Name: Vorhang-Flow-Säule: Optimierung der Effizienz und Empfindlichkeit (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-06-12T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 44 s
Description: Erfahren Sie die Optimierung von Vorhang-Flow-Säulen zur Steigerung von Effizienz und Empfindlichkeit in der HPLC. Diese Methode ermöglicht zuverlässige Spurenanalysen in Umweltwissenschaften und Forensik.

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Einer der Autoren (DK) bestätigt den Erhalt eines Australian Postgraduate Award.

Achtung: Bitte beachten Sie Sicherheitsdatenblätter (MSDS) für alle Materialien und Reagenzien vor der Verwendung (dh MSDS für Methanol). Achten Sie darauf, den Einsatz aller geeigneten Praktiken Sicherheit bei Lösungsmitteln und High Performance Liquid Chromatography (HPLC) Eluent Handhabung. Stellen Sie sicher, angemessene Nutzung von Engineering-Kontrollen von HPLC, Analysenwaage und Detektor Instrumentierung, und sorgen für die Verwendung persönlicher Schutzausrüstung (Schutzbrille, Handschuhe, Kittel, in voller Länge Hosen und geschlossene Schuhe). Hinweis: Dieses Protokoll enthält Anweisungen, wie eine CF-Säule auf einem HPLC-System mit einem UV-Vis-Detektor gekoppelt zu verwenden. Das Protokoll geschrieben wurde unter der Annahme der Leser grundlegende Kenntnisse und Erfahrung in der Chromatographie hat. 1. Aufbau von HPLC-Instrument Hinweis: Dieser Abschnitt kann geändert werden Bedürfnisse der Analysten zu entsprechen, das heißt, die Wahl der Lösungsmittel, Detektorwellenlänge und Geschwindigkeit Fluss,sind auf die Probe von Interesse geeignet ist. <ol><li> Bereiten Sie die HPLC - Instrument mit 100% Reinstwasser (zB Milli-Q - Wasser) für die Linie A und 100% Methanol Linie B als mobile Phase und reinigen die Pumpen nach Hersteller Anforderung. </li><li> Stellen Sie die UV-Vis-Detektor auf 254 nm. </li><li> Wählen Sie entweder eine Voreinspritzung Flow Split-Modus von Set-up oder eine Doppelpumpenfluss Set-up. Für die Split-Flow-Modus gehen Sie zu Schritt 2, für die Doppelpumpenmodus mit Schritt 3 fortfahren. </li></ol> 2. Split-Flow-System-Setup <ol><li> Trennen Sie die Pumpenleitung vom Einspritzventil des Autosampler. </li><li> Bringen Sie ein T-Stück an die Pumpenleitung. </li><li> Bringen Sie ein 15 cm großes Stück von 0,13 mm id Schlauch an jeden Port des T-Stück. </li><li> Schließen Sie ein Rohr aus dem T-Stück Ventil der Autosampler zu Injektor. </li><li> Stellen Sie die Pumpe auf 1,0 ml min -1. </li><li> Vor dem Anschluss Pumpenleitungen mit dem Einlass der CF-Säule, tune das Segmentierungsverhältnis der Strömung zu 40%: 6<html> 0% (Mittellinie: Umfangslinie) wie folgt in Schritt 2.7. </li><li> Tuning von CF Einlass-Verhältnis auf Split-Flow-System <ol><li> Messen Sie die Masse von zwei leeren Sammelbehältern einer Analysenwaage mit und beschriften ein Sammelgefäß zentrale und die andere Peripherie (eine für die Zeile aus dem Autosampler-Port und eine für die Linie von dem T-Stück zu Peripherie-Anschluss zum Zentrum) . </li><li> Für 1,0 min, sammeln den austretenden mobilen Phase von der Linie aus dem Injektor kommen (an der Stelle, die mit der Säule verbunden wird) in den Auffangbehälter, dessen Masse in 2.7.1 gemessen. </li><li> Erneut wiegen die Sammelbehälter im analytischen Maßstab und bestimmen die Masse der mobilen Phase gesammelt. </li><li> Wiederholen Sie die Schritte 2.7.2 für den Eluenten 2.7.3 die Zeile aus dem T-Stück austritt, die an den Peripherieanschluss verbunden werden soll. </li><li> Bestimmen den Anteil der Strömung (ml min -1) aus jeder Zeile der Strömung gemäß den folgenden Gleichungen: 1 &quot;src =&quot; / files / ftp_upload / 53471 / 53471eq1.jpg &quot;/&gt; </li><li> Stellen Sie den Stromverhältnis auf 40%: 60% (± 2%) (Leitung vom Injektor zum zentralen Anschluss: Linie von T-Stück zu Peripherie - Anschluss). Wenn die Zeile von dem Injektor zu dem zentralen Lochströmungs Prozentsatz über 40% ist, erhöhen den Druckabfall durch den Innendurchmesser des Schlauchs abnimmt, oder die Erhöhung seiner Länge. Wenn die Linie von Injektors zentralen Port Strömungs Prozentsatz unter 40% ist, erhöhen Innendurchmesser des Schlauchs oder der Länge des Rohrs zu verringern. </li><li> Sobald die Strömungsverhältnisse abgestimmt setzen Sie die Pumpe fließen. </li><li> Schließen Sie die Leitung vom Injektor zum zentralen Anschluss des Säuleneingang und der Leitung vom T-Stück an den Peripherieanschluss des Säuleneingang. </li><li> Rampe langsam die Fließgeschwindigkeit auf 1,0 ml min -1 bei 100% Linie B. </li><li> Äquilibrieren der Säule (4,6 mm ID x 100 mm Länge), indem100% Methanol (Linie B) mobile Phase fließt durch die Säule bei 1,0 ml min -1 für 10 min. Diese Zeit wird skaliert entsprechend den Abmessungen anderer Spalten der Benutzer verwenden kann. </li><li> Gehen Sie für die Abstimmung des CF-Auslass 4 &#39;Tuning von CF Abstrom&#39; zu Schritt. </li></ol></li></ol> 3. Dual-Pump System-Setup <ol><li> Schließen Sie das HPLC-System Pumpe zum Injektor und schließen dann die Leitung vom Injektor zum zentralen Einlassöffnung der Säule. </li><li> Schließen Sie die zusätzliche Pumpe direkt mit dem Einlass Peripherieschnittstelle der Kolonne. Beachten Sie, dass diese zweite Pumpe den Injektor-Bypässe. </li><li> Rampe die Strömungsgeschwindigkeit des Systempumpe mit dem zentralen Anschluss angeschlossen bis 0,4 ml min -1 (repräsentativ für 40% der Gesamtströmungsrate von 1,0 ml min -1) bei 100% Methanol (Linie B). </li><li> Zur gleichen Zeit wie Schritt 3.3, Rampe der Flussrate des peripheren Pumpe auf 0,6 ml min -1 (repräsentativ für 60% der Gesamtströmungsgeschwindigkeit von1,0 ml min -1) bei 100% Methanol (Linie B). </li><li> Äquilibrieren der Säule (4,6 mm ID x 100 mm Länge) , indem sie 100% Methanol (Linie B) mobile Phase durch die Säule fließen bei 1,0 ml min -1 für 10 min. Diese Zeit wird skaliert entsprechend den Abmessungen anderer Spalten der Benutzer verwenden kann. </li><li> Gehen Sie für die Abstimmung des CF-Auslass 4 &#39;Tuning von CF Abstrom&#39; zu Schritt. </li></ol> 4. Tuning von CF Ausgang Fluss <ol><li> Schließen Sie den zentralen Austrittsöffnung mit dem UV-Vis-Detektor ein 15 cm großes Stück von 0,13 mm id Schlauch verwenden. </li><li> Verbinden eines 15 cm Stück von 0,13 mm id Schlauch an der peripheren Austrittsöffnung der CF-Säule. </li><li> Wiegen Sie die Masse von zwei leeren Sammelbehältern auf der Analysenwaage und beschriften Sie ein Gefäß zentrale und die anderen Peripherie. </li><li> Für 1,0 min, sammeln den austretenden mobilen Phase aus dem UV-Vis-Detektor (Mittelfluss) in den Auffangbehälter Etikett zentrale, dessen Masse in 4,2 gemessen. </li><li> Erneut wiegen die Sammelbehälter des gesammelten Eluenten im analytischen Maßstab und bestimmen die Masse der mobilen Phase gesammelt enthält. </li><li> Wiederholen Sie die Schritte 4,4-4,5 für das Eluierungsmittel die Leitung von der peripheren Austrittsöffnung austritt. </li><li> Bestimmen den Prozentsatz der Strömung von jedem Strömungslinie gemäß den folgenden Gleichungen: <img alt="Gleichung 2" src="/files/ftp_upload/53471/53471eq2.jpg" /></li><li> Stellen Sie den Stromverhältnis auf 21%: 79% (± 2%) (zentrale Abstrom von UV-Vis: periphere Abstrom aus der Leitung). Wenn der zentrale Strömung Prozentsatz von der UV-Vis von über 21%, erhöhen Sie den Druckabfall durch den Innendurchmesser der Rohrleitung zum Ausgang des UV-Vis-Detektor angebracht Verringern oder Erhöhen seiner Länge. Wenn der zentrale Strömungs Prozentsatz vom UV-Vis unter 21% ist, erhöhen Innendurchmesser der Rohrleitung zum Ausgang des UV-Vis-Detektor angebracht ist, oder die Länge des Rohres zu verringern. Jedesmal, wenn die Rohrlänge geändert wurde, repeatSchritte 4,3-4,7. Hinweis: Die CF-Spalte in &quot;virtuellen&quot; 2,1 mm-ID-Modus für die Analyse bereit ist. </li></ol>

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</ol>

Diese Arbeit wurde von der UWS und ThermoFisher Scientific unterstützt.

Diese Studie umfasste die Inter-Laboranalyse von CF Chromatographiesäulen die analytische Leistungsfähigkeit in Bezug auf Effizienz und Empfindlichkeit zu testen. Die CF-Säule wurde mit einem Doppelpumpsystem eingerichtet, wie im Abschnitt &#39;3 beschrieben. Doppelpumpensystem eingerichtet &#39;ein Stromverhältnis von 40:60 zu erreichen (Mitte: periphere) am Einlass der CF-Säule. Das 40:60 (Mitte: periphere) Flussverhältnis wurde durch Einstellen der Flussrate jeder Pumpe auf den Wert erreicht, 40% und 60% der Gesamtfl...

In den letzten Jahren Säulentechnologie für High Performance Liquid Chromatography (HPLC) hat große Fortschritte gemacht; Spitzenleistungen haben sich vor allem dank der Verwendung von kleineren Partikelgrößen und den effizienteren Kern-Schale-Teilchen erhöht. Da Trennungen im Allgemeinen effizienter sind, einen Strömungs-Effekt der Steigerung der Empfindlichkeit seit Peaks nun schärfer sind und somit höher 1-8. Dennoch ist das radiale Bett Heterogenität immer noch ein limitierender Faktor bei der Erfüllung aller Spalten, aber dies ist keine neue Geschichte seit chromatographers dies seit vielen Jahren bekannt. Spalte Betten sind heterogen in sowohl radialer Richtung 9-12 und entlang der Spaltenachse 10,12-15. Die Wand-Effekt vor allem ist ein wichtiger Faktor für den Verlust der Trennleistung 7,16-18. Shalliker und Ritchie 7 kürzlich Aspekte der Säulenbett Heterogenität überprüft und daher muss dies nicht sein discussed hier weiter. Obwohl es genügt zu sagen, dass die Variation in Säulenbettpackungsdichte und die Wandeffekte zu einer Verzerrung des gelösten Stoffes Stecker führen, so dass Bänder durch die Säule in Stecker eluieren , die Suppe teilweise gefüllt ähneln Schalen anstatt dünne flache feste Scheiben 7, die in der Regel in grundlegende Lehre Texte dargestellt. Wenn Versuche unternommen wurden, so dass der gelöste Stoff Wanderung durch das Bett in der Säule die Steckprofile sichtbar gemacht werden konnten, waren teilweise hohl und der Tailing Abschnitt des Bandes ist weitgehend die Wandkomponente des Beispiel-Plug. Das Endergebnis ist , dass es viel mehr Platten zu trennen , diese &#39;teilweise hohl&#39; Stecker nimmt als erforderlich wäre , wenn die Scheiben waren solide und flach 12,14,17. Um die Bandenverbreiterung Fragen im Zusammenhang mit Wandeffekte und der Variation der Radialpackungsdichte, eine neue Form der Säulentechnologie bekannt als Aktive Flow Technology (AFT) überwunden wurde 7,19 entworfen. Der Zweck dieser Konstruktion warWandeffekte durch die physische Trennung von Lösungsmittel eluierenden entlang der Wandbereich, von der der mobilen Phase eluiert wird in der radialen Mittelbereich der Säule 19 zu entfernen. Es gibt zwei Haupttypen von AFT Spalten; Parallel Segmented Flow (PSF) Spalten und Curtain Flow (CF) Spalten 7. Da dieses Protokoll bei der Verwendung und Optimierung von CF Spalten ausgerichtet ist, wird nicht PSF Spalten weiter diskutiert. Curtain Flow (CF) Curtain Flow (CF) -Säule Formate verwenden AFT End-Fittings sowohl dem Einlass und dem Auslass der Säule. AFT End-Armaturen bestehen aus einer ringförmigen Fritte innerhalb eines Multiport-Fitting befindet. Die Fritte besteht aus drei Teilen: einem porösen radial zentralen Abschnitt, der mit dem zentralen Anschluss der Endarmatur, einem porösen äußeren Teil ausgerichtet ist, die mit der Peripherieschnittstelle (n) des Endstückes und einer undurchlässigen Ring ausgerichtet ist, dass trennt die beiden porösen Teile irgendwelche Quer verhindern-flow zwischen den radial zentralen und äußeren Bereichen der Fritte 19, Fig . 1 die Konstruktion der AFT Fritte zeigt und Figur 2 veranschaulicht die CF Spaltenformat. In dieser Betriebsart (CF) wird die Probe in die radiale zentrale Öffnung des Einlasses injiziert Einbau, während zusätzliche mobile Phase wird durch die Umfangsöffnung des Einlaß einzuführenden &quot;Vorhang&quot; die Wanderung der gelösten Stoffe durch den radial mittleren Bereich des Spalte. Daher tritt die Probe das Bett in der radialen Mittelbereich der Säule mit dem äußeren Bereich der Kolonne mobilen Phase nur durchströmt ist. Studien haben gezeigt , dass ein Volumenstrom - Verhältnis von etwa 40:60 (central: Peripherie - Anschluss) für das Einlassende sitz eines 4,6 mm Innendurchmesser (id) Spalte optimale 6,7,16 ist. Die AFT Ausgang der CF-Säule ermöglicht die Anpassung des zentralen und peripheren Strömungs ihrem relativen Anteil und kann auf fast jede gewünschte rati variiert werdeno durch Druckmanagement. Die Optimierung einer CF Säule kann verschiedene funktionale Aspekte der Säulentechnologie, wie Abscheidegrad oder Nachweisempfindlichkeit signifikant verbessern. Auf diese Weise wird eine &quot;wandlosen&quot;, &quot;unendlich-Durchmesser&quot; oder &quot;virtuelle&quot; Spalte 6,10,18,20 etabliert. Der Zweck CF Spalten ist aktiv, die Migration von Probe durch die Säule zu verwalten, die Probe zu verhindern, dass der Wandbereich erreicht. Somit wird die Konzentration des gelösten Stoffes beim Austritt zu dem Detektor maximiert, Erhöhung der Empfindlichkeit von etwa 2,5 mal größer als die herkömmlichen Säulenformat wenn ultraviolette (UV) Detektion unter Verwendung von 16, und noch mehr , wenn 6 Massenspektralanalyse Detektion. CF Säulen sind ideal für niedrige Konzentration Proben geeignet, da die Nachweisempfindlichkeit erhöht wird. Sie sind ferner ideal , wenn gekoppelt Rate begrenzt Detektoren, wie beispielsweise das Massenspektrometer (MS) 6 fließen. Ein AFT-Säule in einem 4,6 mm-ID-Format, kann beispielsweise abgestimmt werden, um das gleiche Volumen Lösungsmittel zu einem Detektor als Standard 2,1 mm ID-Format Spalte, wenn an den gleichen linearen Geschwindigkeiten betrieben zu liefern, durch Verlassen zentralen Strömungs auf 21% eingestellt wird. Ebenso ist die AFT Spalte auch abgestimmt werden, um das gleiche Volumen Belastung auf einen Detektor als 3,0 mm ID-Säule, durch die Einstellung Verlassen zentralen Strömungs auf 43% zu liefern. In der Tat könnte eine &quot;virtuelle&quot; Spaltenformat erzeugt werden 6,18,22 die analytische Anforderung gerecht zu werden . Unter Verwendung dieser speziell End-Armaturen am Einlass und dem Auslass sorgt dafür, dass eine wahre wandlosen Säule hergestellt wird. Es gibt zwei Möglichkeiten , um die Lösungsmittelfördersystem an die zentralen und peripheren Ports des Einlasses einzurichten:. Split-Flow - System 6 und zwei Pumpsystem 6,7 Abbildung 3 jedes dieser Satz ups CF - System zeigt. Split-Flow - System ichna split-Strömungssystem (3A) die Strömungspumpe mit dem Injektor führende gespalten pre-Injektor einen Null-Totvolumen - T-Stückes, wo der mobilen Phase einen Fließstrom mit dem Injektor verbunden ist, die dann an den verbundenen zentrale Öffnung des Einlaßendes sitz der Säule. Der zweite Durchflussstrom der mobilen Phase-Bypässe den Injektor und an die Peripherieschnittstelle an dem Einlass der Säule verbunden. Während des Spaltströmungs wird der Strömungsstrom Prozentsatz bis 40:60 (Mitte: peripher) eingestellt , bevor die Leitungen mit der Säule verbunden sind, dh von Injektors peripher zu zentrieren und zu pumpen. Zwei Pumpsystem Die CF-Säule erfordert zwei Fließströme an dem Einlaßende sitz der Säule. Je nach Art der Probengeber / Injektor des HPLC - Instrument, Split-Flow einrichten kann nicht möglich sein, und so CF kann dann durch zwei Pumpen (3B 21) erreicht werden ,. Jede Pumpe zugeordnet ist und die entweder mit dem zentralen oder peripheren Anschluss und die Strömungsgeschwindigkeit wird 40% der Strömung für die zentrale Port und 60% für die Peripherieschnitt darzustellen. Wenn beispielsweise die Gesamtdurchflussrate von 1,0 ml min -1 ist, wird die zentrale Pumpenströmungsrate auf 0,4 ml min -1 eingestellt und die Umfangs Pumpe auf 0,6 ml min -1 eingestellt. Die Wahl des Betriebsmodus ist weitgehend abhängig von der HPLC Instrumentierung und chromatographische Wirkungsweise. Zum Beispiel in einigen Autosampler eine Druckänderung zwischen den Probenladeposition und Probe injizieren Position des Split-Flow-Verhältnis zu stören und somit in diesem Fall eine Doppelpumpe aufgebaut werden würde für eine optimale Leistung CF auftreten kann empfohlen. Unabhängig von der Lösungsmittelabgabesystem eingerichtet gewählt für den Einlass der CF-Säule, die CF-Ausgang Optimierung bleibt gleich. Der Auslass zentralen Port des CF Spalte wird der UV-VIS (UV-Vis) -Detektor mit der Smal befestigtdamit Volumen möglich Rohr die Auswirkungen der säulennachgeordneten Totvolumen zu minimieren. Da CF Säulen mit enger Bohrung Spalten emulieren Totvolumen zwischen dem Säulenausgang und dem Detektor ist die Trennleistung der Säule CF schädlich. Es ist entscheidend, die kleinste Menge an Volumen des Schlauchs zwischen dem zentralen Anschluss und dem UV-Vis-Detektor zur Minimierung der Auswirkungen von Totvolumen wie Bandverbreiterung, Verlust an Effizienz und Empfindlichkeit zu gewährleisten. Daher ist die Verwendung von engen Bohrung Schlauch (0,1 mm ID) empfohlen, leicht Druckeinstellungen ermöglichen, ohne unangemessene Totvolumen hinzufügen. Tubing ist auch an den Peripherieanschluss und gerichtet angebracht zu verschwenden. Nach dem Austritt der CF-Säule kann das Segmentierungsverhältnis zu jedem Verhältnis eingestellt werden, die den Zweck des Analytikers passt. Wenn ein 4,6 mm-ID CF verwendet wird, zum Beispiel, ist es oft praktisch ist das Verhältnis als entweder 43:57 oder 21:79 (Mitte: periphere) zur Einrichtung einer &quot;virtuellen&quot; 3,0 mm ID-Säule oder 2,1 mm ID-Säule zu emulieren,respektvoll. Auf diese Weise die Trennleistung ist leicht Bank markiert. Der Segmentierungsverhältnis wird durch Wiegen der Menge des Flusses gemessen von dem Detektor austritt, die mit dem zentralen Anschluss verbunden und fließen, um die Peripherieschnittstelle über einen Zeitraum Zeit verlassen. Der Prozentsatz Fluss durch jeden Port kann dann bestimmt werden, und die Verhältnisse durch Änderung der Länge der Rohrleitung befestigt oder mit Hilfe von Schläuchen, die einen unterschiedlichen Innendurchmesser (id) hat eingestellt werden. Dieses Video-Protokoll beschreibt die Bedienung und Optimierungsverfahren von einer CF-Säule für eine verbesserte chromatographische Leistung.

<table><tbody><tr><td>HPLC-Instrument</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Zusätzliche Pumpe</td><td></td><td></td><td>erforderlich, wenn ein CF-System mit 2 Pumpen eingerichtet werden soll.</td></tr><tr><td>Curtain Flow HPLC-Säule</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>Nicht definiert</td><td>Demnächst kommerzialisiertes</td></tr><tr><td>Methanol</td><td>Jede Marke</td><td></td><td>HPLC-Qualität</td></tr><tr><td>PEEK-Schläuche</td><td>Jede Marke</td><td></td><td>Verschiedene Längen und Innendurchmesser</td></tr>;<tr><td>PEEK-Röhrchenschneider</td><td>Jede Marke</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Analysenwaage</td><td>Waage Jede Marke</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Stoppuhr</td><td>Jede Marke</td> Eluentensammelgefäße Jede Marke <td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>1-2 ml Probenfläschchen jeder Marke können als Eluentensammelgefäße verwendet werden</td><td></td> T-Stück Jede Marke <td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

vorhang-flow-säule: optimierung der effizienz und empfindlichkeit

Curtain Flow Column: Optimization of Efficiency and Sensitivity

Active Flow Technology (AFT) ist eine Form der Säulentechnologie, die die Trennleistung einer HPLC-Säule durch die Verwendung eines speziell angefertigten Multiport-Endstücks erhöht. Curtain Flow (CF)-Säulen gehören zur AFT-Säulenreihe, insbesondere ist die CF-Säule so konstruiert, dass die Probe in den radialen zentralen Bereich des Bettes injiziert wird und eine Vorhangströmung aus mobiler Phase, die die Injektion des gelösten Stoffes umgibt, die radiale Dispersion der Probe an der Wand verhindert. Die Säule fungiert als Spalte mit unendlichem Durchmesser. Der Zweck des Designs besteht darin, die radiale Heterogenität des Säulenbetts zu überwinden und gleichzeitig die Probenlast in den radialen Mittelbereich des Säulenbetts zu maximieren, was dazu dient, die Detektionsempfindlichkeit zu erhöhen. Das hierin beschriebene Protokoll beschreibt das System und die CF-Säule sowie den Abstimmungsprozess für eine optimierte "virtuelle" Säule mit unendlichem Durchmesser.

AFT Säulen wurden mit einem speziellen Fritte Design (Abbildung 1) in den Multiport - Säulenende-Armaturen entwickelt , um die Säulenbett Heterogenität überwinden und Trennleistung zu verbessern. Ein Interlabor - Studie über die Trennleistung von CF - Chromatographiesäulen (Abbildung 2) wurde mit einem Doppelpumpensystem eingerichtet (3B) durchgeführt , wie in Abschnitt 3 dieses Protokolls 23 beschrieben. Ein Drei-Komponenten-...

Hier präsentieren wir ein Protokoll für den Betrieb und die Optimierung der Active Flow Technology (AFT)-Säule im Curtain Flow (CF)-Modus für eine verbesserte Trennleistung.

Vorhang-Flow-Säule: Optimierung der Effizienz und Empfindlichkeit

Active Flow Technology (AFT) is a form of column technology that increases the separation performance of a HPLC column through the use of a specially ...

Das übergeordnete Ziel dieser Methode besteht darin, die Effizienz und Empfindlichkeit einer Trennung durch die Optimierung einer Curtain-Flow-Säule zu verbessern. Diese Methode kann helfen, zentrale Fragen im Bereich der Umweltwissenschaften, der Forensik und in Bereichen zu beantworten, die die Analyse von Spurenproben erfordern, wo eine effiziente und hochsensitive Trenntechnik benötigt wird. Der Hauptvorteil dieser Technik liegt darin, dass sie die Effizienz einer Trennung und die Empfindlichkeit der Analyse im Vergleich zu konventionellen HPLC-Trennmethoden erhöht.Diese Methode kann eine Möglichkeit bieten, die Trennleistung und damit die Geschwindigkeitskapazität auf wirtschaftliche und zeiteffiziente Weise zu erhöhen. Die Vorhangfluss-Säule ist ein neues Konzept für Anwender der HPLC, ihre Anwendung ist jedoch nicht kompliziert. Es erfordert lediglich die Optimierung geeigneter Flussratenverhältnisse.Zunächst bereiten Sie Flaschen mit 100 Prozent ultrareinem Wasser und 100 Methanol für die mobilen Phasen A und B des HPLC-Geräts vor. Entlüften Sie die Pumpen gemäß den Herstelleranforderungen. Nach der Entlüftung trennen Sie die Pumpenleitung vom Injektorventil des Autosamplers.Befestigen Sie ein T-Stück an der abgetrennten Leitung. An jeden Anschluss des T-Stücks schließen Sie Schläuche mit einem Innendurchmesser von 0,13 Millimetern und einer Länge von 15 Zentimetern an. Verbinden Sie einen Schlauch vom T-Stück mit dem Injektorventil des Autosamplers.Schließlich stellen Sie die Pumpe auf eine Flussrate von einem Milliliter pro Minute ein. Tarieren Sie zwei leere Sammelgefäße und beschriften Sie sie mit „zentral“ und „peripher“. Sammeln Sie 60 Sekunden lang mit dem mit „zentral“ gekennzeichneten Gefäß die austretende mobile Phase aus der Leitung, die vom Injektor kommt.Wiegen Sie das zentrale Gefäß erneut und ermitteln Sie die Masse der gesammelten mobilen Phase. Wiederholen Sie diesen Vorgang, indem Sie den Durchfluss aus dem peripheren Anschluss mit dem peripher markierten Gefäß auffangen. Bestimmen Sie den Prozentsatz des Durchflusses oder Milliliter pro Minute aus jeder Leitung mithilfe der angegebenen Gleichungen.Der zentrale Port sollte etwa 40 Prozent betragen und der periphere Port etwa 60 Prozent. Wenn die Werte um mehr als zwei Prozent voneinander abweichen, ändern Sie die Schlauchlänge oder den Durchmesser, um das Strömungsverhältnis anzupassen. Wiederholen Sie dann die Sammel- und Berechnungsschritte.Danach pumpen Sie den Durchfluss ab und schließen die Injektorleitung an den zentralen Anschluss der Säuleneinlassöffnung an. Schließen Sie außerdem die Leitung vom T-Stück an den peripheren Anschluss des Säuleneinlasses an. Erhöhen Sie den Durchfluss langsam auf einen Milliliter pro Minute mit 100 Prozent mobiler Phase B. Zum Abschluss der Systemeinstellung lassen Sie 100 Prozent Methanol mit einem Durchfluss von einem Milliliter pro Minute zehn Minuten lang durchlaufen, um die Säule zu equilibrieren.Verbinden Sie zunächst mithilfe eines Schlauchs den zentralen Auslassstutzen mit dem UV-Vis-Detektor. Verbinden Sie einen Schlauch desselben Typs und derselben Länge mit dem peripheren Auslassstutzen der CF-Säule. Stellen Sie anschließend die Pumpe auf eine Flussrate von einem Milliliter pro Minute ein.Wägen Sie zwei leere Sammelgefäße ab und beschriften Sie eines erneut als zentrales und eines als peripheres Sammelgefäß. Sammeln Sie 60 Sekunden lang mit dem als zentral beschrifteten Gefäß die austretende mobile Phase aus dem UV-Vis-Detektor. Wiegen Sie das Sammelgefäß erneut, um die Masse der eluierten Lösung zu bestimmen.Wiederholen Sie diesen Vorgang mit dem peripheren Auslassstutzen und dem gekennzeichneten Sammelgefäß. Bestimmen Sie nun den prozentualen Durchfluss aus jeder Leitung, wie zuvor beim Einlassstrom durchgeführt. Der UV-Vis-Zweig sollte 21 Prozent betragen, und der periphere Auslassstrom sollte 79 Prozent betragen.Wenn das Flussverhältnis signifikant abweicht, passen Sie die Größe des Schlauchs, der am Ausgang des UV-Vis-Detektors angebracht ist, an, um den zentralen Flussanteil zu verändern. Es ist wichtig, dass die Flussverhältnisse zwischen zentralem und peripherem Bereich am Einlass und Auslass der Säule diesem Protokoll folgen, um eine optimale Leistung der Vorhangfluss-Säule sicherzustellen. Säulen mit aktiver Flusstechnologie wurden unter Verwendung eines speziellen Fritte-Designs in den Mehrloch-Säulenendstücken entwickelt, um die Heterogenität des Säulenbetts zu überwinden und die Trennleistung zu verbessern.Eine Testmischung, die Phenetol, Butylbenzol und Pentylbenzol enthielt, wurde an herkömmlichen Säulen mit 4,6 und 2,1 Millimeter Innendurchmesser sowie an einer Curtain-Flow-Säule mit 4,6 Millimeter Innendurchmesser analysiert. Die Trennung der Mischung verdeutlicht die verbesserte Leistung einer Curtain-Flow-Säule hinsichtlich Effizienz und Empfindlichkeit im Vergleich zu Standard-Säulen. Die Verwendung einer Curtain-Flow-Säule erhöhte das Signal für Butylbenzol, obwohl das Peakvolumen reduziert war.Wenn die Technik einmal beherrscht ist, kann sie bei ordnungsgemäßer Durchführung in weniger als einer halben Stunde eingerichtet werden. Die Säulenkonfiguration mit Vorhangfluss kann immer wieder verwendet werden, aber die Flussratenverhältnisse müssen regelmäßig überprüft werden. Bei der Durchführung dieses Verfahrens ist es wichtig, stets möglichst nahe an den vorgeschriebenen Flussratenverhältnissen zu bleiben.Die Vorhangfluss-Säule hat den Weg für Forscher auf dem Gebiet der HPLC geebnet, um die Grenzen der Säulen und UPLC-Instrumente zu erweitern und schnellere Probenauswertungen zu erzielen, ohne die Trennleistung zu beeinträchtigen. Nach dem Ansehen dieses Videos sollten Sie die Bedeutung von Vorhangfluss-Säulen verstehen, da sie eine bessere Trennung als herkömmliche HPLC-Säulen ermöglichen können.

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Research

Forschung

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Chemistry

Chemie

Ein automatisiertes Verfahren zur Identifizierung von geeigneten hydrophoben Interaktionschromatographie (HIC) Medien, die in dem Verfahren der Proteinreinigung verwendet werden vorgestellt. Das Verfahren nutzt eine Mitteldruck-Flüssigkeits-Chromatographie-System einschließlich automatisierter Puffer Blending, dynamisches Probenschleife Injektion, sequentielle Spalte Auswahl, Multi-Wellenlängen-Analyse-und Split-Fraktion Eluat Sammlung.

Automatisierte Hydrophobe Interaktions-Chromatographie Spaltenauswahl für den Einsatz in Protein Purification

Wir beschreiben eine Methode, um unter adhärenten Zellen eine laminare Strömung Schubspannung in einem sterilen kontinuierlichen Kreislauf. Die Zellen "Haftung kann Morphologie durch die transparente Kammer untersucht werden, Proben aus der Schaltung für Metabolit-Analyse und-Zellen nach Scher-Belastung für zukünftige Experimente oder Kultur geerntet wurden.

Parallel-Platten-Flow-Kammer und Continuous Flow Circuit endothelialen Vorläuferzellen unter Laminar Flow Schubspannung Bewerten

Hier präsentieren wir ein Protokoll für den Betrieb und die Abstimmung von parallelen segmentierten Durchflusschromatographiesäulen, um eine Multiplexdetektion zu ermöglichen.

Abstimmen eines Parallel Segmented Flow Säule und Aktivieren von Mehrfachanalysen

Es wird ein Protokoll für die Verwendung von Reaktionsfluss-Hochleistungsflüssigkeitschromatographiesäulen für Methoden vorgestellt, die Post-Säulen-Derivatisierung (PCD) verwenden.

Nachsäulenderivatisierung Mit Reaktionsfluß High Performance Liquid Chromatography Columns

Thermische Grenzwerte können die Umwelt, die Organismen tolerieren, vorhersagen, was angesichts des raschen Klimawandels wertvolle Informationen ist. Hier werden Protokolle mit hohem Durchsatz beschrieben, um kritische thermische Minima und Wärmeabstoßzeiten bei Insekten zu bewerten. Beide Protokolle maximieren den Durchsatz und minimieren die Kosten der Assays.

High-Throughput-Tests kritischer thermischer Grenzwerte bei Insekten

Hier stellen wir Ihnen ein Protokoll für das optimierte FlashPack Kapillarsäulenpackungsverfahren vor. Die Anwendung eines optimierten Protokolls auf ein gängiges 100-bar-Druckbomben-Setup ermöglicht ein 10-mal schnelleres Verpacken und Herstellen von langen Ultra-Hochleistungs-Kapillarsäulen.

Einfache Inhouse-Herstellung von Ultra-Hochleistungs-Kapillarsäulen mit dem FlashPack-Ansatz

Hier stellen wir die Methode der Reichweitenanalyse vor, um die durch ein orthogonales Versuchsdesign generierten Probenpunkte zu optimieren, um sicherzustellen, dass frische Lebensmittel durch Regulierung des Luftstrommusters lange Zeit in einer belüfteten Box gelagert werden können.

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Hier stellen wir die adaptive simulierte Annealing-Methode (ASAM) vor, um ein approximatives quadratisches Reaktionsflächenmodell (QRSM) zu optimieren, das einem staubigen, mit Feinstaub bedeckten Batteriewärmemanagementsystem entspricht, und die Temperaturabfälle durch Anpassung der Luftströmungsgeschwindigkeitskombination von Systemeinlässen zu kompensieren.

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Vorhang-Flow-Säule: Optimierung der Effizienz und Empfindlichkeit

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