Name: Transarterial Verwaltung von onkolytischen Viren für lokoregionale von Orthotopische HCC bei Ratten (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-04-15T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 55 s
Description: Erfahren Sie die transarterielle Verabreichung onkolytischer Viren zur lokoregionalen Therapie von hepatozellulärem Karzinom bei Ratten. Diese Methode ermöglicht die gezielte Zufuhr hoher Virustiter zu multiplen Tumorläsionen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Diese Arbeit wird unterstützt durch die SFB 824 Teilprojekte C6 und C7 (DFG Sonderforschungsbereich 824), Deutsche Forschungsgemeinschaft, Bonn, Deutschland.

Hinweis: Die folgenden Schritte wurden in Übereinstimmung mit den Richtlinien unserer Institution und der lokalen Regierung von Bayern, Deutschland durchgeführt. Alle Versuche, dieses Protokoll zu reproduzieren müssen mit den lokalen Richtlinien für die humane Behandlung von Tieren in die Einhaltung gemacht werden, wie es von den örtlichen Tierpflege und Verwendung Ausschuss diktiert. Zum Beispiel benötigen viele Institute, dass sterile Handschuhe während Nagetier Operation getragen werden. Darüber hinaus arbeiten mit Viren müssen entsprechend den örtlichen Vorschriften durchgeführt werden, für die persönliche und Umweltsicherheit zu kümmern. Es muss richtig gemacht werden , um kontaminierter Abfälle entsorgen und Instrumente zu reinigen und Arbeitsplatz (dh durch Autoklavieren und Reinigung mit einem geeigneten antivirale Desinfektionsmittel nach den Anweisungen des Herstellers). 1. Vorbereitungen Vor Beginn der Chirurgie <ol><li> Sterilisieren chirurgischer Instrumente (dh durch Autoklavieren). </li><li> Verdünne das Virus an die appropriate Konzentration, die in Abhängigkeit von der Toxizität des spezifischen Virus verwendet wird und die Anfälligkeit des Rattenstamm variieren. Hinweis: Wenn beispielsweise bei männlichen Ratten Buffalo vesikulären Stomatitis - Virus verwenden, wir injizieren typischerweise 10 7 pfu in einem 1 ml Volumen, was die tolerierte Höchstdosis in diesem Modell ist. <ol><li> PREFILL das Virus (unter aseptischen Bedingungen) in 1 ml Spritzen und befestigen 30 G Nadeln, wobei darauf geachtet Luft aus der Spritze und Nadel zu beseitigen. </li></ol></li><li> Bereiten Sie den OP-Raum mit allen Materialien und Ausrüstung erforderlich, und sprühen Sie den Bereich mit Ethanol zu desinfizieren. Füllen Sie eine kleine Behälter mit steriler Kochsalzlösung (0,9% NaCl) zum Befeuchten Tupfer und Wattestäbchen. </li></ol> 2. Herstellung der Ratte <ol><li> Verwalten Sie eine analgetische (wie von der örtlichen Tierpflege und Verwendung Ausschuss angegeben) auf der geeigneten Dosis 30 Minuten vor dem chirurgischen Eingriff zu beginnen. Beispielsweise,verabreichen eine hohe Dosis von Metamizol (100-200 mg / kg). </li><li> Anästhesieren die Ratte unter Verwendung von Inhalations (Isofluran) oder injizierbare (dh eine Mischung von Medetomidin (0,15 mg / kg), Midazolam (2 mg / kg) und Fentanyl (0,005 mg / kg), auch als MMF bekannt) Anästhesie. Verwalte isolflurane durch einen Verdampfer bei 1-3% und bei Bedarf nachjustieren normale Atmung und Herzfrequenz zu halten. <ol><li> Bevor Sie fortfahren, stellen Sie sicher, dass die Ratte vollständig sediert und nicht in der Lage, Schmerz zu empfinden, indem der Fuß-Pad Kneifen und für eine Reaktion zu beobachten. </li><li> Tragen Sie eine Veterinäraugensalbe zur Trockenheit während der Narkose zu verhindern. </li></ol></li><li> Rasieren Sie den Bauchbereich vom Brustbein bis auf knapp über den Genitalien eine kleine veterinärHaarSchneider verwenden. Achten Sie darauf, eine gründliche Rasur zu erreichen, ohne die Haut zu verletzen. </li><li> Befestigen Sie die Ratte auf die chirurgische Bett mit Klebeband an der Vorder- und Hinterbeine, und, wenn Inhalationsanästhesie verwenden, legen Sie die Schnauze in einem angemessen dimensionierten Bugnase. Legen Sie ein Heizkissenunterhalb des Rattenkörpertemperatur zu halten. Desinfizieren Sie den Bauchbereich ein chirurgischer Qualität Desinfektionsmittel, gefolgt von einem Alkohol spülen und Anwendung eines antiseptisch Farbe verwendet wird. </li></ol> 3. Laparotomie <ol><li> Mit einem kleinen gekrümmten Skalpells, wie # 15, stellen eine kleine vertikale Inzision in der Hautschicht unmittelbar entlang der Mittellinie. Erweitern Sie den Schnitt bis zum Xyphoid Prozess. Als nächstes einzuschneiden Schicht den Muskel vorsichtig mit einem Paar von Adson Pinzette Anheben eines Skalpells Einschnitt zu machen, und dann den Schnitt verlängern mit chirurgische Scheren der Xyphoid Prozess. Achten Sie darauf, nicht die Organe der Bauchhöhle zu durchstechen oder die kleinen Schiffe, die auf beiden Seiten des Xyphoid Prozess zu beschädigen. </li><li> Legen Sie einen Aufroller über den Bauch, den Muskel und Haut verteilen und die gesamte Bauchbereich aus. </li><li> Befeuchten Sie zwei 7,5 x 7,5 cm 2 Mullkompressen mit steriler physiologischer Kochsalzlösung und verbreiten eine über der Spitze des chirurgischenÖffnen und einem über den Boden, wie in 2A gezeigt. </li></ol> 4. Isolierung der Leberarterie <ol><li> Die Verwendung von zwei angefeuchteten Wattetupfer, befeuchtet mit steriler physiologischer Kochsalzlösung, heben vorsichtig den Darm und Blinddarm aus der Bauchhöhle, und legen Sie sie auf dem unteren Mulltupfer. Falten Sie die Gaze über die Organe feucht zu halten und sie aus dem Weg zu halten. </li><li> Die Verwendung von zwei angefeuchteten Wattetupfer, heben Sie vorsichtig den linken seitlichen Leberlappen auf, die in dieser Phase die vorherrschende Keule in Sicht sein. Klappen Sie den Lappen nach oben, und ein kleines Paar Feder Schere, schneiden durch die Fasermembran auf der Unterseite des Flügels, so dass der Lappen vollständig nach oben geklappt werden und ruhen auf der Oberseite des zuvor platzierten Mulltupfer. Falten Sie die Gaze Tupfer über den Lappen es an Ort und Stelle zu halten. </li><li> Fahren Sie mit dem Lappen (der vordere caudatus), die jetzt die Vorderlappen in Sicht ist. Mit The Hilfe eines Binokular und feinen Pinzette, sezieren die dünne Membran, die die Lappen umgibt, um sie zu lösen und lassen Sie es frei nach oben gekippt werden. Platzieren Sie den Lappen unter dem Mulltupfer zusammen mit der linken Seitenlappen. </li><li> Beachten Sie die hinteren Lobus caudatus, die jetzt sichtbar. Wiederholen Sie Schritt 4.3 vollständig zu den hinteren Lobus caudatus sezieren und drehen Sie sie nach oben und in der Gaze zusammen mit den zuvor platzierten Leberlappen. </li><li> Direkt unter der ursprünglichen Position des Lobus caudatus, finden die gemeinsame Leberarterie, die nun sichtbar und leicht durch seine starke Pulsation erkannt. Im Anschluss an die Arterie an der anatomischen rechts, beobachten die dicke Membranmaterial die gastro und richtige Leberarterien aus Sicht verdunkeln. Mit einer feinen Pinzette, heben Sie dieses Material auf und es sanft reißen, dabei alle kleinen Gefäße in diesem Bereich zu vermeiden. Verwenden Sie Wattetupfer eine Blutung zu stoppen, die auftreten könnten. <ol><li> Suchen Sie die arterial Zweige, die mit Hilfe eines Binokular deutlich sichtbar sein wird, wenn die Membrane richtig präpariert werden. </li></ol></li><li> Mit zwei feinen, atraumatische Pinzetten, sezieren vorsichtig die gemeinsame Leberarterie, A. gastroduodenalis, und die richtige Leberarterie , so dass sie von den umgebenden Membranen (2B) befreit werden. </li></ol> 5. Herstellung der Arterie für Injektions <ol><li> Übergeben Sie eine 7-0 Prolene Naht unter der gastro - Arterie, und verwenden Sie eine Mikro-Nadelhalter eine permanente Ligatur am distalen Ende zu binden, gerade oberhalb der Bifurkation (Abbildung 1 für die richtige Platzierung zu sehen). Erlauben etwa 2 Zoll des Nahtmaterials an den Enden verbleibt, und klemmen sie mit einem Nadelhalter die Arterie gelehrt, wie in 2C zu ziehen. </li><li> Legen Sie eine kleine Klammer über die gemeinsame Leberarterie , um vorübergehend den Blutfluss (2C) blockieren. Hinweis: Dies ist important zu verhindern massive Blutungen, sobald die Nadel aus der Arterie entfernt wird. Darüber hinaus ist die Blockierung der arteriellen Durchblutung wird langsamer Virusgabe und eine bessere Transduktionswirksamkeit ermöglichen. <ol><li> Wichtig: Arbeiten Sie schnell die Höhe der Zeit zu begrenzen, dass der Blutfluss gestoppt wird - führen die Injektion und anschließende Ligation der Arterie innerhalb von 5 Minuten von der gemeinsamen Leberarterie zu klemmen. </li></ol></li><li> Wenn möglich, erhöhen Sie die Vergrößerung auf dem Binokular, so dass die gastroduodenalen Arterie scharf ist und scheint groß genug, um genau die 30 G-Nadel einzufügen. Legen Sie die Nadel der Injektionsspritze in das Lumen des gastro-Arterie und schieben sich langsam auf den Kolben. Anmerkung: Die richtige Platzierung der Nadel in der injizierten Lösung führen direkt durch die A. hepatica propria fließt und in Richtung der Leber. <ol><li> Führen Sie die Injektion sehr langsam Transduktionseffizienz zu maximieren. </li></ol></li> &lt;li&gt; Sobald die gesamte Injektionsvolumen verabreicht wurde, langsam die Nadel aus der Arterie zurückgezogen wird. Hinweis: Es darf keine Blutung aus der Injektionsstelle sein. Im Falle, dass tritt Blutungen, zeigt es an, dass die Klemme nicht richtig platziert ist und schnell angepasst werden sollten. </li></ol> 6. Schluss <ol><li> Übergeben Sie eine zweite 7-0 Prolene Naht unter der gastro-Arterie und eine zweite permanente Ligatur oberhalb der Injektionsstelle zu binden. </li><li> Entfernen Sie die Klammer von der gemeinsamen Leberarterie. Bestätigen Sie, dass der Blutfluss durch die richtige Leberarterie zur Leber wurde wiederhergestellt. <ol><li> Schneiden Sie die losen Enden der Ligatur. </li></ol></li><li> Bestätigen, dass es keine Blutung ist, bevor die Därme und die Leber in die Bauchhöhle zurückkehrt. Achten Sie darauf, dass der Anhang in der ursprünglichen Ausrichtung zurückgeführt wird. </li><li> Nähen Sie den Muskel und Haut in unterschiedlichen Schichten mit 4-0 Vicryl Nahtmaterial mit einer gebogenen Nadel. Platz Dauer-s Nähte etwa 1 mm auseinander und ziehen Sie fest. <ol><li> Während des Nähens Phase verabreichen ein Analgetikum wie Buprenorphin (0,05 mg / kg). </li></ol></li><li> Entfernen Ratte aus der Narkose. Wenn Isofluran verwendet worden ist, sollte die Ratte Bewußtsein innerhalb von einigen Minuten wieder. Wenn MMF hat als injizierbare Anästhesie verwendet, antagonisieren sie mit einer subkutanen Injektion von Atipamezol (0,75 mg / kg), Flumazenil (0,2 mg / kg) und Naloxon (9,12 mg / kg), die die Wirkungen der Anästhesie umkehrt und lassen Sie die Tiere das Bewusstsein innerhalb von 20 Minuten wieder zu erlangen. Halten Sie Ratten warm mit einer Infrarot-Wärmelampe während der anfänglichen Phase wakening. <ol><li> Verwenden Sie kein Tier unbeaufsichtigt lassen, bis es genügend Bewusstsein zu halten Brustlage wiedergewonnen hat. </li><li> Nicht ein Tier zurück, die Operation an die Firma von anderen Tieren unterzogen wurde, bis sie vollständig erholt. </li></ol></li><li> Monitor-Ratten postoperativ für pathologische Anzeichen von Leiden und Folgemit Analgetika vom lokalen Tierpflege und Verwendung Ausschuss nach Bedarf. Beispielsweise kann Buprenorphin 0,05 mg / kg alle 12 Stunden verabreicht werden. </li></ol>

<ol><li>Murray, C. J., Lopez, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence-based+health+policy+-+lessons+from+the+Global+Burden+of+Disease+Study%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Evidence-based health policy - lessons from the Global Burden of Disease Study.</a> Science. 274, 740-743 (1996).</li>
<li>Parkin, D. M., Bray, F., Ferlay, J., Pisani, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estimating+the+world+cancer+burden%3A+Globocan+2000%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Cancer%22%5BJournal%5D)">Estimating the world cancer burden: Globocan 2000.</a> Int J Cancer. 94, 153-156 (2001).</li>
<li>Bruix, J., Sala, M., Llovet, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemoembolization+for+hepatocellular+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Chemoembolization for hepatocellular carcinoma.</a> Gastroenterology. 127, 179-188 (2004).</li>
<li>Miraglia, R., Pietrosi, G., Maruzzelli, L., Petridis, I., Caruso, S., Marrone, G., Mamone, G., Vizzini, G., Luca, A., Gridelli, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+of+transcatheter+embolization%2Fchemoembolization+%28TAE%2FTACE%29+for+the+treatment+of+single+hepatocellular+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22World+J+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Efficacy of transcatheter embolization/chemoembolization (TAE/TACE) for the treatment of single hepatocellular carcinoma.</a> World J Gastroenterol. 13, 2952-2955 (2007).</li>
<li>Breedis, C., Young, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+blood+supply+of+neoplasms+in+the+liver%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">The blood supply of neoplasms in the liver.</a> Am J Pathol. 30, 969-977 (1954).</li>
<li>Nakashima, T., Kojiro, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathologic+characteristics+of+hepatocellular+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Liver+Dis%22%5BJournal%5D)">Pathologic characteristics of hepatocellular carcinoma.</a> Semin Liver Dis. 6, 259-266 (1986).</li>
<li>Heo, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Randomized+dose-finding+clinical+trial+of+oncolytic+immunotherapeutic+vaccinia+JX-594+in+liver+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Randomized dose-finding clinical trial of oncolytic immunotherapeutic vaccinia JX-594 in liver cancer.</a> Nat Med. 19, 329-336 (2013).</li>
<li>Altomonte, J., Marozin, S., Schmid, R. M., Ebert, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineered+newcastle+disease+virus+as+an+improved+oncolytic+agent+against+hepatocellular+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">Engineered newcastle disease virus as an improved oncolytic agent against hepatocellular carcinoma.</a> Mol Ther. 18, 275-284 (2010).</li>
<li>Shinozaki, K., Ebert, O., Kournioti, C., Tai, Y. S., Woo, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oncolysis+of+multifocal+hepatocellular+carcinoma+in+the+rat+liver+by+hepatic+artery+infusion+of+vesicular+stomatitis+virus%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">Oncolysis of multifocal hepatocellular carcinoma in the rat liver by hepatic artery infusion of vesicular stomatitis virus.</a> Mol Ther. 9, 368-376 (2004).</li>
<li>Shinozaki, K., Ebert, O., Woo, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Eradication+of+advanced+hepatocellular+carcinoma+in+rats+via+repeated+hepatic+arterial+infusions+of+recombinant+VSV%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Eradication of advanced hepatocellular carcinoma in rats via repeated hepatic arterial infusions of recombinant VSV.</a> Hepatology. 41, 196-203 (2005).</li>
<li>Altomonte, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synergistic+antitumor+effects+of+transarterial+viroembolization+for+multifocal+hepatocellular+carcinoma+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Synergistic antitumor effects of transarterial viroembolization for multifocal hepatocellular carcinoma in rats.</a> Hepatology. 48, 1864-1873 (2008).</li>
</ol>

Die Autoren haben nichts offenzulegen.

Obwohl die direkte intratumorale Injektion zweifellos die einfachste Methode ist, um eine effiziente Tumortransduktion eines einzelnen Tumorknotens zu erreichen, stellt die hepatische arterielle Infusion einen idealen Verabreichungsweg dar, um multifokales, orthotopes HCC zu behandeln. Diese Methode hat sich bei der Behandlung von HCC bei immunkompetenten Ratten mit onkolytischen Viren als sicher und wirksam erwiesen. Da HCC-Patienten routinemäßig durch transarterielle Anwendung einer Chemoembolisation behandelt werden...

Das hepatozelluläre Karzinom (HCC) ist die fünfthäufigste Krebsart weltweit und die dritthäufigste Ursache der durch Krebs verursachten Tod, es ist eine erhebliche Gesundheitsgefahr 1,2 zu machen. Für Patienten , die nicht für eine Tumorresektion sind, oder solche Erwartung einer Lebertransplantation, lokoregionaler Therapie mit transarterielle Embolisation (TAE) oder transarterial Chemoembolisation (TACE) als Standard Palliativmedizin 3,4 angewendet. Diese Therapien nutzen die einzigartige Funktion der doppelten Blutversorgung in der Leber , wodurch Tumoren fast ausschließlich durch hepatische arterielle Blutfluss zugeführt werden, während das umgebende Leber mit der Mehrheit seiner Blutversorgung aus der Pfortader 5,6 erhält. Aufgrund der extrem begrenzten Wirksamkeiten von etablierten Therapien für HCC haben onkolytischen Viren als vielversprechende Alternative Therapeutika hervorgegangen. JX-594, vor kurzem Pexa-Vec umbenannt, ist ein Thymidinkinase-deleted Vacciniavektor, bewaffnet mit Granulozyten-macrophage - Kolonie-stimulierenden Faktor (GM-CSF), die Phase - II - Studie für HCC 7 abgeschlossen hat. In jüngerer Zeit hat ein rekombinantes vesikuläre Stomatitis-Virus-Vektor (VSV) humanes Interferon-beta Expression einer klinischen Phase-I-Studie für Sorafenib-refraktären HCC (NCT01628640) eingetragen. Als onkolytischen Viren bewegen näher Zulassung für die klinische Anwendung für HCC bei Patienten zu erhalten, wird die Notwendigkeit für eine effiziente Verwaltung Route Ziel multifokale Krankheit ist offensichtlich. Während die systemische Verabreichung durch ineffiziente Tumorübertragung weitgehend wirkungslos ist, intratumorale Anwendungen könnte die Wirksamkeit der Therapie auf das injizierte Tumor begrenzen, uninjectable mikroskopische Läsionen anfällig für Krankheitsprogression zu verlassen. Wir haben ein Verfahren zur Isolierung der Leberarterie bei Ratten etabliert onkolytischen Virus-Therapie in einer Art und Weise verabreichen locoregional orthotope HCC abzuzielen. Wir haben gezeigt, dass diese Art der Anwendung führt zu sicheren und effective Transduktion von multifokalen HCC Knötchen, was zu einer signifikanten Überlebensverlängerung bei immunkompetenten Ratten 8-10. Hier beschreiben wir das Verfahren des Zugreifens, Sezieren, und Einspritzen in die Leberarterie bei Ratten. Ein Schema des Verfahrens ist in Abbildung 1 dargestellt (vorher 9 veröffentlicht)

<table><tbody><tr><td>Veterinärschermaschine</td><td>Aesculap</td><td>GT415</td><td>Kleiner, kabelloser Trimmer, ideal zum Entfernen von Fell im Operationsbereich</td></tr><tr><td>Stereomikroskop</td><td>Zeiss</td><td>Stemi SV6</td><td></td></tr><tr><td>30 G Nadeln</td><td>Braun</td><td>4656300</td><td>30 G x &frac12; "</td></tr><tr><td>1 ml Spritzen</td><td>Braun</td><td>9161406V</td><td>Tuberkulinspritze</td></tr><tr><td>Einwegskalpell</td><td>Feder</td><td>2975#15</td><td>#15 Klinge&nbsp;</td></tr><tr><td>Standard-OP-Schere</td><td>Fine Science Tools</td><td>14001-13&nbsp;</td><td>Scharf/stumpf, zum Öffnen von Haut und Muskeln</td></tr><tr><td>Adson-Pinzette</td><td>Fine Science Tools</td><td>1101-12</td><td>Mit Zähnen, zum Greifen von Haut und Muskeln</td></tr><tr><td>Alm Retraktor</td><td>Fine Science Tools</td><td>17008-07</td><td>Mit stumpfen Zähnen, zum Aufspreizen der Bauchhöhle während der Operation</td></tr><tr><td>Mulltupfer</td><td>Lohmann & Rauscher</td><td>18504</td><td>7,5 cm x 7,5 cm, sollte vor Gebrauch autoklaviert werden</td></tr><tr><td>Applikatortupfer mit Wattespitze</td><td>Lohmann & Rauscher</td><td>11970</td><td>Steril</td></tr><tr><td>Foreceps mit feiner Spitze</td><td>Fine Science Tools</td><td>11063-07</td><td>0,4 mm, abgewinkelte Spitze, zum Präparieren der Leberarterie</td></tr><tr><td>Vannas Federschere</td><td>Fine Science Tools</td><td>91500-09</td><td>Für feinen Schnitt</td></tr><tr><td>Mikro-Nadelhalter</td><td>Fine Science Tools</td><td>12076-12</td><td>Für die Ligatur der Gastroduodenalarterie</td></tr><tr><td>Nadelhalter</td><td>Fine Science Tools</td><td>12005-15</td><td>Wolframkarbid-Backen</td></tr><tr><td>7-0 Prolen-Nahtmaterial</td><td>Ethicon</td><td>8648H</td><td>Polypropylen-Nahtmaterial mit gebogener Nadel, für die Ligatur der Gastroduodenalarterie</td></tr><tr><td>4-0 Vicryl-Nähte</td><td>Ethicon</td><td>V3040H</td><td>Mit aufgesetzter gebogener</td></tr><tr><td>Nadel Infrarot-Wärmelampe</td><td>Beurer</td><td>IL11</td><td>Zur postoperativen Aufrechterhaltung der Körpertemperatur</td></tr></tbody></table>

transarterial verwaltung von onkolytischen viren für lokoregionale von orthotopische hcc bei ratten

Transarterial Administration of Oncolytic Viruses for Locoregional Therapy of Orthotopic HCC in Rats

Hepatozelluläres Karzinom (HCC) ist eine Krankheit mit begrenzten Behandlungsmöglichkeiten und schlechter Prognose. In den letzten Jahren haben sich onkolytische Virotherapien als potenziell wirksame Instrumente zur Bekämpfung von Malignität erwiesen. Durch die einzigartige duale Blutversorgung in der Leber ist es möglich, Therapien lokal bei orthotopen Lebertumoren anzuwenden, die überwiegend durch arteriellen Blutfluss gespeist werden. Wir haben bereits gezeigt, dass die hepatische arterielle Verabreichung von onkolytischen Viren zu einer sicheren und effizienten Transduktionseffizienz von multifokalen HCC-Läsionen führt, was zu einer signifikanten Verlängerung des Überlebens bei immunkompetenten Ratten führt. Dieses Verfahren ahmt die Anwendung der transarteriellen Embolisation bei Patienten nach, die bei vielen HCC-Patienten zur Standard-Palliativversorgung gehört. Die Möglichkeit, Tumortherapien bei Ratten über die Leberarterie zu verabreichen, ermöglicht ein hochentwickeltes präklinisches Modell zur Bewertung neuartiger viraler Vektoren, die sich in der Entwicklung befinden. Hier beschreiben wir das detaillierte Protokoll für die Mikrodissektion der Leberarterie zur Infusion von onkolytischen Virusvektoren zur Behandlung von orthotopem HCC.

Mit Erfahrung, eine fast 100% Erfolgsrate (was bedeutet, dass die Arterie wurde erfolgreich präpariert und injiziert und das Tier überlebt Operation) erreicht werden. Allerdings ist der Gesundheitszustand der Ratte vor der Operation (Grad der Tumorlast, zugrunde liegenden Leberfunktion, etc.) wird offensichtlich eine Rolle für das Ergebnis des chirurgischen Eingriffs zu spielen. Nach der Operation können Ratten zu erwarten vorübergehende Gewichtsverlust zu erleben und eine leich...

Onkolytische Virotherapien befinden sich in der Entwicklung als neuartige Therapeutika zur Behandlung des hepatozellulären Karzinoms (HCC). In dieser Arbeit wird ein Verfahren zur lokoregionären Therapie des HCC über die hepatische arterielle Verabreichung des onkolytischen Virus beschrieben.

Transarterial Verwaltung von onkolytischen Viren für lokoregionale von Orthotopische HCC bei Ratten

Hepatocellular carcinoma (HCC) is a disease with limited treatment options and poor prognosis.  In recent years, oncolytic virotherapies have proven ...

Das übergeordnete Ziel dieses chirurgischen Eingriffs besteht darin, eine lokal begrenzte onkolytische Virus-Therapie über eine hepatische arterielle Applikation bei orthotopen Hepatozellulärkarzinomen oder HCC-Läsionen durchzuführen. Diese Methode kann helfen, zentrale Fragen im Bereich der onkolytischen Virotherapie zu beantworten, beispielsweise welche Wirksamkeit eine lokal begrenzt angewendete Therapie bei der Behandlung orthotoper HCC-Läsionen besitzt. Der wesentliche Vorteil dieser Technik liegt darin, dass sie die Applikation hoher Titer onkolytischer Viren an mehrere HCC-Läsionen ermöglicht.Eine Einschränkung der intratumoralen oder systemischen Applikation. Diese Technik ahmt die Anwendung einer transarteriellen Chemoembolisation nach. Der Standard der Versorgung für viele HCC-Patienten, der eine hervorragende Übertragung präklinischer Daten ermöglicht.Bevor Sie mit der Operation beginnen, tragen Sie die geeignete persönliche Schutzausrüstung und desinfizieren Sie den Operationsbereich und das Gerät mit 70 % Ethanol. Verdünnen Sie das Virus entsprechend seiner Toxizität und der Empfindlichkeit der verwendeten Rattenstamm auf die geeignete Konzentration. Füllen Sie dann Ein-Milliliter-Spritzen mit dem verdünnten Virus vor, und setzen Sie 30-Gauge-Nadeln auf die Spritzen auf, wobei Sie darauf achten, alle Blasen zu entfernen.Überprüfen Sie, ob die Ratte vollständig sediert ist, indem Sie auf einen Mangel an Reaktion auf einen Fußsohlen-Drucktest prüfen. Führen Sie mit einem kleinen, gekrümmten Skalpell einen kleinen, vertikalen Schnitt in die Haut entlang der Mittellinie durch und verlängern Sie den Einschnitt bis zum Processus xiphoideus. Schneiden Sie anschließend die Muskelschicht auf die gleiche Weise, wobei darauf zu achten ist, die Organe der Bauchhöhle nicht zu verletzen.Platzieren Sie einen Retraktor über dem Abdomen, um Muskel und Haut zu spreizen und den gesamten Bauchraum freizulegen. Befeuchten Sie anschließend zwei Gazetupfer mit einer Größe von 7,5 mal 7,5 Zentimetern mit physiologischer Kochsalzlösung und legen Sie einen Gazetupfer über den oberen Teil des chirurgischen Zugangs und einen über den unteren Teil. Um die Arteria hepatica zu isolieren, verwenden Sie zunächst zwei mit physiologischer Kochsalzlösung befeuchtete Wattestäbchen, um den Darm und das Caecum vorsichtig aus der Bauchhöhle auf den unteren Gazetupfer zu verlagern, und falten Sie den Gazetupfer über die Organe, um sie feucht zu halten.Heben und drehen Sie anschließend vorsichtig das linke Seitenleberlappen auf die obere Mullbinde und durchtrennen Sie mit einer kleinen Schere mit Federscharnier die faserige Membran auf der Unterseite des Lappens. Falten Sie die Mullbinde über den Lappen, um ihn an Ort und Stelle zu halten. Trennen Sie dann unter Verwendung eines Präparationsmikroskops und feiner Pinzette die dünne Membran, die den inneren Caudatlappen umgibt, und klappen Sie den Lappen auf die obere Mullbinde um.Legen Sie das innere kaudate Lappen unter die Mullfalte zusammen mit dem linken Seitenlappen, und dissezieren Sie anschließend den hinteren kaudaten Lappen auf die gleiche Weise. Nachdem Sie den hinteren kaudaten Lappen unter die Mullbinde gelegt haben, lokalisieren Sie die Arteria hepatica communis anhand ihrer starken Pulsation. Verfolgen Sie die Arterie nach anatomisch rechts und entfernen Sie mit feiner Pinzette das dicke, membranöse Gewebe, das die Arteria gastroduodenalis und die Arteria hepatica propria verdeckt.Stoppen Sie jede Blutung mit einem Wattestäbchen. Verwenden Sie dann zwei feine atraumatische Pinzetten, um die gemeinsame hepatische Gastroduodenalarterie und die A. hepatica propria vorsichtig von den umgebenden Membranen zu dissezieren. Um die Leberarterie zu injizieren, führen Sie zunächst einen 7-0-Prolen-Faden unter die Gastroduodenalarterie, und verwenden Sie einen Mikronadelhalter, um am distalen Ende der Arterie knapp oberhalb der Bifurkation eine dauerhafte Ligatur anzulegen, wobei jeweils etwa zwei Zoll Fadenmaterial an jedem Ende übrig bleiben. Als Nächstes setzen Sie eine kleine Klemme an die A. hepatica communis, um den Blutfluss vorübergehend zu unterbinden. Innerhalb von fünf Minuten nach Setzen der Klemme erhöhen Sie die Vergrößerung, bis die A. gastroduodenalis scharf im Fokus steht und groß genug erscheint, um die Nadel präzise einführen zu können. Danach führen Sie die Injektionsspritze in das Lumen der A. gastroduodenalis ein und drücken den Kolben langsam nieder, um die Transduktionseffizienz zu maximieren.Nachdem das gesamte Injektionsvolumen verabreicht wurde, ziehen Sie die Nadel langsam aus der Arterie zurück und führen einen zweiten 7-0-Prolen-Faden unterhalb der Arteria gastroduodenalis ein. Legen Sie eine zweite dauerhafte Ligatur oberhalb der Injektionsstelle an und entfernen Sie die Klemme von der Arteria hepatica communis. Überprüfen Sie, ob der Blutfluss durch die Arteria hepatica propria in Richtung Leber wiederhergestellt ist, und schneiden Sie die losen Enden der Ligaturen ab.Stellen Sie sicher, dass keine innere Blutung vorliegt. Bringen Sie anschließend die ausgelagerten Gewebe in die Bauchhöhle zurück. Nähen Sie mit 4-0 Vicryl und einer gebogenen Nadel Muskel und Haut in separaten Schichten mit fortlaufenden Nähten, die etwa einen Millimeter voneinander entfernt liegen.Überwachen Sie dann das Tier, bis es sich vollständig erholt hat. Die Kinetik der intratumoralen Virusvermehrung ist virusabhängig. Beispielsweise erreicht die Vermehrung des Vesikulären Stomatitis-Virus innerhalb eines Tages nach der Injektion ihren Höhepunkt.Bei zahlreichen viralen Herden erfolgt eine ausschließliche Vermehrung innerhalb der hepatozellulären Karzinomknoten der injizierten Tiere. Im Gegensatz dazu weist das Newcastle-Krankheits-Virus eine verlängerte Replikationskinetik auf, wobei die höchsten Virustiter am fünften Tag nach der Injektion erreicht werden. Aufgrund der inhärenten Tumorspezifität der Viren wird der Erreger rasch aus dem normalen umgebenden Lebergewebe eliminiert.Außerdem zeigt die morphometrische Analyse zufällig ausgewählter, mit vesikulärem Stomatitis-Virus-Vektor behandelte Tumorknoten, dass die Transduktionseffizienz der Tumoren nicht mit der Tumorgröße korreliert. Die transhepatische arterielle Applikation eines abbaubaren Stärkemikrosphärs, gleichzeitig mit der viralen Lösung, führt zu einer nahezu vollständigen Embolisation der Tumorknoten, während gleichzeitig eine minimale Wirkung auf die Durchblutung des normalen Lebergewebes ausgeübt wird. Wie weiterhin durch diese dynamischen kontrastverstärkten magnetresonanztomographischen Aufnahmen unter Verwendung eines Gadolinium-Kontrastmittels gezeigt wird.Wenn man die Technik einmal beherrscht, kann sie bei korrekter Durchführung innerhalb von 20 Minuten abgeschlossen werden. Bei der Durchführung dieses Verfahrens ist es wichtig, daran zu denken, alles vor der Verabreichung der Anästhesie vorzubereiten, um die für den Eingriff benötigte Zeit zu minimieren. Nachdem Sie sich dieses Video angesehen haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie man die Arteria hepatica disseziert und für die Injektion onkolytischer Virenlösungen zur lokoregionalen Therapie des HCC vorbereitet.Vergessen Sie nicht, dass die Arbeit mit Viren äußerst gefährlich sein kann und dass stets Vorsichtsmaßnahmen wie das Tragen von persönlicher Schutzausrüstung sowie die ordnungsgemäße Desinfektion des Arbeitsbereichs und der Geräte getroffen werden sollten, während dieses Verfahren durchgeführt wird.

transarterial-administration-oncolytic-viruses-for-locoregional

Research

Forschung

JoVE Journal

Medicine

Medizin

In diesem Artikel beschreiben wir die Identifikation des Adeno-assoziierten Virus Serotyp 3 (AAV3) als die effizienteste Vektor für die Ausrichtung der menschlichen Leber Krebszellen.

High-Efficiency Transduktion von Liver Cancer Cells von rekombinanten Adeno-assoziierten Virus Serotyp 3 Vektoren

Wir präsentieren einen einfach zu etablieren Revision der klassischen Zwei-Manschette Technik zur orthotopen Lebertransplantation in der Ratte.

Lebertransplantation bei der Ratte

Das Video zeigt die lokoregionäre Verabreichung von onkolytischen Viren durch hepatische arterielle Injektion als therapeutischen Ansatz für hepatozelluläres Karzinom. Diese Viren replizieren sich selektiv in Tumorzellen, induzieren die Zelllyse und setzen Tumorzell-assoziierte Antigene frei. Dieser Prozess löst den immunogenen Zelltod aus und induziert eine Anti-Tumor-Antwort.

Gezielte Behandlung von Lebertumoren mit onkolytischen Viren über die Leberarterie

Hilfslebertransplantation bietet eine temporäre Unterstützung in akuten Leberversagen, bis die Regeneration der Leberversagen. Die heterotope Hilfslebertransplantation (HALT) mit Pfortader Arterialisation (PVA) macht ausreichende Leberfunktion. Wir entwickelten eine analoge Technik in der Ratte, um den Einfluss der Pfortader Arterialisation auf die Morphologie und Funktion des Transplantats zu untersuchen.

Heterotope Hilfs Ratte Leber-Transplantation mit strömungs geregelt Pfortader Arterialisation in akutes Leberversagen

Die Rekonstruktion der Suprahepatic Vena Cava (SHVC) bleibt ein schwieriger Schritt in der Ratte orthotopen Leber Transplantation. In diesem Artikel zeigen wir Schritt für Schritt-Protokoll für den Wiederaufbau der SHVC bei Ratten mit einer neuartigen magnetischen Anastomose-Technik.

Einem Rattenmodell der orthotopen Lebertransplantation mit einer neuartigen magnetischen Anastomose-Technik für Suprahepatic Vena Cava Wiederaufbau

Das Ziel dieses Artikels ist eine Grundierung für die Entwicklung und Nutzung des Modells VX2 Karzinom Kaninchen für Leberkrebs zu.

Entwicklung und angiographischen Umgang mit dem Kaninchen VX2 Modell für Leberkrebs

Hier beschreiben wir die Entwicklung eines klinisch relevanten murinen Modells von Leberkrebs, das die typischen Immunmerkmale von hepatozellulärem Krebs (HCC) rekapituliert.

Ein onkogenes Hepatozyten-induziertes orthotopisches Mausmodell von hepatozellulärem Krebs, der bei der Einstellung von Leberentzündungen und Fibrose entsteht

Portalveneninjektion von Darmkrebs (CRC) Organoiden erzeugt stromareiche Lebermetastasen. Dieses Mausmodell der CRC-Lebermetastasierung stellt ein nützliches Werkzeug dar, um Tumor-Stroma-Interaktionen zu untersuchen und neuartige Stroma-gerichtete Therapeutika wie Adeno-assoziierte virusvermittelte Gentherapien zu entwickeln.

Portalveneninjektion von Darmkrebs-Organoiden zur Untersuchung der Lebermetastasierung Stroma

Hier stellen wir ein Protokoll zur Erstellung orthotoper hepatozellulärer Karzinom-Xenotransplantate mit und ohne Leberarterienligatur vor und führen eine nicht-invasive Positronen-Emissions-Tomographie (PET)-Bildgebung der Tumorhypoxie unter Verwendung von [18 F]Fluoromisonidazol ([18 F]FMISO) und [18 F]Fluordesoxyglucose ([18F]FDG) durch.

Nicht-invasive PET/MR-Bildgebung in einem orthotopen Mausmodell des hepatozellulären Karzinoms

Onkolytischen Viren sind für Krebstherapeutika vielversprechend. Die Fähigkeit, die infectability von Live-Gewebeproben von Patienten vor der Behandlung erhalten zu ermitteln ist ein einzigartiger Vorteil dieses therapeutischen Ansatzes. Dieses Protokoll beschreibt, wie das Gewebe für die...

Ex-vivo-Infektion von lebendem Gewebe mit onkolytischen Viren

Erfahren Sie die transarterielle Verabreichung onkolytischer Viren zur lokoregionalen Therapie von hepatozellulärem Karzinom bei Ratten. Diese Methode ermöglicht die gezielte Zufuhr hoher Virustiter zu multiplen Tumorläsionen.

Transarterial Verwaltung von onkolytischen Viren für lokoregionale von Orthotopische HCC bei Ratten

Weitere Videos entdecken