Name: Ein menschliches Glioblastom Organotypisches Scheibenkulturmodell zur Untersuchung der Tumorzellmigration und patientenspezifischen Wirkungen von antiinvasiven Arzneimitteln (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-07-20T12:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 35 s
Description: Erfahren Sie die Erzeugung und Pflege von organotypischen Glioblastom-Gewebescheibenkulturen aus frischem menschlichem Tumorgewebe. Diese Methode ermöglicht die Analyse invasiver Migrationsverhaltensweisen primärer GBM-Zellen unter Erhaltung der in vivo-Gewebearchitektur.

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Wir danken Dr. Lee Niswander und Dr. Rada Massarwa für ihre technische Expertise und Beiträge zu dem hier beschriebenen Slice Culture Confocal Imaging Protokoll. Weiterhin dank Dr. Kalen Dionne, der Fachwissen zur Optimierung von Hirntumor-Gewebe-Schneid- und Kulturparametern lieferte.

<ol><li>Beadle, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+myosin+II+in+glioma+invasion+of+the+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Biol+Cell%22%5BJournal%5D)">The role of myosin II in glioma invasion of the brain.</a> Mol Biol Cell. 19, 3357-3368 (2008).</li>
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<li>Assanah, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glial+progenitors+in+adult+white+matter+are+driven+to+form+malignant+gliomas+by+platelet-derived+growth+factor-expressing+retroviruses%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Glial progenitors in adult white matter are driven to form malignant gliomas by platelet-derived growth factor-expressing retroviruses.</a> J Neurosci. 26, 6781-6790 (2006).</li>
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<li>Verhaak, R. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrated+genomic+analysis+identifies+clinically+relevant+subtypes+of+glioblastoma+characterized+by+abnormalities%5BTitle%5D)+AND+%22in+PDGFRA%2C+IDH1%2C+EGFR%2C+and+NF1.+Cancer+cell%22%5BJournal%5D)">Integrated genomic analysis identifies clinically relevant subtypes of glioblastoma characterized by abnormalities.</a> in PDGFRA, IDH1, EGFR, and NF1. Cancer cell. 17, 98-110 (2010).</li>
<li>Gill, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MRI-localized+biopsies+reveal+subtype-specific+differences+in+molecular+and+cellular+composition+at+the+margins+of+glioblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">MRI-localized biopsies reveal subtype-specific differences in molecular and cellular composition at the margins of glioblastoma.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 111, 12550-12555 (2014).</li>
<li>Snuderl, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mosaic+amplification+of+multiple+receptor+tyrosine+kinase+genes+in+glioblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+cell%22%5BJournal%5D)">Mosaic amplification of multiple receptor tyrosine kinase genes in glioblastoma.</a> Cancer cell. 20, 810-817 (2011).</li>
<li>Kakita, A., Goldman, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patterns+and+dynamics+of+SVZ+cell+migration+in+the+postnatal+forebrain%3A+monitoring+living+progenitors+in+slice+preparations%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Patterns and dynamics of SVZ cell migration in the postnatal forebrain: monitoring living progenitors in slice preparations.</a> Neuron. 23, 461-472 (1999).</li>
<li>Meijering, E., Dzyubachyk, O., Smal, I., van Cappellen, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tracking+in+cell+and+developmental+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Sem+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Tracking in cell and developmental biology.</a> Sem Cell Dev Biol. 20, 894-902 (2009).</li>
<li>Parker, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gefitinib+selectively+inhibits+tumor+cell+migration+in+EGFR-amplified+human+glioblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22Neurooncol%22%5BJournal%5D)">Gefitinib selectively inhibits tumor cell migration in EGFR-amplified human glioblastoma.</a> Neurooncol. 15, 1048-1057 (2013).</li>
<li>Brat, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pseudopalisades+in+glioblastoma+are+hypoxic%2C+express+extracellular+matrix+proteases%2C+and+are+formed+by+an+actively+migrating+cell+population%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Pseudopalisades in glioblastoma are hypoxic, express extracellular matrix proteases, and are formed by an actively migrating cell population.</a> Cancer Res. 64, 920-927 (2004).</li>
<li>Shweiki, D., Itin, A., Soffer, D., Keshet, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular+endothelial+growth+factor+induced+by+hypoxia+may+mediate+hypoxia-initiated+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Vascular endothelial growth factor induced by hypoxia may mediate hypoxia-initiated angiogenesis.</a> Nature. 359, 843-845 (1992).</li>
<li>Shamir, E. R., Ewald, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+organotypic+culture%3A+experimental+models+of+mammalian+biology+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional organotypic culture: experimental models of mammalian biology and disease.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 15, 647-664 (2014).</li>
<li>Charles, N. A., Holland, E. C., Gilbertson, R., Glass, R., Kettenmann, H. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21446047">The brain tumor microenvironment.</a> Glia. 60, 502-514 (2012).</li>
<li>Di Cristofori, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+vacuolar+H%2B+ATPase+is+a+novel+therapeutic+target+for+glioblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">The vacuolar H+ ATPase is a novel therapeutic target for glioblastoma.</a> Oncotarget. 6, 17514-17513 (2015).</li>
<li>Vaira, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+model+of+organotypic+culture+for+pharmacodynamic+profiling+of+human+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">Preclinical model of organotypic culture for pharmacodynamic profiling of human tumors.</a> Proc Natl Acad Sci USA. , 8352-8356 (2010).</li>
<li>Gerlach, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Slice+cultures+from+head+and+neck+squamous+cell+carcinoma%3A+a+novel+test+system+for+drug+susceptibility+and+mechanisms+of+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Cancer%22%5BJournal%5D)">Slice cultures from head and neck squamous cell carcinoma: a novel test system for drug susceptibility and mechanisms of resistance.</a> Br J Cancer. 110, 479-488 (2014).</li>
<li>Holliday, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+practicalities+of+using+tissue+slices+as+preclinical+organotypic+breast+cancer+models%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Pathol%22%5BJournal%5D)">The practicalities of using tissue slices as preclinical organotypic breast cancer models.</a> J Clin Pathol. 66, 253-255 (2013).</li>
<li>Maund, S. L., Nolley, R., Peehl, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+and+comprehensive+characterization+of+a+faithful+tissue+culture+model+of+the+benign+and+malignant+human+prostate%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Invest%22%5BJournal%5D)">Optimization and comprehensive characterization of a faithful tissue culture model of the benign and malignant human prostate.</a> Lab Invest. 94, 208-221 (2014).</li>
</ol>

Die Autoren haben nichts zu offenbaren.

Organotypische Scheibenkulturen aus menschlichem Krebsgewebe bieten eine attraktive und nicht genutzte Plattform für präklinische Translationsversuche. Das Verständnis von Populationsniveaus von Tumorzellen in Bezug auf Migration, Proliferation und Zelltod in der nativen Tumormikroumgebung fehlt. Kritisch kann das Studium der Tumorreaktion auf die Therapie in einer dynamischen, zeitaufgelösten Weise auf der Ebene des Zellverhaltens Licht auf neue Mechanismen der Behandlungsresistenz werfen. Menschliche Tumorscheibenkult...

Die Laborstudie des Glioblastoms (GBM) wird durch einen Mangel an Modellen behindert, die die notwendigen pathologischen Eigenschaften der menschlichen Erkrankung, nämlich die Tumorzellmigration und die Invasion, treu rezitieren. Vergleichende Untersuchungen von 2D- und 3D- In-vitro- Invasions-Assays sowie 3D-Nagetier-Slice-Kulturmodellen haben in diesen beiden Kontexten mechanistisch disparate zelluläre Migrationsprogramme aufgedeckt, die möglicherweise die Übersetzbarkeit von Befunden von 2D-Systemen auf die menschliche Erkrankung 1 , 2 , 3 beschränken . Das hier beschriebene organotypische Tumorscheiben-Kultur- und Bildgebungsparadigma ermöglicht die Untersuchung der Tumorzellmigration innerhalb von ex vivo menschlichem Tumorgewebe, erhalten aus chirurgischer Resektion. So bieten Scheibenkulturen von chirurgisch reseziertem Tumorgewebe in Verbindung mit zeitraffer konfokaler Mikroskopie eine Plattform, um die Tumorzellmigration im Eingeborenen zu untersuchenMikroumgebung ohne Gewebeauflösung oder Kulturpassage. Es gibt umfangreiche Literatur, die Nagetier-Hirn-Slice-Kulturmodelle von GBM aus menschlichen Tumor-Xenotransplantaten, retroviral-induzierten Tumoren und zellulären Overlays zur Untersuchung der Tumorinvasion 1 , 2 , 3 , 4 , 5 verwendet . Kürzlich haben mehrere Gruppen die Erzeugung von organotypischen Scheibenkulturen direkt aus dem menschlichen GBM-Gewebe 6 , 7 , 8 , 9 , 10 beschrieben . Allerdings gibt es eine deutliche Variation zwischen veröffentlichten Protokollen in Bezug auf Schneidtechnik und Kulturmedien. Weiterhin konzentrierte sich die Verwendung von organotypischen Scheibenkulturen auf statische experimentelle Endpunkte, die Änderungen der Zellsignale beinhaltenNg, Proliferation und Tod. Das hier beschriebene Protokoll dehnt sich auf vorherige Scheibenkulturparadigmen aus, indem die zeitaufgelöste Beobachtung von dynamischen Tumorzellverhalten durch zeitkonstante Laserscanning-konfokale Mikroskopie aufgenommen wird. Die jüngste Entdeckung von inter 11 und intratumoraler 12 , 13 genetischer Variation in humanem GBM unterstreicht die Bedeutung der Verknüpfung dieser Heterogenität mit Tumorzellverhalten und deren Auswirkungen auf die Reaktion des Tumors auf die Therapie. Hier berichten wir über ein stromlinienförmiges und reproduzierbares Protokoll für die Verwendung von direkten Scheibenkulturen aus einem menschlichen Krebsgewebe, um die Tumorzellmigration in nahezu Echtzeit zu visualisieren.

<table><tbody><tr><td>DMEM mit hohem Glukosespiegel&nbsp;</td><td>Invitrogen (Gibco)</td><td>11960-044</td><td></td></tr><tr><td>Neurobasal-A Medium, minus Phenolrot</td><td>Invitrogen (Gibco)</td><td>12349-015</td><td></td></tr><tr><td>B-27 Supplement (50x), serumfrei</td><td>Invitrogen (Gibco)</td><td>17504-044</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin (10.000 U/ml)</td><td>Invitrogen (Gibco)</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>GlutaMAX Supplement</td><td>Invitrogen (Gibco)</td><td>35050-061</td><td></td></tr><tr><td>L-Glutamin (200 mM)</td><td>Invitrogen (Gibco)</td><td>25030-081</td><td></td></tr><tr><td>HEPES (1 M)</td><td>Invitrogen (Gibco)</td><td>15630-080</td><td></td></tr><tr><td>Nystatin Suspension</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>N1638-20ML</td><td>10.000 Einheit/ml in DPBS, aseptisch verarbeitet, BioReagenz, geeignet für Zellkulturen</td></tr><tr><td>UltraPure Low Melting Point</td><td>Agarose Invitrogen (Gibco)</td><td>16520-050</td><td>Schmilzt bei 65,5 &#176; C, bleibt bei 37 &#176 flüssig; C und sinkt schnell unter 25 &#176;C.</td></tr><tr><td>Isolektin GS-IB4 aus Griffonia simplicifolia, Alexa Fluor 647 Konjugat</td><td>Thermo Fisher (Molekulare Sonden)</td><td>I32450</td><td>Wird in Medien zur Markierung von Mikroglia/Makrophagen</td></tr><tr><td>verwendet pRetroX-IRES-ZsGreen1 Vector</td><td>Clonetech</td><td>632520</td><td></td></tr><tr><td>Retro-X Konzentrator&nbsp;</td><td>Clonetech</td><td>31455</td><td>Bindeharz für die Nicht-Ultrazentrifugationskonzentration von Virusüberständen</td></tr><tr><td>pVSG-G Vector</td><td>Clonetech</td><td>631530</td><td>Teil des Retro-X Universal Retroviral Expression System</td></tr><tr><td>GP2-293 Virale Verpackungszellen</td><td>Clonetech</td><td>631530</td><td>Teil des Retro-X Universal Retroviral Expression System</td></tr><tr><td>Cyanacrylat-Kleber (Sekundenkleber)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Z105899</td><td>Mittelviskose</td></tr><tr><td><starke>Ausrüstung</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Peel-A-Way-Einbettungsform (quadratisch - S22)</td><td>Polysciences, Inc.</td><td>18646A-1</td><td>Formen für die Einbettung von Tumorproben</td></tr><tr><td>Mikrospatel aus Edelstahl</td><td>Fisher Scientific</td><td>S50823</td><td>Biegeinstrument 45 Grad am Hals der Löffelklinge</td></tr><tr><td>Gebogene Fisherbrand Präparierzange mit feiner Spitze</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-875</td><td></td></tr><tr><td>Einschneidige Rasierklinge (Amerikanische Rasierhobel)</td><td>Fisher Scientific</td><td>17-989-001</td><td>Die Klingenschneide ist 0,009" dick. Die gewellte Abdeckung mit stumpfer Kante wird vor dem Laden auf Vibratome entfernt.</td></tr><tr><td>Leica VT1000 S Vibratome</td><td>Leica Biosystems</td><td>VT1000 S</td><td></td></tr><tr><td>Hydrophiler PTFE-Zellkultureinsatz&nbsp;</td><td>EMD Millipore</td><td>PICM0RG50</td><td>30 mm, hydrophiles PTFE, 0,4 & Mikro; m Porengröße</td></tr><tr><td>35 mm Glasbodenschalen&nbsp;</td><td>MatTek</td><td>P35G-1.5-20-C Hülse</td><td>20 mm Glasdurchmesser. Deckglas Dicke 1,5 mm</td></tr><tr><td>LSM 510 Konfokales Mikroskop</td><td>Zeiss</td><td>LSM 510</td><td>10x Air Objektiv (c-Apochromat NA 0,45)</td></tr><tr><td>PECON Stagetop Inkubator</td><td>PeCON Deutschland</td> <td>(eingestellt)</td><td>Der Inkubator PM 2000 RBT ist ein vergleichbares Produkt, das für den Einsatz mit Zeiss Mikroskopen entwickelt wurde.</td></tr></tbody></table>

ein menschliches glioblastom organotypisches scheibenkulturmodell zur untersuchung der tumorzellmigration und patientenspezifischen wirkungen von antiinvasiven arzneimitteln

A Human Glioblastoma Organotypic Slice Culture Model for Study of Tumor Cell Migration and Patient-specific Effects of Anti-Invasive Drugs

Glioblastom (GBM) weiterhin eine extrem schlechte klinische Prognose trotz chirurgischen, chemotherapeutischen und Strahlentherapie zu tragen. Progressive Tumorinvasion in das umliegende Hirnparenchym stellt eine dauerhafte therapeutische Herausforderung dar. Um Anti-Migrationstherapien für GBM zu entwickeln, sind Modellsysteme, die einen physiologisch relevanten Hintergrund für kontrolliertes Experimentieren bieten, unerlässlich. Hier präsentieren wir ein Protokoll zur Erzeugung von Scheibenkulturen aus humanem GBM-Gewebe, das während der chirurgischen Resektion gewonnen wird. Diese Kulturen erlauben Ex-vivo- Experimente ohne Passage durch tierische Xenotransplantate oder Einzelzellkulturen. Weiterhin beschreiben wir die Verwendung von zeitraffer Laserscanning-konfokalen Mikroskopie in Verbindung mit der Zellverfolgung, um das Migrationsverhalten von Tumorzellen quantitativ zu untersuchen und die Resonanz auf Therapeutika zu beurteilen. Scheiben werden innerhalb von 90 min der chirurgischen Gewebeerfassung reproduzierbar erzeugt. Retrovirally-vermittelte fluoreszierende Zelle laBeling, konfokale Bildgebung und Tumorzellmigrationsanalysen werden anschließend innerhalb von zwei Wochen der Kultur abgeschlossen. Wir haben diese Scheibenkulturen erfolgreich eingesetzt, um genetische Faktoren aufzudecken, die mit einem erhöhten Migrationsverhalten im menschlichen GBM verbunden sind. Weiterhin haben wir die Fähigkeit des Modells validiert, eine patientenspezifische Variation in Reaktion auf Anti-Migrationstherapien zu detektieren. Nach vorne gehen menschliche GBM-Slice-Kulturen eine attraktive Plattform für eine schnelle Ex-vivo- Beurteilung der Tumorsensitivität gegenüber therapeutischen Wirkstoffen, um eine personalisierte neuro-onkologische Therapie voranzutreiben.

<html> Unsere Gruppe hat erfolgreich Schnittkulturen von über 50 Patienten, die sich einer ersten GBM-Resektion unterziehen, erfolgreich produziert. Dieses Scheibenerzeugungs-, Kultur-, Retroviral-Labeling-, Imaging- und Migrationsanalyse-Protokoll wurde in einen reproduzierbaren Workflow gestrafft ( Abbildung 1 ). Kritisch zeigen diese organotypischen GBM-Scheiben die Übereinstimmung mit dem Ursprung des Tumorgewebes während der Kultur, einschließlich der Erhaltung von p...

Aktuelle Ex-vivo- Modelle von Glioblastom (GBM) sind nicht für eine physiologisch relevante Untersuchung der menschlichen Tumorinvasion optimiert. Hier stellen wir ein Protokoll zur Erzeugung und Pflege von organotypischen Scheibenkulturen aus frischem menschlichem GBM-Gewebe vor. Es wird eine Beschreibung der Zeitraffer-Mikroskopie und der quantitativen Zellmigrationsanalyse-Techniken gegeben.

Ein menschliches Glioblastom Organotypisches Scheibenkulturmodell zur Untersuchung der Tumorzellmigration und patientenspezifischen Wirkungen von antiinvasiven Arzneimitteln

Glioblastoma (GBM) continues to carry an extremely poor clinical prognosis despite surgical, chemotherapeutic, and radiation therapy. Progressive tumor ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens besteht darin, invasive Migrationsverhalten in primären humanen Glioblastomzellen zu beobachten und zu analysieren. Diese Methode kann helfen, zentrale Fragen im Bereich der Neuroonkologie zu beantworten, beispielsweise welche phänotypischen und molekularen Eigenschaften den patientenspezifischen Unterschieden im Krankheitsverlauf und in den Therapieantworten zugrunde liegen. Der Hauptvorteil dieser Technik liegt darin, dass sie die direkte Manipulation primärer Zellen ermöglicht, während die in-vivo-Gewebearchitektur und die zelluläre Heterogenität des Glioblastoms erhalten bleiben.Beginnen Sie damit, mit sterilen Pinzetten leere PTFE-Kulturinserts in jede Vertiefung einer 6-Loch-Platte zu geben, die pro Vertiefung ein Milliliter Schnittkultur-Erhaltungsmedium enthält. Sobald alle Inserts hinzugefügt wurden, stellen Sie die Platte in einen befeuchteten, wassergekühlten Gewebekultur-Inkubator bei 37 Grad Celsius und 5 % CO2. Anschließend geben Sie die Tumorgewebestücke in eine Petrischale mit eiskaltem Verarbeitungsmedium und waschen das Gewebe mithilfe einer Pipette vorsichtig dreimal mit frischem Medium, um anhaftende rote Blutkörperchen z

a-human-glioblastoma-organotypic-slice-culture-model-for-study-tumor

Research

Forschung

JoVE Journal

Medicine

Medizin

Dieses Video zeigt die Entwicklung eines 3D-Co-Kultursystems. Hirnschnitte von Mäusen werden auf eine Membran gelegt, auf der fluoreszenzmarkierte menschliche Hirntumorzellen wachsen können. Sobald das System fertig ist, wird es für die Bildgebung gefärbt.

Etablierung eines Hirntumors in einem organotypischen Scheiben-Co-Kulturmodell

Das Video zeigt die Erzeugung und Pflege von organotypischen Schnittkulturen aus Glioblastomgewebe. Das isolierte Gewebe wird in eine Agarose-Matrix eingebettet und mit Hilfe eines Vibratoms werden Dünnschliffe erhalten. Diese Abschnitte werden dann auf permeable Membraneinsätze innerhalb einer Mikroplatte gelegt und zur Langzeitpflege in einem Scheibenkultur-Erhaltungsmedium kultiviert.

Erzeugung und Pflege von Schnittkulturen aus humanem Glioblastomgewebe

Quelle: Parker, J. J., et al. Ein organotypisches Schnittkulturmodell des humanen Glioblastoms zur Untersuchung der Migration von Tumorzellen und der patientenspezifischen Wirkungen von antiinvasiven Medikamenten. J. Vis. Exp. (2017)Dieses Video zeigt die Bildgebung von Glioblastom-Gewebeschnitten, die grün fluoreszierendes Protein (GFP) exprimieren, mittels konfokaler Mikroskopie. Hochauflösende Bilder werden in gleichbleibenden Abständen aufgenommen, um die Bewegung und Richtung der...

Bildgebung der Migration von Tumorzellen im Glioblastomgewebe mittels konfokaler Zeitraffer-Scanning-Mikroskopie

Die organotypischen Hirnschnitt Co-Kultur mit Karzinomzellen ermöglicht die Visualisierung morphologische Veränderungen durch Fluoreszenz sowie Hellfeld-(Video)-Mikroskopie während des Prozesses der Karzinomzellinvasion von Hirngewebe. Dieses Modellsystem ermöglicht auch für die Zellaustausch und die Wiederauffüllung Ansätze und bietet eine Vielzahl von Manipulationen und Analysen.

Co-Kultur-System mit einer Scheibe Organotypische Gehirn-und 3D-Sphäroid von Karzinomzellen

Viele Arten von menschlichen Hirntumoren sind auf bestimmte Regionen innerhalb des Gehirns beschränkt und in Kultur schwer zu züchten. Dieses Protokoll befasst sich mit der Rolle der Tumormikroumgebung und untersucht neue medikamentöse Behandlungen durch die Analyse fluoreszierender primärer Hirntumorzellen, die in einem organotypischen Maushirnschnitt wachsen.

Ein Hirntumor / Organotypischen Co-Kultursystem für die Untersuchung Tumor-Microenvironment und gezielte Arzneimitteltherapie

Organotypischen hippocampal Slice Kulturen (OHSC) sind eine in-vitro- Modell, die die in-Vivo -Situation sehr gut simuliert. Hier beschreiben wir eine Vibratome-basierte verbessert schneiden-Protokoll, um qualitativ hochwertige Scheiben für den Einsatz bei der Beurteilung der neuroprotektive Potenzial der neuartigen Substanzen oder das biologische Verhalten der Tumorzellen zu erhalten.

Organotypischen Hippocampal Slice Kulturen als Modell zur Studie Neuroprotektion und Invasivität der Tumorzellen

Hier beschreiben wir einen einfach zu bedienenden Invasionstest für Glioblastom. Dieser Test eignet sich für glioblastom-Stammzellen. Ein Fidschi-Makro zur einfachen Quantifizierung von Invasion, Migration und Proliferation wird ebenfalls beschrieben.

Ein 3D Spheroid Modell für Glioblastom

Wir führen ein Protokoll zur Messung der Echtzeit-Arzneimittelreaktion in organotypischen Tumorgewebescheiben ein. Die hier skizzierte experimentelle Strategie bietet eine Plattform, um mittelhohe Durchsatz-Medikamenten-Screens auf Gewebescheiben durchzuführen, die aus klinischen oder Maustumoren unter ex vivo-Bedingungen abgeleitet werden.

Messung der Echtzeit-Arzneimittelreaktion in organotypischen Tumorgewebescheiben

Kükenembryonen werden zur Untersuchung von humanen Glioblastom-Hirntumoren (GBM) in ovo - und in ex vivo-Hirnschnitt-Kokulturen verwendet. Das Verhalten von GBM-Zellen kann durch Zeitraffermikroskopie in ex vivo Kokulturen aufgezeichnet werden, und beide Präparate können am experimentellen Endpunkt durch detaillierte konfokale 3D-Analyse analysiert werden.

Verwendung des Gehirns von Kükenembryonen als Modell für in vivo und ex vivo Analysen des Verhaltens menschlicher Glioblastomzellen

Hier skizzieren wir ein umfassendes Protokoll für die Generierung und Verwendung von labortechnisch hergestellten Glioblastom-Organoiden (LEGO), um Genotyp-Phänotyp-Abhängigkeiten zu untersuchen und potenzielle Medikamente für die Glioblastombehandlung zu screenen.

Labortechnische Glioblastom-Organoidkultur und Wirkstoffscreening

Wir präsentieren ein 3D-Glioblastom-Migrationsmodell unter Verwendung von von Patienten abgeleiteten magnetischen Gliomsphären, die aus neu diagnostizierten und wiederkehrenden Tumoren erzeugt wurden. Diese Plattform ermöglicht die Visualisierung patientenspezifischer Migrationsdynamiken und die Bewertung der therapeutischen Wirksamkeit. Der Test kann nach der Migration multiplexiert werden, um die Proteinlokalisierung und Expressionsmuster zu bewerten.

Reproduzierbarer 3D-Glioblastom-Migrationstest mit magnetischer Nanopartikel-vermittelter sphäroider Lokalisierung unter hypoxischen Bedingungen

Erfahren Sie die Erzeugung und Pflege von organotypischen Glioblastom-Gewebescheibenkulturen aus frischem menschlichem Tumorgewebe. Diese Methode ermöglicht die Analyse invasiver Migrationsverhaltensweisen primärer GBM-Zellen unter Erhaltung der in vivo-Gewebearchitektur.

Ein menschliches Glioblastom Organotypisches Scheibenkulturmodell zur Untersuchung der Tumorzellmigration und patientenspezifischen Wirkungen von antiinvasiven Arzneimitteln (Video) | JoVE Journal

Ein menschliches Glioblastom Organotypisches Scheibenkulturmodell zur Untersuchung der Tumorzellmigration und patientenspezifischen Wirkungen von antiinvasiven Arzneimitteln

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