Milchsammlung in der Ratte Mit Kapillarröhrchen und Schätzung der Milchfettgehalt von Creamatocrit

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, zu beschreiben, wie Milch von einer laktierenden Ratte manuell für die Laboranalyse der Milchzusammensetzung entnommen werden kann. Diese Methode kann verwendet werden, um wichtige Fragen im Bereich der Gesundheit von Müttern und Kindern zu beantworten, z. B. wie die Ernährung von Müttern die Milchzusammensetzung beeinflussen kann. Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass sie von einem einzigen Untersucher ohne spezielle Vakuum- oder Absauggeräte durchgeführt werden kann.

No.To beginnen, trennen Sie die Hündin vor dem Melken mindestens fünf Minuten lang von ihren Nachkommen. Sammeln Sie als Nächstes alle Materialien, die für den Melkvorgang benötigt werden, wie hier gezeigt. Legen Sie dann ein saugfähiges Bankpolster auf einen beheizten Operationstisch oder verwenden Sie ein separates Wärmekissen, um einen Wärmeverlust des Muttertiers während des Melkvorgangs zu verhindern.

Überprüfen Sie anschließend das Anästhesiesystem, um sicherzustellen, dass das System vor dem Eingriff über ausreichend Sauerstoff und Iso-Fluor verfügt. Befestigen Sie dann die Maske, die für die Erstanästhesieeinleitung verwendet wird, an der Maschine und stellen Sie die Erhaltungsmaske in die Nähe. Öffnen Sie den Sauerstofftank und stellen Sie den Durchfluss auf einen Liter pro Minute ein.

Schalten Sie dann den Fluss von Isof-Fluor ein und stellen Sie den Durchfluss auf 5% ein. Schalten Sie den Damm nach der Betäubung auf die Erhaltungsmaske um. Bestätigen Sie ein ausreichendes Maß an Anästhesie, indem Sie überprüfen, ob kein Pedalreflex vorhanden ist. Lege dann den Damm in Rückenlage auf die saugfähige Bankauflage.

Reduzieren Sie den Isof-Fluorfluss auf zwei bis 3 %Überwachen Sie den Damm während des gesamten Eingriffs kontinuierlich und passen Sie den Isof-Fluorfluss nach Bedarf an, um Schmerzen und Atemdepression zu vermeiden. Verwenden Sie anschließend ein steriles Alkoholtuch oder ein Reinigungspad, um ein Fläschchen mit Oxytocin mit einer Ein-Milliliter-Spritze zu desinfizieren, die mit einer 25-Gauge-Nadel ausgestattet ist, und ziehen Sie 0,1 Milliliter Oxytocin auf. Führen Sie dann die Nadel in den unteren rechten Quadranten des Bauches des Muttertiers ein, wobei die Nadel in einem Winkel von 15 bis 30 Grad, etwa 0,5 Zentimeter tief, zum Kopf zeigt.

Ziehen Sie den Kolben zurück, um vor der Injektion einen Unterdruck zu gewährleisten. Wenn keine Flüssigkeit aspiriert wird, injizieren Sie das Oxytocin und entsorgen Sie die Nadel und die Spritze sofort in einen Behälter für biologische Gefährdung. Warten Sie etwa fünf bis 15 Minuten, bis das Oxytocin die Milch stimuliert.

Lassen Sie während dieser Zeit die Behälter aus, aus denen die Milch gesammelt wird. Verwenden Sie Trimmer, um das Fell um die ausgewählten Tüten herum vorsichtig zu entfernen, da das Fell Schwierigkeiten bei der Probenentnahme verursachen kann. Anschließend die Tets mit lauwarmem Wasser reinigen.

Bereiten Sie mindestens zwei Standorte vor, da für die Milchannahme mehr als ein Standort erforderlich sein kann. Sobald die Milch abgelassen ist, drücken Sie vorsichtig auf den Boden des Tet, um die Milch manuell auszustoßen. Zum Sammeln sammeln Sie die Milchtröpfchen in einem 50-Mikroliter-Kapillarröhrchen.

Sobald sie voll ist, geben Sie die Milch aus dem Kapillarröhrchen in ein steriles Mikrozentrifugenröhrchen, indem Sie das Ende des Röhrchens berühren, mit dem die Milch aus dem Sauger an die Seite des Mikrozentrifugenröhrchens gezogen wurde. Verwenden Sie dann eine 18-Gauge-Nadel, die an einer Ein-Milliliter-Spritze befestigt ist, um die Milch auszublasen, die nicht in das Röhrchen gezogen wurde. Wiederholen Sie die Milchsammlung und geben Sie sie in das Mikrozentrifugenröhrchen, bis genügend Milch aufgefangen wurde.

Versuchen Sie für die gewählte Analyse, die Gesamtzeit, in der der Damm unter Narkose steht, auf weniger als eine Stunde zu begrenzen. Wenn das Melken abgeschlossen ist, schalten Sie den Fluss von Isof-Fluor und Sauerstoff aus und entfernen Sie die Maske vom Muttertier. Überwachen Sie den Damm so lange, bis er wieder genügend Bewusstsein erlangt hat, um das sternale Liegerad aufrecht zu erhalten.

Wenn keine weiteren Analysen erforderlich sind, die Milch bei minus 80 Grad blasen. Zur Vorbereitung der CCR-Messung füllen Sie 15 bis 20 Mikroliter Milch direkt aus dem Tet in ein Mikrohämatokritröhrchen. Versiegeln Sie dann das Ende des Rohres mit einem Tondichtmittel.

Legen Sie das Kapillarröhrchen mit der Dichtungsdelle nach außen in den Hämatokrit-Spinner und stellen Sie sicher, dass die Zentrifuge ausbalanciert ist. Dann wird die Probe zwei Minuten lang mit 13.700 G gedreht. Sobald sich die Probe fertig gedreht hat, nehmen Sie das Röhrchen aus der Zentrifuge.

Beobachten Sie die Probentrennung in eine Cremeschicht und eine klare Schicht. Messen und notieren Sie die Gesamtlänge der Flüssigkeit im Schlauch und die Länge der Fett- oder Cremeschicht mit einem Lineal oder Messschieber. Verwenden Sie diese Informationen, um die CCR zu berechnen, wie im Begleittextprotokoll beschrieben, um zu bestimmen, wie sich die Ernährung während der Schwangerschaft und Stillzeit auf die Milchzusammensetzung auswirkt.

Milchproben wurden bei der Entwöhnung von Worcester-Muttertieren entnommen, die entweder mit einem hohen Proteingehalt, einem hohen präbiotischen Ballaststoffgehalt oder einer kontrollierten Diät gefüttert werden. Die Milch, die von Muttertieren mit dem hohen präbiotischen Ballaststoffgehalt gesammelt wurde, hatte den zahlenmäßig höchsten C-Hämatokrit, eine schlechte Konzentration und einen schlechten Energiewert. Diese Unterschiede waren jedoch statistisch nicht signifikant, wenn es um Protein geht.

Die Milch, die von den Muttertieren mit der proteinreichen Diät gesammelt wurde, wies jedoch die höchste Proteinkonzentration auf. Auch dieser Unterschied war statistisch nicht signifikant. Einmal gemeistert, kann diese Technik in weniger als einer Stunde ab dem ersten Zeitpunkt der Betäubung des Muttertiers durchgeführt werden, wenn sie richtig durchgeführt wird.

Wenn Sie dieses Verfahren versuchen, ist es wichtig, daran zu denken, das Muttertier kontinuierlich zu überwachen, um sicherzustellen, dass es während der Narkose nach diesem Verfahren nicht zu einer Depression der Atmung kommt. Andere Methoden wie die Massenspektrometrie können verwendet werden, um zusätzliche Fragen wie die Bestimmung der Oligosaccharidzusammensetzung der Milch zu beantworten. Nachdem Sie sich dieses Video angesehen haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie Sie die manuelle Milchentnahme von einer laktierenden Ratte durchführen.