Name: Implantations- und Aufzeichnung von Wireless-Elektroretinogramm und visuell evozierten Potenziale in wachen Ratten (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-06-29T15:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 22 s
Description: Lernen Sie die chirurgische Implantation drahtloser Telemetriesonden zur gleichzeitigen Aufzeichnung von ERG und VEP bei wachen Ratten. Diese Methode ermöglicht präzise elektrophysiologische Messungen ohne Narkoseeinflüsse.

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JC möchte dem David Hay Memorial Fund, The University of Melbourne, für die finanzielle Unterstützung beim Schreiben dieses Manuskripts danken. Die Finanzierung dieses Projekts erfolgte durch einen ARC Linkage Grant 100200129 (BVB, AJV, CTON).

Ethik - Anweisung: Tierversuche wurden in Übereinstimmung mit dem australischen Kodex für die Pflege und Verwendung von Tieren für wissenschaftliche Zwecke (2013) durchgeführt. Die Tierethik Genehmigung wurde von der Tierethikkommission der Universität Melbourne erhalten. Die Materialien werden hier für die Laborversuche nur und nicht für medizinische oder veterinärmedizinische Verwendung bestimmt. 1. Vorbereiten Elektroden Hinweis: Ein Drei-Kanal-Sender ist für die chirurgische Implantation verwendet, die 2 ERG und 1 VEP Aufzeichnung ermöglicht gleichzeitig durchgeführt werden. Die drei aktiven und inaktiven drei Elektroden müssen in eine Ringform vor der Implantation, um das Auge zu befestigen vorgearbeitet werden. Zur Identifizierung hat der Hersteller aktive Elektroden in halb weiß, halb farbigen Kunststoff-Ummantelungen eingeschlossen, während inaktive Elektroden in vollfarbigen Scheiden bedeckt sind. Die Masseelektrode (durchsichtiger Plastikhülle) wird unverändert gelassen. Für alle aktiven und inaktiven elektrOden Verhalten Schritte 1.1, 1.2, 1.3 und 1.7. <ol><li> Aufdrehen Doppelstrang-Elektrode aus rostfreiem Stahl mit zwei feinen Spitzen versehenen Zange. </li><li> Schneiden Sie eine der Edelstahl-Stränge (ca. 1 cm von der Spitze), einen einzigen längeren geraden Strang verlassen verbleibenden, um die Ringelektrode zu formen. </li><li> Falten Sie den einzelnen Edelstahl-Strang wieder auf sich selbst und drehen, einen glatten Ring an der Spitze der Elektrode bilden. </li><li> Für die ERG aktiven Elektroden Art und Weise diese Schleife ~ 0,2-0,5 mm Durchmesser durch die Basis der Schleife drehen (für den hier beschriebenen Zweck, Form zwei aktive Elektroden auf diese Weise ERG von beiden Augen zu erfassen), und die ERG inaktiv und VEP Elektroden machen die Schleife Durchmesser ~ 0,8 mm Durchmesser (in diesem Beispiel, tun dies für eine aktive VEP Elektrode und alle drei inaktive Elektroden). </li><li> Haken Sie die Kreis VEP aktive Elektrode um eine Schraube aus rostfreiem Stahl (Durchmesser 0,7 mm, Länge 3 mm), so dass die Elektrode liegt an dem Schraubenkopf. </li><li> Hook die 3 inaktive Elektroden (2 ERG, 1 VEP) um eine zweite Schraube aus rostfreiem Stahl (Durchmesser 0,7 mm, Länge 3 mm). </li><li> Ziehen Sie die Kunststoffhülse nach vorne über den spitzen Enden der beiden Edelstahl-Strang-Reizung zu reduzieren. </li><li> Sterilisieren der Telemetriesender von ca. 25 ° C für mehr als 10 Stunden in 2% Glutaraldehyd Einweichen. Dann spülen Sie den Sender mit steriler Kochsalzlösung 3 mal. </li></ol> 2. Sender Implantierung <ol><li> Tiervorbereitung <ol><li> Desinfizieren Sie den OP-Bereich vor dem Experiment, indem sie mit 70% Ethanol reinigen. Autoklav alle chirurgische Geräte vor dem Gebrauch und warten Anlagen in Chlorhexidin, wenn sie nicht in Gebrauch während der Operation. Decken Sie das Tier mit einem Operationstuch während der Operation eine sterile Umgebung aufrechtzuerhalten. Sicherstellen, dass alle Experimentatoren tragen chirurgische Masken, sterile Handschuhe und Kittel. </li><li> Induzieren Anästhesie mit 1,5 bis 2% Isofluran, bei einer Strömungsgeschwindigkeit von 3 l / min und der Wartung des2% bei 2 L / min während des gesamten surgery - 1,5 definiert. Bestätigen ausreichende Narkosetiefe durch das Fehlen eines Pedals Reflex auf den Muskel zwischen den Zehen einklemmen. </li><li> Rasur eine 40 mm x 30 mm Fläche, über dem Abdomen von oberhalb der Leiste bis zum Sternum. </li><li> Rasur eine 30 mm x 20 mm Fläche, über die Stirn, posterior zu den Augen und ventral der Ohren. </li><li> Desinfizieren Sie die zwei rasierten Flächen. Für die Stirnbereich mit 10% Povidon-Iod dreimal (vermeiden Sie die Verwendung von Alkohol-basierte Antiseptika für die Fläche in der Nähe des Auges, mit dem Standard der Praxis in Einklang stehen von der Association of Surgical Technologen festgelegt) zu desinfizieren. Über den Bauch desinfizieren mit 10% Povidon-Jod und 70% Ethanol. </li><li> 1 Tropfen Proxymetacain auf die Hornhaut für zusätzliche Lokalanästhesie. </li><li> 1 Tropfen Carboxymethylcellulose-Natrium zur Hornhaut Trocknen der Augen zu verhindern. </li></ol></li><li> chirurgische Implantation <ol><li> Machen Sie eine 10 mm Einschnittauf dem Kopf entlang der vertikalen Mittellinie zwischen den Ohren mit einem chirurgischen Skalpell. </li><li> Machen Sie einen 5 mm Einschnitt auf dem Bauch durch die Hautschicht entlang der Mittellinie unterhalb des Brustbeins. </li><li> Tunnel ein Durchmesser von 5 mm Kanüle subkutan aus dem Bauch Schnitt auf den Kopf Einschnitt. </li><li> Führen Sie die Elektrodendrähte (3 aktiv und 3 inaktiv) des Senders durch die Kanüle aus dem Bauch in den Kopf. </li><li> Lassen Sie die Referenzelektrode mit dem Sender Basis und decken die Elektrodenspitze mit aseptischer Gaze. </li><li> Decken Sie die Elektrodenspitzen (3 aktiv und 3 inaktiv) mit aseptischer Gaze. </li><li> Befestigen Sie den Kopf der Ratte zu einer stereotaktischen Plattform. </li><li> Verlängern Sie die Stirn Einschnitt bis 30 mm in der Länge mit einer chirurgischen Schere. </li><li> Expose OP-Bereich durch lose Haut mit 2 Nähten Einfahren (3-0) bei ~ 3 und 9 Uhr. </li><li> Kratzen Sie die Periost über dem Schädel mit sterilisierten Gaze aus zu belichten Bregma, Lambda und Mittellinie Nähten. </li&gt; <li> Bohren Sie zwei Löcher durch den Schädel an der VEP aktiv (7 mm ventral Bregma 3 mm lateral Mittellinie) und inaktiven (5 mm rostral auf der Mittellinie zu Bregma) stereotaxische Koordinaten. </li><li> Bringen Sie VEP aktive und inaktive Elektroden mit vormontierten Schrauben aus Edelstahl (Durchmesser 0,7 mm, Länge 3 mm) auf den Schädel mit einem kleinen Schraubenzieher auf ~ 1 mm in der Tiefe in die vorgefertigten Löcher. Das verankert die Schraube bis auf die Knochen, ohne die zugrunde liegende Rindengewebe zu schädigen. </li><li> Um die ERG aktiven Elektroden implantieren verwenden, um eine 8-0 Naht, um vorübergehend das obere Augenlid zurückzuziehen. </li><li> Legen Sie eine 16 bis 21 G Kanüle subkutan hinter dem Auge bis zum überlegen Fornix conjunctivae. </li><li> Entfernen Sie die Führungsnadel. </li><li> Ziehen Sie die aktive Elektrode durch die verkürzte Kunststoff-Katheter von der Stirn auf das Auge. Dann entfernen Sie die Kunststoff-Katheter. </li><li> Eine temporäre Naht (8-0), die durch die Elektrodenschleife eingeschraubt ist, zu verhindern, dass die elektrode aus zurück in den Tunnel zurückzieht. </li><li> Machen Sie einen 0,5 mm Einschnitt auf der oberen Bindehaut um 12 Uhr, 1 mm hinter Limbus. Verwenden Sie stumpfe Dissektion die darunter liegende Lederhaut freizulegen. </li><li> Implantieren eines 8-0 oder 9-0 Naht unmittelbar hinter dem Limbus bei halber scleral Dicke. </li><li> Entfernen temporärer Naht von ERG aktiven Elektrode. </li><li> Anchor die ERG aktive Elektrode zur Hälfte scleral Dicke Naht von 3 aufeinander folgenden Knoten binden die Spitze der Elektrode sicherzustellen, liegt in der Nähe des Limbus. </li><li> Schließen Sie die Bindehautlappen mit 1 bis 2 unterbrochen Nähten (8-0 zum 9 - 0). Stellen Sie sicher, dass die Bindehaut vollständig die ERG-Elektrode zur Verbesserung des Komforts umfasst. </li><li> Entfernen Sie das Augenlid Einziehen Naht. </li><li> Wiederholen Sie den Vorgang für das andere Auge. </li><li> Bewerben Cyanacrylat Gel über den Schädel alle rostfreie Schrauben und Elektrodendrähte zu sichern. Sicherstellen, dass die ERG aktiven Elektroden sind nicht zu eng gezogen, bevor sie en Sicherungkönnen Augenbewegungen. </li><li> Schließen Sie die Kopfwunde ein nicht resorbierbares 3 unter Verwendung von - 0 Naht. </li><li> Drehen Sie Nagetier Bauchbereich zu belichten. Verlängern Sie die Bauchhauteinschnitt bis 40 mm entlang der linea alba mit chirurgische Scheren. </li><li> Machen Sie eine 35 mm Schnitt durch die innere Muskelwand der inneren Bauchhöhle zu belichten. </li><li> Mit Hilfe von zwei Nähten (3-0) befestigen Sie den Senderkörper auf der rechten Seite inneren Bauchdecke des Tieres. Vermeiden Sie die Leber in Kontakt. </li><li> Schleife die Masseelektrode und sicher in dieser Form mit einer Naht (3-0). Legen Sie es in die Bauchhöhle freischwebend. </li><li> Schließen Sie das Peritoneum eine fortlaufende Naht mit (3-0). </li><li> Schließen Sie den Hautschnitt mit Einzelnähten (3-0). </li></ol></li><li> Die postoperative Betreuung <ol><li> Überwachen Sie das Tier, bis es genügend Bewusstsein wiedererlangt Brustlage zu halten. Haus das Tier folgenden einzeln die Operation. </li><li> Verwalte carprsubkutan ofen für Analgesie (5 mg / kg) einmal täglich für 4 Tage. </li><li> Fügen prophylaktischen oralen Antibiotika (Enrofloxin, 5 mg / kg) an das Trinkwasser für 7 Tage nach der Operation. </li><li> Tragen Sie eine entzündungshemmende Salbe auf die Haut Inzisionsstellen Reizung für die ersten 7 Tage nach der Operation zu reduzieren. </li></ol></li></ol> 3. Führen Sie ERG und VEP Recordings in wachen Ratten <ol><li> Dunkle anpassen Tier für 12 Stunden vor der ERG und VEP-Aufnahmen </li><li> Führen Sie alle experimentellen Manipulationen bei schwacher roter Beleuchtung (17,4 cd.m -2, λ max = 600 nm) </li><li> Bewerben Lokalanästhesie (0,5% Proxymetacain) und dilating (0,5% Tropicamid) fällt auf der Hornhaut. </li><li> Führen Sie das bewusste Nagetier in einem Maß, klar Verzögerer. Anmerkung: Die Länge dieser Kunststoffrohr kann eingestellt werden, um unterschiedliche Größe Ratten unterzubringen mit dem Gesamtdurchmesser auf 60 mm festgelegt. Das vordere Ende der Vorrichtung verjüngt Kopf mo zu minimierenserung und enthält Perforationen normale Atmung zu ermöglichen. Dieser verjüngte Front ermöglicht die Ausrichtung und Stabilisierung der Ratte den Kopf und die Augen für die Öffnung der Kugel Ganzfeld. Man beachte, dass das Nagetier zum Verzögerer akklimatisiert wurde (3 bis 5 Mal) vor der Operation. </li><li> Platzieren Sie den Nager vor dem Ganzfeld Schüssel mit den Augen mit der Öffnung der Schale ausgerichtet sind. </li><li> Einschalten indwelling Sender durch einen Magneten innerhalb von ~ 5 cm des Senders verläuft. Stellen Sie sicher, dass der Sender die LED-Statusanzeige durch Überprüfung auf der Empfängerbasis eingeschaltet ist. </li><li> Sammeln Signale über einen Bereich von Lichtenergie ( das heißt, -5,6 bis 1,52 log cd.sm -2) , wie zuvor beschrieben 21. Kurz gesagt, durchschnittlich mehr Signale an den Dimmer Lichtpegel (~ 80 Wiederholungen) und weniger bei den helleren Lichtenergien (~ 1 Wiederholung). Allmählich verlängern von 1 bis 180 Sekunden von dimmest zum hellsten Lichtpegel der Interstimulus Intervall. </li><li> Um die ERG Stange isolierenund Kegel Antworten verwenden einen Doppel Flash - Paradigma 8. Zum Beispiel initiieren zwei Blitze bei 1,52 log cd.sm -2 mit einem 500 ms Inter-Stimulus - Intervall in-between. </li><li> Zur Aufzeichnung VEP Signale, durchschnittlich 20 Wiederholungen bei den helleren Lichtenergien (dh 1,52 log cd.sm -2, 5 sec Inter-Stimulus - Intervall). </li><li> Zur Beurteilung der Implantatstabilität, die durch Signalvariabilität im Laufe der Zeit beurteilt wird, führen ERG und VEP Aufnahmen 7, 10, 14, 21 und 28 Tage nach der Operation. </li><li> Folgende Versuchsperiode euthanize Ratten über intrakardiale Injektion von pentobarbiturate (1,5 ml / kg) nach dem Ketamin: Xylazin Anästhesie (12: 1 mg / kg). </li></ol>

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RG und RF sind Mitarbeiter des kommerziellen Geldgebers dieser Forschung (Pfizer Neusentis und Pfizer Global Research). MI war während dieser Forschung Mitarbeiter von Pfizer Global Research und ist derzeit Mitarbeiter von Proteostasis Therapeutics (Cambridge, USA).

Aufgrund der minimal-invasive Art visueller Elektrophysiologie, ERG und VEP-Aufnahmen bei menschlichen Patienten werden unter Bedingungen durchgeführt bewußten und erfordern nur die Verwendung von topischen Anästhetika zur Elektrodenplatzierung. Im Gegensatz dazu wird visuelle Elektro in Tiermodellen üblicherweise unter Vollnarkose durchgeführt, durch die Beseitigung freiwilligen Auge und Körperbewegungen stabile Platzierung der Elektroden zu ermöglichen. Jedoch häufig verwendete allgemeine Anästhetika verändern die ERG...

Die ERG und VEP sind minimal in vivo - Tools invasive sowohl die Integrität der retinalen und der Sehbahn jeweils im Labor und Klinik zu beurteilen. Die Vollfeld ERG ergibt eine charakteristische Wellenform , die in verschiedene Komponenten aufgeteilt werden können, wobei jedes Element die verschiedene Zellklassen des retinalen Stoffwechselweg 1,2. Die klassische Vollfeld - ERG - Wellenform besteht aus einer anfänglichen negativen Steigung (a-Welle) die Photorezeptoraktivität Post Belichtung repräsentieren 2-4 gezeigt wurde , . Die a-Welle wird durch eine wesentliche positive Wellenform (b-Welle) gefolgt , die elektrische Aktivität der mittleren Netzhaut reflektiert überwiegend die ON-bipolaren Zellen 5-7. Darüber hinaus kann eine Lichtenergie variieren und Inter-Stimulus-Intervall Kegel von der Stange Antworten 8 zu isolieren. Der Flash-VEP stellt elektrische Potentiale des visuellen Kortex und im Hirnstamm in Reaktion auf retinale Lichtstimulation9,10. Diese Wellenform kann in frühen und späten Komponenten zerlegt werden, wobei die frühe Komponente Reflexions Aktivität von Neuronen des retino-geniculo-striate Weg 11-13 und den späten Anteil darstellt kortikale Verarbeitung in verschiedenen Schichten V1 durchgeführt in Ratten 11,13. Daher gleichzeitige Messung der ERG und VEP liefert umfassende Bewertung der in der Sehbahn beteiligten Strukturen. Derzeit, um die Elektrophysiologie in Tieren aufzunehmen, wird der Anästhesie eingesetzt, um stabile Platzierung der Elektrode zu ermöglichen. Es gab Versuche, 14-16 in wachen Ratten ERG und VEP zu messen , aber diese Studien eine verdrahtete Einrichtung eingesetzt, die mühsam sein kann und 17 durch die Beschränkung Tier Bewegung und natürliches Verhalten zu Tier Stress führen kann. Mit den jüngsten Fortschritten in der drahtlosen Technologie einschließlich der Verbesserung der Miniaturisierung und Lebensdauer der Batterie ist es nun möglich, eine Telemetrie Ansatz für ERG eine umzusetzend VEP-Aufnahme, die mit verdrahteten Aufnahmen verbunden sind Stress zu verringern und langfristige Rentabilität zu verbessern. Vollständig internalisiert stabile Implantationen von Telemetrie - Sonden haben sich für chronische Überwachung der Temperatur um erfolgreich zu sein, den Blutdruck 18, Aktivität 19 sowie Elektroenzephalographie 20. Solche Fortschritte in der Technologie wird auch mit Wiederholbarkeit und Stabilität der bewussten Aufnahmen helfen, die Plattform der Nutzen für chronische Studien zu erhöhen.

<table><tbody><tr><td>Bioverstärker</td><td>ADInstruments</td><td>ML 135</td><td>Verstärkt ERG- und VEP-Signale</td></tr><tr><td>Carboxymethylcellulose Natrium 1,0 %</td><td>Allergan</td><td>CAS 0009000-11-7</td><td>Aufrechterhaltung der Hydratation der Hornhaut während der Operation</td></tr><tr><td>Carprofen 0,5 %</td><td>Pfizer Animal Health Group</td><td>CAS 53716-49-7</td><td>Analgesie nach der Operation, verabreicht mit injizierbarer Kochsalzlösung zur Flüssigkeitsauffüllung</td></tr><tr><td>Chlorhexadin 0,5 %</td><td>Orion Laboratories</td><td>27411, 80085</td><td>Desinfektion von chirurgischen Instrumenten</td></tr><tr><td>Cyanacrylat-Gel-Aktivator</td><td>RS-Komponenten</td><td>473-439</td><td>Trocknet schnell Cyanacrylat-Gel</td></tr><tr><td>Cyanocrylat-Gel&nbsp;</td><td>RS components</td><td>473-423</td><td>Befestigen Sie rostfreie Schrauben am Schädel</td></tr><tr><td>Zahnfräser</td><td>Storz Instruments, Bausch und Lomb</td><td>E0824A</td><td>Miniatur-Bohrkopf mit ~ 0,7 mm Durchmesser zum Bohren eines kleinen Lochs in den Schädel über jeder Halbkugel zur Implantation von VEP-Schrauben</td></tr><tr><td>Bohrer</td><td>Bosch</td><td>Dremel 300 series</td><td>Automatischer Bohrer zum Trepanieren</td></tr><tr><td>Enrofloxin</td><td>Troy Laboratories</td><td></td><td>Prophylaktischer Antibiotika-Pfosten </td></tr><tr><td>Ganzfeld Ulbrichtsche Kugel</td><td>Photometric Solutions International</td><td></td><td>Kundenspezifischer Lichtstimulator: 36 mm Durchmesser, 13 cm Apertur</td></tr><tr><td>Mulltupfer</td><td>Multigate Medical Products Pty Ltd</td><td>57-100B</td><td>Trocknet chirurgische Schnitte und freiliegende Schädeloberfläche während der Operation</td></tr><tr><td>Isofluran 99,9 %</td><td>Abbott Australasia Pty Ltd</td><td>CAS 26675-46-7</td><td>Proprietärer Name: Isoflo(TM) Inhalationsanaästhetikum. Inhalationsanästhetikum in pharmazeutischer Qualität, gemischt mit Sauerstoffgas für die VEP-Elektrodenimplantatchirurgie</td></tr><tr><td>Kenacomb Salbe</td><td>Aspen Pharma Pty Ltd</td><td></td><td>Zur Verringerung von Hautreizungen und Juckreiz nach der Operation</td></tr><tr><td>Luxeon LEDs</td><td>Phillips Lighting Co.</td><td></td><td>Für die Lichtstimulation, zwanzig 5-W- und eine 1-W-LED, gesteuert von der Scope-Software</td></tr><tr><td>Nadel (Makrochirurgie)</td><td>World Precision Instruments</td><td>501959</td><td>für die Naht von Bauch- und Kopfoperationen, verwendet mit 3 - 0 Nahtmaterial, Augennadel, Schneide 5/16 Kreis Größe 1, 15 mm</td></tr><tr><td>Nadelhalter (Makrochirurgie)</td><td>World Precision Instruments</td><td>500224</td><td>Zum Halten der Nadel bei Bauch- und Kopfoperationen</td></tr><tr><td>Nadelhalter (Mikrochirurgie)</td><td>World Precision Instruments</td><td>555419NT</td><td>Zum Halten der Nadel während der Augenchirurgie</td></tr><tr><td>Optiva-Katheter</td><td>Smiths Medical International LTD</td><td>16 oder 21 G</td><td>Aktive Elektroden der Hornhaut vom Schädel zur Bindehaut</td></tr><tr><td>führen Povidon-Jod 10%</td><td>Sanofi-Aventis</td><td>CAS 25655-41-8</td><td>Proprietäre Bezeichnung: Betadine, Antiseptikum zur Vorbereitung der rasierten Haut auf die Operation 10%, 500 ml</td></tr><tr><td>Powerlab Datenerfassungssystem</td><td>ADInstruments</td><td>ML 785</td><td>Erfassen Sie das Signal vom Telemetriesender, gekoppelt mit dem Telemetriedatenkonverter</td></tr><tr><td>Proxymetacain 0,5%</td><td>Alcon Laboratories&nbsp;</td><td>CAS 5875-06-9</td><td>Topische Augenanalgesie</td></tr><tr><td>Halterung</td><td>hergestellt</td><td></td><td>Die Vorderseite des Rückhaltesystems ist verjüngt, um die Kopfbewegung zu minimieren, die Länge kann an unterschiedliche Rattenlängen angepasst werden, der Gesamtdurchmesser beträgt 60 mm.</td></tr><tr><td>Scapel-Klinge</td><td>R.G. Medical Supplies</td><td>SNSM0206</td><td>Für chirurgische Schnittscheren</td></tr><tr><td>(Makrochirurgie)</td><td>World Precision Instruments</td><td>501225</td><td>zum Schneiden von Gewebe an den Bauch- und</td></tr><tr><td>Stirnscheren (Mikrochirurgie)</td><td>World Precision Instruments</td><td>501232</td><td>Zum Präparieren der Bindehaut für die Elektrodenbefestigung</td></tr><tr><td>Scope Software</td><td>ADInstruments</td><td>Version 3.7.6</td><td>Löst gleichzeitig den Stimulus über das ADI Powerlab System aus und sammelt Daten</td></tr><tr><td>Shaver</td><td>Oster</td><td>Golden A5</td><td>Rasierfell aus Operationsbereichen</td></tr><tr><td>Rostfreie Streelschrauben&nbsp;</td><td>MicroFasteners</td><td>L001.003CS304</td><td>0,7 mm Wellendurchmesser, 3 mm Länge&nbsp;</td></tr><tr><td>Stereotaktischer Rahmen</td><td>David Kopf</td><td>Modell 900</td><td>Ein stereotaktisches Instrument für Kleintiere zur Lokalisierung der Implantationsmarkierungen auf dem Schädel</td></tr><tr><td>Chirurgisches Abdecktuch</td><td>Vital Medical Supplies</td><td>GM29-612EE</td><td>Gewährleisten Sie eine sterile Umgebung während der Operation</td></tr><tr><td>Naht (Makrochirurgie)</td><td>Ninbo medizinische Nadeln</td><td>3-0</td><td>zum Nähen von Bauch- und Kopfoperationen, steril seidengeflochten, 60 cm</td></tr><tr><td>Nahtnadel ( Mikrochirurgie)</td><td>Ninbo medizinische Nadeln</td><td>8-0 oder 9-0</td><td>für die Augenchirurgie, einschließlich Naht der Elektrode zur Sklera und Verschließen der Bindehautwunde, Nylonnaht, 3/8 Kreis 1 &; mal 5, 30 cm</td></tr><tr><td>Telemetrie-Datenkonverter&nbsp;</td><td>DataSciences International</td><td>R08</td><td>ermöglicht die Schnittstelle von Telemetriesignalen mit Datenerfassungssoftware</td></tr><tr><td>Telemetrie-Datenaustauschmatrix</td><td>DataSciences International</td><td></td><td>Sammelt Daten von Sendern und koppelt sie mit dem Empfänger</td></tr><tr><td>Telemetrie-Datenempfänger</td><td>DataSciences International</td><td>RPC-1</td><td>Empfängt Telemetrie-Daten vom Sender</td></tr><tr><td>Telemetrie-Sender</td><td>DataSciences Internationaler</td><td>F50-EEE</td><td>3-Kanal-Telemetriesender</td></tr><tr><td>Tropicamide 0,5</td>%<td>Alcon Laboratories&nbsp;</td><td></td> Pinzette zur <td>Iriserweiterung</td></tr><tr><td>(Makrochirurgie)</td><td>World Precision Instruments</td><td>500092</td><td>Manipulation von Gewebe bei Bauch- und Kopfoperationen</td></tr><tr><td>Pinzette (Mikrochirurgie)</td><td>World Precision Instruments</td><td>500342</td><td>Manipulation von Geweben bei Augenoperationen</td></tr></tbody></table>

implantations- und aufzeichnung von wireless-elektroretinogramm und visuell evozierten potenziale in wachen ratten

Implantation and Recording of Wireless Electroretinogram and Visual Evoked Potential in Conscious Rats

Die Vollfeld-ERG (ERG) und visuell evozierten Potential (VEP) sind nützliche Werkzeuge, Netzhaut- und Sehbahn Integrität sowohl in Labor- und klinischen Umfeld zu bewerten. Derzeit werden präklinische ERG und VEP-Messungen mit Betäubung durchgeführt stabile Elektrodenanordnungen zu gewährleisten. Jedoch hat die Anwesenheit der Anästhesie wurde gezeigt normalen physiologischen Reaktionen zu verunreinigen. Um diese Anästhesie verwechselt zu überwinden, entwickeln wir eine neue Plattform zu testen, ERG und VEP in wachen Ratten. Die Elektroden werden chirurgisch Unter konjunktival auf das Auge implantiert, um die ERG und epidural über dem visuellen Kortex zu untersuchen den VEP zu messen. Eine Reihe von Amplitude und Empfindlichkeit / Timing-Parameter sind sowohl für die ERG und VEP bei steigender Licht Energien untersucht. Die ERG und VEP-Signale werden gezeigt für mindestens 4 Wochen nach der chirurgischen Implantation stabil und wiederholbar sein. Diese Fähigkeit, ERG und VEP-Signale ohne Anästhesie aufnehmen confounds in den vorklinischen setting sollte überlegen Übersetzung klinische Daten zur Verfügung stellen.

Der Photorezeptor - Antwort wird durch den Einbau eines verzögerten Gaußsche an der Vorderkante des anfänglichen absteigenden Schenkel der ERG - Antwort in den oberen 2 Leucht Energien (1,20, 1,52 log csm -2) für jedes Tier analysiert, basierend auf dem Modell von Lamb und Pugh 22, formuliert von Hood und Birch 23. Diese Formel gibt eine Amplitude und eine Empfindlichkeitsparameter, (1C bzw. 1D). Eine hyperbolische Funkti...

Wir zeigen eine chirurgische Implantation und Aufnahmeverfahren visuelle elektro Signale aus dem Auge (ERG) und Gehirn (visuell evozierte Potentiale) zu messen in der bewussten Ratten, die mehr analog zum menschlichen Zustand ist, wo Aufnahmen ohne Narkose verwechselt durchgeführt werden.

Implantations- und Aufzeichnung von Wireless-Elektroretinogramm und visuell evozierten Potenziale in wachen Ratten

The full-field electroretinogram (ERG) and visual evoked potential (VEP) are useful tools to assess retinal and visual pathway integrity in both ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens besteht darin, bewusste ERG- und VEP-Signale nach der chirurgischen Implantation drahtloser Telemetrieproben zu messen. Diese Technik kann helfen, zentrale Fragen im Bereich der Neurowissenschaften zu beantworten, beispielsweise wie sich Neuronen ohne die Einschränkung einer Vollnarkose unter gesunden Bedingungen sowie bei Krankheitszuständen verhalten. Der Hauptvorteil dieser Technik liegt darin, dass sie gleichzeitige Aufnahmen der Elektrophysiologie für die Netzhaut und für den visuellen Kortex bei wachen Tieren ermöglicht.Beginnen Sie das Verfahren, indem Sie die Elektroden unter einem Mikroskop vorbereiten. Dazu lösen Sie mit zwei feinspitzigen Zangen einen doppelsträngigen, rostfreien Stahlelektroden auf. Schneiden Sie einen der Stränge aus rostfreiem Stahl etwa einen Zentimeter von der Spitze entfernt ab, sodass ein einzelner, längerer, gerader Strang verbleibt, der zur Formung der Ringelektrode dient.Dann falten Sie den einzelnen Edelstahldraht zurück in sich selbst und drehen Sie ihn zu einem glatten Ring an der Spitze der Elektrode. Formen Sie anschließend eine ERG-aktive Elektrode, indem Sie die Basis der Schleife drehen, um einen

implantation-recording-wireless-electroretinogram-visual-evoked

Research

Forschung

JoVE Journal

Behavior

Verhalten

Dieses Video zeigt die Vorbereitung eines Rattenmodells zur Untersuchung der Netzhautgesundheit und der Integrität der Sehbahn. Visuell evozierte Potential- und Elektroretinographie-Referenz- und aktive Elektroden werden mit der Ratte verbunden, gefolgt von der Ausrichtung der Plattform mit der Ratte vor der Ganzfeld-Schale für eine gleichmäßige Netzhautbeleuchtung und dem Schließen des Faradayschen Käfigs, um externe Störungen zu vermeiden.

Vorbereitung eines Rattenmodells zur Beurteilung der Integrität der Sehbahn unter Verwendung eines elektrophysiologischen Aufbaus

Dieses Video zeigt das detaillierte Verfahren zur Vorbereitung einer anästhesierten Ratte für elektrophysiologische Aufzeichnungen der Gehirnaktivität von mehreren Stellen. Die Kopfhaut wird präpariert, um Zugang zum Schädel zu erhalten, und es werden Löcher an präzisen Stellen gebohrt, um Elektroden zu installieren und zu sichern. Wolfram-Mikrodrahtelektroden werden dann an der Zielstelle eingesetzt, um die Daten aufzuzeichnen.

In vivo Elektrophysiologische Aufzeichnungen von Gehirnaktivitäten von mehreren Stellen bei Ratten

Das Video zeigt ein Verfahren zur Implantation einer drahtlosen bidirektionalen Mehrkanal-Elektrodeneinheit in ein Rattengehirn, um mehrkanalige neuronale Netze aufzuzeichnen und zu stimulieren.

Implantation eines drahtlosen bidirektionalen Mikroelektrodensystems in ein Rattengehirn

Dieses Video zeigt den Prozess der Messung visuell evozierter Potentiale oder VEPs bei einer dunkeladaptierten, anästhesierten Ratte mit präimplantierten Schädelelektroden, die die elektrischen Signale vom visuellen Kortex des Gehirns als Reaktion auf Lichtreize aufzeichnen.

Aufzeichnung visuell evozierter Potentiale über die Schädelelektroden in einem Rattenmodell

Dieses Video zeigt die Methode zur Implantation eines On-Head-Elektrodensystems in eine anästhesierte Ratte zur Echtzeit-Anfallserkennung. Das Verfahren umfasst das Platzieren von Stimulations- und Aufzeichnungselektroden, das Befestigen mit Zahnzement und das Anschließen an einen am Kopf montierten Verstärker.

Implantation eines On-Head-Elektrodensystems in ein Rattenmodell zur Echtzeit-Erkennung von Anfällen

Dieses Video zeigt, wie man das Elektroretinogramm (ERG) und das visuell evozierte Potenzial (VEP) bei einer bewussten Ratte aufzeichnet. Die Ratte wird zunächst mit chirurgisch implantierten Elektroden dunkeladaptiert. Nach dem Auftragen von dilatierenden Tropfen wird das Tier in eine Fesselung gelegt und in eine Ganzfeld-Schüssel gelegt. Anschließend werden die ERG- und VEP-Signale aufgezeichnet.

Aufnahme des Elektroretinogramms und des visuell evozierten Potentials bei einer Ratte

Das Video zeigt die Aufzeichnung von Elektroenzephalogramm (EEG)-Signalen von anfallsinduzierten Rattenwelpen. Nehmen Sie einen frei beweglichen Welpen, dem Elektroden implantiert wurden, die mit einem Datenerfassungssystem verbunden sind. Ein Neurotoxin wird verabreicht, um epileptische Anfälle auszulösen, und die daraus resultierende elektrische Bursting-Aktivität wird mit Hilfe des EEG-Signals überwacht.

Aufzeichnung von induzierten Anfällen mittels Elektroenzephalographie bei frei beweglichen Rattenbabys

Fokale Demyelinisierung wird im Sehnerv durch Lysolecithin-Mikroinjektion induziert. Visuell evozierte Potentiale werden über Schädelelektroden aufgezeichnet, die über den visuellen Kortex implantiert werden, um die Signalleitung entlang der Sehbahn in vivo zu untersuchen. Dieses Protokoll beschreibt die chirurgischen Verfahren, die der Elektrodenimplantation und der Mikroinjektion des Sehnervs zugrunde liegen.

Visuell evozierten Potential-Aufnahme in einem Rattenmodell für Experimentelle Optic Nerve Demyelinisierung

Dieses Protokoll beschreibt die gleichzeitige Messung von Elektroretinogramm und visuell evozierten Potentialen bei anästhesierten Ratten.

Gleichzeitige Aufnahme von Elektroretinographie und visuell evozierten Potentialen in narkotisierten Ratten

Ein kabelloses, bidirektionale System für neuronale Mehrkanal-Aufnahmen und Stimulation in Ratten frei Verhalten wird eingeführt. Das System ist leicht und kompakt, so dass nur minimale Auswirkungen auf die Futtersorten Verhaltensrepertoire. Darüber hinaus bietet dieses bidirektionale System ein ausgefeiltes Instrument um kausale Zusammenhänge zwischen Aktivierungsmuster Gehirn und Verhalten zu beurteilen.

Ein kabelloses, bidirektionale Schnittstelle für In Vivo Aufnahme und Stimulation der neuronalen Aktivität in Ratten frei Verhalten

Lernen Sie die chirurgische Implantation drahtloser Telemetriesonden zur gleichzeitigen Aufzeichnung von ERG und VEP bei wachen Ratten. Diese Methode ermöglicht präzise elektrophysiologische Messungen ohne Narkoseeinflüsse.

Implantations- und Aufzeichnung von Wireless-Elektroretinogramm und visuell evozierten Potenziale in wachen Ratten

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