Retroductal Submandibulardrüse Einträufeln und Lokalisierte fraktionierten Bestrahlung in einem Rattenmodell von Speichel- Unterfunktion

Unterfunktion der Speicheldrüsen, eine schwerwiegende Nebenwirkung der Kopf- und Hals-Strahlentherapie, verringert die Lebensqualität eines Patienten. Der Nachweis der Wirksamkeit neuer Therapien im Tiermodell ist eine Voraussetzung für den klinischen Übergang. Dieses Protokoll beschreibt die retroduktale Verabreichung und lokale Bestrahlung der submandibulären Drüsen der Ratte.

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist die retroduktive Verabreichung von Therapeutika an die submandibulären Drüsen, um ihre Wirksamkeit bei der Bekämpfung von Speichelfunktionsstörungen zu beurteilen. Diese Methode kann helfen, wichtige Fragen auf dem Gebiet der Speicheldrüsenerkrankungen zu beantworten, z. B. welche Therapien vor Strahlung schützen oder die Funktion der Speicheldrüsen wiederherstellen können. Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass Speicheldrüsen lokal behandelt werden können, wodurch das Risiko von Nebenwirkungen des Nichtzielgewebes verringert wird.

In der Regel haben Menschen, die neu in dieser Methode sind, Schwierigkeiten, da die Kanalöffnungen nicht sichtbar sind und die Kanüle blind in den Kanal manipuliert werden muss. Schneiden Sie vor Beginn der Prozedur einen zehn Zentimeter langen Schlauch aus PE 10 Polyethylen mit einer Kopfhaut ab, fassen Sie dann beide Enden des Schlauchs zwischen Zeigefinger und Daumen jeder Hand und erhitzen Sie den mittleren Teil des Schlauchs über einer sanften Flamme, indem Sie vorsichtig an beiden Seiten ziehen, um den aufgeweichten Schlauch auf die doppelte Länge zu dehnen. Schneiden Sie dann mit einem Skalpell den Schlauch in der Mitte in einem 45-Grad-Winkel ab, um zwei Kanülen mit jeweils einem konischen Ende zu erhalten.

Strecken Sie das nicht verjüngte Ende einer der Kanülen über die 29-Gauge-Nadel der 0,5-ml-Insulinspritze. Entfernen Sie dann die Kanüle und ziehen Sie 220 Mikroliter Kochsalzlösung in die Spritze. Klopfen Sie auf den Spritzenschaft, um alle Luftblasen zu entfernen, und befestigen Sie die Kanüle wieder über der Nadel.

Drücken Sie den Kolben, um die Luft aus der Kanüle auszustoßen und einen freien Fluss der Lösung durch den Schlauch zu gewährleisten, und stellen Sie das Volumen der Kochsalzlösung in der Spritze auf 200 Mikroliter ein. Bestätigen Sie nun den angemessenen Sedierungsgrad der Ratte durch Zehenkneifen und tastbaren Reflex und tragen Sie Augenschmiermittel auf die freiliegende Hornhaut auf. Legen Sie das Amimal auf eine speziell entwickelte Rückhalteplattform und greifen Sie mit den oberen Schneidezähnen in den Quersteg ein.

Schlingen Sie ein Gummiband um die unteren Schneidezähne, um den Kiefer nach unten zu ziehen. Verankerung auf der Plattform. Führen Sie dann eine sterile Naht durch die Zunge und heben Sie sie an, um den Mundboden anzuheben.

Klemmen Sie dann mit einem Blutstiller die Nähte ein und führen Sie den Blutstiller über den Quersteg. Verwenden Sie als Nächstes einen speziell angefertigten Wangenspreizer, um die Wangen zu erweitern, und ein Präpariermikroskop, um die sublingualen Papillen am Mundboden zu lokalisieren. Fassen Sie mit einer feinen Zange das konische Ende des vorgeformten PE 10-Schlauchs und manipulieren Sie die Spitze der Kanüle vorsichtig in die duktale Öffnung an der sublingualen Papille.

Führen Sie dann die Kanüle drei bis fünf Millimeter in den Kanal ein und achten Sie darauf, dass die Kanüle ungehindert durch den Kanal verläuft. Vor dem Einträufeln der Kochsalzlösung injizieren Sie Atrophin subkutan in den Nacken des Tieres. Zehn Minuten nach der Injektion befestigen Sie die Kanüle mit einem Tropfen Cyanacrylat an der Kanalöffnung

Nachdem der Kleber getrocknet ist, drücken Sie den Spritzenkolben langsam mit 50 Mikrolitern pro Minute zusammen, bis 200 Mikroliter der Kochsalzlösung in die Drüse eingeträufelt wurden. Wenn Sie während der Instillation auf einen Rückstau stoßen, stoppen Sie den Schlauch, ziehen Sie ihn zurück und ziehen Sie ihn dann mit einer neuen Kanüle zurück. Klemmen Sie dann den Schlauch mit einem Blutstiller fest und entfernen Sie vorsichtig die Spritze.

Lassen Sie den Schlauch 30 bis 60 Minuten lang im Kanal, bis das Tier wieder zu Bewusstsein kommt. Entfernen Sie dann die Naht, die die Zunge hält, und bringen Sie das Tier in einen separaten Käfig unter einer Wärmelampe, bis es vollständig geborgen ist. Zur lokalen Anwendung einer fraktionierten Bestrahlung der Unterkieferdrüse.

Säulenförmig wird ein drei Zentimeter großer Schlitz des Strahlungsfeldes gebildet, der den Bereich von der unteren Grenze des Brustbeins bis zur Spitze des Brustbeins der betäubten Ratte in Rückenlage umfasst. Nach dem Platzieren eines einen Zentimeter großen gewebeäquivalenten Bolus über die Region. Stellen Sie den Abstand zwischen der Strahlungsquelle und der Spitze des Bolus mit einem Sechs-Megavolt-Photonenstrahl am Linearbeschleuniger auf 100 Zentimeter ein.

Bestrahlen Sie das Tier mit 2,5 Grautönen für die entsprechende Belichtungsdauer. Am Ende der Strahlenexpositionsperiode wärmen Sie das Tier während seiner Genesung, wie gerade demonstriert. Während der ersten Versuche wurde die korrekte Platzierung der Kanüle bestätigt, indem die Drüse mit Hämatoxylin- oder Tryplanblaulösung infundiert und die Drüsenfärbung bei euthanasierten Tieren untersucht wurde.

Die submandibulären Drüsen wurden untersucht, da sie selektiv mit säulenförmiger Strahlung bis zum Hals bestrahlt werden können, um schwere orale Off-Target-Effekte zu vermeiden, die sich auf die Gesundheit der Tiere und das Versuchsergebnis auswirken können. Die Analyse der Auswirkungen dieses fraktionierten Strahlungsschemas auf den Speichelfluss acht Wochen nach der Bestrahlung zeigt, dass die tägliche Exposition gegenüber 2,5-Grau-Schritten den Speichelfluss drastisch reduziert. Innerhalb Ihrer 10-fachen Reduzierung des Speichelausstoßes bei bestrahlten Tieren im Vergleich zu nicht bestrahlten Tieren.

Einmal gemeistert, kann diese Technik in wenigen Minuten abgeschlossen werden, wenn sie richtig ausgeführt wird. Bei diesem Verfahren ist es wichtig, daran zu denken, dass die Kanüle ungehindert in den Ausscheidungsgang der Speicheldrüse gelangt. Nach ihrer Entwicklung ebnete diese Technik den Weg für Forscher auf dem Gebiet der Speicheldrüsenerkrankungen, um Behandlungen für Strahlen- und Autoimmunerkrankungen der Speicheldrüsen zu erforschen.

Nach dem Anschauen dieses Videos sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie man eine retroduktale Installation in der Unterkieferdrüse der Ratte durchführt und die Drüsen lokal bestrahlt, um die therapeutische Wirksamkeit der Verbesserung der Strahlentoxizität zu beurteilen. Vergessen Sie nicht, dass die Arbeit mit Gen- und Proteintherapeutika äußerst gefährlich sein kann und die Vorsichtsmaßnahmen wie die Vermeidung von Nadelstichen und die Minimierung der Hautexposition gegenüber biologischen Wirkstoffen bereits bei der Durchführung dieses Verfahrens getroffen werden sollten.