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Developmental Biology
Ex-vivo-Kultur von Chick Kleinhirn-Slices und räumlich gezielte Elektroporation von Körn...
Ex-vivo-Kultur von Chick Kleinhirn-Slices und räumlich gezielte Elektroporation von Körn...
JoVE Journal
Developmental Biology
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JoVE Journal Developmental Biology
Ex Vivo Culture of Chick Cerebellar Slices and Spatially Targeted Electroporation of Granule Cell Precursors

Ex-vivo-Kultur von Chick Kleinhirn-Slices und räumlich gezielte Elektroporation von Körnerzellvorstufen

Full Text
9,855 Views
10:02 min
December 14, 2015

DOI: 10.3791/53421-v

Michalina Hanzel1, Richard J.T. Wingate1, Thomas Butts2

1MRC Centre of Developmental Neurobiology,King's College London, 2School of Biological and Chemical Sciences,Queen Mary, University of London

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This study presents a protocol for targeting genetic modification to the external granule layer of the chick cerebellum using ex vivo electroporation. This method allows for the examination and modification of granule cell morphology and behavior during a critical period of brain development.

Key Study Components

Area of Science

  • Developmental Neurobiology
  • Genetic Modification Techniques
  • Ex Vivo Electroporation

Background

  • The external granule layer is crucial for cerebellar development.
  • This layer experiences significant cellular proliferation during embryonic development.
  • Understanding granule cell behavior can provide insights into neural development.
  • Similar techniques can be applied to other species, enhancing comparative studies.

Purpose of Study

  • To modify granule cell morphology and behavior in an ex vivo setting.
  • To investigate the migration, proliferation, and differentiation of neural progenitors.
  • To provide a cost-effective and convenient method for developmental studies.

Methods Used

  • Electroporation of cerebellar slices from embryonic Day 14 chick embryos.
  • Culture of cerebellar slices to observe cellular behavior.
  • Decapitation of chick embryos in ovo for sample preparation.
  • Incubation of fertilized eggs to reach the appropriate developmental stage.

Main Results

  • Successful targeting of genetic modifications to the external granule layer.
  • Insights into the morphology and behavior of granule cells.
  • Demonstrated applicability of the method to other model organisms.
  • Provided a framework for future studies in developmental neurobiology.

Conclusions

  • This method enhances the understanding of cerebellar development.
  • It offers a valuable tool for researchers studying neural progenitor behavior.
  • The technique's versatility allows for broader applications in neurobiology.

Frequently Asked Questions

What is the significance of the external granule layer?
The external granule layer is critical for cerebellar development and is the site of significant cellular proliferation.
How does electroporation work in this context?
Electroporation is used to introduce genetic modifications into the cells of the external granule layer.
Can this method be applied to other species?
Yes, while this study focuses on chick embryos, the method can also be applied to reptiles and mammals.
What are the advantages of this technique?
The technique is cost-effective and convenient, allowing for detailed studies of granule cell behavior.
What developmental questions can this method help answer?
It can help investigate how neural progenitors migrate, proliferate, and differentiate during development.
What is the incubation temperature for the eggs?
The fertilized brown chicken eggs should be incubated at 38 degrees Celsius.
What is the age of the embryos used in this study?
The study uses cerebellar slices from embryonic Day 14 chick embryos.

Die Kleinhirn externen Körnerschicht ist der Ort der größten Transit Verstärkung im sich entwickelnden Gehirn. Hier stellen wir ein Protokoll zur genetischen Veränderung, die diese Schicht an der Spitze der Proliferation unter Verwendung ex vivo Elektroporation und Kultur zerebelläre Scheiben aus embryonalen Tag 14 Hühnerembryonen zu zielen.

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, die genetische Modifikation der äußeren Keimschicht des Kleinhirns des Kükens zu fördern, um die Morphologie und das Verhalten von Körnerzellen in einer ex vivo-Umgebung zu beobachten, zu untersuchen und zu modifizieren. Diese Methode kann dazu beitragen, Schlüsselfragen im Bereich der Entwicklungsneurobiologie zu beantworten, z. B. wie neuronale Vorläuferzellen migrieren, sich vermehren und differenzieren. Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass sie die erheblichen Kosten- und Komfortvorteile mit sich bringt, die mit Studien verbunden sind.

Obwohl diese Methode Einblicke in die Entwicklung von Hühnergranulaten geben kann, kann sie auch auf andere Modellorganismen wie Reptilien und Säugetiere angewendet werden. Legen Sie zu Beginn befruchtete braune Hühnereier in einen Eierbrutkasten bei 38 Grad Celsius, bis sie embryonal sind. Tag 14 Am embryonalen Tag 14 schneiden Sie eine Öffnung in das Ei, um den Embryo freizulegen, und enthaupten Sie den Hühnerembryo in Ovo.

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Entwicklungsbiologie Heft 106 Kleinhirn Entwicklung Küken externen Körnerschicht Schnittkultur Körnerzellen Purkinje-Zellen die Elektroporation.

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