Name: Isolierung und Analyse über Durchflusszytometrie von Gliom-Infiltration peripheren mononukleären Blutzellen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-11-28T15:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 52 s
Description: Lernen Sie die Isolierung und Durchflusszytometrie-Analyse von Gliom-infiltrativen peripheren mononukleären Blutzellen. Diese Methode liefert zeitabhängige quantitative Daten zur Immunzellaktivierung im frühen Tumormikromilieu.

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Diese Arbeit wurde vom National Institutes of Health / Nationale Institut für neurologische Erkrankungen und Schlaganfall (NIH / NINDS) gewährt R01-NS074387, R01-NS057711 und R21-NS091555 zu MGC unterstützt; NIH / NINDS gewährt R01-NS061107, R01-NS076991, R01-NS082311 und R21-NS084275 zu PRL; Zuschüsse aus Leas Happy Hearts, University of Michigan Comprehensive Cancer Center an MGC und PRL vergeben; die Klinik für Neurochirurgie, Universität von Michigan School of Medicine; der Michigan-Institut für klinische und Gesundheitsforschung, die von NIH Zuschusses 2UL1-TR000433 unterstützt; die Universität von Michigan Cancer Biology Ausbildungsbeihilfe von NIH / NCI (National Cancer Institute) Zuschuss T32-CA009676 unterstützt; die Universität von Michigan Ausbildung in klinischer und Grundneuroscience von NIH / NINDS unterstützt gewähren T32-NS007222; und der University of Michigan Medical Scientist Training Program von NIH / NIGMS (Nationales Institut für Allgemeinmedizin Wissenschaften) unterstützt gewähren T32-GM007863. Die Autoren einre dankbar für die akademische Führung und Unterstützung von Dr. Karin Muraszko und der Klinik für Neurochirurgie erhalten; M. Dahlgren, D. TOMFORD und S. neapolitanischen für hervorragende administrative Unterstützung; M. Dzaman für herausragende technische Hilfe; und Phil F. Jenkins für die großzügige Unterstützung für den Kauf eines Zeiss 3D Scanning Electron Microscope. Wir erkennen auch die Kuchroo Labor an der Harvard Medical School, von dem eine modifizierte Version des Dichtezentrifugation Medien vermittelte Strategie für die Isolierung von Gehirnmononuklearen Zellen gezogen wurde.

<ol><li>Bleeker, F. E., Molenaar, R. J., Leenstra, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+advances+in+the+molecular+understanding+of+glioblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurooncol%22%5BJournal%5D)">Recent advances in the molecular understanding of glioblastoma.</a> J Neurooncol. 108, 11-27 (2012).</li>
<li>Stupp, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radiotherapy+plus+concomitant+and+adjuvant+temozolomide+for+glioblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Radiotherapy plus concomitant and adjuvant temozolomide for glioblastoma.</a> N Engl J Med. 352, 987-996 (2005).</li>
<li>Ostrom, Q. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CBTRUS+statistical+report%3A+primary+brain+and+central+nervous+system+tumors+diagnosed+in+the+United+States+in+2007-2011%5BTitle%5D)+AND+%22Neuro+Oncol%22%5BJournal%5D)">CBTRUS statistical report: primary brain and central nervous system tumors diagnosed in the United States in 2007-2011.</a> Neuro Oncol. 16, Suppl 4. iv1-63 (2014).</li>
<li>Louveau, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+and+functional+features+of+central+nervous+system+lymphatic+vessels%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Structural and functional features of central nervous system lymphatic vessels.</a> Nature. 523, 337-341 (2015).</li>
<li>Kennedy, B. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor-associated+macrophages+in+glioma%3A+friend+or+foe%3F%5BTitle%5D)+AND+%22J+Oncol.%22%5BJournal%5D)">Tumor-associated macrophages in glioma: friend or foe?</a> J Oncol.. 2013, 486912(2013).</li>
<li>Markovic, D. S., Glass, R., Synowitz, M., Rooijen, N., Kettenmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+stimulate+the+invasiveness+of+glioma+cells+by+increasing+the+activity+of+metalloprotease-2%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuropathol+Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Microglia stimulate the invasiveness of glioma cells by increasing the activity of metalloprotease-2.</a> J Neuropathol Exp Neurol. 64, 754-762 (2005).</li>
<li>Zhai, H., Heppner, F. L., Tsirka, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia%2Fmacrophages+promote+glioma+progression%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Microglia/macrophages promote glioma progression.</a> Glia. 59, 472-485 (2011).</li>
<li>Kmiecik, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elevated+CD3%2B+and+CD8%2B+tumor-infiltrating+immune+cells+correlate+with+prolonged+survival+in+glioblastoma+patients+despite+integrated+immunosuppressive+mechanisms+in+the+tumor+microenvironment+and+at+the+systemic+level%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuroimmunol%22%5BJournal%5D)">Elevated CD3+ and CD8+ tumor-infiltrating immune cells correlate with prolonged survival in glioblastoma patients despite integrated immunosuppressive mechanisms in the tumor microenvironment and at the systemic level.</a> J Neuroimmunol. 264, 71-83 (2013).</li>
<li>Yang, I., Han, S. J., Sughrue, M. E., Tihan, T., Parsa, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+cell+infiltrate+differences+in+pilocytic+astrocytoma+and+glioblastoma%3A+evidence+of+distinct+immunological+microenvironments+that+reflect+tumor+biology%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosurg%22%5BJournal%5D)">Immune cell infiltrate differences in pilocytic astrocytoma and glioblastoma: evidence of distinct immunological microenvironments that reflect tumor biology.</a> J Neurosurg. 115, 505-511 (2011).</li>
<li>Wagner, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglial%2Fmacrophage+expression+of+interleukin+10+in+human+glioblastomas%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Cancer%22%5BJournal%5D)">Microglial/macrophage expression of interleukin 10 in human glioblastomas.</a> Int J Cancer. 82, 12-16 (1999).</li>
<li>El Andaloussi, A., Lesniak, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+increase+in+CD4%2BCD25%2BFOXP3%2B+regulatory+T+cells+in+tumor-infiltrating+lymphocytes+of+human+glioblastoma+multiforme%5BTitle%5D)+AND+%22Neuro+Oncol%22%5BJournal%5D)">An increase in CD4+CD25+FOXP3+ regulatory T cells in tumor-infiltrating lymphocytes of human glioblastoma multiforme.</a> Neuro Oncol. 8, 234-243 (2006).</li>
<li>Kostianovsky, A. M., Maier, L. M., Anderson, R. C., Bruce, J. N., Anderson, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Astrocytic+regulation+of+human+monocytic%2Fmicroglial+activation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Astrocytic regulation of human monocytic/microglial activation.</a> J Immunol. 181, 5425-5432 (2008).</li>
<li>Curtin, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HMGB1+mediates+endogenous+TLR2+activation+and+brain+tumor+regression%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Med%22%5BJournal%5D)">HMGB1 mediates endogenous TLR2 activation and brain tumor regression.</a> PLoS Med. 6, e10(2009).</li>
<li>Curtin, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fms-like+tyrosine+kinase+3+ligand+recruits+plasmacytoid+dendritic+cells+to+the+brain%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Fms-like tyrosine kinase 3 ligand recruits plasmacytoid dendritic cells to the brain.</a> J Immunol. 176, 3566-3577 (2006).</li>
<li>Mineharu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+the+brain+tumor+microenvironment+enhances+the+efficacy+of+dendritic+cell+vaccination%3A+implications+for+clinical+trial+design%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Engineering the brain tumor microenvironment enhances the efficacy of dendritic cell vaccination: implications for clinical trial design.</a> Clin Cancer Res. 17, 4705-4718 (2011).</li>
<li>Larocque, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exogenous+fms-like+tyrosine+kinase+3+ligand+overrides+brain+immune+privilege+and+facilitates+recognition+of+a+neo-antigen+without+causing+autoimmune+neuropathology%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Exogenous fms-like tyrosine kinase 3 ligand overrides brain immune privilege and facilitates recognition of a neo-antigen without causing autoimmune neuropathology.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 107, 14443-14448 (2010).</li>
<li>Curtin, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treg+depletion+inhibits+efficacy+of+cancer+immunotherapy%3A+implications+for+clinical+trials%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Treg depletion inhibits efficacy of cancer immunotherapy: implications for clinical trials.</a> PLoS One. 3, e1983(2008).</li>
<li>Ali, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combined+immunostimulation+and+conditional+cytotoxic+gene+therapy+provide+long-term+survival+in+a+large+glioma+model%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Combined immunostimulation and conditional cytotoxic gene therapy provide long-term survival in a large glioma model.</a> Cancer Res. 65, 7194-7204 (2005).</li>
<li>Dewey, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+brain+inflammation+and+persistent+herpes+simplex+virus+1+thymidine+kinase+expression+in+survivors+of+syngeneic+glioma+treated+by+adenovirus-mediated+gene+therapy%3A+implications+for+clinical+trials%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Chronic brain inflammation and persistent herpes simplex virus 1 thymidine kinase expression in survivors of syngeneic glioma treated by adenovirus-mediated gene therapy: implications for clinical trials.</a> Nat Med. 5, 1256-1263 (1999).</li>
<li>Baker, G. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Natural+killer+cells+eradicate+galectin-1-deficient+glioma+in+the+absence+of+adaptive+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Natural killer cells eradicate galectin-1-deficient glioma in the absence of adaptive immunity.</a> Cancer Res. 74, 5079-5090 (2014).</li>
<li>Baker, G. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+glioma+formation%3A+iterative+perivascular+glioma+growth+and+invasion+leads+to+tumor+progression%2C+VEGF-independent+vascularization%2C+and+resistance+to+antiangiogenic+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Neoplasia%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of glioma formation: iterative perivascular glioma growth and invasion leads to tumor progression, VEGF-independent vascularization, and resistance to antiangiogenic therapy.</a> Neoplasia. 16, 543-561 (2014).</li>
<li>Ormerod, M. G., Novo, D. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aOrmerod%2C+MG+%22Flow+cytometry+%3A+a+basic+introduction%22">Flow cytometry : a basic introduction</a>. , (2008).</li>
<li>Stirling, D. P., Yong, V. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamics+of+the+inflammatory+response+after+murine+spinal+cord+injury+revealed+by+flow+cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Res%22%5BJournal%5D)">Dynamics of the inflammatory response after murine spinal cord injury revealed by flow cytometry.</a> J Neurosci Res. 86, 1944-1958 (2008).</li>
<li>Hirai, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+prevalence+and+phenotype+of+activated+microglia%2Fmacrophages+within+the+spinal+cord+of+the+hyperostotic+mouse+%28twy%2Ftwy%29+changes+in+response+to+chronic+progressive+spinal+cord+compression%3A+implications+for+human+cervical+compressive+myelopathy%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">The prevalence and phenotype of activated microglia/macrophages within the spinal cord of the hyperostotic mouse (twy/twy) changes in response to chronic progressive spinal cord compression: implications for human cervical compressive myelopathy.</a> PLoS One. 8, e64528(2013).</li>
<li>Fleming, T. J., Fleming, M. L., Malek, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+expression+of+Ly-6G+on+myeloid+lineage+cells+in+mouse+bone+marrow.+RB6-8C5+mAb+to+granulocyte-differentiation+antigen+%28Gr-1%29+detects+members+of+the+Ly-6+family%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Selective expression of Ly-6G on myeloid lineage cells in mouse bone marrow. RB6-8C5 mAb to granulocyte-differentiation antigen (Gr-1) detects members of the Ly-6 family.</a> J Immunol. 151, 2399-2408 (1993).</li>
<li>Wiesner, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((De+novo+induction+of+genetically+engineered+brain+tumors+in+mice+using+plasmid+DNA%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">De novo induction of genetically engineered brain tumors in mice using plasmid DNA.</a> Cancer Res. 69, 431-439 (2009).</li>
<li>Holland, E. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combined+activation+of+Ras+and+Akt+in+neural+progenitors+induces+glioblastoma+formation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Genet%22%5BJournal%5D)">Combined activation of Ras and Akt in neural progenitors induces glioblastoma formation in mice.</a> Nat Genet. 25, 55-57 (2000).</li>
<li>Lynes, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lentiviral-induced+high-grade+gliomas+in+rats%3A+the+effects+of+PDGFB%2C+HRAS-G12V%2C+AKT%2C+and+IDH1-R132H%5BTitle%5D)+AND+%22Neurotherapeutics%22%5BJournal%5D)">Lentiviral-induced high-grade gliomas in rats: the effects of PDGFB, HRAS-G12V, AKT, and IDH1-R132H.</a> Neurotherapeutics. 11, 623-635 (2014).</li>
<li>de Vries, N. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+and+robust+transgenic+high-grade+glioma+mouse+models+for+therapy+intervention+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Rapid and robust transgenic high-grade glioma mouse models for therapy intervention studies.</a> Clin Cancer Res. 16, 3431-3441 (2010).</li>
<li>Uhrbom, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ink4a-Arf+loss+cooperates+with+KRas+activation+in+astrocytes+and+neural+progenitors+to+generate+glioblastomas+of+various+morphologies+depending+on+activated+Akt%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Ink4a-Arf loss cooperates with KRas activation in astrocytes and neural progenitors to generate glioblastomas of various morphologies depending on activated Akt.</a> Cancer Res. 62, 5551-5558 (2002).</li>
<li>Marumoto, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+novel+mouse+glioma+model+using+lentiviral+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Development of a novel mouse glioma model using lentiviral vectors.</a> Nat Med. 15, 110-116 (2009).</li>
<li>Assanah, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glial+progenitors+in+adult+white+matter+are+driven+to+form+malignant+gliomas+by+platelet-derived+growth+factor-expressing+retroviruses%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Glial progenitors in adult white matter are driven to form malignant gliomas by platelet-derived growth factor-expressing retroviruses.</a> J Neurosci. 26, 6781-6790 (2006).</li>
</ol>

Die Autoren haben nichts zu offenbaren.

Dieses Protokoll beschreibt eine robuste und reproduzierbare Methode zur Isolierung und Durchflusszytometrieanalyse PBMCs, die die frühe Mausgehirn-Tumor-Mikroumgebung infiltriert haben. Gliom Zellsuspensionen werden in einem vom Experimentator, die stereotaktisch in das Striatum des Gehirns der Maus eingepflanzt werden festgelegte Wert generiert. Mäuse werden dann in vorgegebenen von der Versuchsplanung festgelegten Zeitpunkten getötet und ihre Gehirne werden geerntet und verarbeitet, um Gliom-Infiltration PBMCs, die m...

Gliome sind eine Klasse von neuroepithelial Hirntumoren aus transformierten Gliazellen im Zentralnervensystem (ZNS). Von all den Gliomen, der Weltgesundheitsorganisation (WHO) Grad IV Gliom oder Glioblastom (GBM), der häufigsten und tödlichen 1. GBM ist hochfeuerfesten dem aktuellen Standard-of-Care, die aus Tumorentfernung in dem Maße möglich, gefolgt von einer Strahlentherapie mit gleichzeitiger und adjuvanter Chemotherapie mit Temozolomid 2 besteht. Diese tödliche Krebserkrankungen führen einen düstere Prognose von nur 15-18 Monaten des Überlebens aus der Zeit der ersten Diagnose mit nur 5% der Patienten überleben die Krankheit nach 5 Jahren 3. Das Vorhandensein der Blut-Hirn-Schranke (BBB), haben Mangel an professionellen Antigen-präsentierenden Zellen (APCs), und das zuvor nicht identifizierte Vorliegen bona fide lymphatischen Strukturen innerhalb des Gehirns 4 auf den Begriff der GBM als Immun privilegierten geführt. Doch jetzt zahlreiche Studien show dass diese Hirntumoren Tat erzeugen die Rekrutierung von peripheren Immunzellen, die vorwiegend myeloiden Ursprungs sind die Monozyten, Makrophagen und myeloische-Suppressorzellen (MDSC) 5 umfassen. GBM auch Einfluss auf die Aktivität der Gehirnansässigen Mikroglia zu pro-tumorigenen 6,7 geworden. Lymphoide Zellen, wie CD8 + T-Zellen 8 und CD56 + natürlichen Killerzellen 9 sind ebenfalls im Tumor-Mikroumgebung vorhanden, jedoch in viel geringerer Zahl, eine Tatsache angenommen, dass aufgrund immunsuppressive Funktion Gliom abstammenden Faktoren auf Tumor-assoziierte Makrophagen eingeleitet werden ( TAMs) 10. CD4 + T-Zellen sind auch in GBM, aber ein großer Teil dieser Bevölkerung drückt auch CD25 und FoxP3, Hersteller von immunsuppressiven regulatorischen T (T reg) Zellen 11. Die Gesamt immunsuppressiven Zustand der GBM gipfelt in der Förderung der immunologischen Flucht und Tumorprogression 12. <p class= &quot;jove_content&quot;&gt; Ein besseres Verständnis der Mechanismen der GBM Immunsuppression ist kritisch für die Entwicklung einer wirksamen immun Strategien entwickelt, um das Immunsystem gegen den Tumor stimulieren. Im Laufe der letzten 15 Jahren unser Labor gearbeitet hat, um die Mechanismen der Gehirntumor immunosuppresson um wirksame neue Anti-GBM-Immuntherapeutika 13-19 Entwicklung zu überwinden. Der Höhepunkt dieser Arbeit wurde nun auf einer klinischen Studie konzipiert, um eine kombinierte zytotoxische und immunstimulatorischen Therapeutikum für Patienten mit neu diagnostiziertem GBM (: NCT01811992 ClinicalTrials.gov Identifier) ​​zu bewerten geführt. Unsere jüngste Arbeit zeigt, dass Maus GL26 und Ratten CNS-1 GBM Zellen blockieren Anti-Tumor-NK-Zell-Immunüberwachung durch die Produktion großer Mengen des β-Galactosid-bindenden Lektin Galectin-1 (Gal-1) 20. Dies wurde durch die Unterdrückung der Expression von gal-1 in Gliomzellen mit shRNA-vermittelte Gen-Knockdown demonstriert. In vitro experiments zeigte, dass gal-1-defizienten Gliomzellen normalerweise in Kultur vermehrt, noch eine rasante Ablehnung bald nach intrakraniellen Verpflanzung in syngene C57BL / 6J oder RAG1 - / - Mäuse und schafft so die Unabhängigkeit der T- oder B-Zellen, die auf diese Form der Tumorabstoßung. NK-Zellen Immunodepletion mit anti-Asialo-GM 1-Antiserum oder monoklonalen Antikörpern NK1.1 führte zur vollständigen Wiederherstellung von intrakraniellen gal-1-defizienten Gliom Wachstum, zur Gründung der Rolle von NK-Zellen in gal-1-defizienten Gliom Ablehnung. Wir zeigen nun, dass die Immundepletion der Gr-1 + / CD11b + myeloiden Zellen ausreichend ist, um Gal-1-defizienten Gliom Ablehnung trotz der Anwesenheit von NK-Zellen zu verhindern, offenbart somit ein unverzichtbares Hilfsrolle für myeloide Zellen in den gleichsinnigen von NK-vermittelte gal -1-defizienten Tumor Lyse (unveröffentlichte Daten). Dieses unerwartete Ergebnis hat uns dazu geführt, eine umfassende Protokoll für die Isolierung und Analyse von peripheren mononukleären Blutzellen (PBMCs) zu entwickeln,infiltrieren das Gehirn Tumor-Mikroumgebung bald nach intrakraniellen engraftment damit wir bessere Charakterisierung der Immuninfiltration Ereignisse, die gal-1-defizienten Gliom Ablehnung Prädikat. Das Verfahren wird hier durch die Verwendung der Maus GL26 Gliom-Zellen, die konstitutiv exprimieren mCitrine fluoreszierendes Protein, genannt GL26-Cit, die direkte Tumorzellvisualisierung mittels Fluoreszenzmikroskopie 21 erlauben demonstriert. Diese Zellen werden stereotaktisch in das Gehirn eines syngenen C57BL / 6J-Mäusen eingeimpft und für 24, 48 oder 72 Stunden vor der Euthanasie Maus wachsen. Gliom-Infiltration PBMCs werden dann isoliert und immun mit Anti -CD45, -GR-1, -CD11b und -NK1.1 Zelloberflächenantikörper zusammen mit intrazelluläre Immunmarkierung für Granzym B (GzmB). Diese spezielle Kombination von Antikörpern erlaubt die Identifizierung von Tumor-infiltrierenden Gr-1 + / CD11b + myeloiden Zellen und NK1.1 +, NK-Zellen, Zelltypen wir been verwickelt in gal-1-defizienten Tumorabstoßung. Die Immuninfiltration Profil gal-1-defizienten GL26-Cit Gliom, hier bezeichnet als GL26-Cit-gal1i, wird dann zu der Gliome exprimieren ein normales Niveau von Gal-1 genannt GL26-Cit-NT, die ein nicht enthalten im Vergleich Targeting Steuer shRNA Haarnadel. Das Protokoll beginnt mit einer Beschreibung, wie man Kultur GL26-Cit-Gliomzellen in vitro, die durch eine Erklärung, wie orthotop engraft diese Zellen in das Striatum von syngenen C57BL / 6J Mäusen folgt. Es geht dann zu den Schritten bei der Isolierung und Immunmarkierung von Gliom-Infiltration PBMCs für durchflusszytometrische Analyse beteiligt aufzuzählen. Das Protokoll schließt mit einer Erläuterung von Standarddatenanalyse und grafische Darstellung. Die Demonstration zeigt, dass sowohl Gr-1 + / CD11b + myeloischen Zellen und NK1.1 + NK-Zellen bevorzugt im gal-1-defizienten Gehirn Tumor-Mikroumgebung innerhalb von 48 akkumulierenhr der Tumorimplantation, ein Ergebnis, das zu erklären, warum diese Tumoren schnell komplette Tumorlyse ca. 1 Woche nach der Tumor-Transplantation unterziehen 20 hilft. Das Verfahren ist leicht an einer Reihe von in vivo verschiedenen experimentellen Designs, in welchem ​​zeitlichen Daten auf Immuninfiltration in das Gehirn erforderlich. Eine einzelne Experimentator kann das Protokoll von Gehirn Ernte durchzuführen, um zytometrische Analyse von Gliom-infiltrierenden PBMCs fließen in etwa 4-6 Stunden, je nach der Anzahl der zu analysierenden Proben. Das Verfahren kann auch mit Experimenten gerichtet, um das Profil des zirkulierenden PBMCs in tumortragenden Mäuse für einen Vergleich mit denen, die das Gehirn infiltrieren so Immunsuppression Phänotypen speziell von der Tumor-Mikroumgebung induziert identifizieren charakterisieren kombiniert werden. Anwendung dieser und ähnlicher Verfahren sollte ein besseres Verständnis der Faktoren, die in den Handel mit peripheren Immunzellen in das Gehirn Tumor-Mikroumgebung beteiligt sind, erleichtern.

<table><tbody><tr><td>Dulbecco' s Modifikation von Eagles Medium</td><td>Gibco</td><td>12430-054</td><td>mit 4,5 g/L D-Glucose, L-Glutamin, 25 mM HEPES und Phenolrot</td></tr><tr><td>Dulbecco' s Phosphatgepufferte Kochsalzlösung&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>14190-144&nbsp;</td><td>ohne Calciumchlorid oder Magnesiumchlorid</td></tr><tr><td>Fötales Rinderserum</td><td>Omega Scientific Inc.</td><td>FB-11</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin Streptomycin&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>15140-122</td><td>10.000 U/ml Penicillin; 10.000 μm; g/ml Streptomycin&nbsp;</td></tr><tr><td>L-Glutamin</td><td>Gibco</td><td>25030-081</td><td>200 mM</td></tr><tr><td>G418 Sulfat&nbsp;</td><td>Omega Scientific Inc.</td><td>GN-04</td><td></td></tr><tr><td>Puromycin-Dihydrochlorid &nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P8833</td><td>aus Streptomyces alboniger</td></tr><tr><td>HyClone HyQTase nicht-säugetierfreie Trypsin-Alternative&nbsp;</td><td>Thermo Scientific</td><td>SV30030.01</td><td>in DPBS mit EDTA&nbsp;</td></tr><tr><td>Phasenkontrast-Hämozytometer</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Z359629</td><td>0,1 mm tiefe</td></tr><tr><td>Trypanblau-Färbung</td><td>Gibco</td><td>15250-061</td><td></td></tr><tr><td>Sterile 0,9 % NaCl-Injektion, USP</td><td>Hospira</td><td>NDC: 0409-4888</td><td>10 ml Fläschchen</td></tr><tr><td>0,6 ml konische Polypropylenämie-Mikroröhrchen</td><td>Genesee Scientific</td><td>22-272</td><td></td></tr><tr><td>Atipamezolhydrochlorid-Injektion</td><td>Orion Pharma</td><td>NDC: 52483-6298</td><td>5 mg/ml Lösung</td></tr><tr><td>Ketaminhydrochlorid Injektion</td><td>Fort Dodge</td><td>NDC: 0409-2051</td><td>100 mg/ml Lösung</td></tr><tr><td>Dexmedetomidin Hydrochlorid Injektion</td><td>Zoetis</td><td>NDC: 54771-2805</td><td>0,5 mg/ml Lösung</td></tr><tr><td>Xylazinhydrochlorid Injektion</td><td>Lloyd</td><td>NDC: 61311-481</td><td>100 mg/ml Lösung</td></tr><tr><td>Carprofen Injektion</td><td>Pfizer</td><td>NDC: 61106-8501</td><td>50 mg/ml Lösung</td></tr><tr><td>Buprenorphin Hydrochlorid Injektion</td><td>Reckitt Benckiser</td><td>NDC: 12496-0757</td><td>0,3 mg/ml Ampullen</td></tr><tr><td>1 ml Tuberkulinspritzen</td><td>Covidien</td><td>8881501400</td><td></td></tr><tr><td>26G x &frac12; (0,45 mm x 13 mm) Spritzennadeln&nbsp;</td><td>BD</td><td>305111</td><td></td></tr><tr><td>Chirurgische Schermaschine</td><td>3M</td><td>9661</td><td></td></tr><tr><td>Providon-Jod-Lösung</td><td>Aplicare</td><td>82-217</td><td>NDC: 52380-1905</td></tr><tr><td>Sterile Vaseline Augensalbe&nbsp;</td><td>Dechra</td><td>NDC: 17033-211</td><td></td></tr><tr><td>70% Isopropylalkohol Vorbereitungspads</td><td>Kendall</td><td>6818</td><td></td></tr><tr><td>Sterile</td><td>Gaze Covidien</td><td>8044</td><td>Vlies, 4" x 4", 4-lagig&nbsp;</td></tr><tr><td>1,7 ml konische Mikroröhrchen aus Polypropylen</td><td>Genesee Scientific</td><td>22-281</td><td></td></tr><tr><td>Maus stereotaktischer Rahmen</td><td>Stoelting</td><td>51730</td><td></td></tr><tr><td>OP-Lampe</td><td>Philips Burton</td><td>CS316W</td><td>Coolspot II Variabler Scheinwerfer</td></tr><tr><td>Gebogene Präparierzange</td><td>Ted Pella Inc.</td><td>5431</td><td></td></tr><tr><td>Colibri Retraktoren&nbsp;</td><td>FST</td><td>17000-03</td><td></td></tr><tr><td>Akku-Präzisions-Bohrmaschine</td><td>Dremel&nbsp;</td><td>1100-01</td><td>Stylus-Modell; 7,2 Volt Lithium-Ionen mit Dockingstation</td></tr><tr><td>Gravierschneider</td><td>Dremel</td><td>105</td><td>1/32" oder 0,8 mm</td></tr><tr><td>Bitdurchmesser Mikroliterspritze</td><td>Hamilton</td><td>75</td><td>Hamilton Mikroliterspritzen 700 Serie; 5 &mu; l Volumen</td></tr><tr><td>Mikroliter Spritzennadeln</td><td>Hamilton</td><td>7762-06</td><td>33 G, kleine Nabe RN NDL, 1,5 Zoll, Point Style 3, 6/PK</td></tr><tr><td>Ethilon 3-0 schwarz monofile Nylon-Nähte&nbsp;</td><td>Ethicon</td><td>1663</td><td></td></tr><tr><td>Magnetrührstäbchen</td><td>VWR</td><td>74950-296</td><td>7,9 mm Durchmesser x 50 mm Länge (5/16" Durchmesser x 2" Länge)</td></tr><tr><td>1 L Vorratsflasche aus Glas mit Schraubverschluss</td><td>Corning</td><td>1395</td><td>Typ 1, Klasse A Borosilikatglas</td></tr><tr><td>Heparin Natrium&nbsp;</td><td>Agent</td><td>NDC: 25021-400</td><td>1.000 U/ml Lösung</td></tr><tr><td></td><td>Schlauchpumpe Cole Parmer Instruments Group</td><td>77200-60</td><td>Master Flex Easy Load II Konsolenantrieb</td></tr><tr><td>komprimierter Carbogen (95% O2 / 5% CO2)</td><td>erhältlich vom lokalen Anbieter</td><td>N/A</td><td>A-Typ, großer Zylinder</td></tr><tr><td>20 G x 1 & frac12; " Aluminiumnabe stumpfe Nadeln</td><td>Kendall</td><td>8881202363</td><td>0,9 mm x 38,1 mm</td></tr><tr><td>Polyurethan Eiskübel</td><td>Fisherbrand</td><td>02-591-45</td><td>Kapazität: 0,152 oz. (4,5 l)</td></tr><tr><td>Kollagenase (Typ I-S)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>C1639</td><td>aus Clostridium histolyticum&nbsp;</td></tr><tr><td>Desoxyribonuklease I</td><td>Worthington Biochemical Corp.</td><td>LS002007</td><td>>2.000 Kunitz-Einheiten pro mg Trockengewicht</td></tr><tr><td>Antistatische sechseckige Wägeschalen aus Polystyrol</td><td>Ted Pella Inc.</td><td>20157-3</td><td>obere ID 115 mm, Basis-ID 85 mm, 203 ml Volumen&nbsp;</td></tr><tr><td>Einschneidige Rasierklingen aus rostfreiem Stahl</td><td>Garvey</td><td>40475</td><td></td></tr><tr><td>Knochenrongeurs</td><td>FST</td><td>16001-15</td><td></td></tr><tr><td>Hämostat</td><td>FST</td><td>13014-14</td><td></td></tr><tr><td>Große Präparierschere</td><td>Ted Pella Inc.</td><td>1316</td><td></td></tr><tr><td>Kleine Präparierschere</td><td>FST</td><td>14094-11</td><td></td></tr><tr><td>Zange mit stumpfem Ende</td><td>Ted Pella Inc.</td><td>13250</td><td></td></tr><tr><td>7 ml Glas Dounce Gewebeschleifer</td><td>Kontes</td><td>KT885300-0007</td><td></td></tr><tr><td>Percoll Dichte-Zentrifugationsmedien&nbsp;</td><td>GE Healthcare</td><td>GE17-0891-01</td><td></td></tr><tr><td>10 ml serologische Pipetten</td><td>Genesee Scientific</td><td>12-104</td><td>zum Einmalgebrauch; steril</td></tr><tr><td>70 &mu; M sterile Zellsiebe aus Nylonnetz&nbsp;</td><td>Fisherbrand</td><td>22363548</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 700-konjugierte Anti-Maus CD45 (Klon: 30-F11)</td><td>Biolegend</td><td>103128</td><td></td></tr><tr><td>APC-konjugierte Maus Anti-Maus NK1.1 (Klon: PK136)</td><td>eBiosciences&nbsp;</td><td>17-5941-82</td><td></td></tr><tr><td>PE-konjugierte Ratten-Anti-Maus Gr-1 (Klon: RB6-8C5)</td><td>BD Pharmigen</td><td>553128</td><td></td></tr><tr><td>PerCP/Cy5.5-konjugierte Ratten-Anti-Maus-CD11b (Klon: M1/70)</td><td>Biolegend</td><td>101228</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 700-konjugierte Ratte IgG2b, &kappa; (Klon: RTK4530) Isotyp-Steuerung&nbsp;</td><td>Biolegend</td><td>400628</td><td></td></tr><tr><td>APC-konjugierte Maus IgG2a, &kappa; (Klon: eBM2a) Isotyp-Kontrolle&nbsp;</td><td>eBioscience</td><td>17-4724</td><td></td></tr><tr><td>PE-konjugierte Ratte IgG2b, &kappa; (Klon: eB149/10H5) Isotyp-Kontrolle&nbsp;</td><td>eBioscience</td><td>12-4031-82</td><td></td></tr><tr><td>PerCP/Cy5.5-konjugiertes Ratten-IgG2b, &kappa; (Klon: RTK4530) Isotypkontrolle</td><td>Biolegend</td><td>400632</td><td></td></tr><tr><td>Pacific Blue-konjugiertes Maus-Anti-Maus-Granzym B (Klon: GB11)&nbsp;</td><td>Biolegende</td><td>515403</td><td></td></tr><tr><td>Pacific Blue-konjugierte Maus IgG1, &kappa; (Klon: MOPC-21) Isotyp-Kontrolle&nbsp;</td><td>Biolegend</td><td>400151</td><td></td></tr><tr><td>Cytofix/Cytoperm</td><td>BD</td><td>554714</td><td></td></tr><tr><td>15 ml Zentrifugenröhrchen aus Polypropylen</td><td>Genesee Scientific</td><td>21-103</td><td>mit konischem Boden</td></tr><tr><td>50 ml Zentrifugenröhrchen aus Polypropylen</td><td>Genesee Scientific</td><td>21-108</td> mit <td>konischem Boden</td></tr><tr><td>12 mm x 75 mm mit rundem Boden FACS Röhrchen aus Polypropylen &nbsp;</td><td>Fisherbrand</td><td>14-956-1B</td><td></td></tr><tr><td>FACSAria Sonderauftrag Forschung Produkt Durchflusszytometer/Zellsortierer</td><td>BD&nbsp;</td><td></td><td></td>650033</tr><tr><td>Biologische Sicherheitswerkbank der Klasse II</td> Modell <td>SG603</td><td>von The Baker Company</td><td>: SterilGARD III Advance</td></tr></tbody></table>

isolierung und analyse über durchflusszytometrie von gliom-infiltration peripheren mononukleären blutzellen

Isolation and Flow Cytometric Analysis of Glioma-infiltrating Peripheral Blood Mononuclear Cells

Unser Labor hat kürzlich gezeigt, dass natürliche Killerzellen (NK) in der Lage, die Beseitigung orthotop implantierten Maus GL26 und Ratten-ZNS-1 malignen Gliomen bald nach intrakraniellen Transplantation, wenn die Krebszellen sind mangelhaft in ihrer Expression des β-Galactosid-bindenden Lektin Galectin erbrachten -1 (Gal-1). Neuere Arbeiten zeigt nun, dass eine Population von Gr-1 + / CD11b + myeloiden Zellen ist wichtig, diesen Effekt. Zum besseren Verständnis der Mechanismen, durch die NK und myeloide Zellen zusammenwirken, um Gal-1-defizienten Tumorabstoßung verleihen haben wir ein umfassendes Protokoll für die Isolierung und Analyse von Gliom-infiltrierenden mononukleären peripheren Blutzellen (PBMC) entwickelt. Das Verfahren wird hier durch den Vergleich PBMC Infiltration in das Tumormikroumgebung demonstriert gal-1-exprimierenden GL26 Gliome mit denen gemacht über shRNA Zuschlags gal-1-Mangel. Das Protokoll beginnt mit einer Beschreibung, wie Kultur und bereiten GL26 cells zur Impfung in den syngenen C57BL / 6J Maus Gehirn. Er erklärt dann die Schritte in der Isolation und durchflusszytometrische Analyse von Gliom-Infiltration PBMCs aus dem frühen Gehirn Tumor-Mikroumgebung beteiligt. Das Verfahren ist adaptierbar an einer Reihe von in vivo Versuchsanordnungen, in denen zeitliche Daten auf Immuninfiltration in das Gehirn erforderlich. Die Methode ist empfindlich und hoch reproduzierbare, als Gliom-Infiltration PBMCs aus intrakraniellen Tumoren so schnell wie 24 Stunden nach der Tumor-Transplantation mit vom Zeitpunkt abgestimmt Tumoren im gesamten unabhängigen Experimenten beobachtet ähnliche Zellzahlen isoliert werden. Eine einzelne Experimentator kann das Verfahren aus dem Gehirn der Ernte durchzuführen, um zytometrische Analyse von Gliom-infiltrierenden PBMCs fließen in etwa 4-6 Stunden, je nach der Anzahl der zu analysierenden Proben. Alternative Gliom-Modelle und / oder zellspezifischen Nachweis Antikörper können auch an der Experimentatoren Ermessen verwendet werden, um das Eindringen von mehreren anderen immun zu bewertene Zelltypen von Interesse ohne die Notwendigkeit für die Änderung des Gesamtverfahrens.

Die folgende Gating-Strategie für ein typisches Experiment verwendet: FSC-A vs. SSC-A → SSC-H vs. SSC-W → FSC-H vs. FSC-W → CD45 vs. Zahl → Gr-1 vs. CD11b → NK1.1 vs. Count. Tore mit auf Gr-1 + / CD11b + myeloiden Zellen und NK1.1 + NK-Zellen werden dann auf schichtet GzmB Ausdruck (5A) beruht. Backgating diese Zellen als NK1.1 + NK-Zellen und Gr-1 + / CD11b + myeloischen Zellen in unseren Experimenten auf FSC-A vs. SSC-A den kleineren ly...

Dargestellt ist hier die einfache Methode zur Isolierung und Durchflusszytometrieanalyse Gliom-infiltrierenden mononukleären peripheren Blutzellen, die zeitabhängige quantitative Daten über die Anzahl und Aktivierungsstatus von Immunzellen in das Gehirn frühen Tumorumgebung ergibt.

Isolierung und Analyse über Durchflusszytometrie von Gliom-Infiltration peripheren mononukleären Blutzellen

Our laboratory has recently demonstrated that natural killer (NK) cells are capable of eradicating orthotopically implanted mouse GL26 and rat CNS-1 ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, die Anzahl der mononukleären Zellen des peripheren Blutes zu charakterisieren und zu quantifizieren, die in die frühe Mikroumgebung des Hirntumors eingedrungen sind. Diese Methode kann dazu beitragen, Schlüsselfragen auf dem Gebiet der Hirntumorimmunologie zu beantworten, indem sie Faktoren identifiziert, die für den Transport von peripheren Immunzellen in die Mikroumgebung des Hirntumors wichtig sind. Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass sie zeitabhängige quantitative Daten über die Anzahl und den Aktivierungsstatus der Leukozyten liefert, die in dieses ZNS eingedrungen sind.Nachdem Sie eine anästhesierte Maus in einen stereotaktischen Rahmen eingesetzt haben, machen Sie mit einer Skalpellklinge einen zwei Zentimeter langen Schnitt in der Mittellinie über den Schädel vom Stirnbein zum Hinterhauptbein. Ziehen Sie dann die Haut am Schnitt mit Collibra-Retraktoren zurück. Senken Sie danach eine Mikroliterspritze, die mit einer 33-Gauge-Nadel bestückt ist, direkt über den BMA ab.Passen Sie die Position der Nadel an, um die Zielstelle für die Tumorimplantation zu erreichen. Verwenden Sie dann eine Ein-Milliliter-Tuberkulin

isolation-flow-cytometric-analysis-glioma-infiltrating-peripheral

Research

Forschung

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie und Infektion

Der aktuelle Artikel beschreibt eine schnelle Protokoll zur effizienten Isolierung mononukleärer Zellen aus Gehirn und Rückenmark Gewebe, die effektiv für den durchflusszytometrischen Analysen genutzt werden können.

Isolierung von Brain and Spinal Cord mononukleären Zellen mit Percoll Gradienten

Diese Video-Protokoll zeigt die Anwendung des Fluoreszenzfarbstoffs Carboxyfluorescein-succinimidylester (CFSE) zur Identifikation und Trennung von verschiedenen Subpopulationen von Zellen in humanen Glioblastomzellen nach der Häufigkeit des Zellteilung basiert.

Identifizierung und Isolierung von Slow-teilenden Zellen im menschlichen Glioblastoma Mit Carboxyfluorescein Succinimidyl Ester (CFSE)

Das Video zeigt die Isolierung von tumorinfiltrierenden mononukleären Zellen des peripheren Blutes aus einem Mäusegehirn durch mechanische Dissoziation und enzymatische Verdauung. Daran schließt sich eine Dichtegradientenzentrifugation an, um die Immunzellen für die weitere Analyse zu sammeln.

Isolierung tumorinfiltrierender Immunzellen aus einem Gehirn von Mäusen

Entzündung spielt eine zentrale Rolle bei der Pathogenese des ischämischen Schlaganfalls. Immer mehr Hinweise deuten darauf hin, dass es wie ein zweischneidiges Schwert wirkt, das frühe Hirnverletzungen verschlimmert, aber auch zur späteren Reparatur beiträgt. Dieses Protokoll beschreibt die Isolierung von Immunzellen aus dem ischämischen Gehirn und ihre anschließende durchflusszytometrische Phänotypisierung.

Isolation und Analyse über Durchflusszytometrie von Immunzellen aus dem ischämischen Gehirn der Maus

Dieses Protokoll liefert eine Analyse der Makrophagen-Subpopulationen in das erwachsene Maus-Zentralnervensystem durch Durchflusszytometrie und ist hilfreich für die Untersuchung von mehreren Markern, die von diesen Zellen exprimiert werden.

Analyse von Mikroglia und Monozyten-abgeleiteten Makrophagen aus dem Zentralnervensystem durch Durchflusszytometrie

Dieses Protokoll wurde entwickelt, um Tumor-Mikroumgebungs-Komponenten in Glioblastom-Patienten-Resektionen mit chromogener Immunhistochemie und ImageJ quantitativ zu identifizieren.

Quantitative Immunhistochemie der zellulären Mikroumgebung bei Patienten-Glioblastom-Resektionen

Eine effizientes Screening-Protokoll wird für die Identifikation von kleinen Molekülen präsentiert, die Astroglial Differenzierung in Glioblastom Stammzellen (vorliegenden Allgemeinen Geschäftsbedingungen) zu fördern. Der Test basiert auf Stammzell-Differenzierung Reporter, wobei der Ausdruck der verbesserte GFP (eGFP) durch den menschlichen GFAP Projektträger angetrieben wird.

Flow Cytometry-based Drug Screening-System für die Identifizierung von kleinen Molekülen, die zelluläre Differenzierung von Stammzellen Glioblastom zu fördern

Wir stellen eine Methode zur Replikation der Mikroumgebung des Gliomtumors an der invasiven Front vor, die den interstitiellen Flüssigkeitsfluss einbezieht. Bei diesem Modell handelt es sich um ein Hyaluronan-Kollagen-I-Hydrogel in einem Gewebekultureinsatz, auf den ein Flüssigkeitsdruckkopf aufgebracht werden kann. Die Invasion kann quantifiziert werden, und Zellen können isoliert oder lysiert werden.

Ein photopolymerisierbares Hyaluronsäure-Kollagen-Modell der invasiven Gliom-Mikroumgebung mit interstitieller Strömung

Die Identifizierung von Mikroglia (MG) und peripheren infiltrierenden Makrophagen (Mø) im verletzten Rückenmark ist schwierig. In diesem Protokoll wurde die Durchflusszytometrie (FCM) verwendet, um M1-like MG, M2-like MG, M1-like Mø bzw. M2-like Mø zu identifizieren. Diese Technologie kann auch auf andere Erkrankungen des Zentralnervensystems angewendet werden, um die Rolle von MG und Mø zu verstehen.

Identifizierung von Mikroglia und peripher infiltrierenden Makrophagen im verletzten Rückenmark mittels Durchflusszytometrie

Hier stellen wir ein Protokoll zur Beurteilung der Immunzellfunktion nach ischämischem Schlaganfall mittels durchflusszytometrischer Analyse in einem Mini-Schlaganfallmodell vor. Diese Methode ermöglicht eine detaillierte Untersuchung der neuroimmunen Interaktionen und kann für die Untersuchung anderer neurodegenerativer Erkrankungen angepasst werden, um unser Verständnis der Immunantworten in der Schlaganfallpathologie zu verbessern.

Isolierung und durchflusszytometrische Bewertung neuroimmuner Interaktionen in einem Mini-Schlaganfall-Mausmodell

Lernen Sie die Isolierung und Durchflusszytometrie-Analyse von Gliom-infiltrativen peripheren mononukleären Blutzellen. Diese Methode liefert zeitabhängige quantitative Daten zur Immunzellaktivierung im frühen Tumormikromilieu.

Isolierung und Analyse über Durchflusszytometrie von Gliom-Infiltration peripheren mononukleären Blutzellen

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