Dissection und Flach Montage des Dreistachliger Stichling Branchiogene Skeleton

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, das Stichlings-Kiemenskelett zu präparieren und flach zu montieren. Diese Methode kann helfen, Schlüsselfragen in den Bereichen Entwicklung, Genetik und Evolution zu beantworten. Zum Beispiel, wie sich Tiere an neue Umgebungen anpassen und wie Variationen in der Morphologie adulter Tiere während der Entwicklung entstehen.

Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass durch das Präparieren und Abflachen des Kiemenskeletts eine Vielzahl von trophischen Merkmalen sichtbar gemacht werden kann, die im Whole-Mount nicht untersucht werden können. Überprüfen Sie zur Vorbereitung die relevante Kopfskelettmorphologie des dreistachligen Stichlings. Nachdem Sie den Fisch für die Dissektion vorbereitet haben, beginnen Sie damit, eine scharfe Pinzette Nummer fünf in einem 45-Grad-Winkel in die Seite des Auges einzuführen, um die Membran zu durchstechen, die das Auge bedeckt.

Ziehe dann die Augenmembran ab, wie den Deckel eines Joghurtbechers. Führen Sie dann eine offene Pinzette hinter das Auge ein, fassen Sie den Sehnerv und entfernen Sie das Auge. Achte darauf, dass du das Auge nicht durchstichst, da sonst Melanin austritt.

Wiederholen Sie diesen Vorgang mit dem Auge auf der gegenüberliegenden Seite. Platzieren Sie dann die Klinge einer kleinen Schere unter der hinteren Seite des Operkellappens und schneiden Sie das Weichgewebe dorsal über dem Operkel in Richtung Augenhöhle durch. Schneiden Sie dann den Stirnknochen durch, der dorsal zur Augenhöhle liegt.

Schneiden Sie dann durch den Parasphenoidknochen der Mittellinie um die Mitte der Augenhöhle. Wiederholen Sie den Operkelschnitt auf der gegenüberliegenden Seite. Für die nächsten Schritte können die Beckenwirbelsäulen als Griffe verwendet werden.

Sie klappen sich aus, indem man sie sanft direkt vom Körper wegzieht. Führen Sie nun die Pinzette unter den Operkel ein und schälen Sie das Gesicht langsam vom Körper ab. Sämtliches Weichgewebe, das dabei noch anhaftet, wird entfernt.

Seien Sie vorsichtig in der Nähe der Kiemenrechen und achten Sie darauf, sie nicht zu stören. Es ist leicht, bei der Entfernung des Gesichtsskeletts versehentlich den ersten Ceratobranchialknochen zusammen mit dem Percoll zu greifen. Schauen Sie unter ihr Percoll, während Sie es nach vorne schälen, um sicherzustellen, dass Sie nichts Zusätzliches in der Hand haben.

Löse nun mit einer Pinzette die Ceratohyalen von beiden Seiten des Mittellinien-Basihyals, während du das vordere kraniale Gesichtsskelett abschältst und entfernst. Wiederholen Sie dies auf der gegenüberliegenden Seite. Das vordere kraniale Gesichtsskelett umfasst den gesamten Kiefer, das gesamte Zungenskelett, die darunter liegenden dorsalen und endochondrialen Elemente sowie den vorderen Teil des Schädels.

Führen Sie dann eine geschlossene Pinzette direkt unter dem Darmrohr ein und ziehen Sie sie vorwärts. Dabei werden die verbleibenden Muskeln und Bänder, die am Kiemenskelett befestigt sind, auseinander gerissen. Kratzen Sie dann mit der Spitze der geschlossenen Pinzette die Muskeln ab, die das dorsale Kiemenskelett mit der ventralen Hirnhülle verbinden.

Kratzen Sie mit einer Bewegung von hinten nach vorne. Wiederhole den Muskelabbau auf der gegenüberliegenden Seite des Stichlings. Entfernen Sie anschließend das Kiemenskelett, indem Sie die Basis des Darmschlauchs greifen und anterioral ziehen.

Trennen Sie den Darmschlauch mit einem senkrechten Schnitt hinter dem fünften Ceratobranchial. Ein häufiger Fehler besteht darin, das Darmrohr zu anterior zu greifen, wodurch das ventrale Stirnrohr weit hinter sich bleibt. Achten Sie darauf, tief in die hintere Brusthöhle zu greifen, und Sie können den überschüssigen Darmschlauch später immer noch entfernen.

Nach der Entnahme aller verbleibenden Knochenfragmente aus dem Hirngehäuse auf der dorsalen Seite des Kiemenskeletts. Führen Sie eine Schere in den Kiemenkorb ein und machen Sie einen dorsalen Schnitt zwischen den beidseitigen Sätzen der dorsalen Zahnplatten. Halten Sie diesen Schnitt zentriert, um eine Beschädigung der hinteren Zahnplatten zu vermeiden.

Machen Sie als Nächstes zwei flache seitliche Schnitte in das gummiartige Darmlumen am hinteren Ende des Kiemenskeletts. Am Antieror-Ende des Darmrohrs. Zur Unterstützung der Öffnung des Kiemenskeletts.

Übertragen Sie nun das Skelett in ein Mikrosentrifugenröhrchen, das mit 50 Prozent Glycerin, null Komma zwei und fünf Prozent Kaliumhydroxid beladen ist, um es sanft zu reinigen. Oder übertragen Sie es stattdessen in reines Glycerin, wenn keine weitere Klärung erforderlich ist. Falls eine erneute Färbung erforderlich ist, sind die Einzelheiten im Textprotokoll angegeben.

Um die Montage vorzubereiten, tauschen Sie die Lösung in reines Glycerin aus und schütteln Sie das Röhrchen mindestens fünf Minuten lang. Entfernen Sie dann das Kiemenskelett und platzieren Sie es mit der Rückenseite nach oben am Boden eines 22 x 60 Millimeter großen Glasdecktuchs. Gib nun ein paar Tropfen Glycerin auf das Skelett.

Rollen Sie dann zwei kleine Kugeln Modelliermasse aus und spielen Sie eine auf beide Enden des Deckglases, sie fungieren als Abstandshalter. Legen Sie dann locker einen zweiten Deckslip über das Präparat, mit genügend Druck, um das vordere Kiemenskelett abzuflachen. Schälen Sie nun die linke Rückenklappe inklusive der Rückenzahnplatten auf und schieben Sie die Klappe zwischen die Deckschieber.

Dann machen Sie das Gleiche mit dem rechten Rückenlappen. Und schieben Sie das gesamte Kiemenskelett vom Rand des Deckglases weg. Um den Vorgang abzuschließen, drücken Sie leicht auf den oberen Abdeckschub, um die Tonkugeln flach zu drücken.

Gerade genug, damit sie das Kiemenskelett flach halten. Aber nicht so sehr, dass es zerquetscht wird. Wenn während des Prozesses eine Reihe von Rechen verdeckt wird, schieben Sie die Pinzette zwischen die Deckgläser und richten Sie das Ceratobranchial oder das gesamte Präparat neu aus.

Wenn das Präparat flach in reinem Glycerin montiert ist, kann es mindestens ein Jahrzehnt lang flach bei Raumtemperatur gelagert werden. Dieses Protokoll führt zu einem präparierten und flach montierten Kiemenskelett. Wo eine Vielzahl wichtiger trophischer Merkmale chronifiziert werden kann.

Aus der dorsalen Ansicht können alle Reihen von Kiemenrechen, alle Rachenzahnplatten und fast alle Kiemenknochen leicht sichtbar gemacht und chronifiziert werden. Alizarinrot S, fluoresiert auch auf einem Rhodamin- oder ähnlichen Rotfilter, was eine doppelte Markierung mit anderen Markern und alternativen Visualisierungsmethoden ermöglicht. In diesem Bild sind Kiemenrechen mit Karat markiert.

Zähne sind mit Pfeilspitzen und Knochen mit Sternchen gekennzeichnet. Einmal gemeistert, kann das Sezieren in wenigen Minuten durchgeführt werden und relativ schnell an Hunderten von Tieren durchgeführt werden. Und obwohl wir eine Stichlings-Kiemenskelett-Dissektion demonstriert haben, hoffen wir, dass dieses Verfahren als Leitfaden für eine Vielzahl von Fischarten verwendet werden kann.

Durch das Präparieren des Kiemenskeletts können wir schnell und einfach eine Vielzahl wichtiger trophischer Merkmale sichtbar machen, die bei ganzen Bergen nicht sichtbar sind. Ermöglicht ein besseres Verständnis der Entwicklung und Evolution des kranialen Gesichtsskeletts.