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DOI: 10.3791/53421-v
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This study presents a protocol for targeting genetic modification to the external granule layer of the chick cerebellum using ex vivo electroporation. This method allows for the examination and modification of granule cell morphology and behavior during a critical period of brain development.
Die Kleinhirn externen Körnerschicht ist der Ort der größten Transit Verstärkung im sich entwickelnden Gehirn. Hier stellen wir ein Protokoll zur genetischen Veränderung, die diese Schicht an der Spitze der Proliferation unter Verwendung ex vivo Elektroporation und Kultur zerebelläre Scheiben aus embryonalen Tag 14 Hühnerembryonen zu zielen.
Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, die genetische Modifikation der äußeren Keimschicht des Kleinhirns des Kükens zu fördern, um die Morphologie und das Verhalten von Körnerzellen in einer ex vivo-Umgebung zu beobachten, zu untersuchen und zu modifizieren. Diese Methode kann dazu beitragen, Schlüsselfragen im Bereich der Entwicklungsneurobiologie zu beantworten, z. B. wie neuronale Vorläuferzellen migrieren, sich vermehren und differenzieren. Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass sie die erheblichen Kosten- und Komfortvorteile mit sich bringt, die mit Studien verbunden sind.
Obwohl diese Methode Einblicke in die Entwicklung von Hühnergranulaten geben kann, kann sie auch auf andere Modellorganismen wie Reptilien und Säugetiere angewendet werden. Legen Sie zu Beginn befruchtete braune Hühnereier in einen Eierbrutkasten bei 38 Grad Celsius, bis sie embryonal sind. Tag 14 Am embryonalen Tag 14 schneiden Sie eine Öffnung in das Ei, um den Embryo freizulegen, und enthaupten Sie den Hühnerembryo in Ovo.
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