Geweberegeneration mit somatischen Stammzellen

Tissue Regeneration with Somatic Stem Cells
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Developmental Biology
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Tissue Regeneration with Somatic Stem Cells

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07:06 min
April 30, 2023

Overview

Somatische oder adulten Stammzellen, wie embryonale Stammzellen sind in der Lage selbst-Erneuerung, sondern zeigen eine eingeschränkte Differenzierungspotenzial. Dennoch, diese Zellen sind entscheidend für homöostatische Prozesse und spielen eine wichtige Rolle in der Gewebereparatur. Durch das Studium und die Manipulation dieser Zellpopulation, kann Wissenschaftler neue regenerative Therapien für Verletzungen und Erkrankungen entwickeln zu können.

Dieses Video zuerst definiert somatische Stammzellen, und dann untersucht die Rolle, die diese Zellen im Gewebe-Regeneration. Dies ist eine Beschreibung eines Protokolls betont, dass Muskel-Satelliten-Zellen isoliert und nutzt sie, um die Schädigung der Muskulatur in einem Mausmodell der Muskeldystrophie zu reparieren. Schließlich diskutieren wir spezifische Gewebe Regeneration Studien unter Verwendung somatische Stammzellen.

Procedure

Somatische Stammzellen spielen eine wichtige Rolle in der Wartung und Reparatur von einer Vielzahl von Geweben. Diese Stammzellen, wie ihre Eltern embryonale Stammzellen sind in der Lage, nahezu unbegrenzte Selbsterneuerung. Jedoch im Gegensatz zu embryonalen Stammzellen, die in einer Vielzahl von Zelltypen differenzieren können, somatische Stammzellen entstehen später in der Entwicklung, und ihre Schicksale sind auf Zellen von einem bestimmten Organ beschränkt.

Dieses Video wird die Grundsätzen der Geweberegeneration abdecken, wie Wissenschaftler untersuchen die Rolle der somatischen Stammzellen im Gewebe zu reparieren, nach Verletzungen, und einige Anwendungen, mit denen somatische Stammzellen zur Regeneration des Gewebes zu induzieren.

Beginnen wir mit dem diskutieren der Prinzipien hinter Geweberegeneration nach Verletzungen oder Schäden. Somatische Stammzellen wurden in verschiedenen Geweben, einschließlich Gehirn, Knochenmark, Skelettmuskel, Herz, Leber und Darm festgestellt.

Im Allgemeinen unterscheidet diese erneuerbare Energiequelle Stammzellen zuerst ins Schicksal eingeschränkt Vorläuferzellen vor, die letztlich zu funktional spezialisierte Zellen. Ein klassisches Beispiel hierfür ist die tägliche physiologischer Prozess namens Hämatopoese. In diesem Prozess gefunden somatische Stammzellen im Knochenmark Form das Blut und Immunsystem Vorläuferzellen, die weiter in die Zellen ihrer jeweiligen Systeme unterscheiden.

Gesichtspunkt der Tissue Regeneration wurden somatische Stammzellen in der Skelettmuskulatur gefunden zu spielen eine Rolle in Gewebereparatur gezeigt. Wenn ein Muskel beschädigt ist, diese Zellen sind an der Stelle der Verletzung rekrutiert und differenzieren um beschädigte Zellen zu ersetzen.

Woher wissen die somatische Stammzellen, dass es Zeit zur Arbeit zu kommen? Wenn Zellen geschädigt werden, geben sie lösliche Chemoattractants wie Chemokine, die somatische Stammzellen an der Stelle der Verletzung zu rekrutieren. Diese Zellen können dann in den Zieltyp Gewebe Zelle unterscheiden. Neben der Bereitstellung einer Versorgung mit neuen Zellen, können somatische Stammzellen auslösen lokale Änderungen, wie die Erzeugung von neuen Blutgefässen, die Wundheilung fördern.

Die Regenerationsfähigkeit des endogenen somatische Stammzellen möglicherweise immer nicht ausreichen, um kranke oder beschädigte Gewebe zu reparieren. Daher untersuchen Wissenschaftler, wie die Lieferung von exogenen Pools von somatischen Stammzellen verwendet werden kann, um solche Erkrankungen zu behandeln.

Nun, da Sie die Biologie der Geweberegeneration zu verstehen, betrachten wir ein Beispiel für wie Wissenschaftler somatische Stammzellen zu isolieren und verwalten, um die Reparatur von Gewebe auslösen können. Verwenden die folgende Methode, zeigen Wissenschaftler wie Muskelstammzellen, genannt Satellitenzellen, in Gewebe-Regeneration nach Verletzung helfen.

Erstens die skelettartige Muskeln sind von einer Spenderin Maus seziert und mit Hilfe eines trennendem Enzyms, z. B. Collagenase verdaut. Als nächstes Satellitenzellen sind isoliert, und eine Möglichkeit, das zu tun ist durch Inkubation dieser Zellen mit Antikörpern gebunden, magnetische Beads, die dann auf einer magnetischen Säule gereinigt werden. Nach Reinigung sind die Satelliten-Zellen in Kultur gezüchtet und anschließend durch Zugabe von Differenzierung Medien myogen Vorläuferzellen differenziert.

In der Zwischenzeit bereitet eine Empfänger Maus intramuskuläre Injektion eines Toxins, wodurch eine Muskelschwäche oder Muskeldystrophie. Vorbereitete myogen Vorläuferzellen werden dann in den Skelettmuskeln der dystrophischen Maus injiziert. Letztlich können erfolgreiche Integration und Differenzierung der Spenderzellen Immunohistochemistry bestimmt. Funktionale Verbesserung der dystrophischen Phänotyp kann mit einem Laufbandtest bewertet werden.

Nun, da Sie gesehen wie somatische Stammzellen Zellen isoliert und in ein Gewebe-Regeneration-Experiment manipuliert werden können, betrachten wir einige der nachgelagerten in Vitro und in Vivo Anwendungen dieser einzigartigen Klasse von Zellen.

Neben der Injektion somatische Stammzellen sind Zellen in Vivo Tiermodellen, Wissenschaftler auch Zellen Wege zu manipulieren, das Schicksal dieser in Vitro. In diesem Experiment differenziert Wissenschaftler Stammzellen in funktionale Skelettmuskelzellen durch die erste Vorbereitung einer Petrischale mit Ankern. Stammzellen wurden dann kultiviert, innerhalb einer Kollagen und Gel-Matrix vermischt und in speziell entwickelten Petrischalen verankert.

Dann wurden diese verankerte Stammzellen elektrisch stimuliert durch Elektroden in Differenzierung Kulturmedien, die zur in-vitro- Bildung von funktionalen, Reife Muskel Konstrukte geführt. Immunfluoreszenz bestätigt die Expression von differenzierten Skelettmuskulatur Zelle Marker: Aktin, in rot und Myosin in grün.

Somatische Stammzellen haben auch gezeigt versprechen als potenzielle regenerative Therapien für Erkrankungen des zentralen Nervensystems. Bei dieser Methode Wissenschaftler zuerst geerntet neuronalen Spendergewebe aus einer transgenen Ratte Fötus grünes fluoreszierendes Protein zum Ausdruck zu bringen, und isolierte neuronalen Stammzellen in einer Fibrin-Matrix mit einem Wachstumsfaktor cocktail behandelt wurden. Dann wurden die behandelten neuronalen Stammzellen in den Ort der Läsion Rückenmark der Empfänger Maus injiziert. Veredelte Spenderzellen erwiesen sich als gut integriert und die Hohlräume in der Läsion des Rückenmarks gefüllt haben.

Um besser zu verstehen, wie somatische Stammzellen Zellen in Geweben nach Injektion von ihnen in einen Wirt zu integrieren, haben Wissenschaftler eine Methode zum Eindringmittel beschriften sie in Vitro vor der Injektion entwickelt. In diesem Experiment Wissenschaftler somatische Stammzellen aus Knochenmark Maus geerntet und stabil mit verschiedenen fluoreszierenden Proteins, die Gene, die mit einer viralen Vektoren-Systemen die transduced Zellen dann in die Rute Vene ein Empfänger Maus injiziert wurden transfiziert. Im Laufe der Zeit Organe wurden von der Empfänger Maus geerntet und Fluoreszenzmikroskopie wurde verwendet, um die Position von Zellen in verschiedenen Geweben zu verfolgen.

Sie haben nur Jupiters Video auf somatische Stammzellen angesehen. Dieses Video behandelt die Prinzipien hinter Geweberegeneration durch somatische Stammzellen, wie diese Zellen isoliert und studiert werden können und ihre mögliche Anwendung in der regenerativen Medizin. Da somatische Stammzellen Regeneration einer Vielzahl von Geweben eine entscheidende Rolle spielen, ist das Verständnis der Mechanismen, die diese Klasse von Zellen regulieren ein aktives Gebiet der Forschung in der regenerativen Medizin. Wie immer vielen Dank für das ansehen!

Transcript

Somatic stem cells play an important role in the maintenance and repair of a wide range of tissues. These stem cells, like their parent embryonic stem cells, are capable of nearly unlimited self-renewal. However, unlike embryonic stem cells, which can differentiate into a wide range of cell types, somatic stem cells arise later in development, and their fates are restricted to cells of a specific organ.

This video will cover the principles of tissue regeneration, how scientists study the role of somatic stem cells in tissue repair following injury, and some applications that use somatic stem cells to induce tissue regeneration.

Let’s begin by discussing the principles behind tissue regeneration following injury or damage. Somatic stem cells have been identified in several tissues, including brain, bone marrow, skeletal muscle, heart, liver, and intestines.

Generally, this renewable source of stem cells first differentiates into fate-restricted progenitor cells before ultimately giving rise to functionally specialized cells. A classic example of this is the daily physiological process called hematopoiesis. In this process, somatic stem cells found in the bone marrow form the blood and immune system progenitor cells, which further differentiate into the cells of their respective systems.

From the tissue regeneration point of view, somatic stem cells found in the skeletal muscle have been shown to paly a role in tissue repair. When a muscle is damaged, these cells are recruited to the site of injury and differentiate to replace damaged cells.

How do somatic stem cells know that it’s time to get to work? When cells are damaged, they release soluble chemoattractants, such as chemokines, which recruit somatic stem cells to the site of injury. These cells may then differentiate into the target tissue cell type. In addition to providing a supply of new cells, somatic stem cells can induce local changes, such as the generation of new blood vessels that promote wound healing.

The regenerative capacity of endogenous somatic stem cells may not always be sufficient to repair diseased or damaged tissue. Therefore, scientists are investigating how the delivery of exogenous pools of somatic stem cells can be used to treat such conditions.

Now that you understand the biology of tissue regeneration, let’s look at an example of how scientists can isolate somatic stem cells and administer them to induce tissue repair. Using the following method, scientists demonstrate how muscle stem cells, called satellite cells, aid in tissue regeneration following injury.

First, skeletal muscles are dissected from a donor mouse and digested with the help of a dissociating enzyme, for example collagenase. Next, satellite cells are isolated, and one way to do that is by incubating these cells with antibodies bound to magnetic beads, which are then purified on a magnetic column. Following purification, the satellite cells are grown in culture and subsequently differentiated into myogenic progenitor cells by adding differentiation media.

In the meantime, a recipient mouse is prepared by intramuscular injection of a toxin resulting in a muscular weakness, or muscular dystrophy. Prepared myogenic progenitor cells are then injected into the skeletal muscles of the dystrophic mouse. Ultimately, successful integration and differentiation of donor cells can be determined by immunohistochemistry. Functional amelioration of the dystrophic phenotype may be assessed with a treadmill test.

Now that you’ve seen how somatic stem cells can be isolated and manipulated in a tissue regeneration experiment, let’s look at some of the downstream in vitro and in vivo applications of this unique class of cells.

Apart from injecting somatic stem cells into in vivo animal models, scientists are also devising ways to manipulate the fate of these cells in vitro. In this experiment, scientists differentiated stem cells into functional skeletal muscle cells by first preparing a petri dish with anchors. Stem cells were then cultured, mixed within a collagen and gel matrix, and anchored within the specially engineered petri dishes.

Then, these anchored stem cells were electrically stimulated by electrodes placed in differentiation culture media, which led to the in vitro formation of functional, mature muscle constructs. Immunofluorescence confirmed the expression of differentiated skeletal muscle cell markers: actin, in red, and myosin, in green.

Somatic stem cells have also shown promise as potential regenerative therapies for disorders of the central nervous system. In this method, scientists first harvested donor neuronal tissue from a transgenic rat fetus expressing green fluorescent protein, and isolated neuronal stem cells were treated in a fibrin matrix with a growth factor cocktail. Then, the treated neuronal stem cells were injected in the site of the spinal cord lesion of the recipient mouse. Grafted donor cells were shown to have integrated well and filled the cavities in the spinal cord lesion.

In order to better understand how somatic stem cells integrate into tissues after injecting them into a host, scientists have developed a method for fluorescently labeling them in vitro prior to injection. In this experiment, scientists harvested somatic stem cells from mouse bone marrow, and stably transfected them with different fluorescent protein genes using a viral vector systems The transduced cells were then injected into the tail vein of a recipient mouse. Over time, organs were harvested from the recipient mouse and fluorescence microscopy was used to track the location of cells in various tissues.

You’ve just watched JoVE’s video on somatic stem cells. This video covered the principles behind tissue regeneration by somatic stem cells, how these cells may be isolated and studied, and their potential application in regenerative medicine. Since somatic stem cells play such a critical role in regeneration of a wide range of tissues, understanding the mechanisms that regulate this class of cells is an active area of research in regenerative medicine. As always, thanks for watching!