verhaltens herangezogen werden kann. Der Hauptvorteil dieser Technik zur Quantifizierung sozialen Verhaltens im Vergleich zu bestehenden Methoden wie der computergestützten Videobeobachtung liegt darin, dass sie keine anspruchsvollen Geräte oder Verfahren erfordert und auch keine hohen zeitlichen Aufwendungen

conditions-affecting-social-space-in-drosophila-melanogaster

Research

Forschung

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowissenschaften

Drosophila melanogaster ist eine genetisch und auf der Verhaltensebene praktische Zwecke geeigneten Modells, das verwendet wurde, um die molekularen und zellulären Grundlagen von vielen wichtigen biologischen Prozessen seit über einem Jahrhundert ein zu verstehen. Drosophila wurde auch genutzt, um Einblicke in die genetischen Grundlagen der Fliege Verhalten zu gewinnen.

Methoden zum Test Drosophila Verhalten

Drosophila melanogaster sind nützlich bei der Untersuchung genetischer oder umwelt Manipulationen, die Verhaltensweisen wie spontane Bewegungsaktivität beeinflussen. Hier beschreiben wir ein Protokoll, das Monitore mit Infrarot-Strahlen und Datenanalyse-Software, um die spontane Bewegungsaktivität zu quantifizieren nutzt.

Bestimmung der spontanen lokomotorischen Aktivität in<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Hier präsentieren wir ein Protokoll zur Quantifizierung der Vermeidung von gestressten Personen. Dieses Paradigma ist leistungsfähig und dennoch benutzerfreundlich und kann verwendet werden, um den Einfluss von Genen und Umwelt auf eine Art von sozialer Interaktion bei Drosophila melanogaster zu bewerten.

Einfache Assay zur Quantifizierung von Sozialvermeidung in Drosophila melanogaster

Während Fruchtfliege Kämpfe, die Verhaltensmuster beobachtet, kämpfen Dynamik, und die damit verbundenen Lern- und Gedächtnis werden von experimentellen Bedingungen beeinflusst. Die hier vorgestellte Protokoll beschreibt ein neues Verfahren, das vollständig eliminiert Handhabung von Fliegen während der Experimente. Dies verbessert Kampf Dynamik und ermöglicht die Bildung von starken "Verlierer" Effekte.

Ein neuer Ansatz, die Handhabung für ein Studium Aggression Eliminiert und die &quot;Loser&quot; Effect in<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Verfahren zur Aufzucht von Drosophila melanogaster unter axenic und gnotobiotischer Bedingungen vorgestellt. Fly Embryonen werden in Natriumhypochlorit, aseptisch in sterile Ernährung dechorionated und aufgezogen in geschlossenen Behältern. Impfen Ernährung und Embryonen mit Bakterien führt zu gnotobiotischer Verbänden und bakterielle Präsenz wird durch Plattierung Ganzkörper- Drosophila Homogenate bestätigt.

Aufzucht der Fruit Fly<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Unter Axenic und gnotobiotische Bedingungen

Wir zeigen einen Assay, um die ökologischen und genetischen Cues zu analysieren, die das Paarungsverhalten in der Fruchtfliege beeinflussen Drosophila melanogaster .

Eine Methode, um die Wirkung von Umwelteinflüssen auf das Paarungsverhalten zu untersuchen<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Endokrine Disruptorchemikalien (EDCs) stellen ein ernstes Problem für Organismen und natürliche Umgebungen dar. Drosophila melanogaster stellt ein ideales Modell dar, um EDC-Effekte in vivo zu untersuchen. Hier stellen wir Methoden zur Untersuchung der endokrineStörung in Drosophila vor, die EDC-Effekte auf Fruchtbarkeit, Fruchtbarkeit, Entwicklungszeitpunkt und Lebensdauer der Fliege adressieren.

Methoden zur Prüfung der endokkrinen Disruption bei Drosophila melanogaster

Der Flypub-Assay misst das Verhalten, das die Fruchtfliege Drosophila melanogaster unter dem Einfluss von Ethanol zeigt. Der Assay kann leicht von Experimentatoren auf allen Ebenen gemeistert und auf verschiedene verdampfte Reize angewendet werden, was Substanzmissbrauch und Suchtstudien erleichtert.

Flypub zur Untersuchung von Ethanol induzierte Verhaltenshemmung und Sensibilisierung

Die Autismus-Spektrum-Störung (ASS) ist mit einer Beeinträchtigung des sozialen und kommunikativen Verhaltens und dem Auftreten von sich wiederholendem Verhalten verbunden. Um die Wechselbeziehung zwischen ASD-Genen und Verhaltensdefiziten im Drosophila-Modell zu untersuchen, werden in dieser Arbeit fünf Verhaltensparadigmen zur Untersuchung von sozialem Abstand, Aggression, Balz, Pflege und Gewöhnungsverhalten beschrieben.

Paradigmen für die Verhaltensbewertung im Drosophila-Modell der Autismus-Spektrum-Störung

Das Protokoll stellt eine kostengünstige Methode mit hohem Durchsatz zur Beurteilung der Neurotoxizität in der Fruchtfliege durch die Quantifizierung der Bewegungsstörung als Alternative zu herkömmlichen Säugetiermodellen dar. Ziel ist es, die neurotoxischen Wirkungen von pharmazeutischen Wirkstoffen, Umwelteinflüssen oder genetischen Veränderungen anhand eines sensitiven, reproduzierbaren und ethisch günstigen Modells zu bewerten.

Verhaltensanalyse der lokomotorischen Dysfunktion bei Drosophila melanogaster als Aussage für Neurotoxizität

Erfahren Sie, wie Sie das bevorzugte Sozialverhalten von Drosophila melanogaster quantifizieren. Diese Methode nutzt eine Sozialraum-Kammer zur Analyse genetischer und Umweltfaktoren im Verhalten.

Bedingungen, die sozialen Raum, in

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