A Quick Phänotypische Neurologische Scoring System zur Bewertung der Krankheitsprogression im SOD1 G93A-Mausmodell der ALS

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, die neuromuskuläre Funktion von SOD one G 93 a-Mäusen durch tägliche Beurteilung ihrer Funktion der hinteren Gliedmaßen unter Verwendung eines einfachen phänotypischen neurologischen Scoring-Systems schnell und zuverlässig zu bewerten. Dies wird erreicht, indem man zuerst die Hinterbeine der Mäuse beobachtet, während man sie am Schwanz aufhängt. Der zweite Schritt besteht darin, die Mäuse laufen zu lassen und dabei ihren Gang zu beobachten.

Als nächstes werden die Mäuse auf die Seite gelegt, um das Vorhandensein oder Fehlen des Schreibreflexes zu testen. Der letzte Schritt besteht darin, die Datenanalyse durchzuführen, indem neurologische Score-Daten von Mauskohorten in ein ordinales logistisches Regressionsmodell eingepasst werden. Letztendlich wird unser phänotypisches neurologisches Scoring-System verwendet, um das Fortschreiten der Erkrankung in der SOD one G 93, einem Mausmodell eines LS, zu beurteilen, um die Wirksamkeit therapeutischer Interventionen zu beurteilen.

Der Hauptvorteil dieser Methode gegenüber allen anderen bestehenden Techniken besteht darin, dass sie schnell, einfach, zuverlässig und für die Mäuse nur minimal belastend ist. Die Implikationen dieser Methode erstrecken sich auf die Therapie der neotropen Lateralsklerose oder einer LS, da sie eine schnelle Beurteilung therapeutischer Interventionen im gängigsten Mausmodell der Erkrankung ermöglicht. Die visuelle Demonstration ist von entscheidender Bedeutung, da die neurologische Bewertungsmethode schwer zu erlernen ist, da die neurologischen Unterschiede subtil sein können.

Beginnen Sie mit der Unterbringung von männlichen SOD-Mäusen mit einer G 93 A-Maus, so dass es eine Maus pro Käfig gibt, weibliche SOD-Mäuse mit einer G 93 A-Maus bis zu zwei pro Käfig. Bieten Sie den Mäusen eine Bereicherung für die Umwelt in Form von Plastikhütten. Versorgen Sie die Mäuse bei Lido record mit Futter und Wasser.

Körpergewichte für alle Mäuse und Studien gleichzeitig. Das tägliche Körpergewicht ist ein empfindlicher Indikator für das Fortschreiten der Krankheit und für das Unwohlsein, das sich aus einer chronischen medikamentösen Behandlung ergeben kann. Beurteilen Sie während der Studie täglich den neurologischen Score jeder Maus durch ein Schema von drei Tests, die nacheinander durchgeführt werden.

Beobachten Sie genau, wie es im ersten Test sehr schwierig ist, die Ergebnisse an phänotypischen Übergangspunkten abzugrenzen. Halten Sie die Maus beim Test der Schwanzaufhängung etwa 1,5 Zoll von der Basis des Schwanzes entfernt über die Drahtoberseite des Heimkäfigs. Beobachten Sie die Funktion der Hintergliedmaßen für einen Zeitraum von ein bis zwei Sekunden und wiederholen Sie den Test dreimal.

Für den Gehtest. Platzieren Sie die Maus auf einer sauberen Oberfläche, die eine gewisse Traktion bietet und einen Gehweg von mindestens 25 Zentimetern hat. Lassen Sie die Maus bis zu 75 Zentimeter laufen, während Sie ihren ga beobachten.

Legen Sie die Maus für den Schreibreflextest auf die Seite und messen Sie mit einer Stoppuhr die Zeit, die benötigt wird, um sich selbst ohne Hilfe von beiden Seiten zu schreiben. Es ist nur ein Versuch dieses Tests erforderlich. Bewerten Sie jede Hintergliedmaße unabhängig voneinander auf einer Skala von null bis vier, basierend auf dem kollektiven Ergebnis der drei phänotypischen Beobachtungstests.

Ein Sinus-Score von Null zeigt an, dass die Maus präsymptomatisch ist. Während des Federungstests werden die hinteren Gliedmaßen vollständig von der seitlichen Mittellinie weg gestreckt und verharren zwei Sekunden oder länger in dieser Position. Auch während des Gehtests wird ein normaler Gang beobachtet.

Weisen Sie eine Punktzahl von eins zu, die das Auftreten der ersten Symptome anzeigt. Wenn während der Federungsprüfung die hintere Extremität entweder zur lateralen Mittellinie hin zusammengeklappt ist, teilweise zur lateralen Mittellinie hin zittert oder auf andere Weise abnormal gespreizt ist. Zusätzlich zu den gerade gezeigten Symptomen des Suspensionstests sollte der Gang einer Maus, die eine Note von eins erhalten sollte, immer noch normal oder etwas niedriger erscheinen.

Weisen Sie eine Punktzahl von zwei zu, die den Beginn von Parsis angibt. Wenn während der Aufhängeprüfung die hintere Gliedmaße teilweise oder vollständig eingeklappt ist und zusätzlich während der Gehprüfung die hinteren Gliedmaßen für die Vorwärtsbewegung verwendet werden. Allerdings krümmen sich die Zehen während eines 75-Zentimeter-Gangs entweder mindestens zweimal nach unten oder ein Teil des Fußes schleift, um eine Punktzahl von zwei zu erhalten.

Die Maus muss auch noch in der Lage sein, sich selbst zu schreiben, nachdem sie innerhalb von 10 Sekunden auf beide Seiten gelegt wurde. Ein Sinus-Score von drei deutet auf eine Lähmung hin. Wenn die Maus während des Aufhängungstests eine starre Lähmung der hinteren Gliedmaßen aufweist oder nur minimale Gelenkbewegungen aufweist, kann die Maus während des Gehtests immer noch eine Vorwärtsbewegung zeigen, jedoch nicht mit ihren Hintergliedmaßen.

Neben einem Sinus-Score von drei muss die Maus auch nach dem Auflegen auf beide Seiten innerhalb von 10 Sekunden noch in der Lage sein, sich selbst zu schreiben. Schließlich ein Score von vier, der den humanen Endpunkt definiert, wenn die Maus während der Aufhängung eine starre Lähmung zeigt. Der Test zeigt keine Vorwärtsbewegung während des Gehtests mit den Hintergliedmaßen und ist auch nicht in der Lage, sich innerhalb von 10 Sekunden nach dem Platzieren auf einer der beiden Seiten selbst zu schreiben.

Männliche Mäuse haben in der Regel einen aggressiveren Krankheitsverlauf als weibliche Mäuse, was sich darin zeigt, dass ein größerer Anteil ihrer Lebensspanne Symptome zeigt, die im Vergleich zu weiblichen Mäusen mit einem neurologischen Score von eins eingestuft werden können. Wenn die Symptome in den Bereich eines neurologischen Scores von zwei oder drei zunehmen, ist die Anzahl der Tage, die mit jedem Score verbracht werden, bei allen Geschlechtern gleich häufig. Hier sind ordinale Logistik und statistische Analysediagramme dargestellt, die mit dem gerade beschriebenen Neuroco-Protokoll erstellt wurden.

Diese Daten stammen aus einer pharmakologischen Studie zur Wirksamkeit von Arzneimitteln, in der eine Kohorte von SOD 1 G 93 und Mäusen, die die Testsubstanz TDI 1 73 erhielten, mit einer Kohorte von Mäusen verglichen wurde, die ein Vehikel erhielten. Bei der getrennten Analyse der Geschlechter wurden keine statistisch signifikanten Unterschiede beobachtet, bei der Zusammenlegung der Geschlechter jedoch eine statistische Signifikanz erreicht. Obwohl sie ähnliche Trends zeigte, war die Überlebensanalyse von Kaplan Meyer nicht sensitiv genug, um signifikante Unterschiede zu erkennen, selbst wenn die Geschlechter verschmolzen wurden.

Einmal gemeistert, kann das Punktesystem in weniger als einer Minute pro Maus angewendet werden, wenn es richtig ausgeführt wird. Nachdem Sie sich dieses Video angesehen haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie Sie das Fortschreiten der Erkrankung im SOD one G 93, einem Mausmodell eines LS, mit Hilfe des Neuroco-Systems beurteilen können.