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DOI: 10.3791/53288-v
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Die adaptive Immunität wird durch dynamische 'immunologische Synapsen' gesteuert, die zwischen T-Zellen und Antigen-präsentierenden Zellen gebildet werden. Dieses Protokoll beschreibt Methoden zur Untersuchung von Endothelzellen sowohl als wenig untersuchte physiologische APCs als auch als eine neuartige Art von "planarem zellulärem APC-Modell".
Das übergeordnete Ziel dieser Technik ist es, Endothelzellen als neuartiges planares Antigen-präsentierendes Zellmodell zu nutzen, um grundlegende antigene Signalprozesse zu untersuchen. Diese Methode kann uns helfen, Schlüsselfragen im Bereich der adaptiven Immunität zu beantworten, z. B. wie die subzelluläre und molekulare Umbaudynamik innerhalb der immunologischen Synapse räumlich und zeitlich koordiniert wird. Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass das Endothel eine praktisch planare PC-Oberfläche bildet.
Dies ermöglicht eine Bildgebung mit optimaler räumlicher und zeitlicher Auflösung im Kontext einer physiologisch komplexen und einer formbaren Zelloberfläche. Obwohl sich diese Methode auf die Aktivierung von CD vier positiven TH Ein-Effektor-Gedächtniszellen konzentriert, kann sie auch für die Untersuchung einer Vielzahl von T-Zelltypen, Antigen- und Signalprozessen eingesetzt werden. Heute zeigen Chris und ich, wie Sie den zweiten Begin Begin durchführen, indem Sie primäre menschliche Lungen- oder dermale mikrovaskuläre Endothelzellen mit Membran-YFP und löslichem DS-Rot über die NU-Kernaffektion durchtrennen und die transfizierten Zellen auf lebende Zell-Imaging-Kulturplatten aufplättieren.
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