Name: Neuer Ansatz zur gleichzeitigen Erfassung von renalen sympathischen Nerven-Aktivität und Blutdruck mit intravenösen Infusion in dem Bewusstsein, hemmungslose Mäuse. (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-02-14T12:30:00.000+00:00
Duration: 11 min 8 s
Description: Lernen Sie eine Methode zur gleichzeitigen Erfassung renaler sympathischer Nervenaktivität und Blutdruck bei wachen, unfixierten Mäusen ohne Anästhesieeinflüsse. Diese Technik ermöglicht zuverlässige autonome Bewertungen.

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S.M.H. unterstützte postdoctoral Fellowships der kanadischen Institute für Gesundheit Forschung (CIHR), Herz & Stroke Foundation von Kanada (HSFC) und Alberta innoviert Health Solutions (AiHS); J.E.H. wird durch einen Zuschuss aus dem National Heart, Lungen- und Blut-Institut PO1HL-51971 unterstützt.

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</ol>

Die Autoren haben nichts preisgeben.

Hierin haben wir beschrieben, gezeigt und validiert eine neuartige Methode zur gezielte Auswertung der RSNA in bewusste Mäuse, frei zu bewegen und ruhen bequem in ihrer Heimat Käfigen. Im Anschluss an chirurgische Implantation einer arteriellen Druck-Radiotelemeter, eine innewohnende intravenöse Infusion Katheter und eine speziell angefertigte bipolare Elektrode RSNA Mäuse von der Operation erholt und 48 bis 72 Stunden lang ungestört gelassen wurden. Mäuse blieben bequem sesshaften in ihrem Hause Käfig zu allen Zeiten (e...

Interesse an der Nutzung von Mäusen in mehreren Bereichen der biomedizinischen Forschung weiterhin mit der Entwicklung von unzähligen gentechnisch hergestellten Modelle zu erweitern. Zum größten Teil technischen Fortschritt Schritt gehalten haben, mit dem verstärkten Einsatz von Mäusen in Physiologie und es gibt jetzt eine beeindruckende Auswahl an miniaturisierten Geräten entwickelt speziell für die Messung wichtigen physiologischen Parameter bei Mäusen. Obwohl telemetrische Geräte für die direkte Messung des autonomen nervösen Ton bei der bewussten Ratte wurden für mehr als ein Jahrzehnt, miniaturisierte Geräte für die Beurteilung der Nerven-Aktivität in bewusste Mäuse sind derzeit nicht verfügbar. Ermittler in der Regel umgehen diese Einschränkung durch die Auswertung des Beitrags des vegetativen Nervensystems mit indirekten Methoden (d.h. Plasma oder Urin Katecholamine, pharmakologische Blockade autonomer und spektrale Analyse der Muster des Blutes Druck/Puls)1.
Während diese Ansätze wertvolle Informationen liefern, ist das Ergebnis ein globales Bild der gesamten autonomen Ton, anstatt enthüllt den diskreten Beitrag der isolierten Populationen von Nerven auf das Phänomen untersucht. Alternativ hat direkte Aufnahme der Aktivität von bestimmten Nerven bei narkotisierten Mäusen ausgeführt wurde, stellt eine Vielzahl von Anliegen. Es ist außerordentlich schwierig, stabilen Blutdruck im physiologischen Bereich in einem narkotisierten Maus für mehrere Stunden nach der Operation zu erhalten. In der Tat in diesen Arten von Experimenten, Blutdruck ist oft nicht gemeldete oder präsentiert auf einem extrem niedrigen Niveau (d. h. 60-80 MmHg Vs > 100mmHg in einer bewussten Maus)2. Die Zerbrechlichkeit des Herz-Kreislauf-Systems in einem narkotisierten Maus Vorbereitung oft ausgestellt schließt sinnvolle Beurteilung der vegetativen Nerven-Aktivität, da die Co-abhängige Beziehung zwischen Blutdruck und Sympathikotonus3 4.
Um diese Einschränkung, eine neue Methode für die direkte Aufnahme des renalen sympathischen Nerven-Aktivität (RSNA) in dem Bewusstsein, hemmungslose Mäuse, ungestört in ihrer Heimat Käfige wurde entwickelt. Sowohl die chirurgische und experimentellen Ansatz für eine erfolgreiche Umsetzung dieser Technik wird im Detail beschrieben. Diese Vorbereitung ermöglicht die Ermittler zu arteriellen Drucks über radiotelemetrische neben RSNA, mit der zusätzlichen Möglichkeit intravenös Agenten von Interesse ziehen ohne zu stören die Maus gleichzeitig aufnehmen.
Vierundzwanzig Stunden nach der Operation, Mäuse verhalten sich normal und weisen keine Anzeichen von Schmerzen oder Stress auf. Experimentelle Aufnahmen können dann 48 bis 72 Stunden nach der Operation beginnen, während die Maus bequem in seinem Hause Käfig mit uneingeschränkten Zugang zu Nahrung, Wasser und Umweltanreicherung ruht. Deutliche Spuren der RSNA werden vorgestellt und die charakteristischen Reaktionen dieser Nerv Bevölkerung zur normalen physischen Bewegungen des Tieres (z.B. Essen, Pflege) sind neben pharmakologischen Modulation der systemische Blutdruck unter Beweis gestellt. Die Qualität und Besonderheit der RSNA Signal wird weiter durch ganglionic Blockade validiert. Diese Handschrift enthält die audiovisuelle Ergänzung zu einer zunächst veröffentlichte Beschreibung von dieser Technik5.

<table><tbody><tr><td>Teflonbeschichteter Edelstahl mehrsträhniger Draht</td><td>A-M Systems</td><td>793200</td><td>0,001 Zoll Durchmesser blank; 0,0055 Zoll Durchmesser beschichtet</td></tr><tr><td>#11 Skalpellklinge</td><td>Fisher Scientific</td><td>ALMM9011</td><td></td></tr><tr><td>Lötkolben und Lötzinn</td><td></td><td></td><td>Jede Marke oder jedes Modell geeignet</td></tr><tr><td>Miniatur-Stiftverbinder</td><td>A-M Systems</td><td>520200</td><td>Messing mit Vergoldung</td></tr><tr><td>Miniatur-Stiftbuchse</td><td>A-M Systems</td><td>520100</td><td>Messing mit Vergoldung</td></tr><tr><td>Schrumpfschlauch</td><td>Radio Shack</td><td>Modell #: 278-1610 |&nbsp; Katalog #: 2781610</td><td>1,6 mm Durchmesser</td></tr><tr><td>Polyethylen 90 (PE90) Schlauch</td><td>VWR</td><td>CA-63018-703</td><td>0,86 mm Innendurchmesser; 1,27 mm Außendurchmesser</td></tr><tr><td>Präpariermikroskop</td><td>Leica Microsystems</td><td>Leica M80</td><td>Jede Marke und jedes Modell auch geeignet</td></tr><tr><td>Polyethylen 10 (PE10)</td><td>Schlauch Braintree Scientific</td><td>PE10&nbsp; 50 FT</td><td>0,28 mm Innendurchmesser; 0,61 mm Außendurchmesser</td></tr><tr><td>Sekundenkleber Flüssig</td><td>Loctite</td><td>n/a</td><td>Flüssige Formel; jede Marke geeignet</td></tr><tr><td>Sekundenkleber Gel</td><td>Loctite</td><td>n/a</td><td>Gel Formel; jede Marke geeignet</td></tr><tr><td>Polyethylen</td><td>Schlauch Scientific Commodities</td><td>BB31695-PE/13</td><td>Für Sockel 2,7 mm Innendurchmesser; 4,0 mm Außendurchmesser</td></tr><tr><td>Sterilisationsdienste für Krankenhäuser & Ozon-Sterilisationspakete</td><td></td><td></td><td>Wenden Sie sich an die Sterilisationsdienste für Krankenhäuser vor</td></tr><tr><td>Ort Isofluran-Anästhesie</td><td>Abbott</td><td>05260-05</td><td></td></tr><tr><td>Isotherme Deltaphase-Wärmekissen und Operationstisch</td><td>Braintree Scientific</td><td>39OP</td><td>Halten Sie Wärmekissen in einem 37° warm; C Wasserbad; Entsprechende Operationsliege essentiell</td></tr><tr><td>Glycopyrrolat</td><td>Amdipharm Mercury Company Limited</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>Isofluran-Verdampfersystem & Durchflussmesser</td><td>Braintree Scientific</td><td>VP I</td><td>Inklusive medizinischer Sauerstoffversorgung</td></tr><tr><td>Gewebeschere</td><td>Fine Science Tools</td><td>14173-12</td><td></td></tr><tr><td>Feine Federschere</td><td>Fine Science Tools</td><td>15006-09</td><td></td></tr><tr><td>Kleine Applikatoren mit Wattespitze</td><td>Fisher Scientific</td><td>23400100</td><td></td></tr><tr><td>Feine gerade Pinzette</td><td>Fine Science Tools</td><td>11254-20</td><td>#5, FST von Dumont Biologie</td></tr><tr><td>Abgewinkelte Pinzette</td><td>Fine Science Tools</td><td>11251-35</td><td>#5/45 FST von Dumont</td></tr> Kleine saugfähige <tr><td>Speere</td><td>Fine Science Tools</td><td>18105-03</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Sigma Aldrich</td><td>BR701605&nbsp; ALDRICH</td><td></td></tr><tr><td>Kwik-Sil 2 Komponenten Silikon Polymer</td><td>World Precision Instruments (WPI)</td><td>KWIK-SIL</td><td>Kaufen Sie extra spezialisierte Spitzen von WPI</td></tr><tr><td>5-0 Polysorb Faden</td><td>Tyco Healthcare</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>6-0 Silk Fature</td><td>Braintree Scientific</td><td>SUT-S&nbsp; 104</td><td>Deknatel Marke, Spule</td></tr><tr><td>Radiotelemetrie-Sonde</td><td>Data Sciences International (DSI)</td><td>TA11-PAC10</td><td></td></tr><tr><td>Radiotelemetrie-Empfänger</td><td>Data Sciences International (DSI)</td><td>PhysioTel RPC-1</td><td></td></tr><tr><td>Umgebungsdruck Referenz</td><td>Data Sciences International (DSI)</td><td>Apr-01</td><td></td></tr><tr><td>Druckausgangsadapter</td><td>Data Sciences International (DSI)</td><td>R11CPA</td><td></td></tr><tr><td>Rena Pulse Tubing</td><td>Braintree Scientific</td><td>RPT-040</td><td></td></tr><tr><td>Infusionswirbel</td><td>Instech Solomon</td><td>375/D/22</td><td></td></tr><tr><td>Schwenkbarer Stützarm & Mount</td><td>Instech Solomon</td><td>SMCLA</td><td></td></tr><tr><td>Polysulfon Knopf&nbsp;</td><td>Instech Solomon</td><td>LW62S/6</td><td></td></tr><tr><td>Edelstahlfeder</td><td>Instech Solomon</td><td>PS62</td><td></td></tr><tr><td>Vetbond chirurgischer Klebstoff</td><td>3M</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>Triple Antibiotic Salbe</td><td>Fougera</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>PowerLab 8 Kanal Datenerfassungssystem & Software</td><td>ADInstruments</td><td>PowerLab 8/35</td><td></td></tr><tr><td>PVC-isoliertes Kabel</td><td>Belden</td><td>PVC-Audio-Verbindungskabel 32 AWG</td><td></td></tr><tr><td>Vorverstärker Headstage</td><td>Dagan Corporation</td><td>Modell 4002</td><td></td></tr><tr><td>Differenzverstärker</td><td>Dagan Corporation</td><td>EX4-400</td><td></td></tr><tr><td>Natrium Nitroprusside</td><td>Sigma Aldrich</td><td>71778-25G</td><td></td></tr><tr><td>Phenylephrin</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P6126-5G</td><td></td></tr><tr><td>Sterile physiologische Kochsalzlösung 0,9% NaCl</td><td>Beckton Dickinson</td><td></td><td>Wenden Sie sich an den lokalen Krankenhauslieferanten</td></tr><tr><td>Hexamethonium</td><td>Sigma Aldrich</td><td>H0879-5G</td><td></td></tr><tr><td>Edelstahlplatte Anti-Vibrations-Tisch</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td>Kundenspezifisch im eigenen Haus entwickelt; Massive Stahlplatte auf einer Tischplatte ist auch geeignet</td></tr><tr><td>Faradayscher Käfig</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td>Sonderanfertigung und Konstruktion im eigenen Haus</td></tr><tr><td>Kleintierhaarschneider</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td>Drogerie, Bartschneider für Männer geeignet</td></tr><tr><td>Dipilatory Cream</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td>Veet Marke, Formel für empfindliche Haut</td></tr><tr><td>10% Povidon</td><td>Jod Purdue Produkte</td><td>Betadien</td><td></td></tr><tr><td>70% Ethanol</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>Mikroretraktoren aus Stahl</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td>Hergestellt im eigenen Haus. Biege eine Büroklammer aus Stahl & Schlaufe 4-0 Seide zu einem Retraktor</td></tr><tr><td>Hemostats</td><td>Fine Science Tools</td><td>13011-12</td><td></td></tr><tr><td>Heißluftpistole</td><td>Fisher Scientific</td><td>09-201-27</td><td></td></tr></tbody></table>

neuer ansatz zur gleichzeitigen erfassung von renalen sympathischen nerven-aktivität und blutdruck mit intravenösen infusion in dem bewusstsein, hemmungslose mäuse.

Novel Approach for Simultaneous Recording of Renal Sympathetic Nerve Activity and Blood Pressure with Intravenous Infusion in Conscious, Unrestrained Mice.

Renalen sympathische Nerven tragen wesentlich zum physiologische und pathophysiologische Phänomene. Bewertung der renalen sympathischen Nerven-Aktivität (RSNA) ist von großem Interesse in vielen Bereichen der Forschung wie chronische Nierenerkrankungen, Bluthochdruck, Herzinsuffizienz, Diabetes und Fettleibigkeit. Eindeutige Bewertung der Rolle des sympathischen Nervensystems ist daher unerlässlich für die richtige Interpretation der Versuchsergebnisse und Verständnis von Krankheitsprozessen. RSNA wurde traditionell bei anästhesierten Nagetieren, einschließlich Mäusen gemessen. Allerdings zeigen Mäuse in der Regel sehr geringen systemischen Blutdruck und hämodynamische Instabilität für mehrere Stunden während der Anästhesie und Chirurgie. Sinnvolle Interpretation der RSNA ist durch diese unphysiologischen Zustand, da die intime Beziehung zwischen nervös Sympathikotonus und Herz-Kreislauf-Status verwechselt. Um diese Einschränkung der traditionellen Ansätzen zu begegnen, haben wir eine neue Methode zur Messung der RSNA in bewusst, frei beweglichen Mäusen entwickelt. Mäuse wurden mit Radio-Entfernungsmesser für die kontinuierliche Überwachung von Blutdruck und eine Vena venöse Infusion Katheter sowie speziell angefertigte bipolare Elektrode für die direkte Aufnahme der RSNA chronisch instrumentiert. Nach einer Erholungsphase von 48-72 Stunden Überlebensrate lag bei 100 % und alle Mäuse verhielt sich normal. Zu diesem Zeitpunkt verzeichnete RSNA erfolgreich in 80 % der Mäuse, mit lebensfähigen Signale bzw. bis zu 4 und 5 Tage nach der Operation bei 70 % und 50 % der Mäuse, erworben. Physiologische Blutdrücke verzeichneten alle Mäuse (116±2 MmHg; n = 10). Aufgezeichnete RSNA erhöht mit Essen und Pflege, in der Literatur so gut eingerichtet. Darüber hinaus wurde RSNA ganglionic Blockade und Modulation des Blutdrucks mit pharmakologischer Substanzen überprüft. Hier ist eine effektive und handhabbare Methode für klare Aufnahmen der RSNA in bewusst, frei beweglichen Mäuse beschrieben.

Im Anschluss an das beschriebene Protokoll wurde Überlebensrate 100 % - alle Mäuse, die in dieser Studie überlebten und erholte sich auch nach dem chirurgischen Eingriff instrumentiert. Innerhalb von 24 Stunden nach der OP Vorbereitung, alle Mäuse normalerweise Verhalten ausstellen, typisches Essen, Pflege und exploratives Verhalten. Keine Tiere zeigten Anzeichen von Schmerzen oder Ängste zu diesem Zeitpunkt. 48 Stunden nach der Operation, verzeichnete eine überprüfbare und klares Signal ...

Narkotisierten Mäuse zeigen unphysiologischen systemischen Blutdruck, die aussagekräftige Beurteilung der autonomen Ton gegeben die intime Beziehung zwischen Blutdruck und das vegetative Nervensystem ausschließt. Somit ist eine neuartige Methode zur gleichzeitig aufzeichnen renalen sympathischen Nerven-Aktivität und Blutdruck mit intravenösen Infusion in bewusste Mäuse skizziert.

Neuer Ansatz zur gleichzeitigen Erfassung von renalen sympathischen Nerven-Aktivität und Blutdruck mit intravenösen Infusion in dem Bewusstsein, hemmungslose Mäuse.

Renal sympathetic nerves contribute significantly to both physiological and pathophysiological phenomena. Evaluating renal sympathetic nerve activity ...

Das übergeordnete Ziel dieser neuartigen chirurgischen und experimentellen Methode ist es, die sympathische Aktivität der Niere bei bewussten, nicht fixierten Mäusen zu bewerten, ohne dass die Anästhesieeffekte beeinträchtigt werden. Angesichts des jüngsten Interesses an Mausmodellen bietet dieser Ansatz eine zugängliche Technik, mit der der autonome Tonus bei bewussten Mäusen zuverlässig beurteilt werden kann. Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass die Nervenaktivität in der bewussten, bequem ruhenden Maus ohne Störfaktoren wie Anästhesie oder Fixierung beurteilt werden kann.Nachdem Sie die Maus für die Operation vorbereitet haben, positionieren Sie sie auf der rechten Seite, wobei das rostrale Ende nach links zeigt. Zuerst machen Sie mit dem Skalpell einen fünf Millimeter großen Schnitt im mittleren Rückenbereich. Zweitens machen Sie einen größeren Schnitt in der Haut über der linken Flanke senkrecht zur Wirbelsäule in zwei Millimetern kaudal zum Brustkorb.Von dort aus tunneln Sie eine 13-Gauge-Edelstahlnadel subkutan zur dorsalen Austrittsstelle. Verwenden Sie anschließend eine vorbereitete RSNA-Elektrode. Führen Sie es durch die Nadel und ziehen Sie die Nadel zurück, so dass die Elektrodenspitze auf dem Bauchmuskel der linken Flanke liegt.Ein Teil des Elektrodenkabels sollte unter die Haut ragen. Legen Sie nun die linke Niere frei, schieben Sie die Elektrodenspitze zur Seite und machen Sie einen Schnitt im Bauchmuskel, der direkt unter dem Hautschnitt liegt. Öffnen Sie anschließend das Operationsfeld mit Mikro-Retraktoren und ziehen Sie die Niere zurück.Trennen Sie mit Applikatoren das Fett und das Bindegewebe entlang des Rückenmuskels, um die Niere zu betrachten. Dehnen Sie das neurovaskuläre Bündel der Niere nicht, da dies den Nerv irreversibel schädigt und das Experiment beeinträchtigt. Um das renale neurovaskuläre Bündel zu visualisieren, verwenden Sie ein Hochleistungsobjektiv.Es befindet sich normalerweise entlang der Nierengefäße. Präparieren Sie nun ganz vorsichtig mit einer feinen, geraden Pinzette das Nervenbündel aus dem umgebenden Gewebe. Berühren Sie nicht das Nervenbündel und stören Sie nicht die Gefäße, die den Nerv versorgen.Es ist wichtig, das Nervenbündel während dieses Prozesses in Takt zu halten. Führen Sie als Nächstes die RSNA-Elektrodenspitze in den Bauch ein. Positionieren Sie die Spitze und das Erdungskabel senkrecht zum neurovaskulären Nierenbündel.Das Erdungskabel muss einen guten Kontakt mit dem darunter liegenden Gewebe haben. Heben Sie dann vorsichtig das Nierennervenbündel mit einer abgewinkelten Pinzette an, schieben Sie die Elektrodenspitze unter den Nerv und legen Sie den Nerv so, dass er in direktem Kontakt mit beiden Drähten steht, aber lassen Sie die Elektrode die Nierengefäße nicht zusammendrücken. Schieben Sie anschließend ein kleines Stück sterilisierten Paraffinfilm zwischen die Nervendrähte und das Erdungskabel.Saugen Sie dann das Blut und die Flüssigkeit mit kleinen saugfähigen Stangen auf. Um die Elektrodenspitze elektrisch zu isolieren, tragen Sie vorsichtig gerade so viel Zweikomponenten-Silikonelastomer unter und um den Nerv herum auf. Heben Sie das Silikon nach einigen Minuten Aushärtung vorsichtig mit einer Pinzette an und befestigen Sie es mit einer kleinen Menge flüssigem chirurgischem Klebstoff.Schließen Sie dann den Bauchschnitt mit diskontinuierlichen resorbierbaren 50er Nähten und machen Sie dasselbe mit der darüber liegenden Haut. Im nächsten Abschnitt wird die Implantation des Blutdrucktelemeters beschrieben. Beginnen Sie damit, die Maus wieder auf den Rücken zu legen, wobei das rostrale Ende in Richtung des Chirurgen zeigt.Passen Sie die Anästhesie nach Bedarf an und verabreichen Sie eine zweite Dosis Glykopyrrolat. Machen Sie dann mit dem Skalpell einen Mittellinienschnitt im Halsbereich, der knapp unter dem Unterkiefer beginnt und sich bis knapp über den Brustkorb erstreckt. Trennen Sie nun das Drüsengewebe, um die darunter liegende Nackenmuskulatur freizulegen.Achten Sie sehr darauf, den Vagusnerv nicht zu beschädigen, und legen Sie die linke Halsschlagader frei und trennen Sie sie vom umgebenden Gewebe. Führen Sie nun drei Stücke 60 Seidennähte unter die Arterie ein, die sich über die gesamte Länge ihrer Freilegung erstrecken. Positionieren Sie eine Naht rostral und binden Sie sie, um das Gefäß zu verschließen.Positionieren Sie eine zweite Naht in der Mitte und binden Sie sie locker und positionieren Sie die dritte Naht kaudal und binden Sie sie locker zusammen. Ziehen Sie dann die rostralste Naht zurück und befestigen Sie sie mit einem kleinen Stück Nabelband am Nasenkonus. Ziehen Sie dann mit einer Mikro-Mückenzange die kaudalste Naht zurück, um den Blutfluss einzuschränken.Machen Sie nun mit einer feinen Federschere einen kleinen Schnitt in die Gefäßwand so rostral wie möglich. Führen Sie durch den Schnitt den Radiotelemeterkatheter ein und schieben Sie ihn bis zur Schwanznaht vor. Ziehen Sie die mittlere Naht fest, um sie zu stabilisieren.Lösen Sie als Nächstes die kaudale Retraktion und schieben Sie den Katheter 10 Millimeter vor. Sichern Sie dann den Katheter mit der Naht. Tunneln Sie schließlich den Telemeterkörper in eine subkutane Tasche entlang der rechten Flanke und fahren Sie mit der Implantation in den Jugularvenenkatheter fort.Beginnen Sie mit Applikatoren mit Wattespitze, um die rechte Halsvene freizulegen. Führen Sie dann zwei Stücke 60er Seidennaht um die Vene herum. Positionieren Sie eine Säule weit rostral und binden Sie sie fest, um die Vene zu verschließen.Positionieren Sie den anderen weit nach kaudal und ziehen Sie ihn vorsichtig zurück, um den Blutfluss im Gefäß zu stoppen. Als nächstes machst du mit einer feinen Federschere einen kleinen Schnitt in die Gefäßwand so nah wie möglich an der rostralen Naht. Kathetisieren Sie dann die Vene mit einem wärmegedehnten, mit Kochsalzlösung gefüllten Schlauch.Schieben Sie nun den Katheter acht Millimeter in die Vene vor und sichern Sie ihn mit den Seidenfäden und einem kleinen Tropfen Gelformel Cyanacrylat. Drehen Sie nun die Maus auf die linke Seite und verwenden Sie eine 13-Gauge-Nadel, um den Katheter vom Hals bis zum Ausgang zu tunneln, der im dorsalen mittleren Schulterblattbereich vorbereitet ist. Positionieren Sie dann die Maus wieder auf dem Rücken und schließen Sie den Halsschnitt mit diskontinuierlichen 50 Nähten.Legen Sie nun das Tier in die Bauchlage und schieben Sie einen kleinen subkutanen Knopf in Edelstahlfeder auf den Venenkatheter. Befestigen Sie den Knopf mit Nähten unter der Haut. Befestigen Sie dann den Polyethylen-Sockel, der die Elektrodenleitungen zum darunter liegenden Muskel schützt, mit Gewebekleber.Zum Schluss nähen Sie die darüber liegende Haut über den Flansch, um zusätzlichen Halt zu erhalten. Halten Sie die Mäuse bei der gleichen Temperatur und Luftfeuchtigkeit, die sie während der RSNA-Aufnahmen erleben werden. Gönnen Sie den Mäusen mindestens 30 Minuten Stabilisierung in der Aufzeichnungseinrichtung, bevor Sie eine Stunde lang den Ausgangsblutdruck und die RSNA-Daten aufzeichnen.Stellen Sie sicher, dass die Maus während der Aufnahmen ruhig ruht, da natürliche Bewegungen mit einer Zunahme des Sympathikustons verbunden sind. Während der Aufnahme ist es wichtig, die Bewegungen des Tieres zu beachten. Solche Notizen können direkt auf der digitalen Spur gemacht werden.Fahren Sie nun mit der Messung des Ansprechens auf intravenös verabreichte Substrate fort. Später, nach der Euthanasie, fahren Sie mit den Messungen für 30 Minuten fort. Nach dem beschriebenen Protokoll überlebten 12 von 12 Mäusen und erholten sich gut.Innerhalb von 24 Stunden verhielten sich die Mäuse normal und zeigten keine Anzeichen von Beschwerden. 48 Stunden nach der Operation wurde bei 10 der 12 Mäuse ein überprüfbares und eindeutiges RSNA-Signal aufgezeichnet. Die typischen Erhöhungen von RSNA, die bei normaler Aktivität wie Essen und Körperpflege erwartet werden, waren beobachtbar.Nach 120 Stunden zeigten fünf Mäuse immer noch ein qualitativ hochwertiges RSNA-Signal. Blutdruck und Herzfrequenz blieben während des fünftägigen Untersuchungszeitraums stabil und unterschieden sich nicht von denen, die über 10 Tage nach der chirurgischen Genesung aufgezeichnet wurden. Um zu verifizieren, dass RSNA mit dem arteriellen Baro-Reflex mitgerissen wurde, wurden die Mäuse mit Natriumnitroprussid und Phenylephrin behandelt.Der RSNA-Spiegel stieg charakteristischerweise als Reaktion auf die induzierte Senkung des arteriellen Drucks an und wurde umgekehrt mit erhöhtem arteriellen Druck praktisch zum Schweigen gebracht. Des Weiteren wurde RSNA nach einer ganglionären Blockade mit Hexamethonium vollständig eliminiert. Diese Beobachtung unterstützt die postganglionäre Natur des RSNA-Signals.Einmal gemeistert, kann diese Operationstechnik bei richtiger Ausführung in weniger als drei Stunden abgeschlossen werden. Wenn Sie dieses Verfahren versuchen, ist es wichtig, immer daran zu denken, beim Umgang mit den Nierennerven große Sorgfalt walten zu lassen, um ihre Lebensfähigkeit für spätere Aufzeichnungen zu erhalten. Im Anschluss an dieses Verfahren können andere Methoden wie Luftstrahlstress verwendet werden, um den autonomen Tonus bei bewussten Mäusen weiter zu beurteilen.Mit ihrer Entwicklung eröffnet diese Technik Forschern neue Möglichkeiten, die wichtigen Beiträge des autonomen Nervensystems zu Schlüsselbereichen der kardiovaskulären Physiologie und Pathophysiologie wie der langfristigen Blutdruckkontrolle, Bluthochdruck und Fettleibigkeit zu verstehen.

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Research

Forschung

JoVE Journal

Medicine

Medizin

Elektrophysiologische Charakterisierung von neuronalen Antworten ist für das Verständnis der Gehirnfunktion und für das Führen der Anordnung von Farbstoffen für die Ablaufverfolgung Weg wichtig. Allerdings sind viele Studien an narkotisierten Tieren durchgeführt. Um die Hirnfunktion ohne Betäubung zu verstehen, entwickelten wir eine Methode, um neuronale Antwort Eigenschaften zu erfassen und zu injizieren Farbstoffe in wach-Maus.

Die Erstellung eines Awake Mausklick für Aufnahme neuronalen Antworten und Einspeisen von Tracer

Dieses Video demonstriert eine Technik zur Untersuchung der Aktivität von renalen sympathischen Nerven (RSNs) als Reaktion auf Veränderungen des arteriellen Drucks bei Ratten. Beim Anlegen eines Druckkatheters an die Oberschenkelarterie werden die sympathischen Nerven der Niere freigelegt. Die Nerven werden dann auf eine Aufzeichnungselektrode gehoben und ihre elektrische Aktivität aufgezeichnet. Als nächstes wird ein gefäßverengendes Medikament injiziert, um den Blutdruck zu erhöhen, und...

Aufzeichnung von Veränderungen der Aktivität des sympathischen Nervus der Niere in der Niere als Reaktion auf den arteriellen Druck bei Ratten

Dieser Film zeigt, wie die systemische und hepatische Hämodynamik bei Mäusen zu erwerben. Die ganze Überwachung umfasst Erwerb von Vitalparametern, systemischer Blutdruck, zentraler Venendruck, gemeinsame Leberarterie Strömungsrate und Pfortader Druck sowie das Portal Flussrate bei Mäusen.

Überwachung der System und Leber hämodynamischen Parameter in Mäuse

Wir stellen Methoden zur Konstruktion von Elektroden vor, um gleichzeitig extrazelluläre neuronale Aktivität aufzuzeichnen und mehrere neuroaktive Substanzen in der Nähe der Aufzeichnungsstellen bei wachen Mäusen freizusetzen. Diese Technik ermöglicht die detaillierte Analyse mutmaßlicher lokaler synaptischer Eingaben an das interessierende Neuron.

Die extrazelluläre Aufnahme neuronaler Aktivität in Kombination mit Microiontophoretic Anwendung von neuroaktiven Substanzen in Awake Mäuse

Das Ziel dieses Protokolls ist es, den systemischen Blutdruck bei bewussten, sich frei bewegenden Mäusen mit implantierbaren Radio-Telemetrie-Geräten zu bestimmen.

Langzeit-Blutdruckmessung in sich frei bewegenden Mäuse Telemetrie

Methoden zur Messung der sympathischer und Herz-Kreislauf-Antworten auf zentrale Nervensystem (ZNS) Manipulationen sind wichtig für die Förderung der Neurowissenschaften. Dieses Protokoll wurde entwickelt, um Wissenschaftler mit Messung und Quantifizierung der akute Veränderungen im renalen sympathischen Nerven-Aktivität (RSNA) bei anästhesierten Ratten (Überleben) zu unterstützen.

Quantifizierung der akute Veränderungen im renalen sympathischen Nerven Aktivität als Reaktion auf Zentralnervensystem Manipulationen bei anästhesierten Ratten

Hier beschreiben wir eine Einrichtung zur gleichzeitigen Erfassung von Elektrokardiographie und intra-arterielle Blutdruck (BP) in experimentellen Ratten, die mit standard-Ausrüstung in Tierhaltung möglich ist und können auch auf physiologische oder pharmakologische Studien zur Pathogene oder therapeutische Mechanismen in der Herz-Kreislauf-Medizin zu untersuchen.

Gleichzeitige Elektrokardiographie Aufnahme und Invasive Blut Druckmessung bei Ratten

Der Baroreflex ist ein Mechanismus zur Regulierung der Herzfrequenz durch das autonome Nervensystem als Reaktion auf Blutdruckänderungen. Wir beschreiben eine Operationstechnik zur Implantation von Telemetriesendern zur kontinuierlichen und simultanen Messung von Elektrokardiogramm und Blutdruck bei Mäusen. Dadurch kann die spontane Baroreflexsensitivität bestimmt werden, ein wichtiger prognostischer Marker für Herz-Kreislauf-Erkrankungen.

Implantation von kombinierten telemetrischen EKG- und Blutdrucktransmittern zur Bestimmung der spontanen Baroreflexsensitivität bei bewussten Mäusen

Das vorliegende Protokoll beschreibt eine langfristige kontinuierliche Messung des renalen Blutflusses bei bewussten Ratten und die gleichzeitige Erfassung des Blutdrucks mit implantierten Kathetern (flüssigkeitsgefüllt oder telemetrisch).

Kontinuierliche Langzeitmessung des renalen Blutflusses bei bewussten Ratten

Dieses Protokoll beschreibt eine Methode, um in vivo Einzelneuronen-Aufzeichnungen mit hoher Dichte aus dem Hirnstamm von kopffixierten Mäusen zu erhalten. Dieser Ansatz wird eingesetzt, um das Aktionspotentialfeuer von Neuronen im ventrolateralen periaquäduktalen Grau - einer Hirnstammregion, die während des REM-Schlafs (Rapid Eye Movement) inaktiv ist - vor und während der Vollnarkose zu messen.

Akute Einzel-Multi-Elektroden-Ableitungen aus dem Hirnstamm von Mäusen mit fixiertem Kopf

Lernen Sie eine Methode zur gleichzeitigen Erfassung renaler sympathischer Nervenaktivität und Blutdruck bei wachen, unfixierten Mäusen ohne Anästhesieeinflüsse. Diese Technik ermöglicht zuverlässige autonome Bewertungen.

Neuer Ansatz zur gleichzeitigen Erfassung von renalen sympathischen Nerven-Aktivität und Blutdruck mit intravenösen Infusion in dem Bewusstsein, hemmungslose Mäuse. (Video) | JoVE Journal

Neuer Ansatz zur gleichzeitigen Erfassung von renalen sympathischen Nerven-Aktivität und Blutdruck mit intravenösen Infusion in dem Bewusstsein, hemmungslose Mäuse.

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