Name: Verwaltung und Nachweis von Protein-Kennzeichen auf Arthropoden für Dispersal Forschung (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-01-28T15:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 30 s
Description: Erfahren Sie Methoden zur Proteinmarkierung von Insekten für Ausbreitungsforschung mit ELISA-Nachweis. Diese einfache, kostengünstige Technik ermöglicht Studien zu Wanderungsmustern und invasiven Arten im natürlichen Lebensraum.

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Die Finanzierung wurde von USDA CRIS 5347-22620-021-00D Verfügung gestellt und zum Teil von der Landwirtschaft und Nahrungsmittelforschung Initiative Competitive Grants-Nr. 2011-67009-30141 vom USDA National Institute of Food and Agriculture. Wir sind dankbar für die technische Unterstützung der Johanna Nassif. Wir danken auch Paul Baker, David Horton, Diego Nieto und Frances Sivakoff für die Bereitstellung einiger der in 3 verwendeten Bilder.

1. Interne Mark, Retention und Nachweisverfahren <ol><li> Interner Markierungsverfahren <ol><li> Sammeln von Insekten von Interesse (n ≈ 100 Personen) von einer Laborkolonie auf einer künstlichen Ernährung oder aus dem Bereich aufgezogen und teilen sich in zwei saubere Aufzuchtbehältern. </li><li> Legen Sie einen regelmäßigen 20 ml Diät-Paket (nicht markierten negativen Kontrollbehandlung) in einem der Behälter. Ergänzen eine zweite 20 ml künstliche Ernährung Paket mit 1,0 ml einer 1,0 mg / ml Huhn IgG / IgY Lösung, mischen Sie gründlich, und legen Sie sie in den anderen Behälter. Hinweis: Wenn das Insekt von Interesse nicht über eine künstliche Ernährung kann die Markierung auf oder in irgendeiner Diät sind sie in der Regel auf (zB, grüne Bohnen, Motteneier, Wasser, Zucker, Honig) anhalt platziert werden. </li><li> Lassen Sie die Insekten, um ihre Fraßaktivität 24 Stunden lang fortgesetzt. </li></ol></li><li> Interne Zeichen Retentionsverfahren <ol><li> Entfernen Sie die Diät-Pakete von jedem Behälter und liefern die Insekten with weiteren Nahrungsquelle, um sie über die Dauer des Experiments (zB grünen Bohnen) stützen. </li><li> Sammeln eine Kohorte (n = 20) von Insekten täglich (oder in jedem gewünschten Zeitintervall) von jeder Behandlung und gefrier sofort bei -20 ° C. </li></ol></li><li> Sandwich-ELISA-Verfahren <ol><li> Zugabe von 50 &amp; mgr; l von Kaninchen-Anti-Huhn-IgY primären Antikörper, verdünnt 1: 500 in Tris-gepufferter Salzlösung (TBS) in jede Vertiefung einer sauberen ELISA Mikrotiterplatten und Inkubieren für mindestens 1 h bei RT (Anmerkung: Die Mikrotiterplatten können inkubiert werden O / N bei 4 ° C). </li><li> Entsorgen Sie die Antikörper von der Platte und blockieren jede Vertiefung mit 300 ul einer 1,0% fettfreie Trockenmilch-Lösung für 30 min. </li><li> Während des Wartens auf den vorherigen Inkubationsschritte, legen froren Insekten einzeln in 1,6 ml Mikrozentrifugenröhrchen mit 1,0 ml TBS. </li><li> Mahlen jedes Insekt mit einem sauberen Stößel, bis sie gründlich homogenisiert und fügen Sie eine 100 ul jeder Probe auf eine individuelle Vertiefung der ELISAPlatte. Man lässt die Proben bei Raumtemperatur für 1 h inkubiert. </li><li> 100 l negativ (nur TBS) und positive (Eiweiß in TBS) Kontrollen in die Vertiefungen in der ersten Spalte jeder ELISA-Platte. Fügen Sie außerdem 100 ul negativen Insekten Kontrollen (nicht markierten Insekten) an die 8 Vertiefungen in der letzten Spalte jeder Platte (Abbildung 1). Lassen Sie die Kontrollproben bei RT für 1 h inkubiert. Beachten Sie, dass die Vorlage in der 1 vorgesehen ist die Vorlage, die wir für unsere standardisierten Tests. Die Plazierung der Proben in den Wells ist im Ermessen des Forschers. </li><li> Waschen Sie jede Vertiefung dreimal mit phosphatgepufferter Salzlösung (PBS) -tween und fügen Sie dann 50 ul Kaninchen-anti-Huhn IgG / IgY konjugiert mit Meerrettich-Peroxidase, 1: 10.000 in 1% Milchlösung und Inkubation für 1 h bei RT. </li><li> Dreimal mit PBS-Tween waschen jede Vertiefung geben und fügen Sie 50 ul Tetramethylbenzidin (TMB) Substrat in jede Vertiefung. </li><li> Nach 10 Minuten, lesen Sie die Vertiefungenmit einem Mikroplatten-Spektralphotometer bei einer Wellenlänge von 650 nm eingestellt. </li></ol></li></ol><img alt="Abbildung 1" src="/files/ftp_upload/53693/53693fig1.jpg" /> Abbildung 1 eine schematische Darstellung der standardisierten auch Bezeichnungen für ein typisches 96 verwendet ELISA Mikroplatten. Jede Platte enthält 7 Brunnen Tris-gepufferte Kochsalzlösung negative Kontrollen gewidmet (TBS), ein gut zu einer positiven Proteinsteuerung (Pos Ctrl) gewidmet, 80 Einzelbecken zur erobert Insekten (Probe 1 ... 80) und 8 Vertiefungen, um nicht markierte (negativ) Insekten Kontrollen gewidmet (Neg Ctrl 1 ... 8). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53693/53693fig1large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Figur zu sehen.</a> 2. Externe Mark, Retention und Nachweisverfahren <ol><li> Äußere Kennzeichnung Verfahren <ol><li> Sammeln von Insekten von Interesse (n ≈ 100Einzelpersonen) aus einem Labor-Kolonie oder vom Feld und Ort in zwei 1,0 l Kunststoffbehälter mit einem Loch mit einem Durchmesser von 2,5 cm ausgestanzt aus der Seite eines jeden Containers. </li><li> Sprühen die Insekten in den ersten Behälter mit 1,0 ml dH 2 O (negative Kontrollbehandlung) unter Verwendung einer medizinischen Zerstäuber. Sprühen die Insekten in den zweiten Behälter mit 1,0 ml einer 5,0% igen Lösung von Hühnereiweiß Verwendung eines medizinischen Zerstäuber. </li><li> Befestigen Sie den Schlauch des Verneblers zu einem Standard-Labor Luftauslass und dann die Öffnung des Zerstäubers in die 2,5 cm Loch des Behälters einzufügen. Schalten Sie dann den Luftaustritt nach und nach, bis der Vernebler erzeugt einen Dampf. </li><li> Weiter Spritzen (Kennzeichnung), bis das Eiweiß-Lösung abgegeben worden ist (ca. 2-5 min). </li><li> Entfernen Sie den Vernebler und legen Sie einen Korken in das Loch des Kunststoffbehälters. Lassen Sie die Insekten bei RT stehen, bis die Lösung vollständig getrocknet ist. </li></ol></li><li> Externe Marke Retentionsverfahren<ol><li> Platzieren Sie jede Behandlung der trockenen Insekten in einem separaten sauberen Aufzuchtbehälter, um weitere Exposition zur Marke zu vermeiden. </li><li> Nahrung und Wasser hinzufügen, um die saubere Behälter, um die Insekten über die Dauer der Studie erhalten. </li><li> Sammeln Sie eine Kohorte (n = 20) von Insekten aus jeder Behandlungs täglich und frieren sofort bei -20 ° C. </li></ol></li><li> Indirekte ELISA-Verfahren <ol><li> Legen Sie die gefrorenen Insekten einzeln in 1,6 ml Mikrozentrifugenröhrchen und fügen Sie 1,0 ml TBS. </li><li> Weichen Sie die Proben für 1 Stunde auf einem Orbitalschüttler Satz bei 120 UpM. </li><li> Fügen Sie negative und positive Kontrollen, wie in Schritt 1.3.5 beschrieben. </li><li> Nach dem Einweichen, Pipette 100 ul Aliquot von jeder Probe in eine der mit 80 bezeichnet Probenvertiefungen auf einem neuen 96-Napf-ELISA-Platte, wie in Figur 1 gezeigt lässt die Proben für 1 Stunde bei RT inkubiert. (Anmerkung: Die Mikroplatten kann auch inkubiert O / N bei 4 ° C). </li><li> Dreimal mit Waschen Sie die VertiefungenPBS-Tween gewaschen und dann werden 300 ul phosphatgepufferter Kochsalzlösung, die 1% Rinderserumalbumin (PBS-BSA) in jede Vertiefung. </li><li> Nach 30 min bei RT waschen zweimal mit PBS-Tween. </li><li> In 50 ul Kaninchen-Anti-Eieralbumin primäre Antikörper verdünnt 1: 8000 in PBS-BSA-Silwet (0,05%) in jede Vertiefung und Inkubation für 1 h bei RT. </li><li> Dreimal mit PBS-Tween waschen jeder Vertiefung gegeben und dann werden 50 &amp; mgr; l Ziege-Anti-Kaninchen-IgG, das mit Meerrettichperoxidase konjugiert ist, verdünnt 1: 1 h bei RT 2.000 in PBS-BSA-Silwet (0,05%). </li><li> Dreimal mit PBS-Tween waschen jede Vertiefung geben und fügen Sie 50 ul TMB Substrat in jede Vertiefung. </li><li> Nach 10 Minuten, lesen Sie die Vertiefungen mit einem Mikroplatten-Spektrophotometer bei einer Wellenlänge von 650 nm eingestellt. </li></ol></li></ol> 3. Datenanalyse <ol><li> Berechnen Sie die mittlere Absorptionswert der 8 negative Kontrolle Insekten auf jeden ELISA-Platte und dann die Berechnung der Standardabweichung auf Basis der gepoolten negativen Kontrollen herm all den ELISA-Platten einer gegebenen Studie 12. </li><li> In sechs Mal die gepoolte Standardabweichung zu dem für jeden ELISA-Platte, um einen ELISA positiven Schwellenwert zu erhalten, erhalten Mittelwert. Jede Insekten Probe ergab einen Absorptionswert gleich oder größer als dieser Wert wird als positiv für die Gegenwart des Proteins Zeichen sein. </li></ol>

Die Erwähnung von Handelsnamen oder Handelsprodukte in dieser Publikation ist ausschließlich für den Zweck der Bereitstellung von spezifischen Informationen und stellen keine Empfehlung oder Billigung durch das US Department of Agriculture. USDA ist eine Chancengleichheit Anbieter und Arbeitgeber.

Die Arthropoden Protein immunomarking Verfahren wurde erstmals vor einem Jahrhundert 9 beschrieben, fast ein Viertel. Seitdem hat sich das Verfahren so angepasst, dass die Verbreitungsmuster von einer Vielzahl von Arthropoden mit intern und extern verabreicht IgG / IgYs studieren. Diese Proteine ​​wurden standhaft Marker für die große Vielzahl von bisher getesteten Insektenarten erwiesen. Wie oben erwähnt, ist die Haupteinschränkung für die Verwendung von IgG / IgYs ist jedoch, dass sie sehr teuer sind. Folgl...

Verfolgen der Bewegung von tierischen Schädlingen, natürliche Feinde (Parasitoide und Raubtiere) und Bestäuber in der Natur ist für ein besseres Verständnis, wie man wesentliche Ökosystemdienstleistungen zu verbessern. Die Schlüsselkomponente für die meisten Arten von Ausbreitungs Forschung ist eine zuverlässige Methode, um die Arthropoden (en) von Interesse zu markieren. Eine Vielzahl von Materialien (zB Lacke, Farben, farbig Stäube, Tags, seltenen Elementen, Proteine) verwendet worden, um Arthropoden markieren, ihre Populationsdynamik, Ausbreitung Fähigkeiten zu beurteilen, Fütterung Verhalten und anderen ökologischen Interaktionen 1,2. Die Zweckmäßigkeit einer Markierung für eine gegebene Ausbreitungs Forschung verwendet werden abhängig von der Art der Untersuchung, die durchgeführt werden. Es gibt drei große Kategorisierungen für die Kennzeichnung von Arthropoden: (1) Mark-Release-Wiederfang (MRR), (2) Mark-Erfassung, und (3) Eigenmarke-Capture. Für Mark-Release-Rückeroberung der Forschung, der Ermittler kennzeichnet typischerweise die Arthropoden kollektiv in der Laboratory und gibt sie an einer zentralen Stelle im Feld. Die Arthropoden werden dann auf verschiedenen räumlichen und zeitlichen Abständen unter Verwendung verschiedener Erfassungsgeräte (zB Sweep net, Vakuum, klebrigen Falle) 3,4,5 zurückerobert. Die zurückerobert Proben werden dann untersucht, für die spezifische Markierung von nativen Personen veröffentlicht zu unterscheiden. Für Mark-Capture-Forschung, gilt der Untersucher in der Regel die Markierung direkt im Feld mit Spritzgeräten (zB Rückenspritze, boom und Düsenspritze). Die besten Marker für die Mark-Capture-Forschung sind kostengünstig und einfach an den Arthropoden Lebensraum aufgebracht. Für Eigenmarke-Capture-Forschung, gilt der Untersucher in der Regel Noten zu einem Arthropoden Köder 6,7 oder Nesteingang 8. Im Gegenzug, die Arthropoden kennzeichnet sich intern durch verschlingt die markierte Köder oder extern durch &quot;Bürsten&quot; gegen die Marke, wie es das Nest verlässt. Wie oben erwähnt, sind viele Arten von Markierungen uns gewesened, um eine Vielzahl von Arthropoden-Arten zu taggen. Aber nur sehr wenige sind nützlich für alle drei dieser Zerstreuung Forschungskategorien. Die Entwicklung des Proteins immunomarking Verfahren war ein großer Durchbruch zur Markierung Insekten. Immunomarking stellt ein Protein Etikett auf Arthropoden entweder intern oder extern, was wiederum, wird von einem Anti-Protein-spezifischen Enzym-linked Immunosorbent Assay (ELISA) nachgewiesen. Die erste derartige Protein-Marker verwendet wurden Kaninchen-Immunglobulin (IgG) und Huhn IgG / IgY 9,10. Sie erwiesen sich als sehr wirksam Markierungen für MRR und Selbst-Mark-Capture-Forschung (siehe Diskussion) sein. Leider sind die IgG / IgY Proteine ​​kostspielig und daher nicht praktisch für die Mark-Capture-Forschung und die meisten Arten von Eigenmarke-Capture-Forschung. Anschließend wurden der zweiten Generation Proteinnachweis ELISAs für Proteine ​​in Hühner Eiweiß (Albumin), Kuhmilch (Casein) und Soja-Milch (Trypsin-Inhibitor-Protein) enthalten entwickelt. Jeder Test ist sehr empfindlich, spezifisch und am meistenwichtiger ist, verwendet Proteinen, die viel weniger teuer als die IgG / IgY-Proteine ​​sind 11. Diese Proteine ​​wurden effektiv für MRR, Mark-Capture-und Selbst-Mark-Capture-Forschung (siehe Diskussion) bewährt. In diesem Artikel beschreiben wir, und zeigen, wie die Proteinmarkierung Labor Retention Studien durchzuführen. Solche Studien sind die erste Phase der Forschung für jede Art von Feldausbreitung Studie erforderlich. Genauer gesagt, ist es entscheidend, dass die Ermittler wissen, wie lange die Marke wird über die gezielten Arthropodenarten vor dem Einschiffen auf Feldausbreitungsstudien beibehalten werden. Hier beschreiben wir, und zeigen, wie man nach innen und außen zu markieren Insekten für MRR, Mark-Capture-und Selbst-Mark-Aufnahmeart Feldstudien. Wir haben uns dann zeigen, wie man die Anwesenheit der Markierungen mit indirekter und Sandwich ELISAs zu erkennen.

<table><tbody><tr><td>Vorratsbehälter für Lebensmittel (für die Insektenaufzucht)</td><td>Rubbermaid/Tupperware</td><td>Verschiedene Größen</td><td>Verschiedene Hersteller & Verkäufer. Mesh-Gewebe wird in ein Fenster geklebt</td></tr><tr><td>Kleinvolumiger Vernebler (Micro Mist)</td><td>Teleflex-Hudson RCI</td><td>1881</td><td>Erhältlich online und im Sanitätshausgeschäft. Andere Marken werden auch funktionieren.</td></tr><tr><td>Mikrozentrifugenröhrchen, 1,6 ml mit Kappe</td><td>Continental Lab Products</td><td>4445.X</td><td>Jeder ähnliche Typ funktioniert. Wir bevorzugen Marken, die leicht zu öffnende Deckel haben.</td></tr><tr><td>Styropor-Aufbewahrungsbox für Mikrozentrifugenröhrchen (5x20 Gitter)</td><td>RPI Corp.</td><td>145746</td><td>Dieses Design ist schön, weil es die Röhren nicht überfüllt</td></tr>.<tr><td>Dispenser, Repeater</td><td>Eppendorf</td><td>4982000322</td><td>Alles Ähnliche hilft, die Ausgabe zu beschleunigen.</td></tr><tr><td>Stößel, Einweg-Taschentuchmühlen aus Kunststoff, 1,5 ml</td><td>Kimble Chase</td><td>749521-1500</td><td>Erhältlich bei verschiedenen Anbietern. Stößel können gereinigt und zur Wiederverwendung autoklaviert werden.</td></tr><tr><td>BD Falcon ELISA-Platten, 96-Well-Platten (flacher Boden)</td><td>BD</td><td>351172</td><td></td></tr><tr><td>Ovation-Pipette, manuell (20-200 & Mikro; l)</td><td>VistaLab</td><td>1057-0200 oder 1070-0200</td><td>Jeder ähnliche Typ funktioniert. Dieses Modell ist ergonomisch.</td></tr><tr><td>Reservoire, steriles Reagenz</td><td>VistaLab</td><td>4054-1000</td><td>Alles Ähnliche funktioniert.</td></tr><tr><td>Elektronische Pipette, 8-Kanal (50-1.200 & Mikro; l) (Biohit eLine)</td><td>Sartorius</td><td>730391</td><td>Wenn Sie sich für ein elektronisches Modell entscheiden müssten, wäre diese Größe am nützlichsten.</td></tr><tr><td>Elektronische Pipette, 8-Kanal (10-300 & Mikro; l) (Biohit eLine)</td><td>Sartorius</td><td>730361</td><td>Etwas Ähnliches wird funktionieren.</td></tr><tr><td>Verteiler, Multiwell-Unterlegscheibe (8 Positionen, gerade)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Z369802&nbsp;</td><td>Alles Ähnliche funktioniert auch für die manuelle Plattenreinigung.</td></tr><tr><td>Mikroplatten-Reader mit Absorptionsdetektion</td><td>Molecular Devices</td><td>SpectraMax 250</td><td>Alles Ähnliche funktioniert.</td></tr><tr><td>Hühnerfleisch IgG/IgY</td><td>Vereinigte Staaten Biologisch</td><td>I1903-15R</td><td>Auch aus anderen Quellen erhältlich</td></tr><tr><td>Eiweiß</td><td>Lebensmittelgeschäft</td><td>" Alles Weiße", " Schneebesen", etc.</td><td>Mischen Sie 5 ml mit 95 ml dH2O für 5%ige Lösung</td></tr><tr><td>Tris (Trizma Base)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T1503</td><td>2,42 g/L zur Herstellung von TBS</td></tr><tr><td>Natriumchlorid (NaCl)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S9888</td><td>29,22 g/L zur Herstellung von TBS und 8,0&nbsp; g&#8288;/&#8288; L für PBS</td></tr><tr><td>Natriumphosphat zweibasisch (Na2HPO4)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S0876</td><td>1,14 g/L für PBS</td></tr><tr><td>Kaliumphosphat monobasisch (KH2PO4)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P5655</td><td>0,2 g/L für PBS</td></tr><tr><td>Kaliumchlorid (KCl)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P9541</td><td>0,2 g/L für PBS</td></tr><tr><td>Tween 20, </td><td>EIA-Qualität Sigma-Aldrich</td><td>P1379</td><td>0,5 ml pro l zu PBS hinzufügen, nachdem die Salze aufgelöst wurden.</td></tr><tr><td>PBS mit 1 % BSA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P3688</td><td>Mix 1 Packung in 1 L dH2O</td></tr><tr><td>Anti-Chicken IgY (IgG) (ganzes Molekül) Antikörper, hergestellt in Kaninchen (1:500)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C6409</td><td>Mix 100 & Mikro; l in 50 ml</td></tr><tr><td>TBS Trockenmilch, Pulver- oder Frischmilch (1%)</td><td>Lebensmittelgeschäft</td><td></td><td>Mischen Sie 10 g mit 1 L dH2O für 1% ige Lösung</td></tr><tr><td>Anti-Hühner-IgY (IgG) (ganzes Molekül)-Peroxidase-Antikörper, hergestellt im Kaninchen (1:10.000)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9046</td><td>Mix 100 & micro; l in 1 L 1 % Milch</td></tr><tr><td>Anti-Hühner-Ei-Albumin-Antikörper, hergestellt in Kaninchen (1:8.000)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C6534</td><td>Verdünnt 125 & Mikro; l in 1 l PBS-BSA</td></tr><tr><td>Ziegen-Anti-Kaninchen-IgG-Peroxidase-Konjugat (1:2.000)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A6154</td><td>0,5 ml in 1 L PBS-BSA verdünnen, dann 1,3&nbsp; ml Silwet</td></tr><tr><td>Vac-In-Stuff (Silwet L-77) Silizium-Polyether-Copolymer</td><td>Lehle Seeds</td><td>VIS-01</td><td>Als letzte Zutat</td></tr><tr><td>hinzufügen TMB Microwell Einkomponenten-Peroxidase-Substrat</td><td>SurModics</td><td>TMBW-1000-01</td><td></td></tr></tbody></table>

verwaltung und nachweis von protein-kennzeichen auf arthropoden für dispersal forschung

Administering and Detecting Protein Marks on Arthropods for Dispersal Research

Überwachung Arthropoden Bewegung ist oft erforderlich, um damit verbundenen Bevölkerungsdynamik, Verbreitungsmuster, Wirtspflanze Vorlieben, und andere ökologische Wechselwirkungen besser zu verstehen. Arthropoden sind in der Regel in der Natur durch Markieren sie mit einer einzigartigen Signatur verfolgt und dann neu zu sammeln sie über Zeit und Raum, um ihre Ausbreitung Fähigkeiten zu bestimmen. Neben der tatsächlichen physikalischen Tags, wie farbige Staub oder Farbe wurden verschiedene Arten von Proteinen sehr wirksam für die Kennzeichnung von Arthropoden für ökologische Forschung bewährt. Proteine ​​können intern und / oder extern verabreicht werden. Die Proteine ​​können dann wieder eingefangen Arthropoden mit einem Protein-spezifischen Enzym-linked Immunosorbent Assay (ELISA) nachgewiesen werden. Hier beschreiben wir Protokolle für außen und innen Tagging Arthropoden mit Protein. Zwei einfache experimentellen Beispiele werden gezeigt: (1), um ein Insekt durch die Bereitstellung eines Protein-angereicherte Ernährung und (2) eine externe Protein Zeichen topisch a eingeführt eine interne Proteinzeichenum ein Insekt mit einem medizinischen Vernebler ngewandte. Wir beziehen dann eine Schritt-für-Schritt-Anleitung des Sandwich und indirekt verwendet werden, um Proteinmarkierungen auf den Insekten erkennen ELISA-Verfahren. In dieser Demonstration werden verschiedene Aspekte der Akquisition und den Nachweis von Protein-Marker auf Arthropoden für Mark-Release-Wiederfang, Mark-Capture-und Selbst-Mark-Capture-Arten der Forschung diskutiert, zusammen mit den verschiedenen Möglichkeiten, die immunomarking Verfahren wurde angepasst ist, eine Vielzahl von Forschungszielen entsprechen.

Interne Kennzeichnung: Die Ergebnisse der internen Zeichen Retentionstest sind in 2A gezeigt. Die berechnete ELISA kritischen Schwellenwert war 0,054. Insgesamt (alle vier Probendaten kombiniert), die ohne Protein behandelten Insekten ergab konstant niedrig ELISA-Werte (x = 0,038 ± 0,002, n = 80). Umgekehrt werden alle Insekten gefüttert das Protein angereicherte Ernährung lieferte ko...

Proteine werden oft verwendet, um Arthropoden für die Ausbreitungsforschung zu markieren. Es werden Methoden zur Verabreichung von internen und externen Proteinmarkierungen an Arthropoden vorgestellt. Techniken zum Nachweis von Proteinmarkierungen, entweder durch indirekte oder Sandwich-Enzyme-linked Immunosorbent Assays (ELISAs), werden ebenfalls veranschaulicht.

Verwaltung und Nachweis von Protein-Kennzeichen auf Arthropoden für Dispersal Forschung

Monitoring arthropod movement is often required to better understand associated population dynamics, dispersal patterns, host plant preferences, and other ...

Das übergeordnete Ziel dieser Demonstration ist es, zu beschreiben, wie Insekten mit Protein für die Ausbreitungs- oder Migrationsforschung markiert werden können. In dieser Demonstration sind Methoden zum Nachweis der Markierungen durch ein Sandwich oder einen indirekten enzymgebundenen Immunsorbent-Assay enthalten. Diese Methode kann helfen, zentrale Fragen im Bereich der Insektenausbreitungsforschung zu beantworten.Es kann verwendet werden, um die Migrationsmuster von Insekten, die Präferenzen von Wirtspflanzen von Insekten und die Ausbreitung invasiver Arten zu untersuchen. Die Vorteile dieser Technik bestehen darin, dass die Nachweismethode einfach und kostengünstig ist. Geeignet für hohen Durchsatz, und die Tiere können einfach direkt in ihrem natürlichen Lebensraum markiert werden.Im Allgemeinen werden Personen, die mit dieser Methode noch nicht vertraut sind, Schwierigkeiten haben, weil sie schwieriger erscheint, als sie ist, da die meisten Feldforscher keine Erfahrung mit dieser einfachen Technik haben. Die Idee zu dieser Methode hatte ich erstmals 1989. Wir züchteten großäugige Käferräuber mit künstlicher Nahrung.Wir waren besorgt, dass diese Käfer keine effektiven Fressf

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Ein Calcium Biolumineszenzassay für die funktionelle Analyse von Mosquito ( Aedes aegypti) Und Tick ( Rhipicephalus microplus) G-Protein gekoppelten Rezeptoren

Verfahren schnell Bildschirm Wirtspflanze flüchtigen Stoffe durch Messung der elektrophysiologische Reaktion von erwachsenen Nabel orangeworm...

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Eine schnelle und effiziente Methode, um Pupal Flügel von Drosophila geeignet für Immunodetections oder PCR-Assays sezieren

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