Name: Eine einfache Durchflusszytometrischer Methode Glukoseaufnahme und Glukosetransporter-Expression für Monozytensubpopulationen in Vollblut zu messen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-08-12T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 28 s
Description: Lernen Sie eine Durchflusszytometrie-Methode zur Messung der Glukoseaufnahme und Glukosetransporter-Expression in Monozyten-Subpopulationen aus Vollblut. Dieses Protokoll liefert wertvolle Einblicke in den Immunstoffwechsel.

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Diese Forschung wurde von der australischen Zentrum für HIV und Hepatitis Virologie Forschung (ACH 2) und ein 2010 Entwicklungsbeihilfe (CNIHR) von der University of Washington Zentrum für AIDS - Forschung (CFAR), ein NIH finanzierte Programm unter Verleihungsnummer AI027757 finanziert , die unterstützt wird durch die folgende NIH Institute und Zentren (NIAID, NCI, NIMH, NIDA, NICHD, NHLBI, NIA). CSP ist ein Empfänger der CNIHR und ACH 2 Zuschuss. SMC ist ein Empfänger einer National Health and Medical Research Council of Australia (NHMRC) Hauptforschungsstipendium. Die Autoren danken den Beitrag zu dieser Arbeit der viktorianischen operative Infrastruktur Support-Programm anerkennen vom Burnet Institute erhalten. Wir erkennen die Unterstützung von Geza Paukovic und Eva Orlowski-Oliver von der Amrep Flow Cytometry Core Facility für die Durchflusszytometrie Ausbildung und technische Beratung. Wir danken Angus Morgan für Medien-Coaching und Organisation der Videodreh. Unsere DankbarkeitJesse Masson und Jehad Abdulaziz K. Alzahrani für Labor Unterstützung während der Videoaufnahme. Wir danken den Bemühungen von Dr. David Simar an der School of Medical Sciences, UNSW, Australien, die kritische methodische Beratung angeboten. CSP dankt <a href="http://www.nice-consultants.com/">www.nice-consultants.com</a> für Grafik Konsultationen. AUTOREN BEITRAG: CSP konzipierte das Projekt, entworfen und durchgeführten Experimenten, analysiert und interpretiert Daten und schrieb das Manuskript. JJA interpretierten Daten und schrieb das Manuskript. TRB schrieb das Manuskript. JMM interpretierten Daten, machte kritische intellektuelle Anregungen und überprüft das Manuskript. SMC interpretiert Daten, gemacht kritische intellektuelle Anregungen und überprüft das Manuskript.

HINWEIS: HIV-infizierten und nicht infizierten HIV-Themen aus der Infectious Diseases Einheit am Alfred Hospital in Melbourne, VIC, Australien und von der örtlichen Gemeinde rekrutiert wurden, beziehungsweise. Eine Einverständniserklärung wurde von allen Teilnehmern erhalten, und die Forschung wurde von der Alfred Hospital Research und Ethikkommission genehmigt. 1. Glut1 Zelloberflächenerkennung auf Monozyten und Monozytensubpopulationen <ol><li> Sammeln Sie Blut in Citrat ACD-B Antikoagulans Rohre und beginnen, die Experimente in einem biologischen Sicherheitsschrank innerhalb 1 Stunde der Sammlung. </li><li> 100 l Blut in Polypropylenröhrchen. 2 ml 1x Lyselösung (siehe Materialien Table) zu Röhren , während auf Eis, Pipettieren vorsichtig zu mischen. Inkubieren für 15 Minuten auf Eis. Zentrifuge bei 220 × g für 5 min. </li><li> Dekantieren und waschen Sie zweimal um ca. 2-4 ml Waschlösung (0,5% BSA in PBS 1x) Zugabe und bei 220 xg für 5 Minuten zentrifugiert wurde. </li><li> Verwenden Sie ein Rohrtte sorgfältig so viel von der Waschlösung wie möglich zu entfernen. Die Röhrchen auf Eis und resuspendieren in 100 &amp; mgr; l Waschlösung. </li><li> Zur Identifizierung von spezifischen Monozytensubpopulationen Zellen mit dem folgenden Volumen von Antikörpern pro 100 &amp; mgr; l Zellsuspension, hergestellt in Schritt 1.4 Fleck: 5 ul anti-CD3-PE, 5 ul anti-CD14-APC, 5 ul anti-CD16-PECy7, 5 ul Glut1 -FITC oder IgG2b-FITC (Isotyp Steuerrohr). </li><li> Auf Eis für 30 min im Dunkeln. Waschen Sie 2 mal mit Waschlösung. Fix mit 200-300 ul 0,5% Formaldehyd in 1x PBS. </li><li> Analysieren Sie mit einem Durchflusszytometer erfassen kann 4 Farben innerhalb von 24 Stunden innerhalb der folgenden Anregungs- und Emissionswellenlänge: FITC (488, 530), PE (488, 575), PECy7 (488, 780), APC (633, 660) 10. </li></ol> 2. Glukoseaufnahme von Monozyten <ol><li> Pipette 90 ul Blut in Schritt 1.1 in Polypropylenröhrchen gesammelt. In 10 ul einer 14,60 uM 2-NBDG Arbeitslösungdie 90 &amp; mgr; l Blut (1,46 mM Endkonzentration) und flick sanft zu mischen. Es ist entscheidend, 2-NBDG Exposition durch Abdecken Rohre mit Aluminiumfolie Licht zu begrenzen. </li><li> bei 37 ° C bebrütet 15-30 min im Dunkeln und dann sofort auf Eis legen. 4 ml 1x FACS Röhrchen während auf Eis Lyselösung. Zentrifuge bei 220 × g bei 4 ° C für 5 min. </li><li> Wasche einmal durch Zugabe von 4 ml Waschlösung (0,5% BSA in 1x PBS). Zentrifuge bei 220 × g bei 4 ° C für 5 min. Dekantieren und auf Eis. </li><li> Stain Zellen mit Antikörpern: 5 &amp; mgr; l anti-CD3-PE, 5 &amp; mgr; l Anti-CD14-APC und 5 &amp; mgr; l Anti-CD16-PECy7. Mischen und auf Eis für 30 Minuten im Dunkeln. HINWEIS: In dieser Zeit stellen Sie sicher, das Durchflusszytometer bereit ist für die sofortige Analyse. Erwerben Sie Zellen innerhalb der folgenden Anregungs- und Emissionswellenlänge: 2-NBDG (488, 530), PE (488, 575), PECy7 (488, 780), APC (633, 660). </li><li> In 4 ml eiskaltem Waschpuffer (0,5% BSA in 1x PBS) in Röhrchen.Wasche einmal durch Zentrifugation bei 220 × g bei 4 ° C für 5 min. Dekantieren und 200-300 ul Eis alten PBS hinzuzufügen und so auf Eis im Dunkeln (mit Aluminiumfolie abgedeckt). Analyse auf einem Durchflusszytometer innerhalb von 10 min unter Verwendung von Anregungs- und Emissionswellenlängeneinstellung, wie in Schritt 2.4. </li></ol> 3. Datenerfassung und Auswertung Hinweis: Die Kenntnis der Durchflusszytometrie und Datenanalyse wird angenommen. <ol><li> Mit einem Durchflusszytometer der Lage, mindestens 4-Farbanalyse eingestellt Kompensation ungefärbten und individuell gefärbten Proben. HINWEIS: Single-Färbung eines FITC-markierten CD4 und CD14 verwendet, kann für GLUT1 und 2-NBDG Kompensation verwendet werden. </li><li> Einrichten und beschriften Sie geeignete Fenster, bevor Proben zu erwerben. Zeichnen Sie ein Tor um die Monocytenpopulation und erwerben 100.000 bis 300.000 Ereignissen pro Probe bei mittlerer Geschwindigkeit. 50.000 Ereignisse pro Entschädigung Probe ist ausreichend. HINWEIS: Die Entschädigung kann vor durchgeführt werden, zu probierenErwerb oder in Einzelzellanalyse-Software, nach Standardverfahren. </li><li> Export und Daten in eine geeignete Position zu speichern. Öffnen Sie Einzelzellanalyse - Software wie FlowJo oder andere Analysesoftware (Supplemental Abbildung 1) und Drag &amp; Drop - Proben wie angegeben (Supplemental Abbildung 2). </li><li> Klicken Sie doppelt auf Datei (Supplemental Abbildung 3) zu öffnen. Zeichnen Sie einen Kreis Monozyten Gate basiert auf Vorwärts- und Seitenstreueigenschaften , wie in 1A und Supplemental Abbildung 4 dargestellt. Doppelklicken Sie auf die Monocytenpopulation. Bitte beachten und einen Rahmen um den CD3 ziehen - Bevölkerung (Supplemental Abbildung 4). </li><li> Doppelklicken Sie auf die CD3 - Bevölkerung. Zu beobachten die Monozytensubpopulationen CD14-APC auf der &#39;x&#39; Achse auswählen und CD16-PECy7 auf der &#39;Y&#39;- Achse und beschriften entsprechend (Supplemental Abbildung 5). </li><li> Wo gibt es keine eindeutigedie Expression von GLUT1 oder 2-NBDG Aufnahme in den spezifischen Monozytensubpopulationen positiven und negativen Populationen messen. Es werden die mittleren Fluoreszenzintensitäten (MFI) von Glut1 und 2-NBDG durch den Isotyp Subtrahieren und kein 2-NBDG Hintergrund (Supplemental Abbildung 6). </li><li> Wo definierte Populationen vorhanden sind , verwenden Sie den IgG2b-FITC das Tor zu setzen und bestimmen die prozentualen positiven Zellen (Abbildung 3). HINWEIS: Verwenden Sie dieses Verfahren insgesamt CD14 + Monozyten zu analysieren. Da 2-NBDG Aufnahme der Regel durch eine Verschiebung in der Fluoreszenz markiert ist Intensitäten die Daten am besten durch MFI und Histogramme dargestellt. </li></ol>

<ol><li>Shi, C., Pamer, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monocyte+recruitment+during+infection+and+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Monocyte recruitment during infection and inflammation.</a> Nat Rev Immunol. 11, 762-774 (2011).</li>
<li>Woollard, K. J., Geissmann, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monocytes+in+atherosclerosis%3A+subsets+and+functions%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Monocytes in atherosclerosis: subsets and functions.</a> Nat Rev Cardiol. 7, 77-86 (2010).</li>
<li>Richards, D. M., Hettinger, J., Feuerer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monocytes+and+macrophages+in+cancer%3A+development+and+functions%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Microenviron%22%5BJournal%5D)">Monocytes and macrophages in cancer: development and functions.</a> Cancer Microenviron. 6, 179-191 (2013).</li>
<li>Anzinger, J. J., Butterfield, T. R., Angelovich, T. A., Crowe, S. M., Palmer, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monocytes+as+regulators+of+inflammation+and+HIV-related+comorbidities+during+cART%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol+Res%22%5BJournal%5D)">Monocytes as regulators of inflammation and HIV-related comorbidities during cART.</a> J Immunol Res. 2014, 569819(2014).</li>
<li>Palmer, C., Cherry, C. L., Sada-Ovalle, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucose+Metabolism+in+T+Cells+and+Monocytes%3A+New+Perspectives+in+HIV+Pathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22EBioMedicine%22%5BJournal%5D)">Glucose Metabolism in T Cells and Monocytes: New Perspectives in HIV Pathogenesis.</a> EBioMedicine. , (2016).</li>
<li>Cheng, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((mTOR-+and+HIF-1alpha-mediated+aerobic+glycolysis+as+metabolic+basis+for+trained+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">mTOR- and HIF-1alpha-mediated aerobic glycolysis as metabolic basis for trained immunity.</a> Science. 345, 1250684(2014).</li>
<li>Maratou, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucose+transporter+expression+on+the+plasma+membrane+of+resting+and+activated+white+blood+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Glucose transporter expression on the plasma membrane of resting and activated white blood cells.</a> Eur J Clin Invest. 37, 282-290 (2007).</li>
<li>Freemerman, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolic+reprogramming+of+macrophages%3A+glucose+transporter+1+%28GLUT1%29-mediated+glucose+metabolism+drives+a+proinflammatory+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Metabolic reprogramming of macrophages: glucose transporter 1 (GLUT1)-mediated glucose metabolism drives a proinflammatory phenotype.</a> J Biol Chem. 289, 7884-7896 (2014).</li>
<li>Gonnella, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kaposi+sarcoma+associated+herpesvirus+%28KSHV%29+induces+AKT+hyperphosphorylation%2C+bortezomib-resistance+and+GLUT-1+plasma+membrane+exposure+in+THP-1+monocytic+cell+line%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Kaposi sarcoma associated herpesvirus (KSHV) induces AKT hyperphosphorylation, bortezomib-resistance and GLUT-1 plasma membrane exposure in THP-1 monocytic cell line.</a> J Exp Clin Cancer Res. 32, 79(2013).</li>
<li>Palmer, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucose+transporter+1-expressing+proinflammatory+monocytes+are+elevated+in+combination+antiretroviral+therapy-treated+and+untreated+HIV%2B+subjects%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Glucose transporter 1-expressing proinflammatory monocytes are elevated in combination antiretroviral therapy-treated and untreated HIV+ subjects.</a> J Immunol. 193, 5595-5603 (2014).</li>
<li>Wong, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+expression+profiling+reveals+the+defining+features+of+the+classical%2C+intermediate%2C+and+nonclassical+human+monocyte+subsets%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Gene expression profiling reveals the defining features of the classical, intermediate, and nonclassical human monocyte subsets.</a> Blood. 118, e16-e31 (2011).</li>
<li>Ziegler-Heitbrock, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nomenclature+of+monocytes+and+dendritic+cells+in+blood%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Nomenclature of monocytes and dendritic cells in blood.</a> Blood. 116, e74-e80 (2010).</li>
<li>Belge, K. U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+proinflammatory+CD14%2BCD16%2BDR%2B%2B+monocytes+are+a+major+source+of+TNF%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">The proinflammatory CD14+CD16+DR++ monocytes are a major source of TNF.</a> J Immunol. 168, 3536-3542 (2002).</li>
<li>Frankenberger, M., Sternsdorf, T., Pechumer, H., Pforte, A., Ziegler-Heitbrock, H. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+cytokine+expression+in+human+blood+monocyte+subpopulations%3A+a+polymerase+chain+reaction+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Differential cytokine expression in human blood monocyte subpopulations: a polymerase chain reaction analysis.</a> Blood. 87, 373-377 (1996).</li>
<li>Ziegler-Heitbrock, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+CD14%2B+CD16%2B+blood+monocytes%3A+their+role+in+infection+and+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Leukoc+Biol%22%5BJournal%5D)">The CD14+ CD16+ blood monocytes: their role in infection and inflammation.</a> J Leukoc Biol. 81, 584-592 (2007).</li>
<li>Ziegler-Heitbrock, L. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aZiegler-Heitbrock%2C+L+%22Macrophages%3A+Biology+and+Role+in+the+Pathology+of+Diseases%22">Macrophages: Biology and Role in the Pathology of Diseases</a>. , Springer. 3-36 (2014).</li>
<li>Dimitriadis, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+glucose+transport+and+its+regulation+by+insulin+in+human+monocytes+using+flow+cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+A%22%5BJournal%5D)">Evaluation of glucose transport and its regulation by insulin in human monocytes using flow cytometry.</a> Cytometry A. 64, 27-33 (2005).</li>
<li>Fu, Y., Maianu, L., Melbert, B. R., Garvey, W. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Facilitative+glucose+transporter+gene+expression+in+human+lymphocytes%2C+monocytes%2C+and+macrophages%3A+a+role+for+GLUT+isoforms+1%2C+3%2C+and+5+in+the+immune+response+and+foam+cell+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Blood+Cells+Mol+Dis%22%5BJournal%5D)">Facilitative glucose transporter gene expression in human lymphocytes, monocytes, and macrophages: a role for GLUT isoforms 1, 3, and 5 in the immune response and foam cell formation.</a> Blood Cells Mol Dis. 32, 182-190 (2004).</li>
<li>Stibenz, D., Buhrer, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Down-regulation+of+L-selectin+surface+expression+by+various+leukocyte+isolation+procedures%5BTitle%5D)+AND+%22Scand+J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Down-regulation of L-selectin surface expression by various leukocyte isolation procedures.</a> Scand J Immunol. 39, 59-63 (1994).</li>
<li>Ahmed, N., Kansara, M., Berridge, M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+regulation+of+glucose+transport+in+a+monocyte-macrophage+cell+line%3A+Glut-3+affinity+for+glucose+is+enhanced+during+the+respiratory+burst%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+J%22%5BJournal%5D)">Acute regulation of glucose transport in a monocyte-macrophage cell line: Glut-3 affinity for glucose is enhanced during the respiratory burst.</a> Biochem J. 327 (Pt 2), 369-375 (1997).</li>
<li>Cutfield, W. S., Luk, W., Skinner, S. J., Robinson, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impaired+insulin-mediated+glucose+uptake+in+monocytes+of+short+children+with+intrauterine+growth+retardation%29%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Diabetes%22%5BJournal%5D)">Impaired insulin-mediated glucose uptake in monocytes of short children with intrauterine growth retardation).</a> Pediatr Diabetes. 1, 186-192 (2000).</li>
<li>Yoshioka, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+fluorescent+derivative+of+glucose+applicable+to+the+assessment+of+glucose+uptake+activity+of+Escherichia+coli%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta%22%5BJournal%5D)">A novel fluorescent derivative of glucose applicable to the assessment of glucose uptake activity of Escherichia coli.</a> Biochim Biophys Acta. 1289, 5-9 (1996).</li>
<li>Speizer, L., Haugland, R., Kutchai, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Asymmetric+transport+of+a+fluorescent+glucose+analogue+by+human+erythrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta%22%5BJournal%5D)">Asymmetric transport of a fluorescent glucose analogue by human erythrocytes.</a> Biochim Biophys Acta. 815, 75-84 (1985).</li>
<li>Palmer, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+glucose+metabolic+activity+is+associated+with+CD4%2B+T-cell+activation+and+depletion+during+chronic+HIV+infection%5BTitle%5D)+AND+%22AIDS%22%5BJournal%5D)">Increased glucose metabolic activity is associated with CD4+ T-cell activation and depletion during chronic HIV infection.</a> AIDS. 28, 297-309 (2014).</li>
<li>Palmer, C. S., Ostrowski, M., Balderson, B., Christian, N., Crowe, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucose+metabolism+regulates+T+cell+activation%2C+differentiation%2C+and+functions%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+immunology%22%5BJournal%5D)">Glucose metabolism regulates T cell activation, differentiation, and functions.</a> Frontiers in immunology. 6, (2015).</li>
<li>Palmer, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulators+of+glucose+metabolism+in+CD4+and+CD8+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22International+reviews+of+immunology%22%5BJournal%5D)">Regulators of glucose metabolism in CD4 and CD8 T cells.</a> International reviews of immunology. , 1-12 (2015).</li>
<li>Palmer, C. S., Crowe, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+does+monocyte+metabolism+impact+inflammation+and+aging+during+chronic+HIV+infection%3F%5BTitle%5D)+AND+%22AIDS+research+and+human+retroviruses%22%5BJournal%5D)">How does monocyte metabolism impact inflammation and aging during chronic HIV infection?</a> AIDS research and human retroviruses. 30, 335-336 (2014).</li>
<li>McFadden, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolic+stress+is+a+barrier+to+Epstein-Barr+virus-mediated+B-cell+immortalization%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Metabolic stress is a barrier to Epstein-Barr virus-mediated B-cell immortalization.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 113, E782-E790 (2016).</li>
<li>Gamelli, R. L., Liu, H., He, L. K., Hofmann, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Augmentations+of+glucose+uptake+and+glucose+transporter-1+in+macrophages+following+thermal+injury+and+sepsis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+leukocyte+biology%22%5BJournal%5D)">Augmentations of glucose uptake and glucose transporter-1 in macrophages following thermal injury and sepsis in mice.</a> Journal of leukocyte biology. 59, 639-647 (1996).</li>
<li>Yin, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucose+Oxidation+Is+Critical+for+CD4%2B+T+Cell+Activation+in+a+Mouse+Model+of+Systemic+Lupus+Erythematosus%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+immunology%22%5BJournal%5D)">Glucose Oxidation Is Critical for CD4+ T Cell Activation in a Mouse Model of Systemic Lupus Erythematosus.</a> Journal of immunology. , 80-90 (2016).</li>
<li>Yang, Z., Matteson, E. L., Goronzy, J. J., Weyand, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T-cell+metabolism+in+autoimmune+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+research+%26+therapy%22%5BJournal%5D)">T-cell metabolism in autoimmune disease.</a> Arthritis research & therapy. 17, 29(2015).</li>
<li>Yin, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Normalization+of+CD4%2B+T+cell+metabolism+reverses+lupus%5BTitle%5D)+AND+%22Science+translational+medicine%22%5BJournal%5D)">Normalization of CD4+ T cell metabolism reverses lupus.</a> Science translational medicine. 7, 274ra218(2015).</li>
<li>Barbera Betancourt, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+Phosphoinositide+3-Kinase+p110delta+Does+Not+Affect+T+Cell+Driven+Development+of+Type+1+Diabetes+Despite+Significant+Effects+on+Cytokine+Production%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Inhibition of Phosphoinositide 3-Kinase p110delta Does Not Affect T Cell Driven Development of Type 1 Diabetes Despite Significant Effects on Cytokine Production.</a> PloS one. 11, e0146516(2016).</li>
<li>Barron, C. C., Bilan, P. J., Tsakiridis, T., Tsiani, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Facilitative+glucose+transporters%3A+Implications+for+cancer+detection%2C+prognosis+and+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Metabolism%3A+clinical+and+experimental%22%5BJournal%5D)">Facilitative glucose transporters: Implications for cancer detection, prognosis and treatment.</a> Metabolism: clinical and experimental. 65, 124-139 (2016).</li>
<li>Hegedus, A., Kavanagh Williamson, M., Huthoff, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HIV-1+pathogenicity+and+virion+production+are+dependent+on+the+metabolic+phenotype+of+activated+CD4%2B+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Retrovirology%22%5BJournal%5D)">HIV-1 pathogenicity and virion production are dependent on the metabolic phenotype of activated CD4+ T cells.</a> Retrovirology. 11, 98(2014).</li>
<li>Taylor, H. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phospholipase+D1+Couples+CD4%2B+T+Cell+Activation+to+c-Myc-Dependent+Deoxyribonucleotide+Pool+Expansion+and+HIV-1+Replication%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Phospholipase D1 Couples CD4+ T Cell Activation to c-Myc-Dependent Deoxyribonucleotide Pool Expansion and HIV-1 Replication.</a> PLoS Pathog. 11, e1004864(2015).</li>
<li>Loisel-Meyer, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glut1-mediated+glucose+transport+regulates+HIV+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Glut1-mediated glucose transport regulates HIV infection.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 109, 2549-2554 (2012).</li>
<li>Palmer, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emerging+Role+and+Characterization+of+Immunometabolism%3A+Relevance+to+HIV+Pathogenesis%2C+Serious+Non-AIDS+Events%2C+and+a+Cure%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Emerging Role and Characterization of Immunometabolism: Relevance to HIV Pathogenesis, Serious Non-AIDS Events, and a Cure.</a> J Immunol. 196 (11), 4437-4444 (2016).</li>
</ol>

Die Autoren haben nichts offenzulegen.

Das hier beschriebene Protokoll Details, ein einfaches Verfahren Glukosetransporter-Expression und fluoreszierende Glukose analoge Aufnahme durch Monozyten und Monozytensubpopulationen im Vollblut zu untersuchen. Durch die Bewertung 2-NBDG Aufnahme in Vollblut, erlaubt diese Technik für die Bedingungen ähnlich denen in vivo. In einer früheren Studie untersuchten 6-NBDG Aufnahme in Monozyten aus dem Vollblut durch Dichtezentrifugation 17 getrennt. Allerdings hat diese Studie nicht Monozytensubpopulati...

Monozyten sind ein wichtiger Bestandteil der menschlichen angeborenen Immunsystems , die 1 bis Stellen der Infektion und Entzündung schnell mobilisiert werden. Aktivierung von Monozyten ist entscheidend für die Begrenzung akuten Schädigung durch Pathogene und auch von zentraler Bedeutung für die Pathogenese von verschiedenen chronischen Erkrankungen, einschließlich Atherosklerose 2, Krebs 3 und HIV 4,5. Der Stoffwechsel von ruhenden und aktivierten Monozyten unterscheidet sich dramatisch, mit ruhenden Monozyten oxidativen Stoffwechsel zu nutzen und aktivierten Monozyten unter Verwendung von glykolytischen Metabolismus (dh Vergärung von Glukose zu Laktat) 6. Die Aktivierung von Monozyten induziert die Expression von Glucose - Transporter , die 7 für eine erhöhte Glukoseaufnahme für glykolytischen Stoffwechsel ermöglicht. Monozyt Glukosetransporter 1 (GLUT1) ist ein solcher Transporter nach oben reguliert während der Aktivierung und seine Expression wurde auf die Produktion von pro-inflammatorischen Zytokinen in v zu führen gezeigtITRO und im Fettgewebe von fettleibigen Mäusen 8. Die Infektion einer monozytären Zelllinie durch das Kaposi - Sarkom assoziierten Herpes - Virus führt zu zellulären upregulation von GLUT1 9, und wir haben kürzlich gezeigt , dass während der chronischen HIV - Infektion eine erhöhte Anteil an GLUT1-exprimierenden Monozyten vorhanden sind , während der unbehandelten und Kombination antiretrovirale Therapie behandelten Infektion 10. Zusammengenommen zeigen diese Studien, dass die Glukoseaufnahme und glykolytischen Metabolismus durch Monozyten wichtige Aspekte der vielen Entzündungskrankheiten sind. Somit ist eine einfache Methode, Monozyten GLUT1-Expression und die Glukoseaufnahme während der Homöostase zu messen und entzündliche Erkrankungen ist wahrscheinlich auf ein breites Spektrum von Forschern von Nutzen zu sein. Menschlichen Monozyten sind heterogene, aus drei verschiedenen Untermengen enthalten ist , die durch differentielle Expression der Zelloberflächenmarker CD14 und CD16 11,12 sucht werden können. Klassische Monozyten exprimieren ein hohes Maß an CD14, aber nicht ausdrücken CD16 (CD14 ++ CD16 -), Express- Zwischen Monozyten ein hohes Maß an CD14 und ein mittleres Niveau von CD16 (CD14 ++ CD16 +) und nicht-klassischen Monozyten ein niedriges Niveau von CD14 und ein hohes Maß an CD16 exprimieren (CD14 + CD16 ++). Monocyten , die CD16 exprimieren , werden CD16 + Monocyten bezeichnet, die CD16 im Vergleich - Monozyten haben eine hohe Expression von inflammatorischen Cytokinen und die Fähigkeit zu effektiver 13,14 Antigene. Etwa 10% der Monozyten exprimieren CD16 während der Homöostase mit höheren Anteilen während der Entzündung beobachtet 15. Monozytensubpopulationen sind mit bestimmten Krankheitszuständen verbunden sind und 16 nützliche biologische Marker der Krankheit und Krankheitsprogression sein könnte. Unser Ziel war es, ein Verfahren zu identifizieren, die Glukosetransporter-Expression und die Glukoseaufnahme durch menschliche Monozyten und Monozytensubpopulationen in Bedingungen so nahe PHY messen kannphysiologischen Bedingungen wie möglich. Frühere Studien Monozyten Glukosetransporter - Expression gemessen und die Glukoseaufnahme 17,18, obwohl diese Methoden isoliert Monozyten untersucht , die die Proteinexpression im Vergleich zu physiologischen Bedingungen geändert haben , können 19, und keine früheren Studie hat die menschliche Monozytensubpopulationen sucht. Mit Multi-parametrischer Durchflusszytometrie beschreiben wir eine Methode Glukosetransporter-Expression und die Aufnahme des fluoreszierenden Glucose analogen 2-NBDG von insgesamt Monozyten und Monozytensubpopulationen zu untersuchen (basierend auf CD14 und CD16 Expression) innerhalb ganze unmanipulated Blut.

<table><tbody><tr><td>VACUETT Röhrchen 9 ml ACD-B Antikoagulanzienröhrchen</td><td>Greiner Bio-One GmbH</td><td>455094</td><td></td></tr><tr><td>5 ml sterile Polypropylenröhrchen</td><td>BD Biosciences</td><td>352063</td><td></td></tr><tr><td>Albumin aus Rinderserum (BSA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A7906</td><td></td></tr><tr><td>16%ige Formaldehydlösung</td><td>Elektronenmikroskopie Science</td><td>15710</td><td></td></tr><tr><td>BD FACS Lyselösung (10x)</td><td>BD Biosciences</td><td>349202</td><td>BD FACS Lyselösung 1/10 mit deionisiertem Wasser verdünnen, um die Arbeitskonzentration zu erhalten (bis zu 1 Woche bei 4 & Grad; C)</td></tr><tr><td>anti-CD3-PE</td><td>BD Biosciences</td><td>555340</td><td></td></tr><tr><td>anti CD14-APC</td><td>BD Biosciences</td><td>555399</td><td></td></tr><tr><td>anti-CD16-PECy7</td><td>BD Biosciences</td><td>557744</td><td></td></tr><tr><td>anti-Glut1-FITC</td><td>R & D Systems</td><td>FAB1418F</td><td></td></tr><tr><td>IgG2b-FITC</td><td>R & ; D Systems</td><td>IC0041F</td><td></td></tr><tr><td>2-NBDG</td><td>Life Technologies</td><td>N13195</td><td>Suspendieren Sie 5 mg 2-NBDG in 1 ml deionisiertes Wasser, um eine 14,60 mM Stammlösung herzustellen (bis zu 6 Monate bei 4 μm; C). Um die Arbeitskonzentration von 2-NBDG zu erreichen, verdünnen Sie das Material 1/100 mit 1x DPBS. Mit Folie abdecken. (bis zu 1 Woche bei 4 Grad lagern; C)</td></tr><tr><td>Dulbecco" s Phosphatgepufferte Kochsalzlösung (1x)</td><td>Life technologies</td><td>14190-144</td><td>Zur Herstellung einer Waschlösung 0,5 g BSA pro 100 ml DPBS zugeben (bis zu 2 Wochen bei 4 & Grad; C)</td></tr></tbody></table>

eine einfache durchflusszytometrischer methode glukoseaufnahme und glukosetransporter-expression für monozytensubpopulationen in vollblut zu messen

A Simple Flow Cytometric Method to Measure Glucose Uptake and Glucose Transporter Expression for Monocyte Subpopulations in Whole Blood

Monozyten sind angeborene Immunzellen, die mit bestimmten chronischen entzündlichen Erkrankungen durch Pathogene und Entzündung aktiviert werden kann. Die Aktivierung von Monozyten induziert Effektorfunktionen und eine damit einhergehende Verlagerung von oxidativem zu glycolytic Stoffwechsel, die durch eine erhöhte Glukosetransporter-Expression begleitet wird. Diese erhöhte Glykolyse-Stoffwechsel ist auch für geübte Immunität von Monozyten, eine Form der angeborenen immunologischen Gedächtnisses beobachtet. Obwohl in vitro - Protokolle Glukosetransporters - Expression und die Glucoseaufnahme durch Monozyten untersucht wurden beschrieben, keines hat durch Mehr parametrischer Durchflusszytometrie in Vollblut untersucht. Wir beschreiben eine Multi-Parameter durchflusszytometrischen Protokoll für die Messung von fluoreszierender Glucoseanalog 2-NBDG Aufnahme in Vollblut durch Total Monozyten und der klassischen (CD14 ++ CD16 -), intermediäre (CD14 ++ CD16 +) und nicht-klassischen ( CD14 + CD16 ++) monocyteSubpopulationen. Dieses Verfahren kann verwendet werden, um Glukosetransporter-Expression und die Glukoseaufnahme für insgesamt Monozyten und Monozytensubpopulationen während Homöostase und entzündliche Erkrankungen zu untersuchen, und kann leicht die Glukoseaufnahme modifiziert werden Subpopulationen für andere Leukozyten und Leukozyten im Blut zu untersuchen.

Vergütung ist für das individuelle Fluorochrome durchgeführt werden Fluoreszenzstreuung zu verhindern. Monozyten werden zunächst durch Gating basierend auf Vorwärts- und Seitenstreu angereichert. Die Grundstücke präsentiert sind Vertreter auf Vollblut durchgeführt mindestens sechs unabhängigen Experimenten von sechs oder mehr Teilnehmer als zuvor 10 berichtet 1A die anfängliche Gating von Monozyten durch Zellstreuung und den Ausschluss von T - Zellen durch Gat...

Monozyten sind integrale Bestandteile des menschlichen angeborenen Immunsystems, die auf den glykolytischen Stoffwechsel angewiesen sind, wenn sie aktiviert werden. Wir beschreiben ein durchflusszytometrisches Protokoll zur Messung der Glukosetransporterexpression und der Glukoseaufnahme durch Gesamtmonozyten und Monozyten-Subpopulationen in frischem Vollblut.

Eine einfache Durchflusszytometrischer Methode Glukoseaufnahme und Glukosetransporter-Expression für Monozytensubpopulationen in Vollblut zu messen

Monocytes are innate immune cells that can be activated by pathogens and inflammation associated with certain chronic inflammatory diseases. Activation of ...

Das übergeordnete Ziel dieser Methodik besteht darin, die Aufnahme von Glukose und ihres Transporters in verschiedenen Monozyten-Subpopulationen zu messen. Diese Methode kann verwendet werden, um zentrale Fragen im Bereich der Immunologie zu beantworten, beispielsweise: Welche Bedeutung hat der Stoffwechsel von Immunzellen für den Krankheitsverlauf? Die wesentlichen Vorteile dieser Techniken liegen darin, dass sie schnell und einfach durchzuführen sind, kein reaktives Material erfordern und lediglich ein geringes Blutvolumen benötigen.Innerhalb einer Stunde nach der Entnahme der Blutproben in Citrat-ACD-B-Antikoagulationsröhrchen sollten die Proben in einen biologischen Sicherheitswerkbank gegeben werden. Anschließend 100 Mikroliter Blut von jeder Probe in einzelne Polypropylenröhrchen geben und die Zellen mit zwei Millilitern 1X Lysepuffer auf Eis behandeln, wobei vorsichtig pipettiert wird, um eine Vermischung zu gewährleisten. Nach 15 Minuten die Zellen zentrifugieren und anschließend zwei weitere Zentrifugationsschritte in Waschpuffer durchführen.Nach der zweiten Waschung entfernen Sie mit einer Pipette vorsichtig so viel wie möglich vom Überstand und resuspendieren die Pellets in 100 µL Waschpuffer auf Eis. Um die spezifischen Monozyten-Subpopulationen zu identifizieren, färben Sie die Zellen mit je fünf µL der geeigneten Antikörper pro 100 µL Zellen 30 Minuten lang auf Eis im Dunkeln. Am Ende der Inkubation waschen Sie die Proben zwei Mal in Waschlösung und fixieren die Zellen mit 200 µL 0,5 % Formaldehyd in PBS.Anschließend die Zellen innerhalb von 24 Stunden auf einem Durchflusszytometer analysieren, das in der Lage ist, vier Farben zu detektieren. Um die Glukoseaufnahme der Monozyt-Subpopulationen zu bestimmen, 90 Mikroliter Blut von jeder Probe in einzelne Polypropylenröhrchen überführen und 10 Mikroliter des gewünschten fluoreszenten Glukose-Analogons zum Blut hinzufügen. Die Röhrchen vorsichtig durch Schwenken mischen und die Proben mit Aluminiumfolie abdecken.Danach die Zellen 15 bis 30 Minuten bei 37 Grad Celsius inkubieren und anschließend unverzüglich auf Eis stellen. Danach vier Milliliter FACS-Lyselösung zu den Röhrchen geben und die Zellen zentrifugieren. Anschließend eine zweite Zentrifugation in Waschpuffer durchführen.Den Überstand dekantieren und die Zellen mit den geeigneten Antikörpern der Wahl 30 Minuten bei vier Grad Celsius im Dunkeln einfärben. Anschließend die Proben mit vier Millilitern eiskaltem Waschpuffer waschen, die Pellets in 200 bis 300 Mikrolitern eiskaltem PBS resuspendieren und die Probenröhrchen innerhalb von 10 Minuten analysieren. Für die Durchflusszytometrie zunächst die unbehandelten und einzeln gefärbten Kontrollproben zur Einstellung der Kompensation verwenden.Öffnen Sie anschließend im geeigneten Einzelzell-Analyse-Software die erste Probe in einem Vorwärts- gegen Seitenstreuungs-Diagramm und umschließen Sie die Monozyten wie dargestellt. Doppelklicken Sie dann auf die markierte Monozytenpopulation und umschließen Sie die CD3-negative Population. Doppelklicken Sie nun auf die CD3-negative Population und stellen Sie die x-Achse so ein, dass die CD14-Färbung angezeigt wird, und die y-Achse so, dass die CD16-Färbung angezeigt wird.Danach Histogramme erstellen, um die Aufnahme von Glukose oder ihres Transporters in einer bestimmten Monozyten-Teilpopulation zu messen. Anschließend, falls definierte Zellpopulationen vorliegen, die Kontrollproben mit FITC-IgG verwenden, um das Tor festzulegen und den Gesamtprozentsatz an CD14-positiven Monozyten in jeder Probe zu bestimmen. Hier wird die anfängliche Taktik zur Isolierung der Monozyten anhand des Zellstreuverhaltens und zur Ausschließung von T-Zellen durch Tore innerhalb der CD3-negativen Population gezeigt.Die Monozyten werden anschließend allein nach CD14-Expression oder in Kombination mit CD16 selektiert, um die Gesamtzahl der Monozyten oder Monozyten-Teilpopulationen zu identifizieren. Unterschiedliche Populationen von CD14-positiven, Glut-1-Glucosetransporter-positiven Monozyten können beobachtet werden, insbesondere in den zirkulierenden weißen Blutkörperchen von HIV-positiven Individuen. CD14-positive, Glut-1-positive Zellen können auch innerhalb bestimmter Monozyten-Teilpopulationen bei HIV-negativen Individuen nachgewiesen werden, obwohl diese Populationen bei HIV-positiven Patienten deutlicher ausgeprägt sind.Wie anhand der Expression von Glukosetransportern erwartet, wird auch der Glukose-Analogon 2-NBDG in höheren Mengen von Zellen HIV-positiver Individuen aufgenommen. Wenn man die Methode einmal beherrscht, kann sie bei ordnungsgemäßer Durchführung innerhalb von eineinhalb Stunden abgeschlossen werden. Bei der Durchführung dieses Verfahrens ist es wichtig, die Lichteinwirkung auf alle Bereiche zu begrenzen.Nach der Aufnahme von Glucose-Analoga können die Zellen mit Antikörpern gegen Oberflächenmarker gefärbt werden, um spezifische Immunpopulationen zu identifizieren, die von Interesse sind. Nach ihrer Entwicklung kann diese Methode verwendet werden, um zu bestimmen, wie HIV den Stoffwechsel von Immunzellen beeinflusst, und kann auch von anderen Forschern in verschiedenen Bereichen wie der Immunologie, Virologie und Krebsforschung untersucht werden. Nach dem Anschauen dieses Videos sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie Glucosetransporter 1 und die Glucoseaufnahme in Immunzellen nachgewiesen werden können.Vergessen Sie nicht, dass bei der Arbeit mit infektiösen Agenten standardmäßige Sicherheitsverfahren angewendet werden sollten.

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Research

Forschung

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie und Infektion

Dieses Protokoll beschreibt ein schnelles Verfahren, um die Translokation von GLUT4 aus dem Zytoplasma zu quantifizieren, um die Plasmamembran von Zellen mittels Durchflusszytometrie.

Quantitative Messung der GLUT4 Translokation an die Plasmamembran mittels Durchflusszytometrie

Dieses Video zeigt die Durchflusszytometrie zur Messung der Mikrogliaaufnahme von fluoreszierenden Biopartikeln nach intravitrealer Verabreichung in einem Mausauge. Die Durchflusszytometrie weist lebende Zellen nach, die CD11b exprimieren, und unterscheidet phagozytäre Mikrogliazellen mit grüner Fluoreszenz von anderen myeloischen Zellen, einschließlich Ly6C-exprimierender Monozyten und Ly6G-exprimierender Neutrophilen.

Messung der Mikrogliaaufnahme von intravitreal abgegebenen fluoreszierenden Partikeln mittels Durchflusszytometrie

Dieses Video demonstriert eine auf Durchflusszytometrie basierende Technik, bei der zwei Fluorochrome verwendet werden, um CD4+ und CD8+ T-Zellen, γδ T-Zellen, B-Zellen, natürliche Killerzellen (NK) und Monozyten in menschlichen mononukleären Zellen des peripheren Blutes (PBMCs) zu identifizieren. Nach der Inkubation der Zellen mit Fluorochrom-konjugierten Antikörpern gegen die Oberflächenmarker werden die Zelluntergruppen mit einer optimalen durchflusszytometrischen Gating-Strategie...

Ein Durchflusszytometrie-Assay zur Identifizierung von Immunzelluntergruppen in mononukleären Zellen des peripheren Blutes

Diese Studie vergleicht zwei verschiedene Methoden der Isolierung humaner Monozyten zur Gewinnung von in vitro dendritischen Zellen (DCs). Monozyten werden durch Adhärenz selektiert oder durch magnetische Trennung negativ angereichert. Die Monozytenausbeute und -viabilität sowie die Viabilität, Proliferation und Expression von CD11c/CD14-Oberflächenmarkern werden zwischen beiden Methoden verglichen.

Charakterisierung von humanen Monozyten-abgeleiteten dendritischen Zellen durch Imaging Durchflusszytometrie: Ein Vergleich zwischen zwei Monozyt Isolation Protokolle

Mikroglia Phagozytose ist von entscheidender Bedeutung für die Aufrechterhaltung der Homöostase von Gewebe und unzureichende phagozytischen Funktion hat in der Pathologie in Verbindung gebracht. Allerdings ist die Bewertung Mikroglia - Funktion in vivo technisch anspruchsvoll . Wir haben eine einfache, aber robuste Technik für die präzise Überwachung entwickelt und die phagozytische Potenzial von Mikroglia in einer physiologischen Umgebung zu quantifizieren.

Die Beurteilung Retinal Microglial Phagozytische Funktion<em&gt; In Vivo</em&gt; Mit einem Durchfluss-Zytometrie basierten Assay

Dieses Protokoll liefert eine Analyse der Makrophagen-Subpopulationen in das erwachsene Maus-Zentralnervensystem durch Durchflusszytometrie und ist hilfreich für die Untersuchung von mehreren Markern, die von diesen Zellen exprimiert werden.

Analyse von Mikroglia und Monozyten-abgeleiteten Makrophagen aus dem Zentralnervensystem durch Durchflusszytometrie

Ein Flow Cytometry-basierten zellulären Bindung Assay beschrieben wird, die in erster Linie als Screening-Instrument verwendet wird, um Verbindungen zu identifizieren, die die Bindung eines Eindringmittel beschrifteten CXC-Chemokin-Liganden 12 (CXCL12) an den CXC-Chemokin-Rezeptor 4 (CXCR4) hemmen.

Ein Flow Cytometry-basierte Assay, Verbindungen zu identifizieren, die Bindung von Eindringmittel beschriftet CXC-Chemokin-Liganden 12 an CXC-Chemokin-Rezeptor 4 stören

Hier präsentieren wir ein Protokoll für die Charakterisierung von Monocyte Teilmengen von Vollblut Durchflusszytometrie. Dazu gehören wie Tor die Teilmengen und bewerten ihren Ausdruck der oberflächenmarker skizziert und geben ein Beispiel für die Beurteilung des Ausdrucks (entzündlich) M1 und M2-Marker (entzündungshemmend).

Charakterisierung der menschliche Monocyte Teilmengen von Vollblut Flow Cytometry Analysis

Hier präsentieren wir Ihnen eine integrierte Protokoll, die Monocyte Subpopulation Handel unter in-vitro-Fluss durch Verwendung von spezifischen Oberflächenmarker und konfokale Fluoreszenzmikroskopie misst. Dieses Protokoll kann sequentielle Rekrutierung Schritte sowie zu erkunden, andere Leukozyten-Subtypen mit anderen spezifischen Oberflächenmarker Profil verwendet werden.

Gleichzeitige Untersuchung der Rekrutierung von Monocyte Subpopulationen unter Strömung In Vitro

Hier stellen wir zwei Protokolle zur Quantifizierung des mikroglialen Engulfments von vGLUT1-positiven Synapsen und pHRodo Red markierten rohen Synaptosomen mittels Durchflusszytometrie vor.

Quantifizierung des mikroglialen Engulfments von synaptischem Material mittels Durchflusszytometrie

Hier beschreiben wir detailliert Methoden zur Extraktion von Makrophagen aus dem Knochenmark, der Milz und dem infarktierten Herzen und zur anschließenden Bestimmung des metabolischen Flusses in lebenden Zellen.

Analyse des ex vivo metabolischen Flusses in Milz- und Herzmakrophagen und Knochenmarkmonozyten

Lernen Sie eine Durchflusszytometrie-Methode zur Messung der Glukoseaufnahme und Glukosetransporter-Expression in Monozyten-Subpopulationen aus Vollblut. Dieses Protokoll liefert wertvolle Einblicke in den Immunstoffwechsel.

Eine einfache Durchflusszytometrischer Methode Glukoseaufnahme und Glukosetransporter-Expression für Monozytensubpopulationen in Vollblut zu messen (Video) | JoVE Journal

Eine einfache Durchflusszytometrischer Methode Glukoseaufnahme und Glukosetransporter-Expression für Monozytensubpopulationen in Vollblut zu messen

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