Name: Air-abgetastete Filteranalyse für Endotoxine und DNA-Gehalt (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-03-07T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 16 s
Description: Erfahren Sie die Analyse von Endotoxinen und DNA aus luftabgetasteten Filtern für Umweltbiologie. Diese Methode ermöglicht präzise Untersuchungen biologischer Aerosole in Innen- und Außenbereichen.

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Die Autoren danken Dr. Yoav Barak von der Fakultät für Chemie des Weizmann-Instituts für seine Unterstützung und Beratung. Diese Studie wurde gefördert von der Israel Science Foundation (Grant # 913/12) und von der Minerva Foundation mit Mitteln des Bundesministeriums für Bildung und Forschung.

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Die Autoren haben nichts offenzulegen.

Diese Arbeit beschreibt Extraktion und Nachweismethoden für beide Endotoxinen und DNA, die in Aerosolproben auf Filtern gesammelt zu quantifizieren. Die Methoden erfordern eine genaue Routinen und kann leicht so lange durchgeführt werden, wie der Experimentator auf wenige wesentliche und wichtige Punkte hält sich hier diskutiert. Für die Endotoxin-Nachweisschritt zu beachten, dass das Lysat Lösung ziemlich viskos und neigt dazu, Blasen beim Pipettieren zu erzeugen. Es ist schwierig, dich Bla...

Air Probenahme auf Filter ist ein grundlegendes Instrument in atmosphärischen Aerosolen Forschung. 1 Die abgetasteten Filter der Ausgangspunkt für verschiedene chemische, physikalische und biologische Charakterisierungen der gesammelten Umgebungspartikel sind. 11.02 Der Vorteil dieses Ansatzes besteht darin , dass verschiedene Analysen sein kann off-line auf der gleichen Probe durchgeführt. Kompilieren der Daten aus den verschiedenen Analysen der Forscher ermöglicht bei der Lösung komplexer Fragestellungen in den atmosphärischen Wissenschaften ein gutes Verständnis für die Eigenschaften der gesammelten Partikel und Hilfsmittel zu erhalten. 12,13 Zum Beispiel Meeres- und Binnenluftproben , die während der gleichen genommen Zeitraum kann in Bezug auf das abgetastete Partikel Toxizität und biologische Zusammensetzung verglichen. 14 Für diese Studie Lipopolysaccharide (LPS), Komponenten auf gram-negativen Bakterienzellwände, auch als Endotoxine bekannt sind , wurden von den Filtern on-shore abgetastete extrahiert und ein Binnenstelle und wurden unter Verwendung bewertet dieLimulusamöbocytenlysat (LAL-Test). Verwendung der quantitative Polymerase-Kettenreaktion (q-PCR) parallel wird eine genomische Auswertung des Bakteriengehalt (total Bakterien, gramnegative und Cyanobakterien) wurde an derselben Probe durchgeführt. Der LAL - Test basiert auf der Messung der Trübung nach der Zugabe eines wässrigen Extrakts aus Amöbozyten von dem Pfeilschwanzkrebs Limulus polyphemus gebildet, zu einer wässrigen Lösung , die Endotoxine enthält. Je höher die Endotoxin - Konzentration in der Probe entwickelt die schneller Trübung. 15 die q-PCR - Analyse auf einem Fluoreszenzsignal basiert , als ein spezifisches DNA - Fragment emittiert wird verstärkt. 16 durch Echtzeit - Überwachung des Signals während der exponentiellen Phase der PCR Reaktion und Kalibrierung mit einer Standardkurve, die anfängliche DNA-Menge quantifiziert werden kann. Die Kombination dieser beiden Analysen zusammen mit anderen, wie anderswo detailliert, 14 eine gute Schätzung des Gehalts an Endotoxin liefern kann und dasMenge der Quell Bakterien in den Proben. Der Zweck der hier vorgestellten Verfahren ist es, eine hochgenaue und zuverlässige Analyse des Endotoxin und DNA-Gehalt von Bio-Aerosole aus den Filtern extrahiert zu erhalten. Während Verfahren die physikalischen und anorganischen chemischen Eigenschaften von Aerosolen zur Abtastung bekannt sind und in jüngster Zeit sind Verfahren entwickelt worden , dessen organischer Substanz Komponente zu untersuchen, 17 dort hat auf die biologische Komponente von Aerosolen wenig Forschung. 18 Der Grund für die aktuelle Methode ist , diese Lücke zu schließen, indem zum Extrahieren im Detail ein robustes Verfahren präsentiert, die Analyse und die biologische Fraktion in der Luft Aerosole zu identifizieren. 14 Die Methode , die hier detailliert wird erwartet , dass weit verbreitete Verwendung in der biologischen Innen- und Außenaerosolforschungsprojekte mit Filteranalyse zu finden. 20-24

<table><tbody><tr><td>Filter sampling</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>HiVol 3000 - High Volume Air Sampler</td><td>Ecotech</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Quarz Mikrofaser Filter</td><td>Whatman</td><td>1851-865</td><td>203 mm x 254 mm</td></tr><tr><td>ELF - Labor-Kammeröfen</td><td>Carbolite</td><td>ELF 11series</td><td></td></tr><tr><td>Aluminiumfolie</td><td>Opal</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Name</td><td>Unternehmen</strong</td><td>>Katalognummer</td><td>Kommentare</td></tr><tr><td>Endotoxin</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Sigma Aldrich</td><td>16368&nbsp;</td><td>Laborreagenz, 96%</td></tr><tr><td>Biologische Sicherheitswerkbank der Airstream-Klasse II AC-4E1</td><td>ESCO</td><td>10011712</td><td></td></tr><tr><td>Pyrotell -T</td><td>Associates of Cape Cod, Inc.</td><td>T0051</td><td></td></tr><tr><td>Control Standard Endotoxin</td><td>Associates von Cape Cod, Inc.</td><td>E0005-1</td><td>Escherichia coli&nbsp; Ø113:H10, 0,5 &Mikro; g/Fläschchen 1 Packung</td></tr><tr><td>LAL Reagenz Water</td><td>Associates of Cape Cod, Inc.</td><td>W0051</td><td></td></tr><tr><td>10 ml sterile Spritze mit Luer-Lok Tip</td><td>Becton-Dickinson & Co.</td><td></td><td></td>309605</tr><tr><td>BD Precisionglide Spritzennadel</td><td>Becton-Dickinson & Co.</td><td>305129</td><td>Steril&nbsp;</td></tr><tr><td>Parafilm-M Dichtband</td><td>Parafilm</td><td>P7543</td><td>Sigma Katalognummer</td></tr><tr><td>Microtubes</td><td>Axigen</td><td>MCT-200-C</td><td>2 ml, pyrogenfrei</td></tr><tr><td>1,12 cm Durchmesser Korkbohrer</td><td>Boekel Scientific</td><td>1601 BD Serie - Stahl</td><td>Teil eines Korkbohrer-Sets mit Bohrern mit verschiedenen Durchmessern.</td></tr><tr><td>50 mm Petrischale</td><td>Miniplast Ein-Shemer</td><td>72050-01</td><td>Aseptischer</td></tr><tr><td>Vortex Genie 2&nbsp;</td><td>Scientific Industries, Inc.</td><td>SI-0297</td><td></td></tr><tr><td>Mikrozentrifuge 5415 D</td><td>Eppendorf</td><td>22621408</td><td></td></tr><tr><td>TC MicroWell 96 F SI mit Deckel</td><td>Nunc</td><td>167008</td><td>Vertiefungen mit flachem Boden (mit Deckel (einzeln verpackt)), steril, pyrogenfrei</td></tr><tr><td>Synergy HT Multi-Detection Microplate Reader</td><td>Biotek</td><td>7091000</td><td></td></tr><tr><td>Name</td><td>Company</td><td>Katalognummer</td><td>Comments</td></tr><tr><td>DNA</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>DNA away</td><td>Sigma Aldrich</td><td>7010</td><td></td></tr><tr><td>Standard-DNA der mikrobiellen Spezies von Interesse</td><td>ATCC oder andere Kultursammlung</td><td></td><td>Entweder der geeignete mikrobielle Stamm für die DNA-Extraktion oder die extrahierte DNA</td></tr><tr><td>Neubauer-verbessertes</td><td>Marienfeld</td><td>640030</td><td>Hämozytometer</td></tr><tr><td>TE Puffer, Low EDTA</td><td>Life Technologies</td><td>12090-015</td><td>10 mM Tris-HCl (pH 8,0)&nbsp; 0,1 mM EDTA&nbsp;</td></tr><tr><td>Nukleasefreies Wasser in PCR-Qualität&nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>3315959001 PCR-Primer</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Sigma Aldrich</td><td></td><td>zielt auf die mikrobiellen Spezies von Interesse</td></tr> ab <tr><td>Dual-Markierte Sonden</td><td>Sigma Aldrich</td><td></td><td>zielt auf die mikrobiellen Spezies von Interesse</td></tr><tr><td>ab Schraubverschlussröhrchen</td><td>Axigen</td><td>ST-200-SS</td><td>2 ml&nbsp;</td></tr><tr><td>PowerSoil DNA-Extraktionskit&nbsp;</td><td>Mo Bio Laboratories</td><td>12888-100</td><td></td></tr><tr><td>Glasperlen, säuregewaschen 425-600 & Mikro; m</td><td>Sigma Aldrich</td><td>G8772-100G</td><td></td></tr><tr><td>Glasperlen, säuregewaschen < 106 &Mikro; m</td><td>Sigma Aldrich</td><td>G4649-100G</td><td></td></tr><tr><td>PowerSoil Solution C1</td><td>Mo Bio Laboratories</td><td>12888-100-1</td><td>Zelllysepuffer , Power soil Kit</td></tr><tr><td>Magic Touch Eiskübel</td><td>Bel-Art</td><td>18848-4001</td><td></td></tr><tr><td>Mini-Beadbeater-16</td><td>BioSpec</td><td>607EUR</td><td></td></tr><tr><td>StepOnePlus Real-Time PCR System</td><td>Applied Biosystems</td><td>4376600</td><td></td></tr><tr><td>Schnell SYBR Green Master Mix</td><td>Applied Biosystems</td><td>4385612</td><td></td></tr><tr><td>TaqMan Gene Expression Master Mix</td><td>Applied Biosystems</td><td>4370048</td><td></td></tr><tr><td>MicroAmp Schnelle optische 96-Well-Reaktionsplatte mit Barcode, 0,1 ml</td><td>Applied Biosystems</td><td>4346906</td><td></td></tr><tr><td>MicroAmp Splash-Free 96-Well Base</td><td>Applied Biosystems</td><td>4312063</td><td></td></tr><tr><td>MicroAmp Optischer Klebefilm</td><td>Applied Biosystems</td><td>4311971</td><td></td></tr><tr><td>Zentrifuge 5810 R</td><td>Eppendorf</td><td>5811 000.010</td><td>Rotor A-4-62 mit MTP-Schaufeln&nbsp;</td></tr></tbody></table>

air-abgetastete filteranalyse für endotoxine und dna-gehalt

Air-sampled Filter Analysis for Endotoxins and DNA Content

Außenaerosolforschung verwendet allgemein Partikel auf Filter abgetastet. Dieses Verfahren ermöglicht es, verschiedene Charakterisierungen der gesammelten Partikel in parallel durchgeführt werden. Der Zweck der hier vorgestellten Verfahren ist es, eine hochgenaue und zuverlässige Analyse des Endotoxin und DNA-Gehalt von Bio-Aerosole aus den Filtern extrahiert zu erhalten. Die Gewinnung von hochmolekularen organischen Moleküle, wie Lipopolysacchariden, aus abgetasteten Filter beinhaltet Schütteln der Probe in einer pyrogenfreien Medium auf Wasserbasis. Die nachfolgende Analyse basiert auf einer Enzymreaktion basiert, die unter Verwendung einer turbidimetrischen Messung erfasst werden können. Als Ergebnis des hohen organischen Anteils auf den abgetasteten Filter wird die Extraktion der DNA aus den Proben durchgeführt, eine kommerzielle DNA-Extraktions-Kits verwenden, die ursprünglich für Böden entworfen und modifiziert, um die DNA-Ausbeute verbessern. Der Nachweis und die Quantifizierung von spezifischen mikrobiellen Spezies unter Verwendung quantitative polymerase chain Reactiauf (q-PCR) Analyse mit anderen verfügbaren Methoden beschrieben und verglichen.

Es ist üblich , atmosphärischer Aerosole zu studieren &quot;off-line&quot; , analysiert der abgetasteten Filter verwenden (siehe Abbildung 2). 32 Chemische Analysen des abgetasteten Materie umfassen organische (zB Protein, Kohlenwasserstoffmoleküle, Saccharide) und anorganischen (zB Metalle, Salze) Gehalt . Biologische Analysen umfassen lebensfähigen und nicht lebensfähige Mikroorganismen Gehalt, Artbestimmung einer DNA-Ansatz oder Mikroskopi...

Zwei komplementäre Analysen von atmosphärischen biologischen Partikeln aus Luftprobefiltern werden hier beschrieben: die Extraktion und der Nachweis von Endotoxin und von DNA.

Air-abgetastete Filteranalyse für Endotoxine und DNA-Gehalt

Outdoor aerosol research commonly uses particulate matter sampled on filters. This procedure enables various characterizations of the collected particles ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens besteht darin, die genaue Analyse von Endotoxin- und DNA-Gehalt extrahierter luftgetragener Partikel, die auf Filtern gesammelt wurden, zu beschreiben. Diese Methode kann helfen, zentrale Fragen in der Forschung zu biologischen Aerosolen in Innen- und Außenräumen zu beantworten, beispielsweise im Hinblick auf gesundheitliche Ursachen. Die Demonstration des Filterprobennahmeverfahrens wird Yinon Mazar, ein Doktorand aus meinem Labor, durchführen.Verwenden Sie für die Probenahme mit hohem Volumen Filter aus Quarzfasern. Oder wählen Sie den spezifischen Filtertyp sowie eine geeignete Filter-Cutoff-Größe, die am besten den Anforderungen der Forschung entspricht. Backen Sie die Filter, die für die Probenahme organischer und biologischer Verbindungen vorgesehen sind, vorab ein, indem Sie sie zunächst einzeln in Aluminiumfolie einwickeln.Und anschließend werden sie fünf Stunden lang bei 450 Grad Celsius in einem Laborofen gebacken. Dadurch werden eventuelle vorhandene organische Rückstände zerstört. Die gebackenen Filter bis zur Verwendung für die Probenahme bei 20 Grad Celsius lagern.Als Nächstes reinigen und desinfizieren Sie das Hochvolumen-Sampler, wie es im begleitenden Textprotokoll beschrieben ist. Danach setzen Sie den vorgebackenen Filter in die Filterkassette ein und betreiben das Sampler gemäß den Herstelleranweisungen, um eine geeignete Probe zu sammeln. In einem Sicherheitswerkbank der Klasse zwei schneiden Sie mit einem sauberen Korkbohrer mit einem Durchmesser von 1,12 cm 22 kreisförmige Stücke aus sauberem, vorgebackenem Filtermaterial aus.Verwenden Sie diese Stücke, um eine Reihe von mit Endotoxin versetzten Filtern herzustellen, die als Kontrollen dienen sollen. Schneiden Sie anschließend die Filter, die die gesammelte Probe enthalten, mit einem sauberen Korkenzieher mit 1,12 cm Durchmesser aus und geben Sie jede Probe in eine eigene pyrogenfreie 2-mL-Röhrchen. Überführen Sie außerdem die getrockneten, mit Endotoxin versetzten Filter in separate pyrogenfreie 2-mL-Röhrchen.Geben Sie ein Milliliter pyrogenfreies Wasser in jedes Reagenzglas und schütteln Sie die Proben 60 Minuten bei Raumtemperatur mit einem Labor-Schüttler. Zentrifugieren Sie anschließend die Probenröhrchen in einer Mikrozentrifuge bei 375 × g für 10 Minuten.Anschließend das Überstand, der die Endotoxine enthält, in ein neues pyrogenfreies 2-Milliliter-Gefäß überführen. Eine pyrogenfreie 96-Loch-Flachboden-Mikroplatte mit Deckel für den Endotoxin-Test vorbereiten, indem zunächst die Probenpositionen festgelegt werden.Als Nächstes schalten Sie den Mikroplattenreader ein und programmieren ihn für eine kinetische Reaktion bei 37 Grad Celsius mit Schütteln alle fünf Minuten, gefolgt von Messungen bei 405 Nanometern. Wiederholen Sie das fünfminütige Schütteln und das Auslesen der Platte insgesamt 18-mal.Geben Sie die Proben in die Mikrotiterplatte, indem Sie jeweils 50 µL der zuvor zum Anreichern der Filter verwendeten Standard-Endotoxin-Lösungen in die Reihen A1 bis A10 und B1 bis B10 pipettieren. Füllen Sie die Leerproben in A11, A12, B11 und B12 ein. Fügen Sie anschließend das Überstandsvolumen aus dem zentrifugierten angereicherten Filterextrakt und dessen Leerproben in die Reihen C und D hinzu. Danach werden die Überstände aus den experimentellen Proben und den entsprechenden Leerproben nach Bedarf in die verbleibenden Vertiefungen gegeben.Um den Test zu aktivieren, pipettieren Sie schnell 50 Mikroliter der Limulus-Amebozyten-Glycat-Lösung in jedes Loch. Schütteln Sie die Platte vorsichtig horizontal. Bevor Sie sie in das Plattenlesegerät heben und die experimentelle Messung starten.Entfernen Sie die Platte nach Abschluss vom Plattenlesegerät. Bestimmen Sie den Endotoxin-Gehalt jeder Probe mithilfe der Standardkurve und berechnen Sie außerdem die Effizienz, mit der die Endotoxine aus den Probenfiltern extrahiert wurden. Bereiten Sie zunächst die DNA-spikehaltigen Filter wie im begleitenden textbasierten Protokoll beschrieben vor.Für jede Filterprobe bereiten Sie eine Mischung aus säuregewaschenen Glasperlen in 0,5-Milliliter-Sterilröhrchen vor, bestehend aus 0,1 Gramm Perlen mit einem Durchmesser von 425 bis 600 Mikrometern und 0,3 Gramm Perlen mit einem Durchmesser von weniger als oder gleich 106 Mikrometern. Schneiden Sie anschließend drei kreisförmige Stücke von zufällig ausgewählten Stellen jeder Filterprobe mit einem desinfizierten Korkbohrer mit einem Durchmesser von 1,12 Zentimetern aus. Geben Sie die Filterproben in einzelne Schraubverschlussröhrchen mit einem Fassungsvermögen von zwei Milliliter.Fügen Sie dann die Glasperlenmischung zusammen mit 60&nbsp;Mikroliter des mit dem DNA-Extraktionskit gelieferten Zelllysepuffers zu jedem Röhrchen hinzu. Schließen Sie die Röhrchen und stellen Sie die Proben in den Bead-Beater. Zerstören Sie die gefilterten Zellen mithilfe des Bead-Beaters mechanisch für eine Minute und kühlen Sie die Proben anschließend, indem Sie sie eine zusätzliche Minute lang auf Eis stellen.Wiederholen Sie diesen Zyklus fünfmal. Fahren Sie fort, indem Sie dem Protokoll des Kit-Herstellers folgen und die DNA aus den lysierten Zellen extrahieren. Laden Sie die eluierte Probe nach der Elution ein zweites Mal durch die Extraktionssäule, um die DNA-Ausbeute zu verbessern.Schalten Sie das quantitative PCR-Gerät im Voraus ein, damit es sich aufwärmen kann. Erstellen Sie in der Bediensoftware des Geräts eine neue Programmdatei, und tragen Sie dort die Details für den quantitativen PCR-Lauf ein. Desinfizieren Sie anschließend die Arbeitsfläche mit einem Oberflächen-DNA-Entkontaminierungsmittel und arbeiten Sie ausschließlich mit sterilen Röhrchen, Pipettenspitzen und Reagenzien. Stellen Sie außerdem einen Eimer mit Eis neben den Arbeitsplatz und legen Sie die tac polemoraris-Mischung in den Eimer. Bereiten Sie die quantitative PCR-Reaktionsmischung gemäß Tabelle vier des begleitenden Textprotokolls vor. Lagern Sie die Reaktionsmischung bis zur Verwendung im Dunkeln und auf Eis.Als Nächstes eine saubere Mikroplatte in einen Plattenhalter geben, um zu verhindern, dass sie die Arbeitsfläche berührt, und um sie sauber zu halten. Ein Mikroliter Standard-DNA, Proben-DNA oder nukleasefreies Wasser in die Vertiefungen der Quantitative-PCR-Mikroplatte im Dreifachansatz hinzufügen. Anschließend neun Mikroliter der Master-Reaktionsmischung in jede Reaktionsvertiefung geben.Decken Sie die Platte nach Beendigung mit einer optischen Haftfolie ab und verschließen Sie sie dicht an allen Seiten. Zentrifugieren Sie die Platte in einem mit Plattenrotoren ausgestatteten Zentrifugen für eine Minute bei 1000 × g, bevor Sie sie in den Thermocycler geben. Schließlich aktivieren und führen Sie das vorbereitete quantitative PCR-Programm aus.Während der Endotoxin-Extraktion werden Proben auf einem Filter zentrifugiert, um das Endotoxin aus dem Filter zu gewinnen. Unterschiedliche Zentrifugationsgeschwindigkeiten führen zu variierenden Extraktionswirkungsgraden, insbesondere bei höheren Endotoxin-Konzentrationen.Ein vorläufiger Test zur Extraktionsausbeute sollte für den spezifischen gewählten Filter und den durchgeführten Protokollablauf durchgeführt werden. Höhere Extraktionsausbeuten werden durch die Spiking-Reinigung von Filtern im Vergleich zu Probenquarzfiltern erzielt, und beide Ausbeuten liegen unterhalb derjenigen, die durch die direkte Detektion der Standardlösung erreicht wird. Nach Beherrschung der Methode kann die Endotoxin-Analyse, sofern ordnungsgemäß durchgeführt, in dreieinhalb Stunden abgeschlossen werden.Nach Durchführung dieses Verfahrens können weitere Methoden wie die DNA-Sequenzierung angewendet werden, um zusätzliche Fragen zum Transport von Organismen in der Atmosphäre zu beantworten. Nach dem Anschauen dieses Videos sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie Endotoxine und DNA effizient aus Luftprobenfiltern extrahiert und genau analysiert werden können.

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Research

Forschung

JoVE Journal

Environment

Umwelt

Dieses Video zeigt einen schnellen Bioassay zur Untersuchung der Endotoxinaktivität in einer Vollblutprobe mit einer Chemilumineszenz-basierten Methode. Bei diesem Assay handelt es sich um einen schnellen und sensitiven Biomarker-Test für die Frühdiagnose einer Endotoxin-vermittelten Sepsis.

Endotoxin Activity Assay: Ein Chemilumineszenz-basierter Bioassay zur Untersuchung der Endotoxinaktivität in Blutproben

Dieses Video beschreibt das turbidimetrische Format des Limulus-Amöbozyten-Lysat- oder LAL-Assays zur Abschätzung der Endotoxin-Kontamination in PEGylierten liposomalen Doxorubicin-Nanoformulierungen. Die Trübung der Lösung nach der Reaktion des Endotoxins mit dem LAL-Reagenz hilft bei der Abschätzung des Endotoxins in der Probe.

Turbidimetrischer Limulus-Amöbozyten-Lysat-Assay: Eine Technik zum Nachweis und zur Quantifizierung von Endotoxin-Kontamination in nanoformulierten Arzneimitteln

Dieses Video beschreibt einen Gel-Gerinnsel-Assay zur Bestimmung des Vorhandenseins von bakteriellen Endotoxinen in Nanoformulierungen unter Verwendung von Limulus Amöbozyten-Lysat, das aus den Blutzellen von Pfeilschwanzkrebsen gewonnen wird. Der Assay hilft bei der Prüfung auf Endotoxin-Kontamination von pharmazeutischen Produkten, einschließlich nanobasierter Formulierungen.

Gel-Gerinnsel-Limulus-Amöbozyten-Lysat-Assay: Eine Methode zum Nachweis von bakteriellem Endotoxin in Nanopartikelformulierungen

Dieses Video zeigt einen Assay zur Untersuchung der Toll-like Rezeptor (TLR)-abhängigen Aktivität der Transkriptionsfaktoren Kernfaktor-kappa-B (NF-κB) und Aktivatorprotein-1 (AP-1) in Makrophagen. Die TLRs lösen bei der Erkennung von schadensassoziierten molekularen Mustern (DAMPs) eine proinflammatorische Signalkaskade aus, die NF-κB und AP-1 aktiviert. Die manipulierten Reportermakrophagen produzieren bei Aktivierung von NF-κB und AP-1 ein sezerniertes embryonales alkalisches...

Ein Assay für die TLR-abhängige NF-&kcy;B/AP-1-Transkriptionsfaktor-Signalgebung in Makrophagen

Wir beschreiben ein Protokoll für die Filtration von Wasserproben mit einer Filterpatrone und die Extraktion von Umwelt-DNA (eDNA), ohne dass das Gehäuse aufgeschnitten werden muss, um den Filter zu entfernen. Dieses Protokoll wurde für das Metabarcoding von eDNA von Fischen entwickelt, ist aber auch auf eDNA aus anderen Organismen anwendbar.

Die Verwendung einer Filterpatrone für die Filtration von Wasserproben und Extraktion von Umwelt-DNA

Bestimmung der Pilzen Vielfalt innerhalb einer Umgebung ist eine Methode, bei der arbeitsmedizinischen Untersuchungen, gesundheitliche Gefahren zu identifizieren. Dieses Protokoll beschreibt DNA-Extraktion aus beruflichen Luftproben Amplifikation und Sequenzierung der Pilz ITS Regionen. Dieser Ansatz erkennt viele Pilzarten, die von traditionellen Bewertungsmethoden übersehen werden können.

Erfassung und Gewinnung von betrieblichen Luftproben für Analyse der Pilz DNA

Wir stellen hiermit ein Protokoll vor, um am Krankenbett die Endotoxinaktivität menschlicher Vollblutproben zu messen. Der Endotoxin Activity Assay ist ein einfacher Test und kann ein nützlicher Biomarker bei kritisch kranken Patienten mit Sepsis sein.

Endotoxin Activity Assay for the Detection of Whole Blood Endotoxemia in Critically Ill Patients

Verständnis der biologischen Zusammensetzung der Umwelt Feinstaub ist wichtig für das Studium der seine erheblichen Auswirkungen auf die Gesundheit und Krankheit zu verbreiten. Hier haben wir drei Arten von Bioaerosol Probenahmeverfahren und eine biologische Analyse der Luft Mikroben um in der Luft mikrobielle Gemeinschaften unter verschiedenen Umweltbedingungen besser zu erkunden.

Zusammensetzung und Verteilungsanalyse Bioaerosole unter verschiedenen Umweltbedingungen

Erkennung von Endotoxinen in Nanomaterialien stellt eine der großen Herausforderungen im Bereich der Nanomedizin. Hier präsentieren wir Ihnen eine Fallstudie, die beschreibt den Rahmen, bestehend aus drei verschiedenen LAL-Formaten, mögliche Endotoxin-Kontamination in Nanopartikel zu schätzen.

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Ein Makrophagen-Reporter-Zell-Assay zur Untersuchung der toll-like Receptor-vermittelten NF-kB/AP-1-Signalisierung auf adsorbierten Proteinschichten auf polymeren Oberflächen

Zuverlässige und präzise Formen der vor Ort einsetzbaren DNA-Analysen sind für viele Branchen entscheidend. Dieses Papier bietet zwei Methoden für die Umweltmikrobienanalyse im Feld: 1) die Isolierung mikrobieller DNA aus Umweltproben mittels eines biologischen Extraktions-Feldkits und 2) die Analyse der DNA über die Feld-qPCR-Einheit.

Mikrobielle DNA-Analyse im Feld mit einem biologischen Extraktions-Feldkit und einer Feld-qPCR-Einheit

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Air-abgetastete Filteranalyse für Endotoxine und DNA-Gehalt

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