Name: Herstellung von Ratten Oligodendrozyten Vorläuferkulturen und Quantifizierung von Oligodendrogenesis Mit Doppel-Infrarot-Fluoreszenz-Scanning (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-02-17T15:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 11 s
Description: Lernen Sie die Isolierung und Kultivierung von Ratten-Oligodendrozyten-Vorläuferzellen sowie die Quantifizierung der Oligodendrogenese. Diese Methode ermöglicht zuverlässige Untersuchungen zur Myelinisierung.

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<li>Mei, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Micropillar+arrays+as+a+high-throughput+screening+platform+for+therapeutics+in+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Micropillar arrays as a high-throughput screening platform for therapeutics in multiple sclerosis.</a> Nat Med. 20 (8), 954-960 (2014).</li>
<li>Deshmukh, V. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+regenerative+approach+to+the+treatment+of+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A regenerative approach to the treatment of multiple sclerosis.</a> Nature. 502 (7471), 327-332 (2013).</li>
<li>Najm, F. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug-based+modulation+of+endogenous+stem+cells+promotes+functional+remyelination+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Drug-based modulation of endogenous stem cells promotes functional remyelination in vivo.</a> Nature. 522 (7555), 216-220 (2015).</li>
<li>Zhang, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defining+glial+cells+during+CNS+development%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Defining glial cells during CNS development.</a> Nat Rev Neurosci. 2 (11), 840-843 (2001).</li>
<li>O'Meara, R. W., Ryan, S. D., Colognato, H., Kothary, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Derivation+of+enriched+oligodendrocyte+cultures+and+oligodendrocyte%2Fneuron+myelinating+co-cultures+from+post-natal+murine+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Derivation of enriched oligodendrocyte cultures and oligodendrocyte/neuron myelinating co-cultures from post-natal murine tissues.</a> J Vis Exp. (54), (2011).</li>
<li>Dugas, J. C., Emery, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Purification+of+oligodendrocyte+precursor+cells+from+rat+cortices+by+immunopanning%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Protoc%22%5BJournal%5D)">Purification of oligodendrocyte precursor cells from rat cortices by immunopanning.</a> Cold Spring Harb Protoc. 2013 (8), 745-758 (2013).</li>
<li>Fletcher, J. M., Lalor, S. J., Sweeney, C. M., Tubridy, N., Mills, K. H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T+cells+in+multiple+sclerosis+and+experimental+autoimmune+encephalomyelitis%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Exp+Immunol%22%5BJournal%5D)">T cells in multiple sclerosis and experimental autoimmune encephalomyelitis.</a> Clin Exp Immunol. 162 (1), 1-11 (2010).</li>
</ol>

Die Autoren haben nichts zu offenbaren.

Das Protokoll hier vorgestellte beschreibt ein schnelles und zuverlässiges Verfahren zur Isolierung von Ratten-OPCs und in vitro oligodendrogenesis in Reaktion auf experimentelle Faktoren zu quantifizieren. Mit positiven Selektion, hohe Ausbeuten an lebensfähig und rein OPCs werden direkt zu Versuchszwecken verwendet. Dieses Verfahren vereinfacht die Isolierung, Kultivierung und Differenzierung Schritte in 1-wöchige Zeitrahmen und fixierten Zellen können bequem bei 4 ° C über mehrere Wochen ohne Verlust an Assa...

Efficient Nervenleitung in der Säugetiere Zentralnervensystem (ZNS) erfordert Myelinisierung von Axonen durch Oligodendrozyten. Während der Entwicklung entstehen Oligodendrozyten aus einem Pool von Oligodendrozyten-Progenitorzellen (OPC), die gedacht werden, von den ventrikulären Zonen der Entwicklung des Vorderhirns und Neuralrohr 1 zu migrieren. Nach der Migration OPCs zu reifen unterscheiden, myelinisierenden Oligodendrozyten, die nicht nur effizient Impulsausbreitung zu erleichtern, sondern auch Axone mit trophischen Unterstützung 2 liefern. Die adulten ZNS unterhält eine reichliche Population von OPCs, die während der grauen und weißen Substanz dispergiert sind, die ungefähr 5-8% aller Zellen 3. Nach einer demyelinisierenden Beleidigung, wandern OPCs zu der Stelle der Verletzung, vermehren und differenzieren verlorenen oder beschädigten Myelinscheiden an exponierten Axone zu ersetzen. Doch in einigen Krankheit / Verletzung Einstellungen wird dieses Verfahren ineffizient zu sein oder ganz ausfallen 4 gefunden. Währendchronische Demyelinisierung wird gedacht, um die Krankheitslast, effiziente oligodendrogenesis und Remyelinisierung kostenlos in fünf Symptome zu lindern. Es ist daher von Interesse gewesen OPCs in vitro zu studieren die Wirkung der experimentellen Faktoren auf oligodendrogenesis zu bestimmen. Einblick in die verschiedenen Phasen der Oligodendrozyten-Differenzierung wurde durch die Identifizierung von Stufe spezifische Zellmarker ermöglicht worden. Selbst erneuernden frühen Vorläuferzellen durch ihre Expression von Blutplättchen abgeleiteter Wachstumsfaktor-Rezeptor alpha (PDGFRα), neuronalen / Glia-Antigen 2 (NG2) und A2B5 6 definiert sind - 8. Als OPC ihre Differenzierungsprogramm und ziehen sich aus dem Zellzyklus einleiten, herunterregulieren sie Expression dieser Marker und beginnen Proteine ​​zu exprimieren bezeichnend für Oligodendrozyten mit zyklisch-Nukleotid-3&#39;-Phosphodiesterase (CNPase) und O4 premyelinating. Schließlich deren Differenzierung in reiferen oligodendrocytes wird durch die Expression von Myelin-assoziierten Proteine, einschließlich Myelin-assoziiertes Glykoprotein (MAG), Proteolipidprotein (PLP) und basisches Myelinprotein (MBP) aus. MBP ist ein intrazelluläres peripheren Membranprotein und ein Hauptbestandteil der Myelinscheide. Mäuse entwickeln fehlt MBP einen schweren Phänotyp, in dem CNS Myelinisierung deutlich zu Zittern verringert führt, ist, Krämpfe und frühen Tod 9,10. Diese wichtige Rolle der MBP in Myelinisierung hat zu seiner Verwendung als ein Marker für Oligodendrozyten Differenzierung führte sowohl in vitro als auch in vivo 11. Quantifizierung von MBP kann mit verschiedenen Methoden erreicht werden. RT-PCR und Western Blot-Analyse ermöglichen eine Quantifizierung der MBP-Niveaus unter verschiedenen Behandlungsschemata. Immunzytochemie ist eine gemeinsame qualitative Ansatz, der auch quantitativ sein können, wenn die Kamera-basierte Mikroskopie Ansätze verwendet werden. Obwohl diese Systeme sind zuverlässig und grundlegenddas Studium der Oligodendrozyten-Differenzierung, sie haben jeweils ihre eigenen Nachteile, die ihre Verwendung in Arzneimittel-Screening begrenzen. Erstens, die Menge der primären OPCs, die für RT-PCR und Western Blot-Analyse erforderlich sind, reduziert die Anzahl der Variablen, die gleichzeitig untersucht werden können. Während die Zelle Voraussetzung für Immunzytochemie viel niedriger ist, müssen erhebliche Zeit zu jedem Experiment gewidmet werden, wenn die Quantifizierung ist das Ziel. Zahlreiche Bilder müssen experimentelle Analyse zu erleichtern eingefangen und dann quantifiziert werden. Diese Einschränkungen werden wichtige Hindernisse für Studien zu berücksichtigen, die einen hohen Durchsatz Beurteilung erfordern. Hier beschreiben wir eine Methode, die grundlegenden Aspekte von nutzt sowohl der Immunzytochemie und Western Blot Methoden zur Quantifizierung Myelin, während erheblich sowohl die Anzahl von Zellen erforderlich ist und die Zeit zu reduzieren quantitative Analyse durchzuführen.

<table><tbody><tr><td>Dissection Materials</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>PBS ohne Ca2+ und Mg2+</td><td>Mediatech</td><td>21-040-CV</td><td>1x</td></tr><tr><td>10 cm Petrischalen aus Polystyrol</td><td>Fisherbrand</td><td>0857512</td><td></td></tr><tr><td>Light Dissektionsmikroskop</td><td></td><td>Motic SM2-168</td><td></td></tr><tr><td>Dissoziation Materialien</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tube Rotator</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-090-753</td><td>Dissoziationsrohr Rotator</td></tr><tr><td>Neuralgewebe Dissoziationskit (P)</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-092-628</td><td>Enzymatisches Dissoziationskit</td></tr><tr><td>PBS mit Ca2+ und Mg2+</td><td>Corning</td><td>20-030-CV</td><td>1x</td></tr><tr><td>40 &mu; m Zellsieb</td><td>Corning</td><td>352340</td><td></td></tr><tr><td>A2B5 Säulenreinigung&nbsp; </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Anti-A2B5 Mikrokügelchen</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-097-864</td><td>Bead Bound A2B5 Antikörper</td></tr><tr><td>LS Säulen</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-401</td><td>Magnetische Selektionssäulen</td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Corning</td><td>46-034-Cl</td><td>2 mM</td></tr><tr><td>PBS mit Ca2+ und Mg2+</td><td>Corning</td><td>20-030-CV</td><td>1x</td></tr><tr><td>Rinderserumalbumin&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9647</td><td>0,50 %</td></tr><tr><td><stark>Kulturmaterialien</stark></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>PDGF-AA</td><td>PeproTech Inc</td><td>100-13A</td><td>20 ng/ml</td></tr><tr><td>Dimethylsulfoxid</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D2650</td><td>Hybri-Max 100 ml</td></tr><tr><td>Trijodthyronin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T6397</td><td>45 nM</td></tr><tr><td>Clemastinfumaratsalz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>SML0445-100MG</td><td>1 &mu; M</td></tr><tr><td>Quetiapin Hemifumarat Salz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Q3638-10MG</td><td>1 &mu; M</td></tr><tr><td>N-Acetylcystein</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9165 5</td><td>&mu; g/ml</td></tr><tr><td>Progesteron</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P8783</td><td>60 ng/ml</td></tr><tr><td>Poly-L-Lysin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P1524</td><td>10 &mu; g/ml</td></tr><tr><td>Putrecin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P7505 16</td><td>&mu; g/ml</td></tr><tr><td>Natriumselenit</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S5261</td><td>40 ng/ml</td></tr><tr><td>Hydrocortison</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H0135</td><td>50 ng/ml</td></tr><tr><td>d-Biotin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B4639</td><td>10 ng/ml</td></tr><tr><td>Insulin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I6634 5</td><td>&mu; g/ml</td></tr><tr><td>Apo-Transferrin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T1147</td><td>100 &mu; g/ml</td></tr><tr><td>Rinderserumalbumin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A4161</td><td>100 &mu; g/ml</td></tr><tr><td>Spurenelemente B</td><td>Corning</td><td>25-022-Cl</td><td>1x&nbsp;</td></tr><tr><td>B-27 Ergänzung</td><td>Life Technologies</td><td>17504044</td><td>1x&nbsp;</td></tr><tr><td>Penicillin/Streptomycin</td><td>Life Technologies</td><td>15140122</td><td>1x&nbsp;</td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Life Technologies</td><td>11995-065</td><td>1x&nbsp;</td></tr><tr><td>24-Well-Schwarze Visiplate mit Deckel</td><td>Perkin Elmer</td><td>1450-605</td><td>Gewebekulturqualität</td></tr><tr><td><stark>Immunzytochemie und Quantifizierung</stark></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>PFA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>100-13A</td><td>4%</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>78787</td><td>0,10%</td></tr><tr><td>Normales Ziegenserum</td><td>Jackson Immuno Research</td><td>005-000-121</td><td>5 %</td></tr><tr><td>monoklonales Anti-MBP für Maus</td><td>Biolegend</td><td>SMI-99P</td><td>1:1.000 Verdünnung</td></tr><tr><td>Kaninchen polyklonales Anti-Aktin</td><td>Santa Cruz Biotecnology</td><td>SC-7210</td><td>1:200 Verdünnung</td></tr><tr><td>Kaninchen polyklonal anti-Olig2</td><td>Millipore</td><td>AB9610</td><td>1:1.000 Verdünnung</td></tr><tr><td>Ziege Anti-Maus 680RD</td><td>Licor</td><td>926-68070</td><td>1:500 Verdünnung</td></tr><tr><td>Ziege Anti-Kaninchen 800CW</td><td>Licor</td><td>926-32211</td><td>1:500 Verdünnung</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 594 Ziege Anti-Maus</td><td>Life Technologies</td><td>A11032</td><td>1:1.000 Verdünnung</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 Ziege Anti-Kaninchen</td><td>Life Technologies</td><td>A11008</td><td>1:1.000 Verdünnung</td></tr><tr><td>Prolong Gold Antifading mit DAPI</td><td>Life Technologies</td><td>P36931</td><td></td></tr><tr><td>DPBS mit Ca2+ und Mg2+</td><td>Corning</td><td>21-030-CV</td><td></td></tr><tr><td>Licor Odyssey Clx Infared Imaging System</td><td>Licor</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

herstellung von ratten oligodendrozyten vorläuferkulturen und quantifizierung von oligodendrogenesis mit doppel-infrarot-fluoreszenz-scanning

Preparation of Rat Oligodendrocyte Progenitor Cultures and Quantification of Oligodendrogenesis Using Dual-infrared Fluorescence Scanning

Effiziente Oligodendrogenese ist das therapeutische Ziel einer Reihe von Forschungsbereichen, einschließlich Rückenmarksverletzungen, neonataler Hypoxie und demyelinisierender Krankheiten wie Multiple Sklerose und transversale Myelitis. Die Myelinisierung ist nicht nur erforderlich, um eine schnelle Impulsausbreitung innerhalb des Zentralnervensystems zu ermöglichen, sondern auch, um die darunter liegenden Axone trophisch zu unterstützen. Oligodendrozyten-Vorläuferzellen (OPCs) können in vitro untersucht werden, um Faktoren zu identifizieren, die die Differenzierung von Oligodendrozyten fördern oder hemmen können. Bisher waren viele der verfügbaren Methoden zur Bewertung dieses Prozesses entweder für eine große Anzahl von Zellen erforderlich, was die Anzahl der gleichzeitig zu untersuchenden Bedingungen einschränkte, oder für arbeitsintensive Methoden der Quantifizierung. Darin beschreiben wir ein Protokoll zur Isolierung einer großen Anzahl hochreiner OPCs zusammen mit einer schnellen und zuverlässigen Methode zur Bestimmung der Oligodendrogenese aus mehreren Bedingungen gleichzeitig. OPCs werden aus P5-P7 neonatalen Rattenkortiken isoliert und vor der Differenzierung drei Tage lang in vitro gezüchtet. Vier Tage nach der Differenzierung wird die Oligodendrogenese mit einem Dual-Infrarot-Fluoreszenz-Scanning-Assay bewertet, um die Expression des Myelinproteins zu bestimmen.

A2B5-positiven OPCs werden durch positiven Zellselektion isoliert eine magnetische Trennsäule System. Vor dem Isolierungsverfahren wird das gesamte Gehirn von Rattenjungen entfernt, die zwischen P5 und P7 sind. Sobald das gesamte Gehirn erfolgreich vom Schädel gelöst wird, werden die Riechkolben und Kleinhirn unter Verwendung von feinen chirurgischen Pinzette (1A) entfernt. Um sich durch sorgfältige Dissektion (1B) ausgeschnitten Gehirnrindengewebe der H...

Oligodendrozyten sind die myelinisierenden Zellen des Zentralnervensystems. Dieses Protokoll beschreibt eine Methode zur Isolierung und Kultivierung ihrer Vorläufer, der Oligodendrozyten-Vorläuferzellen, aus der Rattenrinde sowie eine schnelle und zuverlässige quantitative Methode zur Bewertung der Oligodendrogenese in vitro als Reaktion auf experimentelle Faktoren.

Herstellung von Ratten Oligodendrozyten Vorläuferkulturen und Quantifizierung von Oligodendrogenesis Mit Doppel-Infrarot-Fluoreszenz-Scanning

Efficient oligodendrogenesis is the therapeutic goal of a number of areas of research including spinal cord injury, neonatal hypoxia, and demyelinating ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens besteht darin, Vorläuferzellen oligodendrozytärer Zellen aus Ratten zu isolieren und zu kultivieren sowie die Oligodendrozytogenese als Reaktion auf experimentelle Faktoren zu quantifizieren. Eine effiziente Oligodendrozytogenese ist das therapeutische Ziel in zahlreichen Forschungsbereichen, darunter Rückenmarksverletzungen, neonatale Hypoxie und demyelinisierende Erkrankungen wie die transverse Myelitis und Multiple Sklerose. Der Hauptvorteil dieser Technik liegt darin, dass sie ein Protokoll zur Isolierung großer Zahlen von OPCs mit einer schnellen und zuverlässigen Methode kombiniert, um die Oligodendrozytogenese unter mehreren experimentellen Bedingungen gleichzeitig zu bestimmen.Um dieses Verfahren zu beginnen, sterilisieren Sie alle Dissektionsgeräte mit einem erhitzten Perlen-Sterilisator. Geben Sie anschließend 15 bis 20 Milliliter PBS in ein 50-Milliliter-Konischgefäß. Stellen Sie das Konischgefäß auf Eis und verwenden Sie es, um das zerkleinerte kortikale Gewebe während der Dissektion aufzubewahren.Fügen Sie anschließend kaltes PBS einer 10 cm großen Petrischale hinzu, die für die Dissektion unter dem Lichtmikroskop verwendet wird

preparation-rat-oligodendrocyte-progenitor-cultures-quantification

Research

Forschung

JoVE Journal

Developmental Biology

Entwicklungsbiologie

Dieser Artikel beschreibt Methoden zur Ableitung von angereicherten Populationen von murinen Oligodendrozyten-Vorläuferzellen (OPC) in primären Kultur, die, um zu reifen Oligodendrozyten (OLS) produzieren differenzieren. Darüber hinaus beschreibt dieser Bericht Techniken zur Herstellung murine myelinisierenden Co-Kulturen durch Impfen Maus OPCs auf einen Neuriten Bett Maus Spinalganglien Neuronen (DRGNs).

Ableitung von Enriched Oligodendrozyten Kulturen und Oligodendrozyten / Neuron myelinisierenden Co-Kulturen von Post-Natal Mausgeweben

Primary, vermehren humanen fötalen brain-derived, multipotente...

Progenitor-abgeleiteten Oligodendrozyten Culture System von Human Fetal Gehirn

Dieses Video zeigt das Verfahren, retinale Ganglienneuronen (RGNs) aus der Netzhaut einer Ratte zu isolieren und sie mit olfaktorischen Encascaping-Gliazellen (OEG) zu kokulturieren. Diese Methode ermöglicht es, das neuroregenerative Potenzial von OEGs nach neuronalen Verletzungen zu untersuchen.

Kokulturierung von retinalen Ganglienneuronen mit olfaktorischen Encaping-Gliazellen

Das Video demonstriert ein Protokoll zur Differenzierung von Oligodendrozyten-Vorläuferzellen (OPCs) in Oligodendrozyten und zur Induktion der Myelinisierung in einer Co-Kultur mit Neuronen des dorsalen Wurzelganglion (DRG). Die OPCs werden mit lentiviralen Vektoren transduziert, die für ein Signalprotein kodieren, das die Myelinisierung reguliert. Die transduzierten OPCs werden mit DRG-Neuronen co-kultiviert, um die Differenzierung in Oligodendrozyten und die Signalprotein-induzierte...

Ein in vitro Transduktions-induzierter Myelinisierungsassay für Oligodendrozyten-Vorläuferzellen

Quelle: Schott, J. T., et al. Herstellung von Oligodendrozyten-Vorläuferkulturen der Ratte und Quantifizierung der Oligodendrogenese mittels Dual-Infrarot-Fluoreszenz-Scanning. J. Vis. Exp. (2016).  Dieses Video zeigt die Verwendung von Dual-Fluoreszenz-Bildgebung zur Bewertung der Differenzierung von Oligodendrozyten aus Vorläuferzellen (OPCs), die aus dem Gehirn eines Rattenwelpen isoliert wurden. Der Prozess umfasst die Fixierung der Zellen, die Markierung spezifischer Marker mit primären...

Duale Fluoreszenzbildgebung zur Identifizierung differenzierter Oligodendrozyten

Quelle: Portela-Lomba, M., et. al. Kokultur von axotomisierten retinalen Ganglienneuronen der Ratte mit olfaktorischer Enclosing-Glia, als In-vitro-Modell der axonalen Regeneration bei Erwachsenen. J. Vis. exp. (2020). Dieses Video zeigt die Bildgebung und Quantifizierung der axonalen Regeneration in axotomisierten retinalen Ganglienneuronen (RGNs) der Ratte, die mit immortalisierten menschlichen olfaktorischen Gliazellen kokultiviert wurden. RGNs sind immunmarkiert, mit roten Somas und grünen...

Bildgebung und Quantifizierung der axonalen Regeneration in axotomisierten retinalen Ganglienneuronen von Ratten

Wir beschreiben die Immunomagnetic Isolierung der primäre Maustaste Oligodendrozyten, ermöglicht die schnelle und spezielle Isolierung der Zellen für in-vitro- Kultur.

Schnelle und spezifische Immunomagnetic Isolierung der Maus primären Oligodendrozyten

Hier stellen wir ein Protokoll vor, das nahezu infrarote Farbstoffe in Verbindung mit Immunhistochemie und hochauflösendem Scannen verwendet, um Proteine in Hirnregionen zu untersuchen.

Einsatz von Infrarot-Fluoreszenz und hochauflösendem Scannen zur Messung des Protein-Expression im Rodentrains

Hierin zeigen wir eine effiziente Methode zur Reinigung von Oligodendrozyten und zur Herstellung von Oligodendrozyten-konditionierten Medien, die für Kokulturexperimente verwendet werden können.

Generation von Oligodendrozyten und Oligodendrozyten-Konditionierten Mediums für Co-Kultur-Experimente

Wir präsentieren ein In-vitro-Modell zur Beurteilung der olfaktorischen Ensheathing Glia (OEG) neuroregenerativen Kapazität, nach neuronalen Verletzungen. Es basiert auf einer Kokultur von axotomisierten adulten retinalen Ganglion neuronen (RGN) auf OEG-Monolayer und anschließende Studie der axonalen Regeneration, durch die Analyse von RGN axonalen und somatodendritischen Markern.

Cokultur von Axotomized Rat Retinal Ganglion Neurons mit olfactory Ensheathing Glia, als In-Vitro-Modell der erwachsenen axonalen Regeneration

Eine Methode zur Isolierung von neuralen Stammzellen und Oligodendrozyten-Vorläuferzellen aus dem Gehirn lebender Ratten wird hier experimentell detailliert vorgestellt. Es ermöglicht die mehrfache Entnahme dieser Zellen von denselben Tieren, ohne ihr Wohlbefinden zu beeinträchtigen.

Die "Brain Milking"-Methode zur Isolierung von neuralen Stammzellen und Oligodendrozyten-Vorläuferzellen aus lebenden Ratten

Lernen Sie die Isolierung und Kultivierung von Ratten-Oligodendrozyten-Vorläuferzellen sowie die Quantifizierung der Oligodendrogenese. Diese Methode ermöglicht zuverlässige Untersuchungen zur Myelinisierung.

Herstellung von Ratten Oligodendrozyten Vorläuferkulturen und Quantifizierung von Oligodendrogenesis Mit Doppel-Infrarot-Fluoreszenz-Scanning (Video) | JoVE Journal

Herstellung von Ratten Oligodendrozyten Vorläuferkulturen und Quantifizierung von Oligodendrogenesis Mit Doppel-Infrarot-Fluoreszenz-Scanning

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