Name: Isolierung, Charakterisierung und funktionelle Untersuchung des Zahnfleisch Immune Cell Network (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-02-16T15:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 7 s
Description: Erfahren Sie die Isolierung und Charakterisierung von Gingiva-Immunzellen aus Mäusen für die Untersuchung oraler Immunität und Parodontitis. Diese Methode ermöglicht funktionelle Analysen des Immunzellnetzwerks.

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Die Autoren wurden teilweise durch das intramurale Programm von NIDCR (N.M.M) finanziert und durch ein Wellcome Trust Stepping Stones Fellowship (097820/Z/11/B an J.E.K) und durch ein Stipendium des Manchester Collaborative Centre for Inflammation Research (an J.E.K) unterstützt. Die Autorinnen und Autoren danken Teresa Wild für die kritische Durchsicht des Manuskripts.

Alle experimentellen Verfahren in diesem Protokoll beschrieben gefolgt erforderlichen Richtlinien und wurden von der Institutional Animal Care und Use Committee, NIDCR / NIH genehmigt. 1. Bereiten Sie im Voraus <ol><li> Bereiten Sie die komplette Medien: RPMI mit 2 mM L-Glutamin, 100 Einheiten / ml Penicillin, 100 ug / ml Streptomycin und 10% FBS. </li><li> Bereiten DNase Mittel: 50 ml RPMI-Medium mit 7,5 ug DNase ergänzt (Make frisch, auf Eis halten zu allen Zeiten). </li><li> Bereiten Collagenase-DNase Medien: 5 ml DNase Medium plus 3,2 mg / ml Collagenase Typ IV (Make frisch, auf Eis halten zu allen Zeiten). </li><li> Pre-kühlen FACS-Puffer: 0,5% FBS in PBS verdünnt. </li><li> Pre-kühlen Zentrifuge bis 4 ° C. </li><li> Warm Schüttelinkubator bis 37 ° C. </li></ol> 2. Isolierung, Dissection und Zellisolierung von Zahnfleischblöcke <ol><li> Euthanize Mäuse von ihnen auszusetzen 2 in einer entsprechenden Kammer zu CO, nach ARAC Richtlinien. </li> &lt;li&gt; Öffnen Sie die Brust- und Bauchhöhle, das Herz und die inneren Organe freizulegen. Zu perfundieren, stellen einen Einschnitt in die untere Hohlvene und perfundieren 3 ml PBS über dem linken Ventrikel unter Verwendung einer 3 ml-Spritze mit einer 27 G Nadel. </li><li> Immobilisieren den Körper und Kopf der Maus auf einen Block mit Magen nach oben zeigt. </li><li> Schneiden Sie jede Kommissur der Lippe in Richtung des Halses mit einer Schere, trennt die Haut, die Unterkiefer und Hals-Region umfasst, Freilegen der darunter liegenden Gewebe und Muskeln. Präparieren Sie die Unterlippe des Unterkiefers zu entdecken. </li><li> Schneiden zwischen den unteren Schneidezähnen auf beiden Seiten des Unterkiefers zu trennen und jede Seite immobilisieren, um die Mundhöhle gelangen. </li><li> Visualisieren und sezieren den Gaumen von der Nasenhöhle. </li><li> Sezieren Bereiche mit einem 10 Blatt und sind Ober- und Unterkieferbackenzahn Bereiche mit umgebenden Zahnfleischentzündung (Abbildung 1). Stellen vertikale Einschnitte gerade anterior zu den ersten Molaren und hinter der dritten Molaren und einer horizontalen Schnitt andie Grenze des Zahnfleisches (white collar des umgebenden Gewebes Zähne). </li><li> Legen Sie die Ober- und Unterkieferblöcke in einem 50 ml konischen Röhrchen mit 5 ml Collagenase / DNase (auf Eis halten). </li><li> Inkubieren in einem Schüttelinkubator bei 37 ° C für 1 Stunde und während der letzten 5 Minuten Inkubation werden 50 ul 0,5 M EDTA. </li><li> In 5 ml kaltem DNase Medien auf die 50-ml-Tube mit Geweben und sanft zu mischen wirbeln. </li><li> Übertragen Sie die vier Blöcke von Gewebe auf eine Petrischale geben und mit 500 ul DNase Medien. Entfernen Zahnfleisch aus jedem Block von Gewebe, eine Skalpellklinge mit und zeigt die Klinge in den Zahnfleisch und Interdentalräume. </li><li> Übertragen die Gewebe und die Medien aus der Petrischale sowie den vorhergehenden DNase Medien bei der Präparation verwendet werden, auf eine neue 50-ml-Röhrchen durch die Zelle Sieb (70 &amp; mgr; m groß). Wasche mit DNase Medien (3-5 ml) alle Instrumente verwendet und filtriert. </li><li> Mit dem Kolben einer sterilen 3 ml Spritze, Maische, das Gewebe gegen das Sieb,Filterung mit kaltem DNase Medien (30 bis 35 ml). </li><li> Waschen Sie die Zelle Sieb mit kaltem DNase Medien. </li><li> Zentrifuge bei 4 ° C, 314 xg für 6 min. </li><li> Überstand verwerfen, erneut zu suspendieren in 1 ml Vollmedien. </li><li> Zählen von Zellen unter Verwendung eines automatischen Zellzählers (die erwartete Menge sollte zwischen 8 x 10 5 bis 1,2 x 10 6 Zellen mit einer Lebensfähigkeit von&gt; 80% liegen). </li></ol> 3. Die Stimulation und FACS-Färbung von Zahnfleisch Cells <ol><li> Stimulieren die Einzelzellsuspension mit PMA (50 ng / ml) und Ionomycin (2,5 &amp; mgr; g / ml) in Gegenwart von 1 ul / ml Brefeldin A. </li><li> Inkubieren für 3,5 Stunden bei 37 ° C und 5% CO 2. </li><li> Spin down und waschen mit PBS und Zentrifuge bei 4 ° C; 314 g für 6 min. </li><li> Stain die Zellen eine Lebensfähigkeit Fleck unter Verwendung nach den Anweisungen des Herstellers. </li><li> Stain für extrazelluläre Marker (CD45, TCRγδ, TCR &amp; bgr;, CD4, CD8, TCRγδ oder Ameiseibodies der Wahl) nach den Anweisungen des Herstellers. </li><li> Waschen Sie die Zellen mit kaltem FACS-Puffer und Zentrifuge bei 4 ° C, 314 × g für 5 min. </li><li> Sanft vortexen das Zellpellet zu stören. </li><li> Fix die Zellen mit 2% Paraformaldehyd für 20 min bei Raumtemperatur. </li><li> Waschen Sie die Zellen mit kaltem FACS-Puffer, Zentrifuge bei 4 ° C, 314 xg für 5 min und Flecken zur intrazellulären Zytokine. <ol><li> Füllt die FACS-Röhrchen mit einer Lösung aus kaltem 0,5% Saponin verdünnt in FACS-Puffer und Zentrifuge bei 4 ° C, 314 × g für 5 min. </li><li> Hinzufügen von 300 &amp; mgr; l von 0,5% Saponin Lösung für die FACS-Röhrchen, Inkubieren für 15 min im Dunkeln bei 4 ° C und dann zentrifugiert bei 4 ° C, 314 × g für 5 min. </li><li> Stain die Zellen für die intrazelluläre Marker (IL-17A und IFNy oder Cytokine der Wahl) nach den Anweisungen des Herstellers. Waschen Sie die Zellen mit 0,5% Saponin-Lösung und Zentrifuge bei 4 ° C, 314 × g für 5 min. </li><li> Waschen Sie wieder mit FACSPuffer und Zentrifuge bei 4 ° C, 314 × g für 5 min. </li><li> Wieder die Zellen in 300 ul FACS-Puffer. </li></ol></li><li> Analysieren Sie die Ergebnisse auf einem Durchflusszytometer. </li></ol> 4. Durchflusszytometrie Analyse <ol><li> Visualisieren Zellen analysiert auf zukunfts (FSC) und Seitenstreuung (SCC) und Gate werden Trümmer auszuschließen. </li><li> Wählen Sie einzelne Zellen mit Vorwärtsstreubereich (FSC-A) vs. Höhe (FSC-H) Parameter. </li><li> Gate-Zellen, die unter Spannung stehen (wie von Lebensfähigkeit Färbung angedeutet) und positiv für die hämatopoetischen Marker CD45 + für weitere Analysen (2A und 2C). </li><li> Weiter Analyse von spezifischen Markern wie in 2 und 3 dargestellt. </li></ol>

<ol><li>Aas, J. A., Paster, B. J., Stokes, L. N., Olsen, I., Dewhirst, F. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defining+The+Normal+Bacterial+Flora+Of+The+Oral+Cavity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Defining The Normal Bacterial Flora Of The Oral Cavity.</a> J Clin Microbiol. 43, 5721-5732 (2005).</li>
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</ol>

Autoren haben nichts offenzulegen

Die aktuelle Technik erfolgreich eine große Zahl von Immunzellen führt (aus einer einzigen Maus) geeignet, nicht nur für die phänotypische Charakterisierung, sondern auch für funktionelle Studien ex vivo. Eine andere Gruppe war zuvor ein Protokoll veröffentlicht zu isolieren und murine gingival Immunzellen zu charakterisieren und stellte den Wert der mehrfarbigen mit Durchflusszytometrie in der Studie von Parodontitis in Tiermodellen 9. Nach erheblichen Fehlersuche den Schlüssel Änderung in diesem Pr...

Zahnfleischgewebe umgeben den Menschen und der Maus Gebiss und werden ständig auf die komplexe Biofilm des Zahnes 1 ausgesetzt. Die Immunzellennetz der Zahnfleischschutz Überwachung ist entscheidend für Gewebeintegrität zu gewährleisten, mit den lokalen kommensale Bakterien gewährleisten Homöostase und, zur gleichen Zeit, zwei wirksame Immunität gegen pathogene Herausforderung bietet. Um das zu erreichen Homöostase wird das Immunsystem sorgfältig auf die Zahnfleischumgebung zugeschnitten eine hoch spezialisierte Immunzellen Netzwerk zu schaffen, noch so kleine Detail wird von den Zahnfleischimmunzellpopulationen bekannt und ihre Rolle bei der Aufrechterhaltung der Gewebe Immunität 2. Wenn Immunhomöostase auf dem Zahnfleisch gestört ist, entweder durch eine erhöhte Anfälligkeit Host und / oder das Vorhandensein von dysbiotischen mikrobiellen Gemeinschaften, eine entzündliche Erkrankung entsteht Parodontitis 3 4. Parodontitis ist eine weitverbreitete entzündliche Erkrankung, was zu einem Verlust des Zahnes supporting Strukturen. In seiner schweren Formen wird in ca. 10% der Bevölkerung im allgemeinen 5 ersichtlich. Die Schlüsselfaktoren in Parodontitis Anfälligkeit und Progression beteiligt Sezieren hat sich als schwierig erwiesen, 6. Allerdings Tiermodellen haben im Verständnis der Mechanismen der Parodontitis Initiierung und Progression 7 äußerst nützlich. Die Modelle können die wichtigsten Zellpopulationen und molekulare Mechanismen zu definieren, verwendet werden, die Immunhomöostase und Antrieb sind entscheidend Entwicklung einer Parodontitis zu halten. Eine solche Erkenntnis wird unser Verständnis von Zahnfleisch-spezifische Steuerung von Immunhomöostase und weiterhin unser gegenwärtiges Verständnis der Krankheitsentstehung zu transformieren.

<table><tbody><tr><td>Feine Schere</td><td>Feinwissenschaftliche Werkzeuge</td><td>14058-11</td><td></td></tr><tr><td>Skalpellgriff #3</td><td>Feinwissenschaftliche Werkzeuge</td><td>10003-12</td><td></td></tr><tr><td>Skalpellklingen #10</td><td>Feinwissenschaftliche Werkzeuge</td><td>10010-00</td><td>Sterile</td></tr><tr><td>Splitterzange</td><td>Integra Miltex</td><td>6-304</td><td></td></tr><tr><td>Nadeln mit normaler Fase</td><td>BD Medical</td><td>305109</td><td>27 G, 12,7 mm Länge</td></tr><tr><td>Monoject Spritzen</td><td>Covidien</td><td>8881513934</td><td>Luer-Lock-Spitze, 3 ml</td></tr><tr><td>PBS, pH 7,4</td><td>Life Technologies</td><td>10010-049</td><td>Ohne Calcium und Magnesium</td></tr><tr><td>RPMI 1640</td><td>Lonza</td><td>12-167F</td><td>Ohne L-Glutamin</td></tr><tr><td>DNase I aus der Rinderbauchspeicheldrüse</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>DN25-1G</td><td></td></tr><tr><td>Kollagenase Typ IV</td><td>Gibco (von Life technologies)</td><td>17104-019</td><td></td></tr><tr><td>Fötales Rinderserum</td><td>Gemini Bio-products</td><td>100-106</td><td></td></tr><tr><td>Gentamicin 50 mg/ml</td><td>Qualität biologisch</td><td>120-098-661EA</td><td></td></tr><tr><td>Pen Strep</td><td>Gibco (von Life technologies)</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>L-Glutamin</td><td>Gibco (von Life technologies)</td><td>25030-081</td><td></td></tr><tr><td>0,5 M EDTA pH 8,0</td><td>Qualität biologisch</td><td>351-027-721EA</td><td></td></tr><tr><td>50 ml Röhrchen</td><td>Corning</td><td>352070</td><td>Polypropylen, steril</td></tr><tr><td>70 &mu; M Zellsiebe</td><td>Corning</td><td>352350</td><td></td></tr><tr><td>Petrischalen</td><td>Corning</td><td>351029</td><td>Steril</td></tr><tr><td>5 ml FACS Röhrchen</td><td>Corning</td><td>352052</td><td>Steril</td></tr><tr><td>BD GolgiPlug</td><td>BD Biosciences</td><td>555029</td><td>Enthält Brefeldin A-Lösung</td></tr><tr><td>Phorbol 12-Myristat 13-Acetat (PMA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P8139</td><td></td></tr><tr><td>Ionomycin Calciumsalz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>13909</td><td></td></tr><tr><td>Saponin aus Quillaja-Rinde</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S4521</td><td></td></tr><tr><td>LIVE/DEAD Fixable Aqua Dead Cell Stain Kit</td><td>Life Technologies</td><td>L34957</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Maus CD45 Alexa Fluor 700</td><td>eBioscience</td><td>56-0451-82</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Maus CD4 eFluor 450</td><td>eBioscience</td><td>48-0042-82</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Maus TCR beta APC eFluor 780</td><td>eBioscience</td><td>47-5961-82</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Maus gamma delta TCR FITC</td><td>eBioscience</td><td>11-5711-82</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Maus IL-17A APC</td><td>eBioscience</td><td>12-7311-82</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Maus IFN-& gamma; PE</td><td>eBioscience</td><td>11-5931-82</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Maus NK1.1 PE-Cy7</td><td>eBioscience</td><td>25-5941-82</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Maus CD90.2 APC eFluor 780</td><td>eBioscience</td><td>47-0902-82</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Maus CD3e FITC</td><td>eBioscience</td><td>11-0031-82</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Maus CD19 FITC</td><td>eBioscience</td><td>11-0193-82</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Maus CD11b FITC</td><td>eBioscience</td><td>11-0112-82</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Maus CD11c FITC</td><td>eBioscience</td><td>11-0114-82</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Maus TCR beta FITC</td><td>eBioscience</td><td>11-5961-82</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Maus Ly-6G FITC</td><td>eBioscience</td><td>11-5931-82</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Maus Ly-6C FITC</td><td>BD Pharmingen</td><td>553104</td><td></td></tr></tbody></table>

isolierung, charakterisierung und funktionelle untersuchung des zahnfleisch immune cell network

Isolation, Characterization and Functional Examination of the Gingival Immune Cell Network

Immunzellnetzwerke in Geweben spielen eine wichtige Rolle bei der Vermittlung der lokalen Immunität und der Aufrechterhaltung der Gewebehomöostase, dennoch ist wenig über die ansässigen Immunzellpopulationen in der Mundschleimhaut und Gingiva bekannt. Wir haben eine Technik für die Isolierung und Untersuchung von Immunzellen aus murinem Zahnfleischgewebe etabliert, einem Bereich ständiger mikrobieller Exposition und einer anfälligen Stelle für eine häufige entzündliche Erkrankung, die Parodontitis. Unser Protokoll ermöglicht eine detaillierte phänotypische Charakterisierung der Immunzellpopulationen, die in der Gingiva leben, auch im stationären Zustand. Unser Verfahren liefert auch genügend Zellen mit hoher Lebensfähigkeit für den Einsatz in funktionellen Studien, wie z. B. der Beurteilung der Zytokinsekretion ex vivo. Diese Kombination aus phänotypischer und funktioneller Charakterisierung des gingivalen Immunzellnetzwerks soll dazu beitragen, die Mechanismen der oralen Immunität und der parodontalen Homöostase zu untersuchen, aber auch unser Verständnis der Mechanismen der lokalen Immunpathologie zu verbessern.

Zur Anwendung des Protokolls veranschaulichen, zeigen wir repräsentative Ergebnisse der Immunzellennetz in das Zahnfleisch von Mäusen mit und ohne Parodontitis untersucht (WT vs. LFA - / - 2A - C). Repräsentative FACS Plots zeigen Live-CD45 + hämatopoetische Zellen im Zahnfleisch (2A, 2C). Isolation und Verarbeitung von Immunzellen mit diesem Protokoll liefert genügend Zellen ex vivo Stimul...

Wir haben ein Verfahren zur Isolierung, phänotypische Charakterisierung und funktionelle Analyse von Immunzellen aus murinen Gingiva etabliert.

Isolierung, Charakterisierung und funktionelle Untersuchung des Zahnfleisch Immune Cell Network

Immune cell networks in tissues play a vital role in mediating local immunity and maintaining tissue homeostasis, yet little is known of the resident ...

Das übergeordnete Ziel dieser Methode besteht darin, immunologische Zellen aus dem Zahnfleisch zu isolieren, um eingehende Charakterisierungen der Immunantworten im Zusammenhang mit der oralen Immunität und der Parodontitis durchzuführen. Diese Methode kann helfen, zentrale Fragen im Bereich der oralen Immunität zu beantworten, beispielsweise welche zellulären Faktoren an der Pathogenese der Parodontitis beteiligt sind. Die wesentlichen Vorteile dieser Technik liegen darin, dass sie die Untersuchung des immunologischen Zellnetzwerks im Mundraum ermöglicht und ausreichend lebensfähige Zellen für nachgeschaltete in-vitro-Untersuchungen isoliert.Als ersten Schritt dieses Protokolls beginnen Sie damit, Stifte anzubringen, um den Körper der Maus zu fixieren, und öffnen die Brust- und Bauchhöhle, um Herz und innere Organe freizulegen. Danach führen Sie einen Schnitt in die Vena cava durch und spülen mithilfe einer 3-Milliliter-Spritze mit einer 27-Gauge-Nadel 3 Milliliter PBS über den linken Ventrikel aus. Sobald das gesamte Blut ausgespült ist, befestigen Sie den Kopf der Maus mit einem Stift auf einer Präparationsunterlage, sodass der Bauch nach oben zeigt.Verwenden Sie dann eine Schere, um jede Commissur der Lippe in Richtung des Halses zu durchtrennen, wodurch die Haut, die den Unterkiefer und den Halsbereich bedeckt, gelöst und die darunterliegenden Gewebe und Muskeln freigelegt werden. Durchtrennen Sie das Gewebe zwischen den unteren Schneidezähnen, um beide Seiten des Unterkiefers zu separieren. Fixieren Sie jede Seite des getrennten Unterkiefers mit Nadeln der Größe 25 Gauge, um Zugang zur Mundhöhle zu erhalten.Nachdem der Gaumen identifiziert wurde, verwenden Sie eine chirurgische Klinge Nr. 10, um vertikale Einschnitte unmittelbar vor dem ersten Molar und hinter dem dritten Molar anzulegen. Danach wird das Gewebe von der Nasenhöhle abgelöst und die Blocke aus dem Unterkiefer herauspräpariert. Anschließend wird das überschüssige Gewebe vom Rand des Zahnfleisches entfernt, und die ober- und unterkiefereigenen Blocke werden in ein 50-Milliliter-Konischgefäß überführt, das 5 Milliliter Kollagenase und DNase auf Eis enthält.Verdauen Sie das Gewebe eine Stunde lang in einem Schüttelinkubator bei 37 Grad Celsius, wobei Sie in den letzten fünf Minuten 50 Mikroliter einer 0,5-molaren EDTA-Lösung hinzufügen. Anschließend 5 Milliliter kaltes DNase-Medium zum Gewebe geben und den Inhalt des Reaktionsgefäßes vorsichtig durch Schwenken mischen. Danach die vier Gewebestücke in eine Petrischale überführen.Und bedecken Sie sie mit 500 µL frischem DNase-Medium. Entfernen Sie mit einem Skalpell das Zahnfleisch von jedem Gewebeprobeblock. Überführen Sie anschließend den gesamten Inhalt der Petrischale in einen 70 µm-Zellsieb, der auf einem 50-mL-Tube aufsetzt.Spülen Sie die Petrischale und das Sieb mit 3 bis 5 Milliliter frischem DNase-Medium. Danach zerkleinern Sie das Gingivagewebe mit dem Kolben einer sterilen 3-Milliliter-Spritze durch Pressen gegen das Siebgewebe. Spülen Sie das Sieb mit 30 bis 35 Milliliter kaltem DNase-Medium ab und zentrifugieren Sie das Filtrat.Anschließend das Gaumengewebe in 1 Milliliter komplettem Medium resuspendieren und die Anzahl der vitalen Zellen bestimmen. Die Isolierung und Aufarbeitung von Immunzellen, wie gerade gezeigt, liefert eine ausreichende Zellzahl, um eine Ex-vivo-Stimulation und Charakterisierung der Zytokinausschabemuster der Zahnfleischzellen sowohl aus Wildtyp- als auch aus parodontitis-anfälligen Tieren durchzuführen. Tatsächlich kann die immunzelluläre Zusammensetzung des murinen Zahnfleisches, wie in diesen Dichtediagrammen dargestellt, analysiert werden, die die T- und natürlichen Killerzell-Kompartimente bei parodontitis-anfälligen LFA-Knockout-Mäusen bewerten.Unter Verwendung geeigneter Gating-Strategien kann auch die intrazelluläre Zytokinproduktion von TCR-Beta-CD4-positiven, TCR-Beta-CD8-positiven und TCR-Gamma-Delta-positiven T-Zellen sowie von NK-Zellen und angeborenen lymphoiden Zellen bestimmt werden. Sobald die Methode beherrscht ist, können die Zellen innerhalb von drei Stunden für die Immunfärbung isoliert werden, sofern das Verfahren korrekt durchgeführt wird. Bei der Durchführung dieses Verfahrens ist es wichtig, alle Schritte effizient und zügig abzuschließen und die Zellen stets auf Eis zu lagern, wenn sie gerade nicht manipuliert werden.Nach dieser Methode können weitere Verfahren wie die Zellsortierung durchgeführt werden, um zusätzliche Fragen bezüglich der Funktion bestimmter Zellsubpopulationen zu beantworten.

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Research

Forschung

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie und Infektion

Diese Methode zur Isolierung von funktionellen Immunzellen aus dem Herzen stellt eine Alternative zu den herkömmlichen Methoden der Kollagenaseverdau, die unerwünschten Immun-Zell-Aktivierung verursacht, was zu einer verminderten Reaktionsfähigkeit dieser Zellen. Unsere Methode der Isolierung ergibt funktionelle Herz-Immunzellen durch die Vermeidung von Problemen mit enzymatische Verdauung.

Isolierung von Functional Cardiac Immune Cells

Dieses Video zeigt das Isolierungsverfahren des zahnfleischartigen Immunzellnetzwerks aus einem Mausmodell. Durch die enzymatische Verdauung wird das Zahnfleischgewebe von den anhaftenden Zähnen und Knochen freigesetzt, das weiter mechanisch verdaut wird, wodurch Immunzellen aus dem Zahnfleisch freigesetzt werden. Die isolierten Zellen sind bereit für immunologische Experimente.

Isolierung eines gingivalen Immunzellnetzwerks aus murinen Zahnblöcken

Diese Studie beschreibt ein effizientes Verfahren zur Isolation und Behandlung Gingiva von der Maus Mundhöhle, um eine Einzelzellen-Kultur zu erzeugen. Die resultierenden Zellen können weiter für die Durchflusszytometrie und molekulare Studien eingesetzt werden.

Isolation, Verarbeitung und Analyse von Murine Gingivazellen

Dieser Artikel stellt zwei Protokolle vor: eines, um anaerobe Bakterien zu messen, die erfolgreich in den Wirt eindringen und darin überleben können, und das andere, um anaerobe Bakterien zu visualisieren, die mit Wirtszellen interagieren. Diese Studie kann auf jede kultivierbare anaerobe und jeden eukaryotischen Zelltyp angewendet werden.

Porphyromonas gingivalis als Modellorganismus für die Beurteilung der Interaktion von anaeroben Bakterien mit Wirtszellen

Die exponierte normale Okularoberfläche besteht aus Hornhaut und Bindehaut. Epithelzellen, Becherzellen und Immunzellen sind in der Bindehaut vorhanden. Hier wird eine nicht-invasive Technik der Impressionszytologie beschrieben, die eine Impressionszytologie-Vorrichtung und Durchflusszytometrie zur Analyse von Immunzellen in der Bindehaut verwendet.

Ein nicht-invasiver Weg, um Zellen aus der Conjunctiva zu isolieren und zu phenotypen

Das Ziel des Protokolls ist eine entzündliche menschlichen Gingiva Modell in Vitrozu bauen. Dieses Gewebe Modell pflegt Co drei Arten von menschlichen Zellen, HaCaT Keratinozyten, gingival Fibroblasten und THP-1 Makrophagen, dreidimensionalen Bedingungen. Dieses Modell kann angewendet werden, für die Untersuchung von parodontaler Erkrankungen wie Gingivitis und Parodontitis.

Dreidimensionale entzündliche menschliches Gewebe Äquivalente der Gingiva

Im vorliegenden Protokoll erklären wir, wie man mononukleäre Tonbandzellen von gesunden Menschen, die sich einer partiellen chirurgischen Tonsillektomie unterziehen, leicht verarbeitet und kultiviert, um angeborene Immunantworten bei aktivierung zu untersuchen und eine Virusinfektion in Schleimhautgeweben nachzuahmen.

Isolierung von Tonsillar Mononukleären Zellen zur Untersuchung von Ex-Vivo-angeborenen Immunantworten in einem menschlichen Mukosal-Lymphgewebe

Hier stellen wir eine modifizierte Methode zur Isolierung und Kultur menschlicher Zahnfleischepithelzellen vor, indem wir den Rock-Inhibitor Y-27632 zur traditionellen Methode hinzufügen. Diese Methode ist einfacher, weniger zeitaufwendig, verbessert die Stammzelleigenschaften und produziert eine größere Anzahl von Epithelzellen mit hohem Potenzial sowohl für das Labor als auch für klinische Anwendungen.

Isolierung und Kultur primärer humaner Zahnfleischepithelzellen mit Y-27632

Das aktuelle Protokoll stellt eine schnelle, effiziente und schonende Methode zur Isolierung einzelner Zellen dar, die für die Einzelzell-RNA-seq-Analyse aus einem kontinuierlich wachsenden Mausschneidezahn, Mausmollaren und menschlichen Zähnen geeignet sind.

Schnelle Isolierung einzelner Zellen aus Maus- und menschlichen Zähnen

Angeborene lymphatische Zellen der Gruppe 2 (ILC2), die an Typ-2-Entzündungen beteiligt sind, sind hauptsächlich an der Reaktion auf Helmintheninfektionen, allergische Erkrankungen, metabolische Homöostase und Gewebereparatur beteiligt. In dieser Arbeit wird ein Verfahren zur Isolierung von ILC2s aus der murinen Nasenschleimhaut und zum Nachweis der Expression von CD226 demonstriert.

Isolierung von angeborenen lymphatischen Zellen der Gruppe 2 aus der Nasenschleimhaut der Maus zum Nachweis der Expression von CD226

Ziel dieses Protokolls ist es, einen standardisierten Ansatz zur quantitativen Bewertung der Integrität der murinen gingivalen Epithelbarriere zu bieten, indem fluoreszenzmarkierte Dextrans unterschiedlicher Molekülgröße in vivo auf die Gingivaloberfläche topisch aufgetragen werden, gefolgt von einer ex-vivo-Bildgebung mit einem Einzelphotonenmikroskopiesystem.

Funktionelle Beurteilung der Maus-Gingival-Epithelbarriere mit fluoreszierenden Traceren

Erfahren Sie die Isolierung und Charakterisierung von Gingiva-Immunzellen aus Mäusen für die Untersuchung oraler Immunität und Parodontitis. Diese Methode ermöglicht funktionelle Analysen des Immunzellnetzwerks.

Isolierung, Charakterisierung und funktionelle Untersuchung des Zahnfleisch Immune Cell Network

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