Name: Assay mit hohem Durchsatz Eiablage Präferenzen der einzelnen zu untersuchen Drosophila melanogaster (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-03-24T13:00:00.000+00:00
Duration: 3 min 58 s
Description: Lernen Sie einen Hochdurchsatz-Assay zur Analyse von Eiablage-Präferenzen bei einzelnen Drosophila melanogaster. Diese Methode ermöglicht die Identifizierung von Genen und neuronalen Schaltkreisen, die Entscheidungsverhalten steuern.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Wir danken dem Duke Physics Shop, insbesondere Phil Lewis, für die Hilfe beim Bau des Verhaltensapparates und der Anhänge und bei der Erstellung der Zeichnung. Diese Arbeit wird von den National Institutes of Health unter der Fördernummer R01GM100027 finanziert.

1. Flies Vorbereitung zu test <ol><li> Kultur fliegt auf Standard-Melasse / cornmeal Medien bei Inkubator bei 25 ° C und 65% Luftfeuchtigkeit. Achten Sie darauf, nicht die Fläschchen überfüllen. Zum Beispiel setzen 8 Frauen und 6 Männer in einen schmalen Essen Fläschchen. Hinweis: Die &quot;narrow Essen Fläschchen&quot; verwendet hier einen Innendurchmesser von 2,3 cm. Wir typischerweise etwa 10 ml fly Nahrung in jedem Fläschchen abgefüllt. Die Fliege Essen Rezept wir verwendet wird hier beschrieben: http://flystocks.bio.indiana.edu/Fly_Work/media-recipes/molassesfood.html. </li><li> 2 - 3 Tage nach dem Schlüpfen Weibchen, bereiten Fläschchen mit frischer Hefe - Paste in 1E , wie dargestellt. Machen Frischhefe Paste durch 6 g aktiver Hefe-Mischung mit 10 ml von 0,5% Propionsäure. Verwenden Sie einen Spachtel, um den Hefe-Paste auf die Seitenwand der Lebensmittel Fläschchen anzuwenden. Sammeln Sie 30 - 35 geschlüpften Weibchen zusammen mit 20 bis 25 Männer in die Fläschchen. <ol><li> Im Allgemeinen sammeln die Männchen von den gleichen Fläschchen, wo die Weibchen gesammelt werden(So ​​wie die Zeit und Mühe zu sparen). Wenn es jedoch Besorgnis über die Fruchtbarkeit von Männern ist, verwenden WT männlichen statt. Auch Hefe-Paste ist wichtig für die Stimulierung der Eierproduktion ist es daher bereiten täglich frisch. </li></ol></li><li> Aufrechterhaltung der gesammelten Weibchen / Männchen bei 25 ° C, 65% Luftfeuchtigkeit, es sei denn, die Fliegen Temperatur empfindlich sind. </li><li> Nach ca. 4 - 5 Tagen überprüfen Sie die Fläschchen zu sehen, ob Frauen bereit für Eiablage Experimente sind. Sie sind bereit , wenn die Oberfläche des Nahrungsmittel Medium nass von Larven ist aktiv in der Lebensmittel gräbt (siehe Abbildung 1 E - F). Hinweis: Frauen vorenthalten Regel Eier zu legen, wenn die Nahrungsmitteloberfläche nass wird und kriecht mit Larven. Dieser Schritt stellt sicher , dass Frauen bereit sein würde , viele Eier zu legen , wenn sie Substrate mit der gewünschten Textur auftreten (z. B. ~ 1% Agarose). </li></ol> 2. Kammer Konstruktion, Montage, Test-Setup <ol><li> Haben Sie einen Maschinenhalle bauen Acryl Eiablage Kammern (FiAbbildung 1A - D). Die technische Zeichnung der verschiedenen Stücke wurden in Ergänzungs gezeigt . 1 - 3 Bilder mit hoher Auflösung können auch hier bestellt werden (http://www.rebeccayang.org/pdf/chamber%20design.pdf). </li><li> Kunststoffplatten in die Lade (oben) Stück der Kammer ein , wie in 1C gezeigt. Dies dient als Bodenfläche während des Ladens in einzelne Eiablage Arenen fliegt. </li><li> Anesthetize Weibchen auf einem CO 2 Pad und laden Sie sie einzeln in jedem Eiablage Arena. Lassen Sie ~ 30 min für Fliegen aus dem CO 2 zu erholen und an die neue Umgebung gewöhnt zu werden. </li><li> Bereiten Sie die Agarose-Substrate. <ol><li> Der Einfachheit halber halten eine premade Flasche geschmolzen 1% Agarose in einem 55 C-Wasserbad °. </li><li> Fügen Sie die gewünschte Menge an Lager Saccharose-Lösung (2 M) in eine 50 ml konischen Röhrchen und mit Hilfe einer entsprechenden Menge an Agarose gemischt werden. Um zum Beispiel die 150 mM Saccharose Substrat, pla vorzubereitence 750 ul 2 M Saccharose-Lösung in das Röhrchen und füllen Sie dann das Rohr mit Agarose zur 10 ml-Markierung. </li><li> Bereiten Sie die Ebene Substrat auf die gleiche Weise, aber mit destilliertem Wasser anstelle von Saccharose-Lösung. Anmerkung: Die Endkonzentration an Agarose in diesem Protokoll als 1% etwas weniger ist. Nach unserer Erfahrung ist die genaue Konzentration der Agarose nicht so lange egal, wie es innerhalb von ~ 0,9 geregelt wird - 1,1%, und dass die beiden Substrate sind von der gleichen Agarose-Konzentration. </li></ol></li><li> Nehmen Sie das Substrat (Boden) Stück der Kammer und Pipetten 1000 ul Agarose Substrat in jeder Wanne , wie in Figur 1D zu sehen. </li><li> Lassen Sie Agarose für ~ 30 min zu verfestigen. </li><li> Nachdem die Agarose-Substrate und Fliegen bereit sind, montieren alle drei Teile des Eiablagekammer und dann die Kunststoffplatten herausnehmen. </li><li> Legen Sie die Kammern in der Fliege Inkubatoren. Anmerkung: Die Länge des Eiablage Experimenten variieren kann auf expe jerimental Bedürfnisse. Wir laufen in der Regel das Experiment O / N (14 bis 16 h). Auch keine wesentlichen Auswirkungen der zirkadianen Timing auf Eiablage Präferenzen beobachtet. </li><li> Anästhesieren Weibchen von CO 2 in die Kammer eingespritzt wird . Zerlegen Sie die Kammer, werfen Sie die betäubten Fliegen in Fliegen Leichenschauhaus (dh., Ein leerer Kaffee kann mit etwas Maisöl gefüllt). Machen Sie Fotos von den Ergebnissen für Recordkeeping (siehe Abbildung 2). </li><li> Zähle die Anzahl der Eier manuell und berechnen Vorzugs Indizes für die Analyse. Berechnen Präferenz Index wie (N a - N b) / (N + a N b) , wobei N a und N b repräsentieren Anzahl der Eier vor Ort gegen Seite b verbunden. </li></ol>

<ol><li>Perisse, E., Burke, C., Huetteroth, W., Waddell, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Shocking+revelations+and+saccharin+sweetness+in+the+study+of+Drosophila+olfactory+memory%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Shocking revelations and saccharin sweetness in the study of Drosophila olfactory memory.</a> Curr. Biol. 23 (17), 752-763 (2013).</li>
<li>Yamamoto, N. C., Koganezawa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genes+and+circuits+of+courtship+behaviour+in+Drosophila+males%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Genes and circuits of courtship behaviour in Drosophila males.</a> Nat. Rev. Neurosci. 14 (10), 681-692 (2013).</li>
<li>Zwarts, L., Versteven, M., Callaerts, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetics+and+neurobiology+of+aggression+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Fly%22%5BJournal%5D)">Genetics and neurobiology of aggression in Drosophila.</a> Fly. 6 (1), 35-48 (2012).</li>
<li>Joseph, R. M., Devineni, A. V., King, I. F., Heberlein, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oviposition+preference+for+and+positional+avoidance+of+acetic+acid+provide+a+model+for+competing+behavioral+drives+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci%22%5BJournal%5D)">Oviposition preference for and positional avoidance of acetic acid provide a model for competing behavioral drives in Drosophila.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. 106 (27), 11352-11357 (2009).</li>
<li>Miller, P. M., Saltz, J. B., Cochrane, V. A., Marcinkowski, C. M., Mobin, R., Turner, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Natural+variation+in+decision-making+behavior+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Natural variation in decision-making behavior in Drosophila melanogaster.</a> PLoS One. 6 (1), 16436(2011).</li>
<li>Schwartz, N. U., Zhong, L., Bellemer, A., Tracey, W. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Egg-laying+decisions+in+Drosophila+are+consistent+with+foraging+costs+of+larval+progeny%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Egg-laying decisions in Drosophila are consistent with foraging costs of larval progeny.</a> PloS One. 7 (5), 37910(2012).</li>
<li>Yang, C. H., Belawat, P., Hafen, E., Jan, L. Y., Jan, Y. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+egg-laying+site+selection+a+system+to+study+simple+decision-making+processes%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Drosophila egg-laying site selection a system to study simple decision-making processes.</a> Science. 319 (5870), 1679-1683 (2008).</li>
<li>Kacsoh, B. Z., Lynch, Z. R., Mortimer, N. T., Schlenke, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fruit+flies+medicate+offspring+after+seeing+parasites%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Fruit flies medicate offspring after seeing parasites.</a> Science. 339 (6122), 947-950 (2013).</li>
<li>Wu, C. -L., Fu, T. -F., Chou, Y. -Y., Yeh, S. -R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Single+Pair+of+Neurons+Modulates+Egg-Laying+Decisions+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">A Single Pair of Neurons Modulates Egg-Laying Decisions in Drosophila.</a> PloS one. 10 (3), e0121335(2015).</li>
<li>Yang, C. H., He, R., Stern, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+and+circuit+basis+of+sucrose+rejection+by+Drosophila+females+in+a+simple+decision-making+task%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Behavioral and circuit basis of sucrose rejection by Drosophila females in a simple decision-making task.</a> J. Neurosci. 35 (4), 1396-1410 (2015).</li>
<li>Gou, B., Liu, Y., Guntur, A. R., Stern, U., Yang, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanosensitive+neurons+on+the+internal+reproductive+tract+contribute+to+egg-laying+induced+acetic+acid+attraction+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Mechanosensitive neurons on the internal reproductive tract contribute to egg-laying induced acetic acid attraction in Drosophila.</a> Cell Rep. 9 (2), 522-530 (2014).</li>
<li>Stern, U., Zhu, E. Y., He, R., Yang, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-duration+animal+tracking+in+difficult+lighting+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22Sci.+Rep%22%5BJournal%5D)">Long-duration animal tracking in difficult lighting conditions.</a> Sci. Rep. 5, 10432(2015).</li>
<li>Zhu, E. Y., Guntur, A. R., He, R., Stern, U., Yang, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Egg-laying+demand+induces+aversion+of+UV+light+in+Drosophila+females%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Egg-laying demand induces aversion of UV light in Drosophila females.</a> Curr. Biol. 24 (23), (2014).</li>
<li>Branson, K., Robie, A. A., Bender, J., Perona, P., Dickinson, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-throughput+ethomics+in+large+groups+of+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Methods%22%5BJournal%5D)">High-throughput ethomics in large groups of Drosophila.</a> Nat. Methods. 6, 451-457 (2009).</li>
<li>Klatpoetke, N. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Independent+Optical+Excitation+of+Distinct+Neural+Populations%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Methods%22%5BJournal%5D)">Independent Optical Excitation of Distinct Neural Populations.</a> Nat. Methods. 11 (3), 338-346 (2014).</li>
</ol>

Die Autoren haben nichts offenzulegen.

Die Kammern und Protokolle hier beschrieben haben mehrere Verbesserungen gegenüber früheren Eiablage Assays. Erstens erhöhen sie den Durchsatz erheblich Präferenzen der einzelnen Tiere Untersuchung. Jede Kammer kann 30 einzelne Frauen-Assay und es dauert weniger als eine Stunde einzurichten. Zweitens erhöhen sie die Konsistenz der Eiablage Präferenzen gegenüber früheren Methoden. Die Standardisierung der Abmessungen der Arena, Größe der Eiablage Substrate und Abstand zwischen den Substraten macht es leichter, die Ergebn...

Drosophila melanogaster ist ein leistungsfähiger genetischer Modellorganismus, um die neuronalen Grundlagen von Verhaltensweisen zu untersuchen. Die rasante Entwicklung genetischer Werkzeuge zur gezielten Manipulation von Neuronen und das Aufkommen ausgefeilter Verhaltensanalysewerkzeuge haben unsere Fähigkeit, die Schaltkreismechanismen zu entschlüsseln, die den sensomotorischen Transformationsprozessen verschiedener angeborener und erlernter Verhaltensweisen zugrunde liegen1-3, erheblich verbessert.
Die Eiablage von Drosophila ist ein geeignetes Modell, um die neuronalen Grundlagen einfacher Entscheidungsprozesse zu untersuchen. Insbesondere hat sich gezeigt, dass Drosophila-Weibchen die Fähigkeit besitzen, ihre Optionen zu vergleichen und zu ordnen, bevor sie sich "verpflichten", ein Ei auf eine gegebene Option4-8 zu legen. Wenn sie beispielsweise nur ein einfaches (saccharosefreies) Substrat oder nur ein saccharosehaltiges Substrat erhalten, akzeptieren die Weibchen bereitwillig beide Optionen für die Eiablage. Wenn sie jedoch mit beiden Optionen konfrontiert werden, lehnen Weibchen das Saccharosesubstrat in einigen Kontexten robust ab7,9,10. Über die neuronalen Mechanismen, die es Frauen ermöglichen, "das größere von zwei Gütern zu wählen", ist jedoch relativ wenig bekannt. Ein Haupthindernis war das Fehlen einer effizienten Methode, um die Präferenzen der Eiablage zu testen, so dass man ein systematisches genetisches Screening-Verfahren zur Untersuchung dieses Problems verwenden kann.
In diesem Bericht beschreiben wir das von uns entwickelte Protokoll, das es ermöglicht, die Eiablagepräferenzen von Weibchen mit Einzeltierauflösung und mit wesentlich verbessertem Durchsatz und Konsistenz gegenüber früheren Methoden zu testen. Konkret stellen wir die Baupläne für den Bau der von uns entworfenen Kammern zur Verfügung, das Protokoll für die Vorbereitung der Weibchen, damit jedes darauf vorbereitet ist, viele Eier zu legen, und das Protokoll für die Nutzung der Kammern.

<table><tbody><tr><td>Ultrareine Agarose&nbsp;</td><td>Invitrogen</td><td>16500-500</td><td></td></tr><tr><td>Saccharose</td><td>Sigma</td><td>S0389</td><td></td></tr><tr><td>Wasserbad&nbsp;</td><td>Fisher</td><td>15-462-6Q</td><td></td></tr><tr><td>LifeCam Cinema Webcam</td><td>Microsoft</td><td>H5D-00013</td><td></td></tr><tr><td>Rote LEDs</td><td>Cree</td><td>C503B-RAN-CA0B0AA1</td><td></td></tr><tr><td>Eiablagekammern</td><td>Speziell angefertigte</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kamerahalterungen</td><td>Speziell angefertigte</td><td></td><td></td></tr><tr><td>LED-Halterungen</td><td>Speziell angefertigte</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fly-Fläschchen (schmal)</td><td>Genesee</td><td>32-116 v. Chr</td><td></td></tr></tbody></table>.

assay mit hohem durchsatz eiablage präferenzen der einzelnen zu untersuchen<em&gt; drosophila melanogaster</em

High Throughput Assay to Examine Egg-Laying Preferences of Individual Drosophila melanogaster

Vor kurzem Eiablage bevorzugt von Drosophila als genetisch manipulierbaren Modell entstand die neuronale Grundlage einfacher Entscheidungsprozesse zu studieren. Bei der Auswahl von Standorten um ihre Eier abzulegen, sind weibliche Fliegen der Lage, die relative Attraktivität ihrer Optionen Ranking und die Auswahl von &quot;größeren von zwei Waren.&quot; Allerdings sind die meisten Eiablage bevorzugt Assays sind nicht praktisch, wenn man will, eine systematische genetische Screening-Ansatz zu übernehmen für die Schaltung Basis zu suchen, diese einfache Entscheidungsprozess zugrunde liegen, wie sie sind populationsbasierte und arbeitsaufwendig einzurichten. Um den Durchsatz des Studiums der Eiablage Präferenzen der einzelnen Frauen zu erhöhen, entwickelten wir individuelle Kammern, die jeweils gleichzeitig Assay Eiablage Vorlieben von bis zu dreißig Einzel sowie ein Protokoll fliegt, die jedes Weibchen sorgt für eine hohe Eiablagerate (so dass ihre Präferenz ist leicht erkennbar und überzeugender). Unser Ansatz ist einfach auszuführenund produziert sehr konsistente Ergebnisse. Darüber hinaus können diese Kammern mit verschiedenen Aufsätzen ausgestattet werden, um Video die Eiablage Tiere Aufnahme zu ermöglichen und Licht für die Optogenetik Studien zu liefern. Dieser Artikel enthält die Baupläne für diese Kammern Herstellung und das Verfahren zur Herstellung der Fliegen in diesen Kammern untersucht werden.

Die Eiablage Kammern bestehen aus mehreren Teilen zusammengesetzt: ein Substrat (unten) Stück, einen Teiler (Mitte) Stück, eine Lade (oben) Stück, und 2 Schiebetüren (1A - D). Diese Stücke werden verwendet , um unabhängig Setup Fliegen und Substraten vor Eiablage Experimenten. 1F zeigt , wie Fläschchen aussehen sollte , wenn weibliche Fliegen bereit für Eiablage sind. Wenn Fliegen eine Wahl zwischen einem einfachen und einem Substrat Saccharose-haltige S...

Dieses Protokoll beschreibt einen Hochdurchsatz-Assay zum Testen der Eiablagepräferenzen von Drosophila melanogaster bei Einzeltierauflösung. Dieser Assay bietet eine einfache, effiziente und skalierbare Plattform zur Identifizierung von Genen und Schaltkreiskomponenten, die einen einfachen Entscheidungsprozess steuern.

Assay mit hohem Durchsatz Eiablage Präferenzen der einzelnen zu untersuchen<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Recently, egg-laying preference of Drosophila has emerged as a genetically tractable model to study the neural basis of simple decision-making processes. ...

Das übergeordnete Ziel dieses Hochdurchsatz-Assays besteht darin, eine einfache, effiziente und skalierbare Plattform bereitzustellen, um Gene und Neuronen zu identifizieren, die ein einfaches Entscheidungsverhalten bei Drosophila steuern. Der Hauptvorteil dieser Methode liegt darin, dass Sie tatsächlich eine Infektion als Eiablageentscheidung und ein einzelnes Tier auf äußerst geeignete Weise untersuchen können. Beginnen Sie das Experiment, indem Sie acht Weibchen und sechs Männchen in ein schmales Nährmedium-Röhrchen geben, das mit Standardfliegenmedium gefüllt ist.Verwenden Sie anschließend die aus diesem Gefäß hervorgegangenen weiblichen Nachkommen für die Eiablageexperimente. Zwei bis drei Tage nach dem Schlüpfen der Weibchen bereiten Sie eine frische Hefepaste zu, indem Sie sechs Gramm aktive Hefe mit 10 Millilitern 0,5%iger Propionsäure vermischen. Tragen Sie die Hefepaste mit einem Spatel an die Seitenwand der Nährbodenröhrchen auf.Als Nächstes geben Sie 30 zuvor gesammelte geschlüpfte Weibchen und 20 Männchen in die Gefäße. Nach vier Tagen überprüfen Sie die Oberfläche des Nährbodens. Wenn die Oberfläche nass ist, weil die Larven aktiv im Nährboden graben, sind die weiblichen Fliegen bereit für Eiablageexperimente.Fahren Sie mit dem Experiment fort, indem Sie zuvor hergestellte Acryl-Legestationen beschaffen. Stecken Sie Plastikfolien in die Oberseite, um ein Stück der Kammer als Bodenfläche zu laden. Anschließend betäuben Sie die Weibchen auf einem Kohlendioxid-Kissen und bringen Sie einzeln in jede Legestation ein.Lassen Sie die Fliegen 30 Minuten Zeit, sich vom Kohlendioxid zu erholen und an die neue Umgebung zu gewöhnen. Während sich die Fliegen akklimatisieren, füllen Sie ein Gefäß mit Agarose bis zur 10-Milliliter-Marke und bereiten dann ein 150-Milliliter-Saccharose-Substrat vor, indem Sie 750 Mikroliter einer zwei Molaren Saccharoselösung in das Gefäß geben. Halten Sie eine Flasche geschmolzene 1 %ige Agarose in einem Wasserbad bereit.Bereiten Sie das reine Substrat auf die gleiche Weise vor, ersetzen Sie jedoch die Saccharoselösung durch destilliertes Wasser. Nehmen Sie danach das Substratstück der Kammer und pipettieren Sie jeweils 1.000 Mikroliter der Agaroselösung in jede Rinne. Stellen Sie das Agarose zur Vollständigen Verfestigung 30 Minuten beiseite.Sobald die Agarose-Substrate und die Fliegen bereit sind, setzen Sie alle drei Teile der Eiablagekammer zusammen und entfernen Sie anschließend die Plastikfolien. Stellen Sie die Kammern über Nacht in Fliegeninkubatoren. Betäuben Sie die Weibchen, indem Sie Kohlendioxid in die Kammer einleiten.Zerlegen Sie die Kammer und entsorgen Sie die anästhesierten Fliegen. Nehmen Sie abschließend Bilder der Eier zur Dokumentation auf. Der Präferenzindex (PI) wurde berechnet als die Anzahl der Eier, die weibliche Fliegen ablegten, wenn ihnen die Wahl zwischen einem einfachen Substrat und einem Substrat mit Saccharose geboten wurde.Weibchen bevorzugten deutlich das einfache Substrat für die Eiablage. Nach diesem Verfahren bieten sich andere Methoden wie die Funkaufzeichnung als Möglichkeit, genetische Untersuchungen durchzuführen, um weitere Fragen zu beantworten, beispielsweise wie sich die Fliegen vor der Ablage jedes Eis verhalten.

high-throughput-assay-to-examine-egg-laying-preferences-individual

Research

Forschung

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowissenschaften

Drosophila melanogaster ist eine genetisch und auf der Verhaltensebene praktische Zwecke geeigneten Modells, das verwendet wurde, um die molekularen und zellulären Grundlagen von vielen wichtigen biologischen Prozessen seit über einem Jahrhundert ein zu verstehen. Drosophila wurde auch genutzt, um Einblicke in die genetischen Grundlagen der Fliege Verhalten zu gewinnen.

Methoden zum Test Drosophila Verhalten

Dieses Video beschreibt eine einfache Methode zur Quantifizierung der Fortbewegung von Fliegen und zeigt den durchgeführten Kletter-Assay. Der Fly-Climbing-Assay ist ein allgemeiner Test der motorischen Funktion, der auf einer negativen Geotaxis-Reaktion beruht.

Fly Climbing Assay: Eine Methode zum Testen der allgemeinen Fortbewegung bei Drosophila melanogaster

Dieses Video beschreibt den Insel-Assay, eine Verhaltensmethode, die zur Untersuchung der Fortbewegung von Drosophila verwendet wird. Das Probenprotokoll verfügt über einen Aufbau für den Assay, der mit der halbautomatischen Bildanalyse kompatibel ist.

Island Assay: Eine Hochdurchsatzmethode zur Bewertung des Fortbewegungsverhaltens von Drosophila

Drosophila-Weibchen wählen zwischen Substraten und wählen Standorte, die für die Eiablage attraktiv sind. Dieses Video beschreibt einen Verhaltensassay, der ihre Entscheidungsfindung testet, den sogenannten Eiablage-Präferenz-Assay. Der vorgestellte Clip demonstriert das Verfahren mit einem speziell angefertigten Setup, das es den Forschern nicht nur ermöglicht, das Verhalten vieler Weibchen gleichzeitig zu testen, sondern auch mit Videoaufzeichnungen und optogenetischen Setups kompatibel ist.

Drosophila Egg Lege-Preference Assay: Eine Methode zur Überprüfung der Entscheidungsfindung bei Fliegen

C. elegans Eiablageverhalten kann wichtige Informationen in Entwicklungs-, Reproduktions- und anatomischen Studien liefern. Dieses Video stellt die wichtigen Schritte eines Eiablageassays vor und zeigt ein Beispielexperiment, in dem ein Medikament auf Reproduktionstoxizität getestet wird.

Egg Laying Assay: Eine Methode zur Quantifizierung des Eiablageverhaltens von C. elegans

In diesem Video-Artikel beschreiben wir einen automatisierten Test, um die Wirkung von Hunger oder Sättigung auf olfaktorische abhängige Nahrungsmittel Suchverhalten in der Erwachsenen Obst messen Drosophila melanogaster.

Ein Single-fly-Assay für Sammelverhalten in Drosophila

Hier präsentieren wir ein Protokoll zur Quantifizierung der Vermeidung von gestressten Personen. Dieses Paradigma ist leistungsfähig und dennoch benutzerfreundlich und kann verwendet werden, um den Einfluss von Genen und Umwelt auf eine Art von sozialer Interaktion bei Drosophila melanogaster zu bewerten.

Einfache Assay zur Quantifizierung von Sozialvermeidung in Drosophila melanogaster

Um neue Mutationen zu identifizieren, die die Mechanoempfindung beeinflussen, haben wir einen Assay entwickelt, der die Verhaltensreaktion auf taktile Stimulation von Fliegenborsten in mutierten Klonen misst, die mit der MARCM-Methode erzeugt wurden. Die Kombination der Techniken ermöglicht die Identifizierung mechanosensitiver Mutationen, die sonst tödlich wären.

Ein Verhaltenstest für Mechanosensation der MARCM-basierte Klonen in<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Dieser Artikel beschreibt einen Verhaltenstest , die männliche Paarungs Laufwerk verwendet in Drosophila melanogaste r Motivation zu studieren. Mit dieser Methode können die Forscher fortgeschrittene Fliegenneurogenetischen Techniken verwenden, um die genetischen, molekularen aufzudecken und zellulären Mechanismen, die diese Motivation zu Grunde liegen.

Messen und Ändern von Mating Antrieb in Male<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Dieses Protokoll soll die Lebensfähigkeit von Drosophila in jeder Entwicklungsphase vom Embryo bis zum Erwachsenen bewerten. Die Methode kann verwendet werden, um die Lebensfähigkeit verschiedener Genotypen oder Wachstumsbedingungen zu bestimmen und zu vergleichen.

Eine direkte und einfache Methode zur Beurteilung der Lebensfähigkeit von Drosophila melanogastervom Embryo zum Erwachsenen

Blut - Hirn-Schranke Integrität ist entscheidend für die Funktion des Nervensystems. Bei Drosophila melanogasterwird die Blut-Hirn-Schranke bei der späten Embryogenese durch Gliazellen gebildet. Dieses Protokoll beschreibt Methoden zur Untersuchung der Bildung und Erhaltung von Blut-Hirn-Barrieren bei D. melanogaster Embryonen und dritten Instarlarven.

Assay für Blut - Hirn-Barriere Integrität in Drosophila melanogaster

Lernen Sie einen Hochdurchsatz-Assay zur Analyse von Eiablage-Präferenzen bei einzelnen Drosophila melanogaster. Diese Methode ermöglicht die Identifizierung von Genen und neuronalen Schaltkreisen, die Entscheidungsverhalten steuern.

Assay mit hohem Durchsatz Eiablage Präferenzen der einzelnen zu untersuchen

Weitere Videos entdecken