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DOI: 10.3791/54107-v
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Anastasis ist technisch anspruchsvoll, um in Vivo zu erkennen, da die Zellen, die der Zelle Todesprozess umgekehrt haben morphologisch nicht zu unterscheiden von normalen gesunden Zellen sein können. Hier beschreiben wir Protokolle für die Erkennung und Verfolgung von Zellen, die Anastasis mit lebenden Tieren zu unterziehen, durch den Einsatz unserer neu entwickelten in Vivo -CaspaseTracker-Biosensor-System.
Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, die Umkehrung des Zelltodprozesses nach Caspase-Aktivierung bei lebenden Tieren anhand von Drosophila melanogaster als Modell zu erkennen und zu verfolgen. Als Reaktion auf Todesreize durchlaufen Zellen einen programmierten Zelltod, wie z. B. die Apoptose, die traditionell als irreversible Kaskade angesehen wird, die zum Zelltod führt. Interessanterweise können jedoch einige absterbende Zellen nach Wegfall des Todesreizes den Zelltodprozess auch im späten Stadium umkehren.
Durch ein neu entdecktes Phänomen der Zellwiederherstellung, die Anastasis. Die Lebendzellmikroskopie zeigt, dass apoptotische sterbende Zellen einzigartige morphologische Merkmale aufweisen, wie z. B. das Blubben der Plasmidmembran, die Kernkondensation und die Zellschrumpfung. Im Allgemeinen wird davon ausgegangen, dass diese Zellen absterben.
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