Name: Fecal Glucocorticoid-Analyse: Nicht-invasive Monitoring-Adrenal in Equids (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-04-25T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 2 s
Description: Erfahren Sie die nicht-invasive Analyse von Fäkal-Glukokortikoiden zur Überwachung der Nebennierenaktivität bei Equiden. Diese Methode ermöglicht Langzeitstudien zum Wohlbefinden von Hauspferden und wilden Zebra-Populationen.

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Die Finanzierung für die Produktion dieses Manuskripts wurde von der Nottingham Trent University bereitgestellt. Die Autoren danken der Hofleiterin der Universität, Anna Gregory, für die Verwendung ihrer Pferde und die Bereitstellung von Kotproben für die Verwendung im Protokoll. Vielen Dank auch an das Chester Zoo Wildlife Endocrinology Laboratory für die Nutzung seiner Einrichtungen.

Ethik-Anweisung: Verfahren beteiligt Feld Probenahme und Tier Themen wurden von der Schule für Tier, ländliche und Umweltwissenschaften (ARES) an der Nottingham Trent University genehmigt. 1. Sammlung von Kotproben HINWEIS: sollten Handschuhe getragen werden, wenn Stuhlproben und Umgang mit Methanol. Wenn es einen starken Verdacht, dass ein Tier aus einem Zoonose, Schutzkleidung wie Laborkittel leiden könnten, sollten auch getragen werden. <ol><li> Sammeln Sie die Kotproben so schnell wie möglich (innerhalb von Minuten bis zu einigen Stunden) nach einer Darmentleerung und legen Sie sie in einen Probenbeutel. Dauern drei bis fünf Unterstichproben von jeder defecated Probe mit einem Gesamtgewicht von ca. 10 g. Beschriften Sie die Tasche mit dem Datum und Uhrzeit der Sammlung, individuelle ID und gefrieren die Probe bei -20 ° C bis zur Analyse. </li><li> Zur Minimierung der Fehler, einfrieren alle Proben bei -20 ° C, bis die Studie abgeschlossen ist, die Proben zusammen für die Analyse als eine einzelne Charge dann sammeln. &lt;/ Li&gt; </ol> 2. Fecal Hormon Extraktion <ol><li> Lassen Sie die Kotproben bei RT auftauen. </li><li> Stellen Sie sicher, dass die Proben durch manuelles Mischen jede Probe in einem eigenen Probenbeutel homogenisiert werden. </li><li> Für jede Probe in einem Boot dann wiegen auf einer Mikrowaage 0,50 (± 0,003 g) von Fäkalien wiegen übertragen die Fäkalien auf ein 8 ml Glasfläschchen. Verwenden Sie eine neue wiegen Boot für jede Probe und reinigen Sie die Pinzette mit 30% Methanol zwischen jeder Probe. </li><li> Kombinieren Sie die 0,5 g Fäkalien mit 5 ml 90% Methanol: Wasser, und schütteln O / N auf einem Orbitalschüttler bei RT. </li><li> Am nächsten Morgen, Strudel der Probe und dann für 20 Minuten bei 600 g zentrifugiert werden. </li><li> Man dekantiert die Methanolfraktion in eine 16 x 125 mm Glasrohr 2 und in einem Gestell in einem Wasserbad auf eine Temperatur von 37 ° C eingestellt. Dampfe in einem Abzug mit Luft bis zur Trockenheit. Spülen Sie die Extraktion Fläschchen und legen Sie die restlichen fäkalen Pellets in einer klinischen Abfallbeutel zur Entsorgung bringen. </li><li> Re-suspend die Stuhlextrakten in 100%, 1 ml Methanol und Transfer in ein 12 x 75 mm 2 Polypropylenröhrchen. Sofort verschließen und bei -20 ° C bis zur Analyse. </li></ol> 3. Hormonanalyse <ol><li> Führen Sie die Analyse mit einem Enzym Linked-Immunoassay (EIA) polyklonalen Corticosteron CJM006 Antiserum. . HINWEIS: Eine zweite EIA (Cortisol R4866 Antiserum getestet wurde, aber dies konnte die biochemische Validierungsschritt (siehe Abschnitt 4.1) Die polyklonalen Corticosteron CJM006 Antiserum und Cortisol R4866 Antiserum und die jeweilige HRP des von CJ Munro, University of California geliefert werden, zu erreichen, Davis, CA. </li><li> Verdünnen Sie das Antiserum bei 1: 15.000 in Beschichtungspuffer (0,05 M NaHCO3, pH 9,6) eine sich wiederholende Pipette und eine 50 ul Pipettenspitze, legen Sie eine 96-Well Mikrotiterplatte mit 50 &amp; mgr; l / Vertiefung. Die Platte mit Abklebefolie und bebrüten O / N bei 4 ° C. Verlassen zwei Vertiefungen, die nicht-spezifischen Bindungs ​​Vertiefungen darzustellen ungestrichen (NSB). </li><li> Unmittelbar vor dem Gebrauch waschen Sie die Mikrotiterplatten fünfmal eine automatisierte Mikrotiterplatte Wascher (Waschlösung, 0,15 M NaCl, 0,05% Tween 20). </li><li> Legen Sie die Platten mit 50 &amp; mgr; l pro Vertiefung für die NSB und &quot;Null&quot; Brunnen [EIA - Puffer (0,1 M NaPO 4, 0,149 M NaCl, 0,1% Rinderserumalbumin, pH 7,0) nur], Normen (Corticosteron, 3,9 - 1000 pg / gut) oder Fäkalextrakt Proben (in geeigneter Weise um 1:20 EIA-Puffer verdünnt, siehe Abschnitt 4.1). Standards und Nullen sollten in dreifacher Ausfertigung und vierfacher Ausfertigung, jeweils ausgeführt werden. Verwässertes Fäkalextrakt Proben und NSB sollte doppelt durchgeführt werden. </li><li> Folgen Sie diese sofort mit der Zugabe von 50 &amp; mgr; l / Vertiefung des Etiketts Meerrettichperoxidasekonjugat ᵻ in EIA - Puffer verdünnt auf 1: 70.000. </li><li> Inkubieren der Mikrotiterplatten im Dunkeln für 2 h bei RT. </li><li> Waschen Sie die Mikrotiterplatten mit Waschlösung 5 mal und Inkubation der Platten bei RT im Dunkeln mit 100 ul / well der RT - Substrat [0,4 mM 2,2&#39;-Azino-di- (3-ethylbenzthiazolinsulfonsäure) diammoniumsalz, 1,6 mM H 2 O 2, 0,05 M Citrat, pH 4,0]. Vorbereiten des Substrats unmittelbar vor der Verwendung. </li><li> Verwenden Sie ein Spektrophotometer bei einer Wellenlänge von 405 nm der Mikrotiterplatten zu lesen. Inkubation der Platten wird als vollständig betrachtet, wenn die optische Dichte der Null Vertiefungen 0,8 bis 1,0 erreicht. </li><li> Um sicherzustellen , Wiederholbarkeit, verwenden Kontrollen [EIA - Standards oder einer biologischen Probe , verdünnt in EIA - Puffer bei etwa 30% (EIA - Standard) zu binden, 50% (eine biologische Probe zB Pool von Hauspferd Fäkalextrakt) und 70% (EIA - Standard) ] intra- und inter-Assay-Variationskoeffizienten von &lt;10% und &lt;15% bzw. zu demonstrieren. </li></ol> 4. Enzyme Linked-Immunoassay: Validierung für die Studie Spezies und Sex <ol><li> Biochemische Validation (Parallelism) <ol><li> Mit EIA Puffer, führen Sie eine serielle Verdünnung auf gepoolten fäkale Extract, im Idealfall genommen von Verdacht auf hohe und niedrige Hormonkonzentration Proben von mehreren Personen (Bereich: ordentlich, 1: 2 bis 1: 8192) und auf der EIA laufen, wie in Kapitel 3 beschrieben. ANMERKUNG: Eine Parallelität erreicht betrachtet, wenn die Reihenverdünnungen von Stuhlextrakten eine Verschiebungskurve parallel zu der Standardkurve und der linearen Regressionsergebnisse ergeben zeigen R2&gt; 0,90, eine Steigung&gt; 0,50 und p &lt;0,05. Die serielle verdünnte Fäkalextrakt , die rund 50% auf die Standardkurve bindet sollte die ideale Verdünnung betrachtet werden alle Stuhlextrakten zu laufen (zB 1:20). Es gibt keine Störungen auf den Assay betrachtet, wenn die lineare Regressionsergebnisse zeigen, R2&gt; 0,90 und p &lt;0,05. </li></ol></li><li> Biochemische Validation (Interferenz) <ol><li> Spike 200 &amp; mgr; l seriell verdünnte Standards (Null, 3,9 bis 1000 ng / well Corticosteron) mit 200 ul der entsprechend verdünnten gepoolt Fäkalextrakt [bei 50% verdünnt paralleli bestimmten Bindungsm (1:20)] und laufen auf der EIA wie in Abschnitt 3 EIA Analyseplot Nach der beobachtete Konzentration minus der Hintergrund (Konzentration der Nullprobe) im Vergleich zu der erwarteten Konzentration. HINWEIS: Wenn die Zugabe von verdünnter gepoolt Fäkalextrakt Standards nicht wesentlich ändern , um die Menge zu erwarten und die lineare Regression Ergebnisse liefert R 2&gt; 0,90, eine Steigung nahe bei 1,0 und p &lt;0,05. Keine Interferenz mit der EIA wurde erreicht. </li></ol></li><li> Biologische Validierung: Hinweis: Eine Demonstration , dass die gewählte EIA die Fähigkeit zur Messung der biologisch relevanten Änderungen des Hormons von Interesse hat [zB der Anstieg der Glukokortikoid - Konzentrationen nach einer pharmakologischen (ACTH ist oft ein lizenzierter Verfahren) oder biologische Herausforderung (zB psychologische und / oder Umwelt, eher eine opportunistische unregulierten Ereignis)] zu sein. <ol><li> Wählen Sie, zu extrahieren und zu analysieren Kotproben für Glucocorticoid MetabolitkonzentrationenVerwendung des Verfahrens in Abschnitten ausführlich 1-3 vor und nach einem schwierigen Fall. HINWEIS: Eine anspruchsvolle Veranstaltung artspezifisch sein wird. Ein beispielhaftes Verfahren wird im Folgenden für das Hauspferd zur Verfügung gestellt. Ausführliche Beispiele für anspruchsvolle Veranstaltungen für Pferde wurden zuvor einschließlich der Verwendung von Management - 9 und Haltungsverfahren 16 veröffentlicht. Ein signifikanter Anstieg der Glucocorticoid-Metabolitenkonzentrationen nach dem herausfordernden Ereignis muss anhand einer statistischen Analyse beobachtet und bestätigt werden. Diese müssen über die gegebenenfalls die Wirkung der wiederholten Messungen, Proben Datum und individuell. Biologische Validierung wird angenommen, dann erreicht. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Mormède, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exploration+of+the+hypothalamic-pituitary-adrenal+function+as+a+tool+to+evaluate+animal+welfare%5BTitle%5D)+AND+%22Physiology+and+Behaviour%22%5BJournal%5D)">Exploration of the hypothalamic-pituitary-adrenal function as a tool to evaluate animal welfare.</a> Physiology and Behaviour. 92 (3), 317-339 (2007).</li>
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<li>Goymann, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-invasive+monitoring+of+hormones+in+bird+droppings%3A+biological+validations%2C+sampling%2C+extraction%2C+sex+differences+and+the+influence+of+diet+on+hormone+metabolite+levels%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+the+New+York+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Non-invasive monitoring of hormones in bird droppings: biological validations, sampling, extraction, sex differences and the influence of diet on hormone metabolite levels.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 1046, 35-53 (2005).</li>
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<li>Yarnell, K., Hall, C., Billett, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+assessment+of+the+aversive+nature+of+an+animal+management+procedure+using+behavioural+and+physiological+measures%5BTitle%5D)+AND+%22Physiology+%26+Behaviour%22%5BJournal%5D)">An assessment of the aversive nature of an animal management procedure using behavioural and physiological measures.</a> Physiology & Behaviour. 118, 32-39 (2013).</li>
<li>Goymann, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+use+of+non-invasive+hormone+research+in+uncontrolled%2C+natural+environments%3A+the+problem+with+sex%2C+diet%2C+metabolic+rate+and+the+individual%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Ecology+and+Evolution%22%5BJournal%5D)">On the use of non-invasive hormone research in uncontrolled, natural environments: the problem with sex, diet, metabolic rate and the individual.</a> Methods in Ecology and Evolution. 3, 757-765 (2012).</li>
<li>Sheriff, M. J., Dantzer, B., Delehanty, B., Palme, R., Boonstra, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+stress+in+wildlife%3A+techniques+for+quantifying+glucocorticoids%5BTitle%5D)+AND+%22Oecologia%22%5BJournal%5D)">Measuring stress in wildlife: techniques for quantifying glucocorticoids.</a> Oecologia. 166, 614-619 (2011).</li>
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<li>Touma, C., Palme, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+fecal+glucocorticoid+metabolites+in+mammals+and+birds%3A+the+importance+of+validation%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+the+New+York+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Measuring fecal glucocorticoid metabolites in mammals and birds: the importance of validation.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 1046, 54-74 (2005).</li>
<li>Millspaugh, J. J., Washburn, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+fecal+glucocorticoid+metabolite+measures+in+conservation+biology+research%3A+considerations+for+application+and+interpretation%5BTitle%5D)+AND+%22General+and+Comparative+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Use of fecal glucocorticoid metabolite measures in conservation biology research: considerations for application and interpretation.</a> General and Comparative Endocrinology. 138, 189-199 (2004).</li>
</ol>

Die Autoren haben nichts offenzulegen.

Fecal Corticosteron Analyse stellt ein Mittel zur bei Pferden langfristig Muster der Nebentätigkeit zu beurteilen. Die nicht-invasive Art des Verfahrens überwindet die verwirrende Wirkung anderer Stichprobenverfahren verwendet , um adrenale Aktivität einschließlich Speichel und Plasmaanalyse 9 beurteilen. Darüber hinaus hat die Technik eine klare, nicht-invasive Vorteil, wenn freilaufenden Pferde zu studieren. Es gibt mehrere wichtige Punkte in Bezug auf diese Methode und ihre ang...

Das beschriebene Verfahren Ziele Corticosteron-Konzentrationen in equine Kot, um eine nicht-invasive Beurteilung von adrenalen Aktivität bereitzustellen zu analysieren. Hypothalamus-Hypophysen-Nebennieren-Achse (HPA) Aktivität zu messen, ist ein akzeptierter Ansatz, um die Reaktion auf potenziell aversiven Situationen sowohl in Gefangenschaft und Haustierarten zu untersuchen. Die Referenztechnik und die am weitesten verbreitete Methode ist die Verwendung von Blutplasma 1 jedoch alternative Methoden wie Stuhlanalyse wurden entwickelt, um sich durch Blutentnahme induziert , den Stress zu überwinden und ermöglichen die Fähigkeit , frei lebenden Arten zu überwachen. Während einer aversiven Situation wird physiologische Homöostase gestört. Der Hypothalamus im Gehirn Freisetzungen Releasing Hormon (CRH), Corticotropin, die auf der vorderen Hypophyse wirkt und stimuliert Freisetzung von adrenocorticotropen Hormons (ACTH). ACTH gelangt in den Blutkreislauf und regt die NNR specie absonderns spezifische Glucocorticoide (GC). Glucocorticoide sind eng mit belastenden Ereignissen verknüpft und nicht in allen Energie erhöhte Staaten konsequent produziert deshalb werden sie häufig bevorzugt , gemessen über andere Stress verbunden Hormone 2. Glucocorticoide sind mehrere adaptive Effekte bei Pferden verantwortlich. Energie schnell von Speicherstellen im Körper in Form von Fettsäuren und Glukose mobilisiert wird, wird die Sauerstoffaufnahme erhöht, sensorische Funktion 3 erhöht und der Blutfluss zu den Bereichen verringert nicht erforderlich , für die Bewegung 4. Neben dem Einsatz als Bewältigungsmechanismus wirkt, kann der Stress induzierten Anstieg der Glukokortikoide auch das Tier für die nächste Stressor helfen 5 vorzubereiten. Beurteilung der Hormonspiegel im Plasma und Speichel beinhaltet jedoch die tatsächliche zirkulierenden Hormons Messung der Stoffwechselprodukte in den Faeces Maßnahmen die metabolische Endprodukt des Hormons gemessen wird. Zirkulieren Steroide sind in der l katabolisiertIver vor Ausscheidung in die Galle , wo sie weitere Veränderungen durch die enzymatischen Aktivitäten der Bakterienflora im Darm Spur 6 erleichtert unterziehen. Daher auf Blut Glucocorticoide gerichtet Immunoassays kann nicht für die Analyse von Stuhl Glukokortikoidmetaboliten 7 geeignet sein. Als fäkale Sammlung kann das Pferd ohne Störung durchgeführt werden, die Analyse der Faeces für Corticosteron, umfassend zu überwachen, HPA-Aktivität in einer Reihe von Umständen verwendet wurde. Erhöhte Corticosteron im Kot von Pferden hat als Reaktion auf potenziell aversiven Situationen berichtet worden 9 während der postoperativen Behandlung Veterinär 8 und in restriktiver Gehäuse einschließlich. Fecal Probenahme spiegelt eine gepoolte Glucocorticoid - Ebene im Laufe der Zeit , statt den Zeitpunkt Probenahme von Plasma und Speichel bot es angemessen für die Überwachung der langfristigen machen, chronische oder saisonale Muster 10. Aufgrund der nicht-invasiveNatur des Verfahrens Proben 11 ohne die Notwendigkeit für die Aufnahme oder Rückhalte wiederholt für einen einzelnen gesammelt werden. Allerdings müssen bestimmte Darmtransitzeit Arten berücksichtigt werden, wenn ein Probenahmeprotokoll zu planen. Bei Pferden ist gut Laufzeit ca. 18 Std 12 daher, Neben Reaktion und anschließender Corticosteron - Metaboliten in den Kot einen Tag nach der ersten Aktivierung der HPA - Achse erfasst werden. Wenn nicht-invasive Techniken Immunoassay verwendet eine sorgfältige Validierung für die Spezies untersucht 13 von wesentlicher Bedeutung. Darüber hinaus Geschlechtsunterschiede in der Hormon Ausscheidung der Metaboliten wurden in Stoffwechselrate und die Art des Corticosteron - Metaboliten ausgeschieden in verschiedenen Arten , darunter Mäuse 14 und Hühner 15 aufgrund von Unterschieden berichtet wahrscheinlich ist. Es war daher wichtig, als Teil dieses Verfahrens, daß der Assay für die Verwendung sowohl in männlichen und weiblichen Hauspferde validiert wurde wie detailliert in the Protokoll. Dieser Unterschied in der Hormonmetabolismus zwischen den Geschlechtern hat Konsequenzen für die Datenqualität noch ist es selten als Teil der Assayvalidierung angesprochen und einbezogen. Diese nicht-invasive Methode ermöglicht langfristige Beurteilung der Nebentätigkeit bei domestizierten Pferden. Die Protokolldetails sowohl die Validierung des Assays und der Assay-Technik selbst.

<table><tbody><tr><td>Corticosteron-Antikörper & HRP-Kit</td><td>Coralie Munro - UC Davis</td><td></td><td>Nicht mehr über UC Davis erhältlich - siehe Arbor Assays</td></tr><tr><td>Cortisol Antikörper & HRP-Kit</td><td>Coralie Munro - UC Davis</td><td></td><td>Nicht mehr über UC Davis erhältlich - siehe Arbor Assays</td></tr><tr><td>Corticosteron synthetisches Standardhormon</td><td>Sigma Aldrich</td><td>50-23-7</td><td>Harnful bei Einnahme oder Hautkontakt. Verwendung im Abzug</td></tr><tr><td>Cortisol synthetisches Standardhormon</td><td>Sigma Aldrich</td><td>15087-01-1</td><td>Gesundheitsschädlich bei Verschlucken oder Hautkontakt. Zur Verwendung im Abzug</td></tr><tr><td>Methanol</td><td>Sigma Aldrich</td><td>67-56-1</td><td>Reizstoff. Verwendung im Abzug</td></tr><tr><td>Natriumbicarbonat</td><td>Sigma Aldrich</td><td>144-55-8</td><td>Reizstoff</td></tr><tr><td>Natriumcarbonat wasserfrei</td><td>Sigma Aldrich</td><td>497-19-8</td><td>Reizstoff</td></tr><tr><td>Natriumphosphat zweibasig</td><td>Sigma Aldrich</td><td>7558-79-4</td><td>Reizstoff</td></tr><tr><td>Natriumphosphat monobasisch</td><td>Sigma Aldrich</td><td>10049-21-5</td><td>Reizstoff</td></tr><tr><td>BSA</td><td>Sigma Aldrich</td><td>9048-46-8</td><td>Reizstoff</td></tr><tr><td>zwischen 20</td><td>Sigma Aldrich</td><td>9005-64-5</td><td>Reizstoff</td></tr><tr><td>Zitronensäure</td><td>Sigma Aldrich</td><td>77-92-9</td><td>Reizstoff</td></tr><tr><td>ABTS</td><td>Sigma Aldrich</td><td>30931-67-0</td><td>Reizstoff</td></tr><tr><td>Wasserstoffperoxid 30%Sigma</td> <td>Aldrich</td><td>7722-84-1</td><td>Reizstoff</td></tr><tr><td>Natriumchlorid</td><td>Sigma Aldrich</td><td>7647-14-5</td><td>Reizstoff</td></tr><tr><td>Pufferkapseln - pH 4</td><td>VWR</td><td>332732B</td><td></td></tr><tr><td>Pufferkapseln - pH 7</td><td>VWR</td><td>332742D</td><td></td></tr><tr><td>Pufferkapseln - pH 10</td><td>VWR</td><td>332762H</td><td></td></tr><tr><td>Salzsäure</td><td>Sigma Aldrich</td><td>435570</td><td>Reizend. Verwendung im Abzug</td></tr><tr><td>Natriumhydroxid</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S5881</td><td>Reizstoff</td></tr><tr><td>Analysenwaage</td><td>Fisher Scientific</td><td>BFS-525-010A</td><td></td></tr><tr><td>Luftkompressor</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Zentrifuge</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Computer +Drucker</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kühl-Gefrierkombination</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Trocknung </td><td></td><td></td><td></td>Apparat</tr><tr><td>+Schläuche</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Aufbewahrungsschrank für brennbare Flüssigkeiten</td><td>VWR</td><td>649-002</td><td></td></tr><tr><td>Abzug</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Heizplattenrührer</td><td>VWR</td><td>640-282</td><td></td></tr><tr><td>Mikroplatten-Lesegerät</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mikroplatten-Waschmaschine</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>pH Messgerät</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf Research&reg Pipetten - Multipack Option 2</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pipette - 1.000 & Mikro; l</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pipette - 200 &micro; l</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pipette - 20 &Mikro; l</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Repetierpipette</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pipettenfüller</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Orbitalschüttler</td><td>Progen Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ultraschallgerät</td><td>Hilsonic</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vortex</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Warmwasserbad</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Wasseraufbereitungssystem</td><td>Millipore</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

fecal glucocorticoid-analyse: nicht-invasive monitoring-adrenal in equids

Fecal Glucocorticoid Analysis: Non-invasive Adrenal Monitoring in Equids

Die Nebennierenaktivität kann bei Pferden durch Analyse des Kots auf Corticosteron-Metaboliten beurteilt werden. Während einer potenziell aversiven Situation wird das Corticotropin-Releasing-Hormon (CRH) aus dem Hypothalamus im Gehirn freigesetzt. Dadurch wird die Ausschüttung des Nebennierenrindenhormons (ACTH) aus der Hirnanhangdrüse stimuliert, was wiederum die Ausschüttung von Glukokortikoiden aus der Nebenniere stimuliert. Bei Pferden ist das Glukokortikoid Corticosteron für mehrere Anpassungen verantwortlich, die zur Unterstützung des Fluchtverhaltens der Pferde und zur anschließenden Entfernung aus der aversiven Situation erforderlich sind. Corticosteron-Metaboliten können im Kot von Pferden nachgewiesen werden, und die Bewertung bietet eine nicht-invasive Möglichkeit, langfristige Muster der Nebennierenaktivität zu bewerten. Die Stuhlbeurteilung bietet Vorteile gegenüber anderen Techniken zur Überwachung der Nebennierenaktivität, einschließlich Blutplasma- und Speichelanalysen. Der nicht-invasive Charakter der Methode vermeidet Stress bei der Probenahme, der die Ergebnisse verfälschen kann. Es ermöglicht auch die Möglichkeit einer wiederholten Probenahme im Laufe der Zeit und ist ideal für Studien an freilaufenden Pferden. Dieses Protokoll beschreibt den enzymgebundenen Immunoassay (EIA), der zur Beurteilung von Stuhl auf Corticosteron verwendet wird, zusätzlich zu der damit verbundenen biochemischen Validierung.

Hauspferde (n = 16, 8 Stuten, 8 Wallache) mit einem mittleren Alter von 15 Jahren (± 3) wurden nach Geschlecht gruppiert und zu vier Gehäusebauformen mit zunehmenden sozialen Isolation unterworfen (n = 4 Pferd / Behandlung). Das Gehäuse 1 beteiligt Pferde in einer Herde Umgebung leben, eng ihrem natürlichen Lebensraum zu simulieren. Das Gehäuse 2 beteiligt Pferde paarweise in einer Indoor-Scheune leben. Das Gehäuse 3 beteiligten Pferde allein in Ställen untergebracht, aber mit Sichtkonta...

Die Nebennierenaktivität kann bei Pferden durch Analyse des Kots auf Corticosteron-Metaboliten beurteilt werden. Die Methode bietet eine nicht-invasive Möglichkeit, langfristige Muster sowohl bei Haus- als auch bei Freilandpferden zu beurteilen. Dieses Protokoll beschreibt den beteiligten enzymgekoppelten Immunoassay und die damit verbundene biochemische Validierung.

Fecal Glucocorticoid-Analyse: Nicht-invasive Monitoring-Adrenal in Equids

Adrenal activity can be assessed in the equine species by analysis of feces for corticosterone metabolites. During a potentially aversive situation, ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens besteht darin, zu demonstrieren, wie die Nebennierenaktivität bei Pferden nichtinvasiv durch die Extraktion und Analyse fäkaler Glucocorticoidmetabolite bewertet werden kann. Diese Methode kann helfen, zentrale Fragen im Bereich der Tierwohlbeurteilung zu beantworten, indem sie die physiologischen Auswirkungen von Haltungsprotokollen auf domestizierte Pferde sowie auf Wildpopulationen afrikanischer Zebras untersucht. Der Hauptvorteil dieser Technik liegt darin, dass sie eine nichtinvasive Möglichkeit bietet, die langfristige Nebennierenaktivität sowohl bei domestizierten als auch bei frei lebenden Pferden zu messen.Am Tag des Experiments homogenisieren Sie die Stuhlproben manuell, nachdem sie bei Raumtemperatur aufgetaut wurden, indem Sie jede einzelne Probe in ihrem Probensack vermischen. Danach entnehmen Sie für jede Probe die entsprechende Menge Stuhl mit einer Mikrowaage in einem sauberen Wägeboot und überführen die Proben in einzelne acht Milliliter fassende Glasfläschchen. Anschließend mischen Sie jeweils fünf Milliliter 90 % Methanol in Wasser mit jeder Probe und schütteln die Proben über Nacht auf einem Rüttelschüttler bei Raumtemper

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Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Wir beschreiben das Verfahren und die Analyse der Daten aus einer chemischen Screening-System für Glukokortikoid-Stress-Hormon-Signalisierung unter Verwendung von Zebrafisch-Larven: Die Glucocorticoid Responsive In-vivo-Zebrafisch-Luciferase-Aktivität (Grizly)-Assay. Der Test sensitiv und spezifisch erkennt Auswirkungen auf die Glukokortikoid-Signalisierung durch Verbindungen, die Metabolisierung verlangen oder beeinflussen endogene Glucocorticoid-Produktion.

Eine Stoff Screening Verfahren für die Glucocorticoid-Signalisierung mit einem Zebrafisch-Larve Luciferase-Reportersystems

Cortisol (CORT) reichert sich in der wachsenden Haarschaft von Menschen und nicht-menschlichen Primaten. Wir beschreiben Methoden zur Extraktion und Analyse von Haar CORT mit hoher Genauigkeit und Empfindlichkeit. Messung von CORT Haar ist besonders für die Beurteilung chronischer Stress über einen Zeitraum von Wochen bis Monaten geeignet.

Extraktion und Analyse von Cortisol aus Menschen-und Affen-Haar

Es besteht ein Bedarf für eine nicht-invasive Beurteilung von Stress. Dieser Beitrag beschreibt ein einfaches Protokoll mit Wärmebild, um eine signifikante Reaktion in der Augenregion Temperatur in wilden Blaumeisen in eine milde akute Stressoren erkennen.

Wärmebild um Stress-nicht-invasiv in Hemmungslose Birds Studieren

"Super-selektive" Nebennieren venösen Probenahme (SsAVS, auch genannt segmentale Nebennieren venösen Probenahme: SAV) erfolgte mittels eines Mikrokatheters Nebennieren Segmente identifizieren, die übermäßige Mengen von Hormonen produzieren. Die SsAVS-Technik wurde beschrieben, präsentierten sich Fälle, in denen Nebennieren segmentale Läsion(en) durch SsAVS identifiziert wurden, und die Nützlichkeit des SsAVS in Nebennieren Zukunftsforschung wurde diskutiert.

Eine neuartige Methode: Super-selektiven Nebennieren venösen Sampling

Das Hormon der Nebennierenrinde sezerniert ist von entscheidender Bedeutung für die Tiere gegen Stress und Krankheiten. Hier präsentieren wir ein Protokoll zur Kultur der primären Ratte Nebenniere Zellen. Es könnte eine gute in-vitro-Plattform für die Untersuchung der Mechanismen des Reagens des Interesses an Nebennieren Steroidgenese und Lipid-Biosynthese.

Primärkultur von Ratte Nebennierenrindeninsuffizienz Zellen und Assays Steroidogenic Funktionen

Wir präsentieren ein Protokoll zur Bestimmung des optimalen Extraktionslösungsmittels zur Messung von Cortisol aus Koalafell. Die in diesem Protokoll verwendeten Lösungsmittel sind Methanol, Ethanol und Isopropanol. Die Bestimmung eines optimalen Extraktionslösungsmittels hilft bei der zuverlässigen Messung von Fellen, um die Auswirkungen chronischer Belastungen auf Koalas zu bestimmen.

Cortisol Messung in Koala (Phascolarctos cinereus) Pelz

Enterische Gliazellen werden zunehmend für ihre Rolle bei der Darmhomöostase und bei Krankheitsprozessen, einschließlich postoperativer Komplikationen, anerkannt. Equidenpatienten, die sich von einer explorativen Notfall-Laparotomie erholen, leiden unter einem hohen Risiko für entzündliche postoperative Erkrankungen, was die Bedeutung der Etablierung einer wiederholbaren enterischen Glia-Primärzellkultur für die Studie unterstreicht.

Enterische Gliakultur bei Pferden und Anwendung zur Untersuchung eines neuronalen Entzündungsmechanismus bei Pferdekoliken

Ein robuster und reproduzierbarer Ansatz zur Etablierung von 2D-Primärkulturen von Zona-Glomerulosa- und Zona-Fasciculata-angereicherten Zellen wurde für den Nebennieren-Cortex der Maus entwickelt. Dieses System bewahrt wichtige molekulare und funktionelle Merkmale jeder Zone und ermöglicht so eine gezielte Untersuchung von Signalwegen, Hormonproduktion und dem Verhalten der Nebennierenkortikale Zellen ex vivo.

Etablierung von zonenangereicherten Primärkulturen aus dem Nebennierenkortex der Maus

Nebennierenmarks chromaffinen Zellkultur-Systeme sind äußerst nützlich für die Untersuchung der Anregungs-Sekretion Kopplung in einem in vitro-Einstellung. Dieses Protokoll stellt das Verfahren verwendet werden, um den Nebennieren zu sezieren und dann isolieren medulläre Region durch Abstreifen der Nebennierenrinde. Die Verdauung der Medulla in einzelne chromaffinen Zellen wird dann demonstriert.

Maus Adrenal Chromaffin Zellisolation

Für die Bewertung von neuen Stammzelltherapien ist es wichtig, nicht-invasiv Spur der injizierten Zellen in vivo. Dieses Video zeigt Ihnen, wie Sie humanen mesenchymalen und embryonalen Stammzellen mit Eisenoxid-Kontrastmittel in vivo für die nachfolgenden MR-Bildgebung in vivo-Label.

Labeling hESCs und hMSCs mit Eisenoxid-Nanopartikel für Non-Invasive in vivo-Tracking mit MR-Bildgebung

Erfahren Sie die nicht-invasive Analyse von Fäkal-Glukokortikoiden zur Überwachung der Nebennierenaktivität bei Equiden. Diese Methode ermöglicht Langzeitstudien zum Wohlbefinden von Hauspferden und wilden Zebra-Populationen.

Fecal Glucocorticoid-Analyse: Nicht-invasive Monitoring-Adrenal in Equids

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