Name: Ein verbessertes Verfahren zur schnellen Intubation der Luftröhre in Mice (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-02-22T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 46 s
Description: Erfahren Sie eine schnelle, zuverlässige Intubationsmethode zur Reagenzienverabreichung in die Lunge von Mäusen. Diese Technik minimiert Gewebeschäden, benötigt keine Spezialausrüstung und ermöglicht kurze Erholungszeiten für Lungenforschung.

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Die Autoren danken Brian Johnson von der Histologie und Imaging-Core an der Universität von Washington für die Hilfe bei der Trichrom-Färbung und Analyse. Diese Arbeit wurde vom NIH Zuschüsse HL098067 und HL089455 unterstützt.

Die Institutional Animal Care und Verwenden Komitees (IACUC) an der University of Washington und Cedars-Sinai Medical Center haben das Tier Arbeit notwendig für diese Studien zugelassen. 1. Vorbereitung <ol><li> Sterilisieren sowohl dem stumpfen Ende einer Pinzette und den Niederhalter über Autoklaven. </li><li> Mit einem biologischen Sicherheitsschrank, bereiten eine Arbeits Lager von BLM in PBS aus dem gefriergetrocknetes Pulver. Beschallen die Lösung für 10 min bei 35 kHz auch sicherzustellen Mischen. Hinweis: Ein Gesamtvolumen von 30 bis 45 &amp; mgr; l wird empfohlen Pipettieren Variation am unteren Ende zu verhindern, und Erstickung mit größeren Volumina. </li><li> Bereiten einer sauberen Arbeitsbereich, der sich etwa 1 m 2 für das Verfahren umfasst, sowie vorgesehenen Stellen für Käfige vor und nach dem Eingriff. </li><li> Befestigen Sie die Basis des Verfahrens Bord der Bank unmittelbar vor dem Forscher durch Verlegung 2 oder 3 Streifen von Labor Band über der Basis und underlying Bank. Siehe Abbildung 1 für weitere Angaben auf ein Brett zu schaffen. </li><li> Binden Sie eine Einzellänge von Größe 4,0 Faden zwischen den beiden Stellschrauben des Verfahrens Bord. </li><li> Generieren Sie einen provisorischen Spirometer durch Entfernen und Verwerfen des Kolbens von drei 1 ml Spritzen und Ablegen 60 ul PBS in der Spitze jedes Fass eine luftdichte Abdichtung zu bilden. Sichern Sie die Nabe des Katheters lose an einer der Spritzen und legen Sie es auf der einen Seite der Platine. </li><li> Saugen Sie 300 ul von Luft in einer 1-ml-Spritze und legen Sie es auf der einen Seite der Platine. </li><li> Schneiden Sie ein zusätzliches Stück Band ca. 6 cm in der Länge und zur Seite legen. Diese werden verwendet, um das Tier zu dem Brett in Schritt 2.4 zu sichern. </li><li> Stellen Sie eine Isofluran Kammer auf. Bringen O 2, Isofluran und Vakuum an die entsprechenden Anschlüsse sowohl auf der Belichtungskammer und der Frei Vakuum. Alternativ verwalten Betäubung in eine Isofluran-kompatibel biologischenSicherheitswerkbank. </li></ol> 2. Intubation <ol><li> Betäuben die Maus mit Isofluran in der Kammer, bis er das Bewusstsein verliert und die Atmung verlangsamt zu einer angemessenen Geschwindigkeit. Eine typische Belichtung enthält 4% Isofluran und 2% O 2 für 3 bis 4 min, und das ideale Ergebnis ist 2 bis 2,5 min der Sedierung. Dies entspricht einer Atemfrequenz von 1 Luft alle 2 sec. </li><li> Während des Wartens auf Sedierung in zu setzen, aspirieren zwischen 30 und 45 &amp; mgr; l der BLM in eine Pipette und zur Seite legen. </li><li> Wenn Sie bereit sind, unterbrechen die sediert Maus mit seinem oberen Schneidezähne aus der zu den Stellschrauben des Verfahrens Plattform befestigt Faden. Stellen Sie sicher, dass das Tier die Rücken liegt flach auf der Plattformoberfläche. </li><li> Man aufpassen, nicht Lüftung zu beschränken, legen Sie ein Stück Klebeband lose über die untere (kaudale) Teil der Brusthöhle, direkt über der Membran. Eine Platzierung sollte fest genug sein, die richtige Ausrichtung während der Prozedur zu haltenEDURE, aber nicht so eng, daß sie die Atmung einschränkt. </li><li> Schalten Sie den Illuminator auf zwischen 80% und 100% Intensität und orientieren den Schwanenhals, so dass es 1 bis 2 cm von der Oberfläche der Haut ist in der Nähe des Sonnengeflecht. Überprüfen Sie regelmäßig die Spitze der Schwanenhals für Wärme, um sicherzustellen, dass es nicht die Maus nicht verletzen. </li><li> Hinter der Plattform mit Hilfe der sterilen, stumpfen Ende Zange die Zunge zu lokalisieren. Wobei darauf geachtet, die unteren Schneidezähne, sanft Griff und ziehen die Zunge in der Mundhöhle zu vermeiden. </li><li> Mit dem restlichen Hand, legen Sie die Niederhalter und es verwenden, um die Zunge gegen den Boden der Mundhöhle zu glätten. Lassen Sie die Zange, aber die Niederhalter an Ort und Stelle für die nächsten beiden Schritte lassen. </li><li> Richten Sie das Licht, so dass die Luftröhre durch die Führung des Schwanenhals proximal von der Höhe des Solarplexus sichtbar ist, bis sie das Niveau des Hauptbronchus Bronchien erreicht. Anmerkung: Die Luftröhre kann durch die Wirkung der Atmung leicht unterschieden werden, WHIch bewirkt, dass das emittierte Licht in Intensität schwankt. Wenn richtig positioniert, wird diese Struktur in der axialen Ebene als einer zentral angeordneten Stift von Licht mit minimaler Umgebungslicht in der Mundhöhle selbst erkennbar sein. </li><li> Winkeln Sie die Spritze so, dass sie den natürlichen Weg der Luftröhre folgt, und die 22-G Katheterspitze senken, mit dem angebrachten Spritze das Tröpfchen, gerade in das Lumen enthält. Die PBS-Blase beginnt mit jedem Atemzug bei erfolgreicher Platzierung zu steigen und fallen. Hinweis: Diese Aktion kann durch mehrere Sekunden infolge der tiefen Sedierung verzögert werden. </li><li> Führen Sie den Katheter in einem zusätzlichen 5 mm. Entfernen Sie den Spatel. </li><li> Schieben Sie die Spritze mit der anderen Hand, und Greifen der Nabe, sanft gegen die Spritze entfernen. </li><li> Ablagerung zwischen 30 und 45 &amp; mgr; l von BLM in der Mitte des Inneren des Katheteransatzes, der zweite Spritze befestigen und 300 &amp; mgr; l von Luft in der Nabe verzichtet werden. </li><li> Setzen Sie die zweiteSpritze mit dem zunächst die Blase PBS mit. Die Blase wird weiter steigen und fallen, wenn das Verfahren erfolgreich durchgeführt worden ist. </li></ol> 3. Post-Verfahrenspflege <ol><li> Entfernen Sie den Katheter und Band, und legen Sie das Tier in einem trockenen warmen Ort, bis er das Bewusstsein wiedererlangt - in der Regel innerhalb von ein paar Minuten. </li></ol>

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</ol>

Die Autoren haben nichts offenzulegen.

In Fällen, in denen Aerosolisierung aufgrund der begrenzten Verfügbarkeit Reagenz unpraktisch ist, Sicherheit oder Kosten, ist direkte tracheale Verabreichung eine überlegene Methode zur Abgabe von exogenen Mitteln in die Lungen 16 Transtracheale Instillation diese weit verbreitet zu bewerkstelligen ist. Jedoch, wie bei allen chirurgischen Eingriff, es führt auch damit das Potential für durch das Verfahren verursachten Komplikationen selbst und nicht notwendigerweise das Mittel eingeflößt wurde. 13...

Trotz einiger anatomischen und physiologischen Unterschiede, ein Mausmodell weiterhin für die Modellierung menschlichen Biologie und Pathogenese der Erkrankung. 2 von einer Haltung Standpunkt, Mäuse sind leicht zu handhaben, haben eine geringe Brutzeit, eine beschleunigte Lebensdauer und sind relativ preiswert von unschätzbarem Wert sein unterzubringen. Mit der Entwicklung der verschiedenen genetischen Stämme und Strategien (z. B. bedingte Knock-outs, Reporter Mäusen Abstammung-Tracing-Ansätze, etc.), sowie die große Auswahl an erhältlichen Reagenzien (z. B. Antikörper, rekombinante Proteine, Inhibitoren, etc.), Mäuse sind zu einem wesentlichen Modell wirbel~~POS=TRUNC-Organismus aufzudecken menschliche Homöostase und Krankheitsprozesse geworden. 3 Mäuse haben besonders wertvoll gewesen Lungenstudienbedingungen, einschließlich akutem Lungenversagen (ALI) und Lungenfibrose. 4 ALI beim Menschen können durch ein Trauma, Verletzungen hervorgerufen werden, oder Sepsis und wird von epithelialen gekennzeichnet undendothelialen Leck (dh., Ödem), Entzündung und werdende Fibrose. Bei vielen Patienten schreitet ALI seiner schweren Form, akutem Atemnotsyndrom (ARDS), die oft in Fibrose und Tod durch Atemstillstand führt. 5,6 Lungenfibrose eine progressive, fatale Pathologie ist durch das überschüssige Ablagerung von extrazellulärer Matrix gekennzeichnet geben, vor allem I-Kollagen, was zu einer Beeinträchtigung der Lungenfunktion. 7,8 Verabreichung von Bleomycin (BLM) ist die am weitesten verbreitete und am besten charakterisierte Modell zur Induktion ALI und Fibrose bei Versuchstieren. 9 Obwohl Lungenfibrose bei Nagetieren-BLM induziert tut rekapitulieren nicht vollständig die menschlichen fibrotische Phänotypen, 10 Maus-Studien mit diesem Modell zur Entdeckung von vielen wichtigen Faktoren geführt haben das Auftreten und Fortschreiten der Erkrankung zu beeinflussen. 11 Während der genaue Mechanismus (n) hinter BLM-induzierte Fibrogenese unbekannt sind, das auslösende Verletzungvermutlich aus Kontakt-abhängigen DNA-Strangbrüche in den Epithelzellen entstehen die leitenden Atemwege und Lungenbläschen auskleiden, und insbesondere, Typ-1-Pneumozyten. 12 Die Notwendigkeit für den direkten Kontakt zwischen BLM und die Lungen Epithel unterstreicht die Bedeutung eines robusten Lieferroute und diese Bedenken sind auch für eine breite Palette an Anwendungen auf die Atemwege distal ausgerichtet, einschließlich rekombinanter Proteine, Antikörper, siRNA, Viren, Bakterien, Teilchen und mehr relevant. Oropharyngealen Aspiration (OPA) wurde zu diesem Zweck 13, aber ein Haupt Ein Nachteil OPA ist, dass ein Teil der Mittel kann geliefert werden Verschlucken in den Magen-Darm-Trakt, was zu Ungenauigkeiten in der verabreichten Dosis eingesetzt. Eine andere verbreitete Ansatz ist transtracheal Einträufeln, die die Luftröhre und die Applikation von einem Agenten aufzudecken direkt in die Atemwege Tracheotomie unter starker Betäubung beinhaltet. 14 Aber nicht nur kann soeine Prozedur aufgrund seiner Invasivität unerwünscht sein, aber es ist auch zeitaufwendig und erfordert ein gutes Stück der Ausbildung, und verursacht eine starke Schädigung der Atemwege. 15,16 verschiedene Protokolle, die die direkte Verabreichung von Wirkstoffen in die entwickelt wurden, umfassen Luftröhre ohne die Notwendigkeit für einen chirurgischen Eingriff, 16,17,18,19,20 aber diese Verfahren erweitert Erholungszeiten von mächtigen Anästhetika verursacht beinhalten, die Verwendung von teuren Geräten (dh., Otoskop / Laryngoskop, im Handel erhältliche Verfahren Platten, Glasfaser Drähte, etc.), ein Überschuß der Manipulation in der Mundhöhle, und der Unsicherheit in Bezug auf die Dosierung. Dieses Papier beschreibt eine relativ einfache Methode zur Verabreichung über Intubation, die ein Forscher, preiswert, schnell ermöglicht und zuverlässig ein Reagens in die Mäuselunge mit begrenztem Risiko von Rest Schäden an den umgebenden Gewebe vermitteln.

<table><tbody><tr><td>Bleomycin zur Injektion, 30 Einheiten/Fläschchen</td><td>APP Pharmaceuticals, LLC</td><td>103720</td><td>Für beste Ergebnisse sollte BLM in PBS suspendiert, aliquotiert und als lyophilisierte Aliquote für den einmaligen Gebrauch gelagert werden.</td></tr><tr><td>Stumpfe Endzange</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Zungenspatel (d. h. gebogene Valleylab-Klingenelektrode, 2,4 Zoll)</td><td>Covidien</td><td>E1551G</td><td>Vor Gebrauch eine 45-Grad-Biegung 1,5 cm von der Klingenspitze entfernt. Ein geeigneter Drücker kann auch aus jedem Metallwerkzeug ähnlicher Abmessungen hergestellt werden.</td></tr><tr><td>Exel Safelet Katheter 22G x 1"</td><td>Exel International</td><td>26746</td><td></td></tr><tr><td>1 ml Einweg-Tuberkulinspritze mit Slip-Tip (200/sp, 1600/ca)</td><td>BD</td><td>309659</td><td></td></tr><tr><td>0,2 ml Pipettierer und Filterspitzen</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fiber-Lite Illuminator. Modell 181-1: Modell 180 in Verbindung mit der Standard-Dual-Schwanenhalsbeleuchtung</td><td>von Dolan Jenner Industries, Inc.</td><td>181-1</td><td>LED-Beleuchtungen mit geringerer Leistung werden nicht empfohlen, da sie die Luftröhre nicht ausreichend beleuchten.</td></tr><tr><td>Intubationsboard</td><td></td><td></td><td>siehe Diagramm 1.</td></tr><tr><td>Farbiges Etikettenband: 0,5&nbsp; in. Breit</td><td>Fisherbrand</td><td>15-901-15A</td><td></td></tr><tr><td>Sauerstoff&nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Phosphatgepufferte Kochsalzlösung, 1X</td><td>Corning</td><td>21-040-CV</td><td>Das Produkt sollte steril</td></tr><tr><td>sein Unsterile Seide Schwarz Geflochtene Nahtspule, 91,4 m, Größe 4-0</td><td>Harvard Apparat</td><td>517698</td><td></td></tr><tr><td>Tisch-Anästhesiegerät Isofluran</td><td>Highland Medical Equipment</td><td></td><td>http://www.highlandmedical.net/</td></tr> <tr><td>Slide Top Induktions-Maus-Isofluran-Kammer</td><td>MIP / Anästhesie Technologies</td><td>AS-01-0530-SM</td><td></td></tr><tr><td>FORANE (Isofluran, USP) Flüssigkeit zur Inhalation 100 mL&nbsp;</td><td>Baxter</td><td>1001936040</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp; Nanozoomer Digitales Pathologiesystem</td><td>Hamamatsu</td><td></td><td></td></tr><tr><td>IgM ELISA Quantifizierungskit&nbsp;</td><td>Bethyl Laboratorien</td><td>E90-101</td><td></td></tr></tbody></table>

ein verbessertes verfahren zur schnellen intubation der luftröhre in mice

An Improved Method for Rapid Intubation of the Trachea in Mice

Trotz einiger anatomischer und physiologischer Unterschiede sind Mausmodelle weiterhin ein wesentliches Werkzeug für die Untersuchung menschlicher Lungenerkrankungen. Die Bleomycin-Toxizität ist ein häufig verwendetes Modell, um sowohl akute Lungenschäden als auch Fibrose zu untersuchen, und es wurden mehrere Methoden zur Verabreichung von Bleomycin (und anderen toxischen Wirkstoffen) in die Lunge entwickelt. Viele dieser Ansätze, wie z. B. die transtracheale Instillation, haben jedoch inhärente Nachteile, einschließlich der Notwendigkeit starker Anästhetika und Überlebensoperationen. In dieser Arbeit wird über eine schnelle, reproduzierbare Methode der intratrachealen Intubation berichtet, die eine milde Inhalationsanästhesie, die Visualisierung der Luftröhre und die Verwendung eines Surrogat-Spirometers zur Bestätigung der Exposition umfasst. Als Wirksamkeitsnachweis wurde 8-12 Wochen alten C57BL/6-Mäusen entweder 2,0 E/kg Bleomycin oder ein gleichwertiges Volumen PBS verabreicht, und sowohl die Schadens- als auch die fibrotischen Endpunkte wurden nach der Exposition gemessen. Dieses Verfahren ermöglicht es den Forschern, eine große Kohorte von Mäusen in relativ kurzer Zeit mit geringen Kosten und minimaler Nachsorge zu behandeln.

Intubierten Mäusen wurden täglich auf Gewichtsverlust und Not überwacht und getötet, 4, 10 oder 17 Tage später durch eine intraperitoneale Injektion von 2,5% 2,2,2-Tribromethanol. Bronchoalveoläre Lavage (BAL) wurde in drei Waschungen mit PBS gesammelt, wie an anderer Stelle beschrieben 21 und die rechte Lunge wurde in 10% Formalin, Paraffin eingebettet und gefärbt mit Masson Trichrom der von der University of Washington Histology and Imaging Kern 22</su...

Dieser Artikel stellt eine schnelle und einfache Methode zur Bleomycin direkt in die Luftröhre Maus über Intubation verabreicht wird. Die wichtigsten Vorteile dieser Methode sind, dass sie in hohem Maße reproduzierbar, leicht zu beherrschen ist, und nicht spezialisierte Ausrüstung oder langwierige Wiederherstellungszeiten erfordern.

Ein verbessertes Verfahren zur schnellen Intubation der Luftröhre in Mice

Despite some anatomical and physiological differences, mouse models continue to be an essential tool for studying human lung disease. Bleomycin toxicity ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens besteht darin, eine schnelle, einfache und zuverlässige Applikation von Reagenzien in die Lunge von Mäusen mittels Intubation bereitzustellen. Die Methode beschränkt zudem das Risiko von Schädigungen des umliegenden Gewebes und ist kostengünstig. Diese Methode kann helfen, zentrale Fragen in den Bereichen der grundlegenden Lungensbiologie und der Krankheitsmechanismen zu beantworten.Wie akute Lungenschädigung und Fibrogenese. Die Hauptvorteile dieser Technik sind ihre hohe Reproduzierbarkeit, die einfache Erlernbarkeit, der Verzicht auf spezielle Ausrüstung und kurze Erholungszeiten. Der Eingriff muss mit sterilisierten Instrumenten durchgeführt werden.Sterilisieren Sie daher sowohl die stumpfen Pinzette als auch den Depressor im Autoklaven. Bereiten Sie in einer sterilisierten Haube eine Arbeitslösung des Reagenz vor, die über die Intubation verabreicht wird. Ein Bolusvolumen zwischen 30 und 45 Mikrolitern wird empfohlen.Sonifizieren Sie die Lösung 10 Minuten lang bei 35 Kilohertz, um eine gleichmäßige Durchmischung zu gewährleisten. Bereiten Sie nun den Arbeitsplatz vor. Stellen Sie mindestens einen Quadratmeter Arbeitsfläche zur Verfügung.Sowie für die Tiere separate Standorte sowohl vor als auch nach dem Eingriff. Bereiten Sie nun ein Operationsbrett vor. Dieses speziell angefertigte Modell wird aus einem Aluminiumblech geschnitten und durch eine Winkelhalterung verstärkt.Ähnliche kommerzielle Platten sind ebenfalls erhältlich. Befestigen Sie die Unterseite der Versuchsplattform mithilfe einiger Klebestreifen auf der Arbeitsfläche, sodass sie sich direkt vor dem Experimentator befindet. Danach wird ein Stück 4.0-Nahtmaterial zwischen die beiden Positionierungsschrauben der Versuchsplattform gespannt.Bauen Sie als Nächstes ein Spirometer. Entfernen Sie die Kolben von drei Ein-Milliliter-Spritzen. Füllen Sie dann bis zu 60 Mikroliter PBS in das obere Ende jedes Spritzenzylinders.Befestigen Sie eine dieser drei Spritzen locker an der Anschlussstelle eines Katheters. Während der Anwendung wird Luft, die aus der Luftröhre austritt, dazu führen, dass die PBS in der Spritze ansteigt und absinkt. Stellen Sie dies neben das Operationsfeld.Platzieren Sie die beiden weiteren zusätzlichen Spritzen griffbereit als Ersatz. Ziehen Sie anschließend mit einer vierten Spritze 300 Mikroliter Luft auf und legen Sie sie beiseite. Bereiten Sie außerdem einige sechs Zoll lange Stücke Klebeband vor, um das Tier auf dem Brett zu befestigen.Richten Sie anschließend gegebenenfalls eine Isofluran-Kammer ein. Schließen Sie die Sauerstoff-, Isofluran- und Vakuumleitungen an die entsprechenden Anschlüsse an der Kammer und am Abzugsvakuum an. Beginnen Sie mit der Anästhesie der Maus.Da Faktoren wie das Alter, das Gewicht und der Gesundheitszustand des Tieres alle die Reaktion auf Anästhetika beeinflussen können, sollte jedes Labor die Isofluran-Exposition an seine eigenen Bedürfnisse anpassen. Währenddessen laden Sie die Bolusmenge des Reagenz in eine Pipettenspitze und stellen Sie diese beiseite. Wenn die Maus sediert ist, hängen Sie sie an ihren oberen Schneidezähnen an dem Faden der Operationsplattform auf, wobei der Rücken des Tieres flach auf der Plattformoberfläche aufliegt.Jetzt vorsichtig darauf achten, die Belüftung nicht einzuschränken, und den unteren Teil der Brusthöhle, knapp oberhalb des Zwerchfells, locker mit Klebeband an der Plattform befestigen, um das Tier während des Eingriffs ausgerichtet zu halten. Danach die Gänsehalsbeleuchtung auf 80 bis 100 % einstellen, das Licht ein bis zwei Zentimeter von der Hautoberfläche in der Nähe des Sonnengeflechts entfernt positionieren und regelmäßig überprüfen, ob die Haut nicht übermäßig erhitzt wird. Von hinter der Plattform aus die stumpfe Pinzette verwenden, um die Zunge zu lokalisieren.Danach vorsichtig die unteren Schneidezähne umgehend, die Zunge sanft greifen und aus der Mundhöhle herausziehen. Während die Zunge fixiert wird, sie mit dem Spatel in der nicht-dominanten Hand abflachen, sodass die Pinzette losgelassen werden kann. Führen Sie nun den Gänsehals etwa vom Sonnengeflecht zu den Hauptbronchien, um die Luftröhre zu beleuchten.Die Luftröhre kann auch leicht an der Atembewegung erkannt werden, die dazu führt, dass die Lichtintensität beim Austritt aus der Luftröhre schwankt. Bei korrekter Positionierung erscheint die Luftröhre als zentraler Lichtstrahl, wobei im Mundraum selbst nur minimales Streulicht vorhanden ist. Der Katheter sollte den Mundraum nicht betreten, bis die Sicht auf die Luftröhre ideal ist.Die Luftröhre kann nicht durch Verstellen der Lichtquelle oder des Depressors sichtbar gemacht werden. Die Forschenden sollten die Zunge freigeben und den Vorgang erneut versuchen. Danach sollte die Spritze so ausgerichtet werden, dass sie dem natürlichen Verlauf der Luftröhre folgt.Senken Sie die Spitze des 22-Gauge-Katheters, an dem die Spritze mit dem PBS befestigt ist, gerade in das Lumen ein. Führen Sie den Katheter nun weitere fünf Millimeter ein und entfernen Sie den Zungenspatel. Bei korrekter Platzierung beginnt sich die PBS-Blase im Zylinder mit jedem Atemzug zu heben und zu senken.Seien Sie geduldig bei der Suche nach diesem Indikator, da sowohl tiefe als auch leichte Sedierung die Atemfrequenz verändern können. Danach wechseln Sie die Spritze in die nicht dominante Hand. Halten Sie die Kanüle am Hub fest und entfernen Sie vorsichtig die Spritze, sodass die Kanüle an ihrem Platz verbleibt.Tragen Sie aus der dominanten Hand den vorbereiteten Reagenz-Pfropfen direkt in die Mitte des Katheterhubs auf. Befestigen Sie dann die zweite Spritze mit 300 Mikrolitern Luft und spritzen Sie die Luft in den Hub. Dies trägt dazu bei, sicherzustellen, dass der Pfropfen gleichmäßig in den Lungen verteilt wird.Entfernen Sie nun die Spritze und ersetzen Sie sie durch eine Spritze, die die Luftblase aus PBS enthält. Die Luftblase wird weiterhin auf- und absteigen, wenn das Verfahren erfolgreich durchgeführt wurde. Entfernen Sie nun den Katheter und das Klebeband.Und stellen Sie das Tier an einen trockenen, warmen Ort, bis es das Bewusstsein wiedererlangt, was typischerweise innerhalb weniger Minuten der Fall ist. Intubierte Mäuse wurden täglich hinsichtlich Gewichtsverlust überwacht.Mäuse wurden vier, zehn und siebzehn Tage nach intratrachealer Intubation mit Bleomycin entnommen. Die Bronchoalveoläre Lavage wurde aus diesen Lungen gewonnen und analysiert. Erhöhte IgM-Spiegel zeigten einen signifikanten, zeitabhängigen Anstieg der Lungendurchlässigkeit, der auf eine Dysfunktion der epithelialen und/oder endothelialen Barriere hinweist.Die rechten Lungen wurden fixiert und mit der Masson-Trichrom-Färbung angefärbt. Die fibrogene Reaktion, ein gut etablierter Marker für den Gesamtkollagengehalt, wurde quantifiziert. Die histologischen Schnitte zeigten eine behandlungsabhängige Verdickung des pulmonalen Interstitiums sowie eine Zunahme fibrotischer Läsionen.Wenn die Technik einmal beherrscht ist, kann sie bei korrekter Durchführung in weniger als einer Minute durchgeführt werden. Bei der Durchführung dieses Verfahrens ist es wichtig zu bedenken, dass eine Manipulation des Weichgewebes im Bereich der Luftröhre nicht erforderlich oder empfehlenswert ist. Solche Eingriffe können sowohl die Gesundheit des Tieres als auch die Integrität des Experiments beeinträchtigen.

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Medicine

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