Name: Hochempfindliche und schnelle Fluoreszenzdetektion mit einem tragbaren FRET Analyzer (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-10-01T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 27 s
Description: Erfahren Sie die hochempfindliche Quantifizierung von Zuckergehalten in Getränken mit einem tragbaren FRET-Analysator. Diese Methode ermöglicht die effiziente Überwachung kleiner Moleküle wie Maltose ohne teure Fluorometer.

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Diese Forschung wurde unterstützt durch Zuschüsse aus dem Intelligent Synthetic Biology Center of Global Frontier-Projekt (2011-0031944) und der KRIBB Research Initiative Program.

1. Herstellung von Biosensor <ol><li> Konstruieren Sie das Plasmid pET21a (+) - GFP-MBP-YFP-His6 durch Befolgen des vorher festgelegten Protokoll 2. </li><li> Impfen 5 ml Luria - Brühe (LB) mit einer Einzelkolonie eines Stammes Escherichia coli DE3 und Inkubation bei 37 ° C für 16 Stunden unter Schütteln. </li><li> 1 ml des O / N - Kultur in einen 500-ml - Kolben , die 100 ml LB und bei 37 ° C in einem Schüttelinkubator inkubieren , bis die optische Dichte bei 600 nm (OD 600) 0,5 erreicht (ca. 3 h). </li><li> Ernte der Zellen in einem 50 ml konischen Röhrchen durch Zentrifugation bei 1.000 × g für 20 min bei 4 ° C. </li><li> Das Pellet schnell in jedes Röhrchen mit 50 ml eiskaltem destilliertem Wasser (DW) und die Zentrifuge bei 1000 × g für 20 min bei 4 ° C. </li><li> Das Pellet in 50 ul eiskaltem DW mit 10% (v / v) Glycerin vorsichtig , bis die Lösung (elektro Zellen) wirbelnden erreicht eine OD 600 </sub&gt; 100. </li><li> Legen Sie die Mischung aus elektro Zellen (50 &amp; mgr; l der Zellen bei einer OD 600 von 100) und 10 ng des pET21a (+) - GFP-MBP-YFP-His6 in einer eiskalten Elektroporationsküvette in einer Elektroporation Gerät und elektroporieren die Mischung (18 kV / cm, 25 &amp; mgr; F). </li><li> Schnell 1 ml SOC-Medium in die Küvette hinzufügen und die Zellen resuspendieren sanft, für 1 Stunde bei 37 ° C mit anschließender Erholung mit sanftem Rundboden Röhrchen in einem 15 ml schütteln. </li><li> Verteilt die Zellen auf einer LB-Platte, die 100 ug / ml Ampicillin und Inkubieren bei 37 ° C für 12 Stunden. </li><li> Isolieren einer Einzelkolonie einer Schleife und inokulieren die Kolonie in 10 ml LB für 12 h in einem Schüttler 100 ug / ml Ampicillin bei 37 ° C enthält. </li><li> 5 ml der Impfkultur zu 500 ml LB, enthaltend 100 &amp; mgr; g / ml Ampicillin und Inkubieren der Kultur in einem 37 ° C Schüttelinkubator. </li><li> In 0,5 mM Isopropyl β-d-(IPTG) , wenn die OD 600 erreicht24 h 0,5 und die Kultur in einem 37 ° C Schüttelinkubator inkubiert. </li><li> Zentrifuge die Zellen bei 4.500 × g für 20 min (4 ° C) und Überstand vorsichtig entfernen. </li><li> Resuspendieren des Pellets in 5 ml Bindungspuffer (20 mM Tris-HCl, pH 8,0, 1 mM PMSF, 0,5 mM EDTA und 1 mM DTT). </li><li> Beschallen die Zellen auf Eis mit sechs 10-Sekunden-Bursts bei 200-300 W, die jeweils mit 10 sec Burst folgenden Kühlung. </li><li> Zentrifugieren Sie das Lysat bei 10.000 × g für 30 min bei 4 ° C, um die Zelltrümmer zu pelletieren. Den Überstand (lösliche Protein) in eine neue Sammelröhrchen. </li><li> Zur Affinitätsreinigung der FRET Sensorproteine, Last 4 ml des gelöscht Zelllysats auf eine Ni-NTA - Affinitätssäule (5 ml Volumen) , und führen eine Chromatographie - Assay unter Verwendung von Fast - Protein - Flüssigchromatographie (FPLC) 18 erreichen. </li><li> Die Säule wird einmal mit fünf Säulenvolumina Waschpuffer I (50 mM Phosphatpuffer, 300 mM Natriumchlorid, 10 mM Imidazol, pH 7,0). </li><li> Wiederholen der Waschschritt mit fünf Säulenvolumina Waschpuffer II (50 mM Phosphatpuffer, 300 mM Natriumchlorid, 20 mM Imidazol, pH 7,0). </li><li> Eluieren des Sensorprotein mit fünf Säulenvolumina Elutionspuffer (50 mM Phosphatpuffer, 300 mM Natriumchlorid, 500 mM Imidazol, pH 7,0). </li><li> Zu konzentrieren und die eluierten Probe entsalzen füllen Konzentrator (Membran eine Größe von 10000 MW) mit bis zu 20 ml der Probe und zentrifugiert für 10 min bei 3000 × g. Nachzufüllen Konzentrator mit 0,8% Phosphat-gepufferte Kochsalzlösung (PBS). Wiederholen Sie diesen Schritt zweimal, zuerst den Konzentrator mit 20 ml Probe füllen und dann mit PBS Nachfüllen. </li><li> Wiederherstellen der konzentrierten und de-gesalzene Sensorprotein und lagern Sie es bei -80 ° C. </li></ol> 2. Messung des Zuckergehalts der FRET-Analyzer HINWEIS: Die Details des FRET - Analysator Bau wurden in unserer bisherigen Arbeit 7 beschrieben. <ol><li> Bereiten Sie eine Detektionslösung von 0,8% PBS, die 0,2uM der Sensorproteinen. </li><li> Schalten Sie den FRET-Analysator. Drücken Sie die Taste &quot;UP&quot; für 2 Sekunden die optimale Temperatur zu kalibrieren. Stellen Sie die Temperatur auf 53 ° C unter Verwendung der &quot;UP&quot; und &quot;DOWN&quot; Tasten und drücken Sie die Taste &quot;SET&quot;. </li><li> Für die Kalibrierung, drücken und halten Sie die &quot;UP&quot; und &quot;DOWN&quot; Tasten gleichzeitig für 2 Sekunden. Bestätigen Sie, dass die LED-Panel Displays &quot;CALIB&quot; und drücken Sie die Taste &quot;SET&quot;. </li><li> Legen Sie ein 12,5 x 12,5 x 45 mm (Länge x Breite x Höhe) quader Gefäß (Küvette), die nur Puffer PBS in einem Küvettenhalter des Analysators und drücken Sie die Taste &quot;SET&quot;. </li><li> Setzen Sie die Küvette mit einer nur die Nachweislösung enthält (siehe 2.1) ohne Zucker (Maltose / Saccharose) und drücken Sie die Taste &quot;SET&quot; die Basislinie zu kalibrieren. </li><li> Setzen Sie die Küvette mit einer der Detektionslösung mit 10 mM Zucker und drücken Sie die &quot;SET&quot;Taste. </li><li> Um den Zuckergehalt eines Getränks Probe zu bestimmen, setzen Sie 1 ml Getränkeprobe in einem 1,5-ml-Mikrozentrifugenröhrchen und Zentrifuge bei 16.000 × g für 1 min. HINWEIS: FRET sensorbasierte Fluoreszenzmessung hat den Vorteil, nicht erfordern spezielle Vorbehandlung der Probe, da nur 1% (v / v) der Probe wird in dem Gesamtvolumen enthalten. Empfehlen jedoch Entfernen wir jedes Material, das die Fluoreszenzmessung (zB Zellen, unlöslichen Teilchen, Lipid, Fett, oder jedes Material mit Eigenfluoreszenz) beeinflussen können. Darüber hinaus, wenn eine starke Säure, starke Basis, Mittel (Reinigungsmittel) reinigen oder Emulgator (Emulgator) in hoher Konzentration vorhanden ist, und kann die Eigenschaften des FRET biologischen Sensor beeinflussen, sollte es ein organisches Lösungsmittel oder ein entfernt werden unter Verwendung von Neutralisator. Wenn beispielsweise Milchfett und Emulgatoren aus gefrorenen Snacks eliminiert werden, werden die Proben in einem Mikrozentrifugenröhrchen für 30 min bei 16000 × g zentrifugiert und die Flüssigkeit between der Bodensediment und die obere Schicht aus Milchfett wird extrahiert. Eine gleiche Menge an Hexan wird dann zugegeben, gefolgt von einer Zentrifugation bei 15.000 × g für 30 min Lipiden zu eliminieren. </li><li> Entfernen Sie den Überstand mit einer 1-ml-Spritze und filtern sie durch einen Spritzenfilter (Porengröße 0,2 um). </li><li> Legen Sie 0,1 ml gefiltert Getränkeprobe in einem 1,5-ml-Mikroröhrchen mit 0,9 ml PBS und Wirbel sanft. HINWEIS: Es ist entscheidend, um die Getränkeprobe richtig zu verdünnen. In diesem Fall wurde 1.000-fache Verdünnung durchgeführt, so dass die Zuckerkonzentration innerhalb des dynamischen Bereichs der Vorrichtung fallen. Wir empfehlen, die Schätzung der Zielzuckerkonzentration im Voraus in der Bezeichnung des Getränks auf den Zuckergehalt bezieht. </li><li> Zugabe von 5 &amp; mgr; l der verdünnten Getränkeprobe (1%, v / v) in eine Küvette 0.495 ml der Nachweislösung enthält. </li><li> Setzen Sie die Küvette in einem Küvettenhalter des FRET-Analysator und Vorwärmung der Probenlösung auf 53 ° C. </li><li> Drücken Sie die Taste &quot;SET&quot;, den Zuckergehalt zu messen. Hinweis : Es ist möglich , die FRET - Messung mit einem Multilabel- Plattenlesegerät oder ein Fluoreszenz - Spektralphotometer mit einem Peltier - Element zur Temperaturkontrolle zu bewerten , indem das Verhältnis bei 488/535 nm 7,8 zu lesen. Für Saccharose Erkennung, die Schritte 1,1-2,12 mit einem CSY-LH - Sensor 2. </li></ol>

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</ol>

Die Autoren haben nichts zu offenbaren.

Dieses Protokoll ermöglicht eine schnelle und effiziente Quantifizierung des Zuckergehalts in Getränkeproben, eine maßgeschneiderte FRET - Analysator 7 bei einer optimalen Temperatur für FRET - Sensoren. Der Analysator wurde entwickelt mit einem kürzlich entwickelten, kostengünstigen 405-nm-Band Ultraviolett-LED als die Lichtquelle und zwei Photodetektoren mit einer Silizium-Photodiode. Diese Vorrichtung ist kostengünstiger als andere vergleichbare Fluorometer. Die Vorrichtung zeigte eine hohe Nachweisempfind...

Förster - Resonanzenergietransfer (FRET) wurde als biometrischer Sensor zur Erkennung kleiner Moleküle wie Zucker, Calciumionen und Aminosäuren 1-4 verwendet. FRET Biosensoren enthalten fluoreszierende Proteine, cyan fluoreszierende Proteine ​​(CFPs) und Gelb fluoreszierendes Protein (YFPs), die an beiden Enden des periplasmatischen-bindenden Proteinen fusioniert sind (PBPs). Zucker binden an PBPs in der Mitte des FRET-Sensor befindet, strukturelle Änderungen an dem Sensor verursachen, die anschließend den Abstand und Übergangsdipolmomente Orientierung der beiden fluoreszierenden Proteinen an jedem Ende des PBP verändern. Diese Änderung ermöglicht die quantitative Analyse der Zuckergehalt, indem das Verhältnis der Emissionswellenlängen von EYFP (530 nm) und ECFP (480 nm) gemessen wird. Aufgrund der hohen Sensitivität, Spezifität, Echtzeit - Monitoring - Kapazitäten und eine schnelle Reaktionszeit von FRET Biosensoren sind diese Sensoren weit verbreitet in der Umwelt, Industrie und medizinische Anwendungen 5. Außerdem ratiometric Messung mittels FRET Biosensoren hat wichtige praktische Vorteile, da es verwendet werden kann, Komponenten in komplexen biologischen Proben zu messen, wo der Sensor-Konzentration nicht leicht gesteuert werden kann und die Hintergrundfluoreszenz ist immer vorhanden. Trotz dieser Vorteile von FRET-basierten Sensoren für quantitative Visualisierung, kleine strukturelle Veränderungen mit unvollständigen Domain Bewegungsübertragung auf die fluoreszierenden Proteine ​​produzieren von Natur aus schwach Signalintensität. Dieses schwache Signal begrenzt die Anwendung von FRET-basierten Sensoren für die in vitro oder in vivo - Analyse 6. Folglich meisten FRET Biosensoren die Verwendung von teuren und hochempfindliche Ausrüstung erfordern. Bisher haben wir eine kostengünstige und portable FRET - Analysator mit Funktionen ähnlich denen der bestehenden Fluoreszenz Analysatoren 7. Bei dieser Vorrichtung ist kostengünstig 405-nm-Band ultraviolettem Licht emittierende Diode (LED) als Lichtquelle verwendet Anregung th zu verursachene Fluoreszenzsignal, eine teure Lampe oder einem Laser zu ersetzen. Das Detektionssystem des Analysators fokussiert effizient das ableitende Fluoreszenzsignal auf zwei Photodetektoren mit einer Silizium-Photodiode. In einer neueren Studie wurde gezeigt, dass die Optimierung der Erfassungstemperatur bei 50 - 55 ° C signifikant die ratiometrisch FRET - Signal 8 vergrößern könnte. Diese Temperatur spezifische Signalverstärkung, zusammen mit dem maßgeschneiderten FRET-Analyzer, ermöglicht die Verwendung von FRET-Sensoren in allgemeinere diagnostische Anwendungen mit schnellen und hohen Empfindlichkeit. In diesem Protokoll haben wir gezeigt, die allgemeine Anwendbarkeit des FRET-Analysator unter optimalen FRET Temperaturbedingungen durch den Zuckergehalt von handelsüblichen Getränken zu quantifizieren. Dieses Protokoll stellt die Details des FRET Gerätebedienung sowie eine kurze Beschreibung der Sensor und die Probenvorbereitung. Wir gehen davon aus, dass dieser Bericht die Anwendung des tragbaren fördernAnalysator in kleinen Laborumgebungen und eine Grundlage für die weitere Entwicklung eines kostengünstigen Vor-Ort-Diagnosegerät mit FRET-basierten Biosensoren bieten.

<table><tbody><tr><td>LB</td><td>BD</td><td>#244620</td><td></td></tr><tr><td>isopropyl &beta;-D-thiogalactosid (IPTG)</td><td>Sigma</td><td>I6758</td><td></td></tr><tr><td>Ampicillin</td><td>Sigma</td><td>A9518</td><td></td></tr><tr><td>Tri-HCl</td><td>Bioneer</td><td>C-9006-1</td><td></td></tr><tr><td>PMSF</td><td>Sigma</td><td>78830</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Bioneer</td><td>C-9007</td><td></td></tr><tr><td>DTT</td><td>Sigma</td><td>D0632</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Junsei</td><td>19015-0350</td><td></td></tr><tr><td>phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS)</td><td>Gibco</td><td>70011-044</td><td>0,8 % NaCl, 0,02 % KCl, 0,0144 % Na2HPO4, 0,024 % KH2OP4, pH 7,4</td></tr><tr><td>SOC</td><td></td><td></td><td>2 % Trypton, 0,5 % Hefeextrakt, 10 mM NaCl, 2,5 mM KCl, 10 mM MGCl2, 20 mM</td></tr><tr><td>Glukoseressource Q</td><td>Amersham Biosciences</td><td>17-1177-01</td><td>6 & 30 mm Anionenaustauschchromatographie-Säule&nbsp;</td></tr><tr><td>HisTrap HP1</td><td>Amersham Biosciences</td><td>29-0510-21</td><td></td></tr><tr><td>Quarzküvette</td><td>Sigma</td><td>Z802875</td><td></td></tr><tr><td>AK&Auml; KTAFPLC</td><td>Amersham Biosciences</td><td>18-1900-26</td><td>eine schnelle Proteinflüssigkeitschromatographie (FPLC)</td></tr><tr><td>Cary Eclipse</td><td>VarianInc</td><td></td><td>ein Fluoreszenzspektrophotometer</td></tr><tr><td>VICTOR&nbsp; &nbsp;</td><td>PerkinElmer</td><td>2030-0050</td><td>a Multilabel Plate Reader</td></tr><tr><td>E. coli JM109 (DE3)</td><td>Promega</td><td></td><td>Elektrokompetente Zellen</td></tr><tr><td>A (Getränke)</td><td>Korea Yakult Co. (Korea)</td><td>Birak</td><td>Fermentierte Getränke</td></tr><tr><td>B (Getränke)</td><td>Lotte Foods (Korea)</td><td>Epro</td><td>Erfrischungsgetränke</td></tr><tr><td>C (Getränke)</td><td>Lotte Foods (Korea)</td><td>Getoray</td><td>Sportgetränke</td></tr></tbody></table>

hochempfindliche und schnelle fluoreszenzdetektion mit einem tragbaren fret analyzer

Highly Sensitive and Rapid Fluorescence Detection with a Portable FRET Analyzer

Die jüngsten Verbesserungen in Förster-Resonanzenergietransfer (FRET) Sensoren haben ihre Verwendung aktiviert werden, damit verschiedene kleine Moleküle einschließlich Ionen und Aminosäuren erkennen. Allerdings ist die angeborene schwache Signalintensität von FRET-Sensoren eine große Herausforderung dar, die ihre Anwendung in verschiedenen Bereichen verhindert und die Verwendung von teuren High-End-Fluorometer notwendig. Bisher haben wir eine kostengünstige, High-Performance-FRET-Analyzer, der speziell das Verhältnis von zwei Emissionswellenlängenbändern zu messen (530 und 480 nm) hohe Nachweisempfindlichkeit zu erreichen. In jüngerer Zeit wurde entdeckt, dass FRET Sensoren mit bakteriellen periplasmatischen Bindungsproteinen Liganden mit einer maximalen Empfindlichkeit im kritischen Temperaturbereich von 50 erfassen - 55 ° C. Dieser Bericht beschreibt ein Protokoll Zuckergehalt in handelsüblichen Getränkeproben unter Verwendung unserer tragbaren FRET-Analysator mit einer temperaturspezifischen FRET-Sensor für die Beurteilung. Unsere Ergebnisse zeigten, dass die zusätzliche VorwärmungProzess des FRET-Sensor erhöht die FRET-Verhältnissignal, eine genauere Messung des Zuckergehalts zu ermöglichen. Maßgeschneiderte FRET-Analysator und Sensor wurden erfolgreich den Zuckergehalt in drei Arten von kommerziellen Getränke zu quantifizieren angewandt. Wir gehen davon aus, dass eine weitere Größenreduktion und Leistungssteigerung der Anlage wird die Verwendung von Hand Analysatoren in Umgebungen erleichtern, in denen High-End-Geräte nicht zur Verfügung steht.

Auszuführen quantitative Analyse der Zuckergehalt unter Verwendung des FRET-Analysator, ist es notwendig, eine angepasste Kurve Abschätzen der Zielzuckerkonzentration aus dem beobachteten FRET-Verhältnis aufzubauen. Es sei r das Verhältnis der Emissionsintensität von GFP bei 480 nm und die Emissionsintensität von YFP erzeugt bei 530 nm (Gl. 1) definieren. <img alt="Gleichung 1" src="/files/ftp_upload/54144/54144equatio...

Dieses Protokoll beschreibt die schnelle und hochempfindliche Quantifizierung von Förster-Resonanzenergietransfer (FRET) Daten Sensor eine maßgeschneiderte portable FRET-Analyzer. Das Gerät wurde verwendet, Maltose innerhalb eines kritischen Temperaturbereich zu erkennen, die Detektionsempfindlichkeit maximiert, wodurch praktische und effiziente Beurteilung der Zuckergehalt.

Hochempfindliche und schnelle Fluoreszenzdetektion mit einem tragbaren FRET Analyzer

Recent improvements in F&#246;rster resonance energy transfer (FRET) sensors have enabled their use to detect various small molecules including ions and ...

Das übergeordnete Ziel dieses Protokolls besteht darin, die allgemeine Anwendbarkeit des FRET-Analysators unter optimalen Bedingungen zu demonstrieren, indem der Zuckergehalt handelsüblicher Getränke quantifiziert wird. Diese Methode kann helfen, zentrale Fragen im Bereich der Detektion und Überwachung kleiner Moleküle wie Zucker zu beantworten. Der Hauptvorteil dieser Technik liegt darin, dass sie effizient ein frisches Signal verfolgen kann, das auf kleine Moleküle reagiert, und dabei keine teuren, hochwertigen Fluorimeter erfordert.Dr. Han aus unserem Labor wird das Verfahren demonstrieren. Bereiten Sie zunächst das Maltose- oder Saccharose-spezifische cyan- und gelbfluoreszierende Biosensor-Plasmid vor. Impfen Sie dann fünf Milliliter Luria-Brühe mit einer einzelnen Kolonie von DE3 E. coli an und inkubieren Sie die Kultur 16 Stunden lang bei 37 Grad Celsius in einem schüttelnden Inkubator.Als Nächstes einen Milliliter der Kultur in einen Kolben mit 100 Milliliter LB geben. Den Kolben bei 37 Grad Celsius in einem schüttelnden Inkubator inkubieren, bis die optische Dichte bei 600 Nanometern etwa 0,5 beträgt. Die Kultur 20 Minuten lang bei vier Grad Celsius zentrifugieren. Den Pel

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Forschung

JoVE Journal

Biochemistry

Biochemie

Droplet-based mikrofluidischen Plattformen sind vielversprechende Kandidaten für einen hohen Durchsatz Experimente, da sie in der Lage, Picoliter, Selbst-compartmentalized Schiffe kostengünstig erzeugen bei kHz Preise sind. Durch die Integration mit schnellen, empfindlichen und hoch aufgelöste Fluoreszenz-spektroskopischen Methoden kann die große Mengen von Informationen in diesen Systemen erzeugt effizient extrahiert werden können, genutzt und verwertet werden.

Fluoreszenz-Nachweisverfahren für Mikrofluidik-Tropfen-Plattformen

Wir demonstrieren FRET zwischen konjugiertes Polymer Polydiacetylen (PDA) und Fluorophor auf die Oberfläche des PDA Liposomen für die Erfassung von Biomolekülen gebunden. PDA Liposomen auch Rezeptormoleküle auf ihren Oberflächen für Biomoleküle als Sonden verwendet werden enthalten. Ligand-Rezeptor-Wechselwirkungen auf Änderungen des FRET-Effizienz zwischen dem Fluorophor und PDA, welche die Grundlage des Fühlmechanismus ist zu führen.

Echtzeit-Überwachung von Ligand-Rezeptor-Wechselwirkungen mit Fluorescence Resonance Energy Transfer

Förster Resonanz Energie Transfer (FRET)-Mikroskopie ist eine leistungsstarke Technik für die Echtzeit-Überwachung der Signalwege in lebenden Zellen mit verschiedenen Biosensoren als Reporter. Hier beschreiben wir, wie eine benutzerdefinierte Epifluoreszenz bauen FRET Imaging-System aus handelsüblichen Komponenten und wie es zu benutzen für Experimente FRET.

FRET-Mikroskopie zur Echtzeit-Überwachung der Signalisierung Events in lebenden Zellen mit unimolekularen Biosensors

Zell-zu-Zell-Transfer von Proteinaggregaten oder proteopathischen Seeds könnte dem Fortschreiten der Pathologie bei neurodegenerativen Erkrankungen zugrunde liegen. In dieser Arbeit wird ein neuartiger FRET-Durchflusszytometrie-Assay beschrieben, der einen spezifischen und sensitiven Nachweis der Seeding-Aktivität aus rekombinanten oder biologischen Proben ermöglicht.

Sensitive Detection von Proteopathic Seeding Aktivität mit FRET Durchflusszytometrie

Mehrfarbige Fluoreszenzdetektion in der Tröpfchenmikrofluidik beinhaltet typischerweise sperrige und komplexe Epifluoreszenzmikroskop-basierte Detektionssysteme. Hier beschreiben wir ein kompaktes und modulares mehrfarbiges Detektionsschema, das ein Array von optischen Fasern verwendet, um mehrfarbige Daten, die von einem einzigen Photodetektor gesammelt wurden, zeitlich zu kodieren.

Mehrfarbenfluoreszenzdetektion für Droplet Mikrofluidik Verwendung von Optical Fibers

Ein photothermischer Winkellichtstreusensor (PT-AS) ermöglicht die schnelle und chemikalienfreie Hämoglobin-Bestimmung von Blutproben im Nanoliter-Maßstab. Hier werden Details zum PT-AS-Aufbau und ein Messprotokoll für die Hämoglobinkonzentration im Blut zur Verfügung gestellt. Repräsentative Ergebnisse für anämische Blutproben werden ebenfalls vorgestellt.

Eine schnelle und Chemiefreie Hämoglobin-Assay mit Photothermische Winkellichtstreuung

Wir präsentieren eine Open-Source hohe Content-Analyse (HCA) Instrument unter Verwendung von automatisierten Fluorescence Lifetime Imaging (FLIM) zur Untersuchung von Protein-Interaktionen mit Förster-Resonanzenergietransfer (FRET) basiert Ablesungen. Die Datenerfassung für dieses openFLIM-HCA Instrument wird von der Software in μManager geschrieben gesteuert und Datenanalyse wird in FLIMfit unternommen.

Open Source High Content Analyse Unter Verwendung Automatische Fluorescence Lifetime Imaging Mikroskopie

Zeitaufgelöste Förster-Resonanzenergietransfer-Zell-basierte Assay-Protokolle werden für die einfache, spezifische, sensitive und robuste Quantifizierung von endogenen phosphorylierten Signalwandlern und Aktivatoren der Transkription (STAT) 1/3/4/5/6-Proteinen in Zelllysaten im 384-Well-Format beschrieben.

Zeitaufgelöste Förster-Resonanz-Energietransfer-Assays zur Messung von endogenen phosphorylierten STAT-Proteinen in menschlichen Zellen

Dieser Artikel stellt eine Methode zur raumzeitlichen Analyse von mobilen, einzelmolekularen Förster-Resonanz-Energietransfer-basierten (smFRET)-basierten Sonden mittels Weitfeldfluoreszenzmikroskopie vor. Das neu entwickelte Software-Toolkit ermöglicht die Bestimmung von smFRET-Zeitspuren bewegter Sonden, einschließlich der korrekten FRET-Effizienz und der molekularen Positionen, als Funktionen der Zeit.

Automatisierte zweidimensionale raumzeitliche Analyse mobiler Einzelmolekül-FRET-Sonden

Dieses Protokoll beschreibt eine einzigartige Methode zum Nachweis der Bindung zwischen Verbindungen und Proteinmolekülen, die die Vorteile eines minimalen Proteinprobenverlusts und einer hohen Datengenauigkeit bietet.

Nachweis der CD40-Protein-Umbelliferon-Wechselwirkung mittels dynamischer Differenzialfluoreszenz

In dieser Arbeit wurde das Protokoll für das Design und die Entwicklung eines E-Eye-Enable-POCT-Geräts zum Nachweis von Fe, Cr, As und F in Umweltproben, biologischen Proben sowie Lebensmitteln und Getränken diskutiert. Fast 2000 Proben wurden getestet, und die Ergebnisse stimmen mit der Goldstandard-Technik überein.

TD-DFT-geführte, fortschrittliche E-Eye-Sensing-Technik für die Vor-Ort-Quantifizierung von Fe, Cr, F und As in Umwelt-, Bio- und Lebensmittelproben

Erfahren Sie die hochempfindliche Quantifizierung von Zuckergehalten in Getränken mit einem tragbaren FRET-Analysator. Diese Methode ermöglicht die effiziente Überwachung kleiner Moleküle wie Maltose ohne teure Fluorometer.

Hochempfindliche und schnelle Fluoreszenzdetektion mit einem tragbaren FRET Analyzer

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