Name: Die Messung der Überlebensdauer in Brachionus Rotifers: Synchronisation von Maternal Bedingungen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-07-22T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 18 s
Description: Lernen Sie die Messung der Überlebensdauer bei Brachionus-Rotiferen durch Synchronisation maternalbedingter Einflüsse über mehrere Generationen. Diese reproduzierbare Methode liefert zuverlässige Daten für die Alternsforschung.

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Wir danken George Jarvis, Martha Bock und Bette Hecox-Lea, Marine Biological Laboratory, für ihre Hilfe bei der Verfilmung.

1. Herstellung von Medien Hinweis: Verwenden Sie Halb verdünnt Brujewicz künstlichem Meerwasser Salzgehalt 16,5 ppt (PSU). Andere künstliche seawaters werden auch häufig verwendet , um Kultur Brachionus rotifers 25,26. <ol><li> Hinzufügen 454 mM NaCl, 26 mM MgCl 2, 27 mM MgSO 4, 10 mM KCl, und 10 mM CaCl 2 bis 4,5 L destilliertem Wasser (Endvolumen 5 wird L sein). Alternativ dazu können Sie entsalztem Verdünnungswasser anstelle von destilliertem Wasser. In CaCl 2 , nachdem alle anderen Salze aufzulösen. </li><li> Bereiten Sie die 0,48 M NaHCO 3 - Stammlösung (200x Konzentration). 25 ml davon zu der obigen Lösung. Die Endkonzentration von NaHCO 3 beträgt 2,4 mM. </li><li> Bereiten Sie die 0,4 M NaBr-Stammlösung (500x Konzentration). 10 ml davon zu der obigen Lösung. Die Endkonzentration von NaBr 0,8 mM. Machen Sie bis zu 5 L mit destilliertem Wasser. </li><li> Filtern der Lösung mit einem 0,45 um-Membranfilter.Verdünnen zweimal mit sterilem Wasser vor der Verwendung (v / v). Hinweis: Es ist möglich, eine 2x Konzentration von Brujewicz künstlichem Meerwasser als Stammlösung zu machen. </li></ol> 2. Allgemeine Kulturbedingungen <ol><li> Kultur im Labor erhöht oder Wild gefangen Rotatorien in einem sterilen 100-ml-Becher zwischen 20 und 30 ° C. Höhere Temperaturen führen zu kürzeren Lebensdauer und eine beschleunigte Wiedergabe. Verwenden 25 ° C für die Bequemlichkeit der Experimente. Die rotifer Dichte oder Volumen von künstlichem Meerwasser ist kein großes Problem hier. </li><li> Kultur Nahrungs Mikroalge Spezies in künstlichem Meerwasser 11. Siehe Snell et al. (2014) für weitere Einzelheiten 11. Typischerweise verwenden Tetraselmis tetrathele (~ 2 x 10 5 Zellen / ml 27,28), T. suecica (~ 6 x 10 5 Zellen / ml 25,29) und Nannochloropsis oculata (~ 7 x 10 6 Zellen / ml 30,31). Da Diätalgen (Arten, Kultur conditIonen, biochemische Zusammensetzungen) , beeinflusst maßgeblich die Überlebenszeit von Brachionus Rotatorien, die gleiche Menge Mikroalge in allen Versuchsgruppen verwenden. </li><li> Halten Sie eine Stammpopulation von Rotatorien in einer Batch - Kultur durch die Fütterung und wechselnden Medien gelegentlich (zB füttern alle 2 Tage und impfen jede Woche). Viele Neugeborene und Erwachsene 2-3 Eier tragen, können beobachtet werden, wenn Rotatorien unter optimalen Bedingungen sind. Hinweis: Eine alternative Möglichkeit, experimentelle Rotatorien zu erhalten, ist Dauereier auszubrüten. Rotifers aus ruhenden Eier ausgebrütet werden als gut synchronisiert werden, und ihre Lebensdauer ist nicht signifikant verschieden von der aus amictic Eier 11 schraffiert Rotatorien. Allerdings rotifers aus ruhenden Eier beginnen Reproduktion früher als die aus amictic Eier. Daher ist Vorsicht für Messungen ihrer Reproduktionsmerkmale erforderlich. </li></ol> 3. Synchronisation von Rotifers von Pre-Kultur <ol><li> Wählen Sie einen einzelnen rotifer aus dem stock Bevölkerung und Kultur wie in 2,1-2,3 beschrieben eine Subpopulation zu etablieren, die für Experimente verwendet werden. Typischerweise Kultur für zwei Wochen. </li><li> Sammeln egg tragenden Rotatorien vom Subpopulation (eine doppelte Anzahl von Personen zu sammeln, die für das Experiment verwendet wird). Kultur als eine einzige Kohorte (Dichte: ~ 50 Personen / ml) in einer 6-Well - Kulturplatte wie in 2,1-2,3 in einem frischen Medien unter Ad - libitum - Fütterung beschrieben. Controlling Bevölkerungsdichte ist wichtig , weil das konditionierte Medium 32,33 Fortpflanzungsphysiologie von Brachionus rotifers beeinflusst. </li><li> Übertragen ausgebrütet Neugeborenen von der ersten Eier &quot;Erwachsene neu vorbereitet Kulturmedien. Wiederholen Sie diese Prozedur über 2-3 Generationen. </li><li> Verwenden innerhalb eines bestimmten Zeitraums schraffierten Neugeborenen (zB &lt;3 h) , um die Überlebenszeit gemessen wird . Um zu vermeiden, eine mögliche Verzerrung des einzelnen Individuums bei der Auswahl, wenn auch sehr unwahrscheinlich, überprüfen Reproduzierbarkeit unter Verwendung mehrerer independent Subpopulationen. Hinweis: Da Rotatorien der Regel nur ungeschlechtlich unter dieser Bedingung zu reproduzieren, sicherzustellen, dass keine Männchen während des gesamten Experiments vorhanden sind. Die Männchen sind kleiner als Neugeborene und in der Regel bewegen sich schneller als Frauen. Mictic Weibchen haben unterschiedliche Lebensdauern von amictic Weibchen unter bestimmten Bedingungen 29. </li></ol> 4. Messungen der Überlebenszeit <ol><li> Ort Neugeborenen in Kunststoffplatten (typischerweise 24- oder 48-Well-Platten, wobei jede Vertiefung mit 1 ml künstlichem Meerwasser). </li><li> Nach 24 h Intervallen, übertragen Sie die Rotatorien neu vorbereitet Kulturmedien oder in 12 Stunden Intervallen, wenn bei höherer Temperatur (30 ° C oder höher). Notieren Sie die Anzahl der Nachkommen und ob jeder einzelne ist tot oder lebendig. Notieren Sie sich die rotifer als tot, wenn Zilien Bewegung der Korona vollständig zum Stillstand gekommen ist. Anmerkung: Rotifers befestigen häufig an den Seitenwänden der Vertiefungen. Vorsichtiges Pipettieren des Wassers hilft, sie zu finden. Wenn rotifers nicht gefunden oder are versehentlich durch Pipettieren beschädigt, sie aufzunehmen als &quot;zensiert&quot;, nicht als &quot;tot&quot;. </li><li> Entfernen Neugeborenen, wenn experimentelle rotifers aktiv reproduzieren sind. Neugeborenen wachsen schnell und es ist manchmal schwierig, sie aus experimentellen Rotatorien zu unterscheiden. </li></ol> 5. Datenanalyse <ol><li> Erstellen Sie die Kaplan-Meier - Überlebenskurve (Abbildungen 1 und 2) durch kumulative Überlebensrate auf der Y - Achse und die Zeit auf der X - Achse aufgetragen ist . Dies ist die häufigste Darstellung der Überlebensdaten. Verwenden Sie den nicht-parametrischer Log-Rank - Test auf statistische Vergleich der Überlebenszeit 34 (auch Mantel-Cox - Test genannt). Die Log-Rank-Test wird auch in anderen statistischen Standardpakete wie JMP und R. enthalten Hinweis: da Normalverteilung 35 durch das Überleben Daten erfüllt in der Regel nicht nicht Student-t-Test oder Varianzanalyse (ANOVA) , gefolgt von parametrischer mehrere Vergleich verwenden. Auch sind diese methods nehmen nicht zensiert Personen berücksichtigt. Mann-Whitney U-Test kann verwendet werden, wenn es keine zensierten Daten ist. </li></ol>

<ol><li>Wallace, R. L., Snell, T. W., Ricci, C., Nogrady, T. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWallace%2C+RL+%22Rotifera+Vol.1%3A+Biology%2C+ecology+and+systematics%22">Rotifera Vol.1: Biology, ecology and systematics</a>. , 2nd edn, SPB Academic Publishing. (2006).</li>
<li>Segers, H. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSegers%2C+H+%22Annotated+checklist+of+the+rotifers+%28Phylum+Rotifera%29%2C+with+notes+on+nomenclature%2C+taxonomy+and+distribution%22">Annotated checklist of the rotifers (Phylum Rotifera), with notes on nomenclature, taxonomy and distribution</a>. , Magnolia Press. Auckland. (2007).</li>
<li>Mark Welch, D. B., Meselson, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+for+the+evolution+of+bdelloid+rotifers+without+sexual+reproduction+or+genetic+exchange%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Evidence for the evolution of bdelloid rotifers without sexual reproduction or genetic exchange.</a> Science. 288 (5469), 1211-1215 (2000).</li>
<li>Suga, K., Mark Welch, D., Tanaka, Y., Sakakura, Y., Hagiwara, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+expressed+sequence+tags+of+the+cyclically+parthenogenetic+rotifer+Brachionus+plicatilis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Analysis of expressed sequence tags of the cyclically parthenogenetic rotifer Brachionus plicatilis.</a> PLoS ONE. 2, e671(2007).</li>
<li>Denekamp, N. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Discovering+genes+associated+with+dormancy+in+the+monogonont+rotifer+Brachionus+plicatilis%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Genomics%22%5BJournal%5D)">Discovering genes associated with dormancy in the monogonont rotifer Brachionus plicatilis.</a> BMC Genomics. 10, 108(2009).</li>
<li>Lee, J. -S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sequence+analysis+of+genomic+DNA+%28680+Mb%29+by+GS-FLX-Titanium+sequencer+in+the+monogonont+rotifer%2C+Brachionus+ibericus%5BTitle%5D)+AND+%22Hydrobiologia%22%5BJournal%5D)">Sequence analysis of genomic DNA (680 Mb) by GS-FLX-Titanium sequencer in the monogonont rotifer, Brachionus ibericus.</a> Hydrobiologia. 662 (1), 65-75 (2010).</li>
<li>Flot, J. -F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genomic+evidence+for+ameiotic+evolution+in+the+bdelloid+rotifer+Adineta+vaga%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Genomic evidence for ameiotic evolution in the bdelloid rotifer Adineta vaga.</a> Nature. 500 (7463), 453-457 (2013).</li>
<li>Dunn, C. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Broad+phylogenomic+sampling+improves+resolution+of+the+animal+tree+of+life%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Broad phylogenomic sampling improves resolution of the animal tree of life.</a> Nature. 452 (7188), 745-749 (2008).</li>
<li>Yoshinaga, T., Kaneko, G., Kinoshita, S., Tsukamoto, K., Watabe, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+molecular+mechanisms+of+life+history+alterations+in+a+rotifer%3A+a+novel+approach+in+population+dynamics%5BTitle%5D)+AND+%22Comp.+Biochem.+Physiol.+B+Biochem.+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">The molecular mechanisms of life history alterations in a rotifer: a novel approach in population dynamics.</a> Comp. Biochem. Physiol. B Biochem. Mol. Biol. 136 (4), 715-722 (2003).</li>
<li>Dahms, H. -U., Hagiwara, A., Lee, J. -S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ecotoxicology%2C+ecophysiology%2C+and+mechanistic+studies+with+rotifers%5BTitle%5D)+AND+%22Aquat.+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Ecotoxicology, ecophysiology, and mechanistic studies with rotifers.</a> Aquat. Toxicol. 101 (1), 1-12 (2011).</li>
<li>Snell, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rotifers+as+models+for+the+biology+of+aging%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+Rev.+Hydrobiol%22%5BJournal%5D)">Rotifers as models for the biology of aging.</a> Int. Rev. Hydrobiol. 99 (1-2), 84-95 (2014).</li>
<li>Snell, T. W., Johnston, R. K., Gribble, K. E., Mark Welch, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rotifers+as+experimental+tools+for+investigating+aging%5BTitle%5D)+AND+%22Invertebr.+Reprod.+Dev%22%5BJournal%5D)">Rotifers as experimental tools for investigating aging.</a> Invertebr. Reprod. Dev. 59, Suppl 1. 5-10 (2015).</li>
<li>Kaneko, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+characterization+of+Mn-superoxide+dismutase+and+gene+expression+studies+in+dietary+restricted+Brachionus+plicatilis+rotifers%5BTitle%5D)+AND+%22Hydrobiologia%22%5BJournal%5D)">Molecular characterization of Mn-superoxide dismutase and gene expression studies in dietary restricted Brachionus plicatilis rotifers.</a> Hydrobiologia. 546, 117-123 (2005).</li>
<li>Yoshinaga, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insulin-like+growth+factor+signaling+pathway+involved+in+regulating+longevity+of+rotifers%5BTitle%5D)+AND+%22Hydrobiologia%22%5BJournal%5D)">Insulin-like growth factor signaling pathway involved in regulating longevity of rotifers.</a> Hydrobiologia. 546, 347-352 (2005).</li>
<li>Ozaki, Y., Kaneko, G., Yanagawa, Y., Watabe, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calorie+restriction+in+the+rotifer+Brachionus+plicatilis+enhances+hypoxia+tolerance+in+association+with+the+increased+mRNA+levels+of+glycolytic+enzymes%5BTitle%5D)+AND+%22Hydrobiologia%22%5BJournal%5D)">Calorie restriction in the rotifer Brachionus plicatilis enhances hypoxia tolerance in association with the increased mRNA levels of glycolytic enzymes.</a> Hydrobiologia. 649 (1), 267-277 (2010).</li>
<li>Kailasam, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+calorie+restriction+on+the+expression+of+manganese+superoxide+dismutase+and+catalase+under+oxidative+stress+conditions+in+the+rotifer+Brachionus+plicatilis%5BTitle%5D)+AND+%22Fish.+Sci%22%5BJournal%5D)">Effects of calorie restriction on the expression of manganese superoxide dismutase and catalase under oxidative stress conditions in the rotifer Brachionus plicatilis.</a> Fish. Sci. 77 (3), 403-409 (2011).</li>
<li>Garcìa-Garcìa, G., Sarma, S., Núñez-Orti, A. R., Nandini, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+the+mixture+of+two+endocrine+disruptors+%28ethinylestradiol+and+levonorgestrel%29+on+selected+ecological+endpoints+of+Anuraeopsis+fissa+and+Brachionus+calyciflorus+%28Rotifera%29%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+Rev.+Hydrobiol%22%5BJournal%5D)">Effects of the mixture of two endocrine disruptors (ethinylestradiol and levonorgestrel) on selected ecological endpoints of Anuraeopsis fissa and Brachionus calyciflorus (Rotifera).</a> Int. Rev. Hydrobiol. 99 (1-2), 166-172 (2014).</li>
<li>Yang, J., Mu, Y., Dong, S., Jiang, Q., Yang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+the+expression+of+four+heat+shock+proteins+during+the+aging+process+in+Brachionus+calyciflorus+%28rotifera%29%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stress+Chaperones%22%5BJournal%5D)">Changes in the expression of four heat shock proteins during the aging process in Brachionus calyciflorus (rotifera).</a> Cell Stress Chaperones. 19 (1), 33-52 (2014).</li>
<li>Han, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sublethal+gamma+irradiation+affects+reproductive+impairment+and+elevates+antioxidant+enzyme+and+DNA+repair+activities+in+the+monogonont+rotifer+Brachionus+koreanus%5BTitle%5D)+AND+%22Aquat.+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Sublethal gamma irradiation affects reproductive impairment and elevates antioxidant enzyme and DNA repair activities in the monogonont rotifer Brachionus koreanus.</a> Aquat. Toxicol. 155, 101-109 (2014).</li>
<li>Gribble, K. E., Jarvis, G., Bock, M., Mark Welch, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maternal+caloric+restriction+partially+rescues+the+deleterious+effects+of+advanced+maternal+age+on+offspring%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+Cell%22%5BJournal%5D)">Maternal caloric restriction partially rescues the deleterious effects of advanced maternal age on offspring.</a> Aging Cell. 13 (4), 623-630 (2014).</li>
<li>Yoshinaga, T., Hagiwara, A., Tsukamoto, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+periodical+starvation+on+the+survival+of+offspring+in+the+rotifer+Brachionus+plicatilis%5BTitle%5D)+AND+%22Fish.+Sci%22%5BJournal%5D)">Effect of periodical starvation on the survival of offspring in the rotifer Brachionus plicatilis.</a> Fish. Sci. 67 (2), 373-374 (2001).</li>
<li>Kaneko, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calorie+restriction-induced+maternal+longevity+is+transmitted+to+their+daughters+in+a+rotifer%5BTitle%5D)+AND+%22Funct.+Ecol%22%5BJournal%5D)">Calorie restriction-induced maternal longevity is transmitted to their daughters in a rotifer.</a> Funct. Ecol. 25 (1), 209-216 (2011).</li>
<li>Lansing, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+transmissible%2C+cumulative%2C+and+reversible+factor+in+aging%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Gerontol%22%5BJournal%5D)">A transmissible, cumulative, and reversible factor in aging.</a> J. Gerontol. 2 (3), 228-239 (1947).</li>
<li>Yoshinaga, T., Hagiwara, A., Tsukamoto, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+periodical+starvation+on+the+life+history+of+Brachionus+plicatilis+O.+F.+M%C3%BCller+%28Rotifera%29%3A+a+possible+strategy+for+population+stability%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Mar.+Biol.+Ecol%22%5BJournal%5D)">Effect of periodical starvation on the life history of Brachionus plicatilis O. F. Müller (Rotifera): a possible strategy for population stability.</a> J. Exp. Mar. Biol. Ecol. 253 (2), 253-260 (2000).</li>
<li>Gribble, K. E., Kaido, O., Jarvis, G., Mark Welch, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patterns+of+intraspecific+variability+in+the+response+to+caloric+restriction%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Gerontol%22%5BJournal%5D)">Patterns of intraspecific variability in the response to caloric restriction.</a> Exp. Gerontol. 51, 28-37 (2014).</li>
<li>Snell, T. W., Johnston, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glycerol+extends+lifespan+of+Brachionus+manjavacas+%28Rotifera%29+and+protects+against+stressors%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Gerontol%22%5BJournal%5D)">Glycerol extends lifespan of Brachionus manjavacas (Rotifera) and protects against stressors.</a> Exp. Gerontol. 57, 47-56 (2014).</li>
<li>Kim, H. -J., Hagiwara, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+female+aging+on+the+morphology+and+hatchability+of+resting+eggs+in+the+rotifer+Brachionus+plicatilis+M%C3%BCller%5BTitle%5D)+AND+%22Hydrobiologia%22%5BJournal%5D)">Effect of female aging on the morphology and hatchability of resting eggs in the rotifer Brachionus plicatilis Müller.</a> Hydrobiologia. 662 (1), 107-111 (2011).</li>
<li>Kim, H. -J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Light-dependent+transcriptional+events+during+resting+egg+hatching+of+the+rotifer+Brachionus+manjavacas%5BTitle%5D)+AND+%22Mar.+Genomics%22%5BJournal%5D)">Light-dependent transcriptional events during resting egg hatching of the rotifer Brachionus manjavacas.</a> Mar. Genomics. 20, 25-31 (2015).</li>
<li>Gribble, K. E., Welch, D. B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Life-span+extension+by+caloric+restriction+is+determined+by+type+and+level+of+food+reduction+and+by+reproductive+mode+in+Brachionus+manjavacas+%28Rotifera%29%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Gerontol.+A+Biol.+Sci.+Med.+Sci%22%5BJournal%5D)">Life-span extension by caloric restriction is determined by type and level of food reduction and by reproductive mode in Brachionus manjavacas (Rotifera).</a> J. Gerontol. A Biol. Sci. Med. Sci. 68 (4), 349-358 (2013).</li>
<li>Kaneko, G., Kinoshita, S., Yoshinaga, T., Tsukamoto, K., Watabe, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+expression+patterns+of+stress+protein+genes+during+population+growth+of+the+rotifer+Brachionus+plicatilis%5BTitle%5D)+AND+%22Fish.+Sci%22%5BJournal%5D)">Changes in expression patterns of stress protein genes during population growth of the rotifer Brachionus plicatilis.</a> Fish. Sci. 68 (6), 1317-1323 (2002).</li>
<li>Kim, H. J., Sawada, C., Hagiwara, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavior+and+reproduction+of+the+rotifer+Brachionus+plicatilis+species+complex+under+different+light+wavelengths+and+intensities%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+Rev.+Hydrobiol%22%5BJournal%5D)">Behavior and reproduction of the rotifer Brachionus plicatilis species complex under different light wavelengths and intensities.</a> Int. Rev. Hydrobiol. 99 (1-2), 151-156 (2014).</li>
<li>Yoshinaga, T., Hagiwara, A., Tsukamoto, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+conditioned+media+on+the+asexual+reproduction+of+the+monogonont+rotifer+Brachionus+plicatilis+O.+F.+M%C3%BCller%5BTitle%5D)+AND+%22Hydrobiologia%22%5BJournal%5D)">Effect of conditioned media on the asexual reproduction of the monogonont rotifer Brachionus plicatilis O. F. Müller.</a> Hydrobiologia. 412, 103-110 (1999).</li>
<li>Ohmori, F., Kaneko, G., Saito, T., Watabe, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+growth-promoting+protein+in+the+conditioned+media+from+the+rotifer+Brachionus+plicatilis+at+an+early+exponential+growth+phase%5BTitle%5D)+AND+%22Hydrobiologia%22%5BJournal%5D)">A novel growth-promoting protein in the conditioned media from the rotifer Brachionus plicatilis at an early exponential growth phase.</a> Hydrobiologia. 667 (1), 101-117 (2011).</li>
<li>GraphPad Statistics Guide. , Available from:
 <a target="_blank" href="http://www.graphpad.com/guides/prism/6/statistics/">http://www.graphpad.com/guides/prism/6/statistics/</a> (2015).</li>
<li>Collet, D. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCollet%2C+D+%22Modelling+Survival+Data+in+Medical+Research%22">Modelling Survival Data in Medical Research</a>. , 2nd edn, Chapman & Hall/CRC. 151-193 (1993).</li>
<li>Bouliotis, G., Billingham, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crossing+survival+curves%3A+alternatives+to+the+log-rank+test%5BTitle%5D)+AND+%22Trials%22%5BJournal%5D)">Crossing survival curves: alternatives to the log-rank test.</a> Trials. 12, Suppl 1. A137(2011).</li>
<li>Yang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+expression+of+manganese+superoxide+dismutase%2C+copper+and+zinc+superoxide+dismutase+and+catalase+in+Brachionus+calyciflorus+during+the+aging+process%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+ONE%22%5BJournal%5D)">Changes in expression of manganese superoxide dismutase, copper and zinc superoxide dismutase and catalase in Brachionus calyciflorus during the aging process.</a> PloS ONE. 8 (2), e57186(2013).</li>
<li>Snell, T. W., Johnston, R. K., Rabeneck, B., Zipperer, C., Teat, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Joint+inhibition+of+TOR+and+JNK+pathways+interacts+to+extend+the+lifespan+of+Brachionus+manjavacas+%28Rotifera%29%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Gerontol%22%5BJournal%5D)">Joint inhibition of TOR and JNK pathways interacts to extend the lifespan of Brachionus manjavacas (Rotifera).</a> Exp. Gerontol. 52, 55-69 (2014).</li>
<li>Klass, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aging+in+nematode+Caenorhabditis-elegans+-+major+biological+and+environmental-factors+influencing+life-span%5BTitle%5D)+AND+%22Mech.+Ageing+Dev%22%5BJournal%5D)">Aging in nematode Caenorhabditis-elegans - major biological and environmental-factors influencing life-span.</a> Mech. Ageing Dev. 6 (6), 413-429 (1977).</li>
<li>Priest, N. K., Mackowiak, B., Promislow, D. E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+parental+age+effects+on+the+evolution+of+aging%5BTitle%5D)+AND+%22Evolution%22%5BJournal%5D)">The role of parental age effects on the evolution of aging.</a> Evolution. 56 (5), 927-935 (2002).</li>
</ol>

Die Autoren haben nichts offenzulegen.

Das aktuelle Protokoll beschreibt ein Verfahren zur in Brachionus Rotatorien die Überlebenszeit gemessen wird . Der entscheidende Schritt ist die Synchronisation von rotifer Bedingungen über mehrere Generationen. Bei experimentellen rotifers gut synchronisiert sind, ist eine typische Typ - I - Überlebenskurve mit sehr wenig frühe Sterblichkeit beobachtet , wie 18,24,37,38 in mehreren früheren Studien berichtet. Die Standardabweichungen der Überlebenszeit werden deshalb kleiner im Vergleich zu schlech...

Rotifers sind mikroskopisch kleine kosmopolitische Zooplankton (&lt;1 mm), die die phylum Rotatorier 1 darstellen. Sie haben eine einfache Körperplan von ca. 1.000 somatischen Zellen besteht, sowie eine charakteristische radähnlichen ciliary Vorrichtung die corona genannt, die für die Fortbewegung und Fütterung verwendet wird. Die meisten rotifers gehören zu den Klassen Monogononta oder Bdelloida, die etwa 1600 und 500 Arten enthalten jeweils 2. Monogononta rotifers haben in der Regel sowohl sexuelle und asexuelle Reproduktionsphasen (zyklische Parthenogenese), während Bdelloid Rotatorien durch obligatorische Parthenogenese 3 reproduzieren. Es ist somit möglich, genetisch identische rotifer Individuen zu erhalten, die in Experimenten eine hohe Reproduzierbarkeit gewährleistet. Darüber hinaus haben sie mehrere andere Vorteile als Modellorganismen, wie beispielsweise eine kurze Lebensdauer, Einfachheit der Kultur, die Verfügbarkeit von genomischen und transkriptomischen Sequenzdaten 4-7 und eine einzigartige phylogenetische Position entfernt von a8 rthropods und Nematoden. Rotifers versprechen daher invertebrate Modelle in ökologische, toxikologische und Alterungsuntersuchungen 12.09. Die Überlebenszeit unter der Exposition gegenüber Umweltstress oder Chemikalien ist ein häufig gemessene Parameter in diesen Forschungsfeldern 13-19. Allerdings ist Vorsicht geboten, wenn die Überlebenszeit von Rotatorien Messung, weil sie anfällig gegenüber Umweltbedingungen ihrer Mütter ist. Und zwar in der Monogononta rotifer Brachionus Manjavacas, weiblichen Nachkommen von im Alter von Mütter haben eine kürzere Lebensdauer als die von jungen Mütter; jedoch mütterliche Kalorienrestriktion (CR) kompensiert teilweise die schädlichen Auswirkungen von fortgeschrittenen Alter der Mutter 20. In B. plicatilis, mütterliche CR bietet Nachkommen Langlebigkeit, Beständigkeit lange Überlebenszeit unter Hunger und hohen oxidativen Stress verbunden mit erhöhter Expression von antioxidativen Enzymen 21,22. Das Alter der Mutter WirkungAuch in Bdelloid Rotatorien 23 beobachtet. Daher sollten die Bedingungen der experimentellen Rotatorien sorgfältig über mehrere Generationen vor der Messung der Überlebenszeit synchronisiert werden. Hier bieten wir ein Protokoll für die Messung der Überlebenszeit in Brachionus rotifers nach der Synchronisation von Kulturbedingungen über mehrere Generationen hinweg. Intermittierende Fasten (IF), eine Variation von CR wo rotifers periodisch zugeführt werden, um die Wirkung der Synchronisation aufgrund der bekannten Wirkung von IF auf Langlebigkeit 22,24 offenbaren angewendet.

<table><tbody><tr><td>Natriumchlorid</td><td>Wako</td><td>190-13921</td><td></td></tr><tr><td>Magnesiumchlorid</td><td>Wako</td><td>136-03995</td><td></td></tr><tr><td>Magnesiumsulfat</td><td>Wako</td><td>131-00427</td><td></td></tr><tr><td>Kaliumchlorid</td><td>Wako</td><td>168-22111</td><td></td></tr><tr><td>Calciumchlorid</td><td>Wako</td><td>035-00455</td><td></td></tr><tr><td>Natriumbicarbonat</td><td>Wako</td><td>199-05985</td><td></td></tr><tr><td>Natriumbromid</td><td>Wako</td><td>190-01515</td><td></td></tr><tr><td>Membranfilter (0,45 &Mikro; m Porengröße)</td><td>Millipore</td><td>HAWP04700</td><td></td></tr><tr><td>Kulturplatte, 6 Well, unbehandelt</td><td>Thomas Scientific</td><td>6902D01</td><td>Kulturplatte mit flachem Boden</td></tr><tr><td>, 48 Well, unbehandelt</td><td>Thomas Scientific</td><td>6902D07</td><td>Tetraselmis mit flachem Boden</td></tr><tr><td>, Living</td><td>Carolina Biological Supply Company</td><td>152610</td><td></td></tr><tr><td>PRISM 6</td><td>GraphPad Software</td><td>Version 6.0d</td><td></td></tr></tbody></table>

die messung der Überlebensdauer in<em&gt; brachionus</em&gt; rotifers: synchronisation von maternal bedingungen

Measurement of Survival Time in Brachionus Rotifers: Synchronization of Maternal Conditions

Rädertierchen sind mikroskopisch kleine kosmopolitische Zooplankton, die aufgrund ihrer verschiedenen Vorteile wie kurze Lebensdauer, einfache Kultivierung und Parthenogenese, die klonale Kultur ermöglicht, als Modelle in ökotoxikologischen und Alterungsstudien verwendet werden. Bei der Messung ihrer Überlebenszeit ist jedoch Vorsicht geboten, da sie vom Alter der Mutter und den Ernährungsbedingungen der Mutter beeinflusst wird. In dieser Arbeit stellen wir ein Protokoll zur Verfügung, mit dem die Überlebenszeit von Brachionus-Rädertierchen nach sorgfältiger Synchronisation der Kulturbedingungen über mehrere Generationen hinweg leistungsfähig und reproduzierbar gemessen werden kann. Empirisch führt eine schlechte Synchronisation zu einer frühen Mortalität und einer allmählichen Abnahme der Überlebensrate, was zu einer schwachen statistischen Aussagekraft führt. Tatsächlich konnte die Kalorienrestriktion (CR) unter solchen Bedingungen die Lebensdauer von B. plicatilis nicht signifikant verlängern, obwohl die CR-induzierte Langlebigkeit mit gut synchronisierten Rädertierchenproben in früheren und aktuellen Studien nachgewiesen wurde. Dieses Protokoll ist wahrscheinlich auch für andere wirbellose Modelle nützlich, einschließlich der Fruchtfliege Drosophila melanogaster und des Fadenwurms Caenorhabditis elegans, da bei diesen Arten auch über Auswirkungen auf das Alter der Mutter berichtet wurde.

Abbildung 1 zeigt repräsentative Überlebenskurven von schlecht synchronisierten Populationen (von zwei Wiederholungen). In diesem Experiment rotifers waren entweder gefüttert jeden Tag [ad libitum (AL) Gruppe] oder jeden zweiten Tag (IF - Gruppe). Das mediane Überleben betrug 13 und 18 Tage in der AL und IF-Gruppe. Obwohl es bekannt ist, dass, wenn die Lebensdauer der rotifer erstreckt, scheiterte dieser Versuch einen statistisch signifikanten Unterschied ...

Rädertierchen sind mikroskopisch kleines Zooplankton, das als Modelle in ökotoxikologischen und Alterungsstudien verwendet wird. Hier stellen wir ein Protokoll zur leistungsfähigen und reproduzierbaren Messung der Überlebenszeit bei Brachionus-Rädertierchen zur Verfügung. Die Synchronisation der Kulturbedingungen über mehrere Generationen hinweg ist von besonderer Bedeutung, da der mütterliche Zustand die Lebensgeschichte der Nachkommen beeinflusst.

Die Messung der Überlebensdauer in<em&gt; Brachionus</em&gt; Rotifers: Synchronisation von Maternal Bedingungen

Rotifers are microscopic cosmopolitan zooplankton used as models in ecotoxicological and aging studies due to their several advantages such as short ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens besteht darin, die Überlebenszeit von Brachionus-Rädertieren genau zu messen, indem mögliche schädliche Effekte der mütterlichen Generationen ausgeglichen werden. Diese Methode kann helfen, zentrale Fragen der Alternsforschung zu beantworten.Indem eine zuverlässige Methode zur Bestimmung der Überlebenszeit von Rädertieren bereitgestellt wird. Der Hauptvorteil dieser Technik liegt darin, dass sie reproduzierbar ist und eine hohe statistische Aussagekraft besitzt. Zunächst werden 4,5 Liter destilliertem oder entionisiertem Verdünnungswasser 454 Millimolar Natriumchlorid, 26 Millimolar Magnesiumchlorid, 27 Millimolar Magnesiumsulfat, 10 Millimolar Kaliumchlorid und 10 Millimolar Calciumchlorid zugegeben.Stellen Sie eine 0,48 molare Stammlösung von Natriumbicarbonat her und geben Sie 25 Milliliter davon zu der gerade hergestellten Salzlösung. Bereiten Sie eine 0,4 molare Stammlösung von Natriumbromid vor.Und zehn Milliliter davon zur Salzlösung hinzufügen. Anschließend die Salzlösung mit destilliertem Wasser auf fünf Liter auffüllen. Die Lösung dann mit einer 0,45-Mikrometer-Filtermembran filtrieren.Um im Labor gezüchtete oder wild gefangene Rädertiere zu kultivieren, bringen Sie sie in einen sterilen 100-Milliliter-Becher mit künstlichem Meerwasser und kultivieren Sie sie bei 25 Grad Celsius. Kultivieren Sie laut den Methoden von Snell Nahrungsmikroalgenarten in künstlichem Meerwasser.Dafür sorgen, dass in allen Versuchsgruppen dieselbe Charge Mikroalgen verwendet wird. Eine Stammpopulation von Rädertieren in einer Batch-Kultur durch Fütterung alle zwei Tage und Wechsel des Mediums einmal pro Woche erhalten.Wenn sich die Rädertiere in optimalen Bedingungen befinden, können viele Neona und Erwachsene mit zwei bis drei Eiern beobachtet werden. Um die Rädertiere durch Vorkultur zu synchronisieren, wählen Sie ein einzelnes Rädertier aus der Stammpopulation aus und kultivieren Sie es etwa zwei Wochen lang in künstlichem Meerwasser in einem 100-Milliliter-Becher, wie zuvor beschrieben.Nach der Inkubation Eier tragende Rädertiere aus der Teilpopulation sammeln. Diese als einzelne Kohorte kultivieren, indem etwa 50 Rädertiere pro Milliliter Meerwasser in die Vertiefungen einer 6-Loch-Platte gegeben und ad libitum gefüttert werden. Sobald die Eier geschlüpft sind, die Nachkommen in frisch zubereitetes Kulturmedium überführen.Wiederholen Sie das Kultivieren und Übertragen von Neonaten über zwei bis drei Generationen. Um die Überlebenszeit zu messen, bringen Sie innerhalb eines Zeitraums von drei Stunden geschlüpfte Neonaten in die Vertiefungen von 24- oder 48-Well-Platten, die jeweils ein Milliliter künstliches Meerwasser enthalten. Übertragen Sie die Rädertiere in Abständen von 12 oder 24 Stunden in frisch zubereitetes Kulturmedium.Notieren Sie die Anzahl der Nachkommen und ob jedes Individuum tot oder lebendig ist. Vermerken Sie den Rädertierchen als tot, wenn die Flimmerbewegung der Corona vollständig zum Stillstand gekommen ist. Wenn sich die experimentellen Rädertierchen aktiv fortpflanzen, entfernen Sie die Neugeborenen, da diese schnell wachsen und manchmal schwer von den experimentellen Rädertierchen zu unterscheiden sind.Führen Sie die Datenanalyse gemäß dem Textprotokoll durch. Diese Abbildung zeigt Überlebenskurven aus zwei Wiederholungen von schlecht synchronisierten Rädertierpopulationen. Entweder ad libitum gefüttert, dargestellt als A-L, oder jeden zweiten Tag, dargestellt als intermittierende Fastenkur, I-F.Die mittlere Überlebensdauer betrug in den beiden Gruppen jeweils 13 und 18 Tage. Obwohl bekannt ist, dass intermittierendes Fasten die Lebensdauer des Rädertiers verlängert, waren die Unterschiede nicht statistisch signifikant. In diesem Experiment waren die Bedingungen für die Rädertiere optimal und gut synchronisiert.Und die Tiere überlebten tendenziell bis in die spätere Phase des Experiments. Die mediane Überlebenszeit betrug 13 Tage für AL-Rädertiere und 20 Tage für die IF-Gruppen, was statistisch signifikant war.Nachdem Sie sich dieses Video angesehen haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie man Rotiferenzustände synchronisieren kann. Wir hoffen, dass dieses Protokoll die Nutzung von Rotiferen als Modellorganismus in der Alternsforschung verbessert.

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