Name: Erkennen Cortex Fragmente während der bakteriellen Sporenauskeimung (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-06-25T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 35 s
Description: Erfahren Sie eine kolorimetrische Methode zur Quantifizierung von Cortex-Fragmenten während der bakteriellen Sporenauskeimung bei Clostridium difficile. Dieses Protokoll ermöglicht Forschern die Untersuchung metabolischer Prozesse.

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Das Projekt beschrieben wird durch Verleihungsnummer 5R01AI116895 aus dem Nationalen Institut für Allergien und Infektionskrankheiten unterstützt. Der Inhalt ist allein in der Verantwortung der Autoren und stellen nicht notwendigerweise die offizielle Position des Nationalen Instituts für Allergien und Infektionskrankheiten oder die National Institutes of Health vertreten.

1. Erstellen von Proben <ol><li> Wärme aktivieren C. difficile Sporen bei 65 ° C für 30 min und auf Eis lagern. Hinweis: C. difficile - Sporen hergestellt und gereinigt werden , wie zuvor beschrieben , 7,9,10. </li><li> Bereiten Sie die Keimung Lösung bei X + 1 ml, wobei X die Anzahl der Abtastwerte ist, die während des Assays entnommen werden. Anmerkung: Die Keimlösung ist spezifisch für die Spezies von Bakterien untersucht-Sporen werden. Für C. Testen difficile Sporenkeimung, verwendeten wir eine Lösung von 10 mM Tris (pH 7,5), 150 mM NaCl, 100 mM Glycin und 10 mM Taurocholsäure in deionisiertem Wasser. </li><li> Vor der Durchführung des Tests, ziehen eine 1,0 ml Probe der Keimungslösung ohne Sporen als Rohling für Cortex-Fragment Erkennung dienen. </li><li> Hinzufügen Sporen zu einer OD 600 von ~ 3,0 auf die Keimung Lösung und vortex schnell. Hinweis: Für unsere Keimung Studien in B. subtilis, wir haben das gleiche OD 600 Sporen als für C. difficile. Hinweis: Diese Menge an Sporen funktionierte gut für die Überwachung der Hirnrinde Fragment während C. difficile Spore Keimung. Die Menge von Sporen in diesem Assay verwendet wird, sollte experimentell für jedes Bakterium oder Belastung bestimmt werden. </li><li> Entfernen, um eine 1,2 ml Probe unmittelbar nach der Sporen Zugabe und Zentrifuge bei Raumtemperatur für 1 min bei 14.000 × g. Dies ist der Zeitpunkt Null. </li><li> Übertragen 1,0 ml des Überstands aus der zentrifugierten Probe in ein frisches Röhrchen zur anschließenden cortex Fragmentanalyse. Hinweis: Sollte DPA muss überwacht werden, eine separate 100 ul - Probe zum Nachweis von DPA in der Lösung zu entfernen unter Verwendung eines Assays auf Basis von Terbium - Fluoreszenz 9,18,19. </li><li> Fixieren Sie die gesammelte Probe bei -80 ° C. </li><li> Wiederholen Sie die Schritte 1.4 und 1.5 in regelmäßigen Abständen, bis alle Zeitpunkte abgeschlossen. Hinweis: Da der Zeitaufwand für die Zentrifugation und Probenentnahmen, Zeitpunkte weniger thein 2 min waren abgesehen nicht möglich während unseres Verfahrens, so dass unsere Abtastintervallen waren einmal alle 2 min für 14 min. </li><li> Als Positivkontrolle für Zucker Nachweis und die Quantifizierung Verringerung umfassen die folgenden Mengen an N Acetylglucosamin (nmol): 0, 12,5, 25, 50, 100, 250, 500 und 5.000. Bereiten Sie diese Proben in der gleichen Zeit wie Cortex Proben und führen zusammen mit den Cortex-Proben, so dass die Standard-Kurve an die Daten relevant sind, erzeugt durch Sporen keimen. </li><li> Nachdem alle Zeitpunkt Proben gesammelt werden, lyophilisieren die Proben. Anmerkung: Wir gefriergetrocknet, unsere Proben in 2 ml mit Schraubverschluss Röhrchen. </li></ol> 2. Messung Cortex Fragmente <ol><li> lyophilisierte Proben in 120 ul 3 N HCl supplementiert mit 1% Phenol und 0,5% β-Mercaptoethanol resuspendieren. </li><li> Übertragen Sie die resuspendierten Proben auf 2 ml mit Schraubverschluss Röhrchen. Hinweis: Für die Reproduzierbarkeit, sicherzustellen, dass alle die gefriergetrocknete Probe suspendiert und übertragen wird. </li> &lt;li&gt; Inkubieren der Proben in einem Umlaufwasserbad bei 95 ° C für 4 Stunden. </li><li> Nach der Inkubation, legen Sie die Proben auf Eis, bis sie kühl sind. </li><li> Neutralisieren der Proben mit 120 ul 3 M NaOH. </li><li> Hinzufügen, 80 ul einer gesättigten Natriumhydrogencarbonat-Lösung und 80 ul einer 5% Essigsäureanhydrid-Lösung zu jeder Probe und vortexen. </li><li> Inkubieren der Proben bei Raumtemperatur für 10 min. </li><li> Übertragen Sie die Proben zurück zu dem 95 ° C warmen Wasserbad für genau 3 min. Hinweis: Dieser Schritt ist zeitkritisch und längere Zeiten nachgeschaltete Signalentwicklung beeinflussen können. </li><li> Entfernen Proben aus dem Wasserbad und kühlen auf Eis. </li><li> In 400 ul 6,54% K 2 B 4 O 7 · 4H 2 O in jedes Röhrchen und Wirbel. </li><li> Inkubieren der Proben in einem Umlaufwasserbad bei 95 ° C für genau 7 min. Hinweis: Dieser Schritt ist zeitkritisch und längere Zeiten nachgeschaltete Signalentwicklung beeinflussen können. </li><li> Entfernendie Proben und auf Eis für 5 min. </li></ol> 3. Farbreagenz <ol><li> Während Proben auf Eis (Schritt 2.12) sind, bereiten Sie das Farbreagenz. Man löst 0,320 g p -dimethylaminobenzaldehyde (DMAB; Ehrlich-Reagens) in 1,9 ml Eisessig. Hinweis: Das Reagenz ist Zeit, Temperatur und lichtempfindlich und sollte nicht im Voraus gemacht werden. </li><li> Nachdem der DMAB vollständig auflöst, 100 ul 10 N HCl und Wirbel. </li><li> 5 ml Eisessig und Wirbel. </li></ol> 4. kolorimetrische Reaktion <ol><li> Transfer 100 ul jeder gekühlten Kortex Probe in ein neues 1,5 ml Mikrozentrifugenröhrchen. </li><li> In 700 ul der frisch zubereiteten Farblösung zu jeder Probe. </li><li> Unmittelbar übertragen Sie die Proben auf einem 37 ° C Wasserbad und für genau 20 min inkubiert. </li><li> Übertragen Sie 200 ul jeder Probe auf eine klare 96-Well-Platte. </li><li> Quantifizierung der Proben bei 585 nm auf einer PlatteLeser. Die Proben sollten bei einer gelben Farbe und eine positive Reaktion auf lila verschiebt starten. Je mehr Hirnrinde vorhanden ist, desto tiefer die violette Farbe. </li></ol>

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</ol>

Die Autoren haben nichts offenzulegen.

Nach Stimulation unterzogen Sporen den Prozess der Keimung verlieren ihre Beständigkeitseigenschaften ohne die Notwendigkeit einer makromolekularen Synthese. Wenn Sporenauskeimung ausgelöst wird, 2 die Spore Kern freigibt DPA im Austausch für Wasser. Aufgrund der hohen DPA - Gehalt der ruhenden Spore, die sporen Kern unter intensiver osmotischen Druck und dem Fach Peptidoglycan, Hirnrinde, hilft durch Einwirken vermutlich als Barriere für Expansions 2 den Kern aufquellen verhindern. <p class="j...

Endospores metabolisch ruhenden Formen von Bakterien, die Bakterien erlauben, in ungünstigen Umgebungen zu bestehen. In vielen sporenbildenden Bakterien, wird die Sporenbildung von Nährstoffmangel induziert aber dieser Prozess kann 1 durch Änderungen der pH - Wert, der Exposition gegenüber Sauerstoff oder anderen Spannungen gesteuert werden. Während in ihrer metabolisch ruhenden Sporenform, wider Bakterien UV - Strahlung, Austrocknung, höhere Temperaturen und Einfrieren 2. Der größte Teil des Wissens über die Sporulation Prozess stammt aus Studien im Modellorganismus Bacillus subtilis. Die Sporulation Prozess beginnt mit der DNA - Replikation und die Bildung eines axialen Glühfaden 3,4. Eine asymmetrische Septum teilt sich dann die Zelle in zwei ungleich große Fächer. Die größere Kammer, die Mutterzelle, verschlingt die kleinere Kammer, die forespore. Sowohl die Mutterzelle und forespore Genexpression koordinieren, um die Sporen und die Mutterzelle zu reifen schließlich lysiert, die Freigabe der dormant Sporen in die Umgebung 1. Die Sporen Struktur und Zusammensetzung ist in vielen Bakterienarten konserviert. Die Spore Kern hat einen geringeren Wassergehalt als die vegetative Zelle und ist reich mit Dipicolinsäure (DPA) 1,2. Während die Sporenbildung wird DPA in die Spore Kern im Austausch für Wasser gepumpt. Den Kern umgibt , ist eine innere Membran sporen wo in den meisten sporenbildenden Bakterien, die Rezeptoren , die die kleinen Moleküle erkennen , die Keimung (Keimungsmittel) stimulieren 2 befindet. Das Hotel liegt etwas außerhalb der inneren Membran der Spore ist eine Schicht aus Zellwandpeptidoglycan. Eine spezialisierte Peptidoglycan Schicht (Cortex) umgibt die Peptidoglycan-Zellwand und viele der gleichen Komponenten wie Zellwandpeptidoglycan [alternierende N-Acetylglucosamin (NAG) und N-Acetylmuraminsäure (NAM)] zusammengesetzt ist. Jedoch etwa 50% der NAM - Reste in der Hirnrinde haben muramic-δ-lactam 5,6 umgewandelt </sup&gt;. Während der Sporenkeimung, diese muramic-δ-Lactam-Reste werden durch die Sporenrinde lytische Enzyme (SCLEs) erkannt, so dass die Rinde ermöglicht abgebaut werden (ein Prozess wesentlich Keimung abzuschließen), aber nicht die Zellwand. Die Rinde umgibt , ist eine äußere Membran und mehrere Schichten von Hüllproteinen 2. den Prozess der Keimung Steuerung ist von entscheidender Bedeutung für die sporenbildende Bakterien. Die Keimung wird eingeleitet , wenn Keimungsinduktor Rezeptoren interagieren mit ihren jeweiligen Keimungsmittel 2. In vielen sporenbildende Bakterien sind diese Keimungsmittel Aminosäuren, Zucker, Nukleotide, Ionen oder Kombinationen davon . 2 C. difficile Sporenkeimung durch Kombinationen bestimmter Gallensäuren, [zB Taurocholsäure (TA)] und Aminosäuren (beispielsweise Glycin) 7-10 eingeleitet. Obwohl es Unterschiede zwischen der C. difficile Keimung Weg und die untersuchten Wege in andere sporenbildendeBakterien, wie B. subtilis, allen gemeinsam ist die absolute Notwendigkeit der Spore Kortex abzubauen eine vegetative Zelle zu ermöglichen , von der gekeimten Spore 2,8 zu wachsen. Cortex Abbau kann durch die SCLEs CwlJ / SLEB erreicht werden oder SLEC (wie in B. subtilis gefunden) (wie in vielen Clostridia gefunden). Cortex Hydrolyse verringert die Beschränkung der Zellwand und der Spore. Dies ermöglicht eine volle Kern Rehydratisierung notwendiger Schritt in 2 viele der Proteine ​​, die für den Zellstoffwechsel zu reaktivieren. Wenn Sporen keimen, die ruhende Sporen ändert sich von einem phasen hellen Zustand in einen Phase-Dunkel-Zustand und dieser Prozess kann durch eine Veränderung der optischen Dichte (OD) bei 600 zu messen nm 11. Ein früherer Bericht legt nahe , dass ein großer Teil dieser Änderung in der OD auf die Freisetzung von DPA aus der Spore 12 zurückzuführen ist. Während unserer Studie haben wir versucht , den Zeitpunkt C zu vergleichen difficile Sporenkeimung und überwacht dieFreisetzung von DPA und Cortex - Fragmente 9. Für diese Studie war es wichtig, die Freisetzung von Cortex-Fragmente zu überwachen, wie sie begann von keimen Sporen freigesetzt werden. Die kolorimetrischen Test hier verwendet wurde , basiert auf einem Verfahren zur Bereitstellung von Zuckern mit reduzierenden Enden entwickelt Ghuysen et al erfasst wird . 13. Weil andere 14 - Protokolle zum Nachweis von reduzierenden Zuckern beschrieben haben oder diese Protokolle 15 modifiziert, kann die Literatur zu diesem Thema verwirrend sein. Hier stellen wir ausführlich die Schritt- für -Schritt - Verfahren zur kolorimetrischen Detektion von Zuckern befreit keimen C. Reduktions difficile - Sporen. Obwohl diese Studie verwendet C. difficile - Sporen sind die reduzierenden Zucker während der Keimung von Sporen von anderen sporenbildenden Bakterien freigesetzt können mit diesem Protokoll 9,16,17 erkannt werden.

<table><tbody><tr><td>2,0 ml Schraubverschluss Röhrchen</td><td>USA scientific</td><td>1420-3700</td><td></td></tr><tr><td>p1000 Eppendorf Pipette</td><td>Eppendorf</td><td></td><td></td></tr><tr><td>p200 Eppendorf Pipette</td><td>Eppendorf</td><td></td><td></td></tr><tr><td>p20 Eppendorf Pipette</td><td>Eppendorf</td><td></td><td></td></tr><tr><td>100 - 1.250 &#956; l Pipettenspitzen</td><td>VWR</td><td>89079-486</td><td></td></tr><tr><td>1 - 200 &#956; Alle Pipettenspitzen</td><td>VWR</td><td>89079-458</td><td></td></tr><tr><td>N-Acetyl-D-Glucosamin</td><td>Sigma</td><td>A3286-25G</td><td></td></tr><tr><td>Salzsäure - 10 N</td><td>BDH-Aristar</td><td>BDH3032-3.8LP</td><td></td></tr><tr><td>Essigsäureanhydrid</td><td>Alfa Aesar</td><td>L04295</td><td></td></tr><tr><td>Natriumbicarbonat</td><td>BDH</td><td>BDH0280-500G</td><td></td></tr><tr><td>Kaliumtetraborat-Tetrahydrat</td><td>Alfa Aesar</td><td>39435</td><td></td></tr><tr><td>Natriumhydroxid</td><td>BDH</td><td>BDH8019-500G</td><td></td></tr><tr><td>4-(Dimethylamino)benzaldehyd</td><td>Sigma</td><td>156477-100G</td><td></td></tr><tr><td>Gesättigtes Phenol</td><td>Fisher</td><td>BP1750-400</td><td></td></tr><tr><td>2-Mercaptoethanol</td><td>Aldrich</td><td>M6250-100ML</td><td></td></tr><tr><td>SpectraMax M3</td><td>Molekulare Bauelemente</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Essigsäure, eiskalt</td><td>BDH</td><td>BDH3098-3.8LP</td><td></td></tr><tr><td>Beheiztes, zirkulierendes Wasserbad</td><td>VWR Scientific</td><td>Modell 1136</td><td></td></tr><tr><td>Microtest 96</td><td>Falcon</td><td>353072</td><td>96 Well klare Gewebekulturplatten</td></tr><tr><td>Kulturröhrchen</td><td>VWR</td><td>89000-506</td><td></td></tr><tr><td>Lyophilisator</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Wärmeblöcke</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vortex-Maschine</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

erkennen cortex fragmente während der bakteriellen sporenauskeimung

Detecting Cortex Fragments During Bacterial Spore Germination

Der Prozess der Endosporenkeimung in Clostridium difficile und anderen Clostridien unterscheidet sich zunehmend von dem sporenbildenden Modellbakterium Bacillus subtilis. Die Keimung wird durch niedermolekulare Keimlinge ausgelöst und erfolgt ohne makromolekulare Synthese. Obwohl es Unterschiede zwischen den Mechanismen der Sporenkeimung bei Bacillus- und Clostridium-Arten gibt, ist eine gemeinsame Anforderung die Hydrolyse des Peptidoglykan-ähnlichen Kortex, die es dem Sporenkern ermöglicht, anzuschwellen und zu rehydrieren. Nach der Rehydrierung kann der Stoffwechsel beginnen, was schließlich zum Auswachsen einer vegetativen Zelle führt. Der Nachweis von hydrolysierten Kortexfragmenten während der Sporenkeimung kann schwierig sein und die Modifikationen an den zuvor beschriebenen Assays können verwirrend oder schwer zu reproduzieren sein. Basierend auf unserem jüngsten Bericht über diesen Assay beschreiben wir daher ein Schritt-für-Schritt-Protokoll für den kolorimetrischen Nachweis von Kortexfragmenten während der Keimung von Bakteriensporen.

Tabelle 1 zeigt typische Ergebnisse mit NAG - Standards. Daten verwendet werden , um eine Standardkurve zu erzeugen. Die Tabelle 2 zeigt typische Ergebnisse von einem Keimungsassay in Keimung Puffer , ergänzt mit 100 mM Glycin und 10 mM TA (Keimung fördernden Bedingungen) oder 100 mM Glycin allein (nicht-keimende Bedingungen). In Abwesenheit von TA, C. difficile - Sporen keimen nicht , und es gibt wenig Änderung in Gegenwart von cortex Fragmente...

Hierin beschreiben wir einen kolorimetrischen Assay zum Nachweis des Vorhandenseins von reduzierenden Zuckern während der Keimung von Bakteriensporen.

Erkennen Cortex Fragmente während der bakteriellen Sporenauskeimung

The process of endospore germination in Clostridium difficile, and other Clostridia, increasingly is being found to differ from the model spore-forming ...

Das übergeordnete Ziel dieses schrittweisen Protokolls besteht darin, die Menge an Cortexfragmenten oder reduzierenden Zuckern während der Keimung bakterieller Sporen zu quantifizieren. Diese Methode erläutert die erforderlichen Schritte, um das Vorhandensein von Cortexfragmenten oder reduzierenden Zuckern während der Sporenkeimung nachzuweisen. Der Hauptvorteil dieser Technik liegt darin, dass die meisten Laboratorien über die notwendigen Reagenzien und Geräte verfügen, um das Protokoll erfolgreich durchzuführen.Beginnen Sie dieses Verfahren, indem Sie ein Reagenzglas mit Clostridium difficile-Sporen in ein Heizblock geben und es 30 Minuten lang bei 65 Grad Celsius inkubieren. Nach der Inkubation stellen Sie das Reagenzglas auf Eis. Die Keimungslösung ist spezifisch für die Art der bakteriellen Sporen, die untersucht wird.Für die Bestimmung der C.difficile-Sporenkeimung verwenden wir eine Lösung aus 10 Millimolar Tris bei pH 7,5 mit 150 Millimolar Natriumchlorid, 100 Millimolar Glycin und 10 Millimolar Taurocholsäure in entionisiertem Wasser. Bereiten Sie ein Milliliter Keimungslösung pro Probe sowie ein zusätzliches Milliliter vor. Überführen Sie vor Beginn des Tests ein Millilit

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Research

Forschung

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie und Infektion

Quelle: Francis, M. B., et al. Nachweis von Kortexfragmenten während der Keimung von Bakteriensporen. J. Vis. Exp. (2016).Dieses Video zeigt eine kolorimetrische Methode zum Nachweis des Kortexabbaus während der Keimung bakterieller Sporen, indem die Freisetzung von reduzierenden Zuckern im Laufe der Zeit gemessen wird. Unter Verwendung von N-Acetylglucosamin-Standards und Zeitpunktproben quantifiziert der Assay die Zuckerkonzentration durch eine violette chromogene Reaktion, die das Ausmaß der...

Kolorimetrische Detektion des Kortexabbaus während der Keimung bakterieller Sporen

Quelle: Wen, J., Pasman, et. al., Visualisierung von Germinosomen und der inneren Membran in Bacillus subtilis-Sporen . J. Vis. Exp. (2019)Dieses Video zeigt die Verwendung von strukturierter Beleuchtungsmikroskopie, um dreidimensionale Fluoreszenzbilder zu erhalten, die die Organisation von Keimproteinen innerhalb der Bakterienspore zeigen.

Visualisierung von Keimproteinen in der inneren Membran von Bakteriensporen

Wir beschreiben ein Verfahren zum Verfolgen der endomembrane Bruch hervorgerufen durch die intrazelluläre...

Single Cell Messungen Vacuolar Rupture durch intrazelluläre Erreger verursacht

Bakterien produzieren sezernierten Verbindungen, die das Potenzial, die Physiologie der Mikroorganismen ihre Nachbarn beeinflussen. Hier beschreiben wir eine Co-Kultur Bildschirm, der Nachweis solcher chemisch vermittelte Inter Wechselwirkungen durch Mischen von Bodenmikroben mit fluoreszierenden Reporter-Transkriptions Stämmen von Bacillus subtilis auf festen Medien ermöglicht.

Mit Cokultur zur Erkennung chemisch vermittelte Interspezies-Interaktionen

Es wurde eine Methode entwickelt, um bakterielle Endosporen aus komplexen mikrobiellen Gemeinschaften herauszufiltern, um maßgeschneiderte Kultur- oder molekulare Studien dieser Bakteriengruppe durchzuführen.

Physische Isolierung von Endospores aus Umweltproben durch gezielte Lyse von vegetativen Zellen

Dieses Protokoll zeigt die wichtigen aufeinander folgenden Schritte erforderlich, um die Relevanz der Überwachung Vitalität Parameter und DNA-Reparaturprozesse in Bacillus Subtilis Sporen nach der Behandlung mit Niederdruckplasma Wiederbelebung durch tracking Fluoreszenz-markierten DNA-Reparatur Proteine über zeitaufgelösten konfokalen Mikroskopie und Rasterelektronenmikroskopie.

Untersucht die nachteiligen Effekte der Low Druck Plasmasterilisation auf das Überleben von Bacillus Subtilis Sporen mittels Live Cell Mikroskopie

Hier stellen wir Protokolle für Anfänger Forscher um Phänotypisierung für die pharmakologisch wichtigen bakteriellen Gattung Streptomyceszu initiieren.

Visuelle und Mikroskopische Auswertung von Streptomyces Entwicklungsstörungen Mutanten

Brandpilze verursachen viele verheerende landwirtschaftliche Krankheiten. Sie sind als schlafenden Brandsporen zerstreut, die als Reaktion auf ökologische Hinweise zu keimen. Wir skizzieren zwei Methoden zur Untersuchung von molekularer Veränderungen während der Keimung: Atmung Erhöhung um Stoffwechselaktivierung erkennen Messung und Bewertung von molekularen Ereignisse durch die Isolierung Brandsporen in verschiedenen morphologischen Stadien ändern.

Untersuchung von Teliospore Keimen mit Microrespiration Analyse und Mikrodissektion

Germinant Rezeptor-Proteine-Cluster in "Germinosomes" in der inneren Membran der Bacillus Subtilis Sporen. Wir beschreiben ein Protokoll mit Superresolution Mikroskopie und Leuchtstoffröhren Reporter Proteine, um Germinosomes zu visualisieren. Das Protokoll zeigt auch Spore innere Membrandomänen, die bevorzugt mit dem Membran-Farbstoff FM4-64 gefärbt sind.

Visualisierung von Germinosomes und die innere Membran in Bacillus Subtilis Sporen

Die Infektion von Caenorhabditis elegans durch den mikrosporidianen Parasiten Nematocida parisii ermöglicht es den Würmern, Nachkommen zu produzieren, die gegen denselben Erreger sehr resistent sind. Dies ist ein Beispiel für vererbte Immunität, ein wenig verstandenes epigenetisches Phänomen. Das vorliegende Protokoll beschreibt die Untersuchung der vererbten Immunität in einem genetisch handhabbaren Wurmmodell.

Untersuchung der vererbten Immunität in einem Caenorhabditis elegans Modell der Mikrosporidieninfektion

Dieses Protokoll konzentriert sich auf die Verwendung von Durchflusszytometrie und Zählperlen zur Quantifizierung von Bakteriensporen, die mit Ethidiumbromid markiert sind. Die Methode ist auch effizient, um die kovalente Kopplung von Proteinen auf der Oberfläche intakter Sporen zu analysieren.

Verbesserung der Bacillus subtilis-Sporenzählung und Markierungsanalyse in der Durchflusszytometrie

Erfahren Sie eine kolorimetrische Methode zur Quantifizierung von Cortex-Fragmenten während der bakteriellen Sporenauskeimung bei Clostridium difficile. Dieses Protokoll ermöglicht Forschern die Untersuchung metabolischer Prozesse.

Erkennen Cortex Fragmente während der bakteriellen Sporenauskeimung

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