A High Resolution Method to Monitor Phosphorylation-dependent Activation of IRF3

Alexa C. Robitaille; M&#233;lissa K. Mariani; Audray Fortin; Nathalie Grandvaux

doi:10.3791/53723

Eine hohe Auflösung Methode zur Phosphorylierung abhängige Aktivierung von IRF3 Überwachen

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Biology

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A High Resolution Method to Monitor Phosphorylation-dependent Activation of IRF3

Eine hohe Auflösung Methode zur Phosphorylierung abhängige Aktivierung von IRF3 Überwachen

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11:44 min

January 24, 2016

DOI: 10.3791/53723-v

Alexa C. Robitaille*^1,2,3, Mélissa K. Mariani*^1,3, Audray Fortin¹, Nathalie Grandvaux^1,2,3

¹CRCHUM - Research center, Centre Hospitalier de l'Université de Montréal,Université de Montréal, ²Department of Biochemistry and Molecular Medicine,Université de Montréal, ³Faculty of Medicine,Université de Montréal

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Hier beschreiben wir ein Verfahren, das eine detaillierte Analyse der phosphorylierungsabhängigen Aktivierung des IRF3-Transkriptionsfaktors ermöglicht. Dies wird durch die Kombination einer hochauflösenden SDS-PAGE und einer nativen PAGE erreicht, die mit Immunoblots unter Verwendung mehrerer phosphospezifischer Antikörper gekoppelt ist.

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, eine detaillierte Analyse der phosphorylierungsabhängigen Aktivierung des IRF3-Transkriptionsfaktors zu ermöglichen. Diese Methode kann also dazu beitragen, zentrale Fragen zur Interferon-vermittelten angeborenen Immunantwort zu beantworten. Zum Beispiel aktiviert ein Krankheitserreger die IRF3-abhängige Interferon-beta-Expression oder dringt in sie ein.

Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass sie einen erschwinglichen und empfindlichen Ansatz darstellt, um die verschiedenen IRF3-aktivierten Formen zu unterscheiden, die nach verschiedenen Stimulationen auftreten können. Obwohl diese Methode Einblicke in die Virusinfektion menschlicher Zellen bietet, kann sie auch auf Maus- oder menschliche Gewebe angewendet werden, die anderen Krankheitserregern oder pathogenassoziierten molekularen Mustern ausgesetzt sind. Alexa Robitaille und Melissa Mariani, zwei Zell-Simulink-Expertinnen aus meinem Labor, werden das Verfahren vorführen.

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