Name: Impressionszytologie des Deckels Wiper Bereich (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-08-09T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 1 s
Description: Erfahren Sie die Impressionszytologie des Lidwischer-Bereichs zur Untersuchung von Epithelzellen. Diese Methode hilft bei der Analyse von Reibungseffekten an der Okularoberfläche und liefert Erkenntnisse über Trockenes Auge.

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Wir möchten unserem Kollegen Dr. Jalaiah Varikooty danken, der Einblicke und Fachwissen zum Thema des Deckelwischers zur Verfügung gestellt hat, die diese Forschung sehr unterstützt haben.

Ethik-Anweisung: Vor der Zellen aus menschlichen Patienten zu sammeln, informierte Zustimmung und Ethik Genehmigung eingeholt werden muss. 1. Bereiten Sie Stain HINWEIS: Bereiten Sie Fleck am Tag des Experiments. <ol><li> Werden 5 ul Ethidium (oder 4 &amp; mgr; M) und 5 &amp; mgr; l Calcein AM (oder 4 &amp; mgr; M) zu 2,5 ml Phosphat gepufferter Salzlösung (PBS) in 15 ml Zentrifugenröhrchen; mischen. Wickeln Sie in Aluminiumfolie vor Licht und lagern bei RT bis zur Verwendung zu schützen. </li></ol> 2. Sammeln Zellen <ol><li> Entfernen Zellkultureinsätze aus ihrer Verpackung und Beschriftung für jede Augenlid abgetastet werden. Mark Orientierung der Zellsammlung auf der Seite der Membran Kunststoffhalter mit Permanentmarker. Conduct Spaltlampe Inspektion bei mäßiger Vergrößerung (etwa 20fach) eine angemessene Gesundheits der Region zu bestätigen IC zu unterziehen. </li><li> Einen Tropfen Lokalanästhetikum (0,5% Proparacainhydrochlorid) im unteren Bindehautsack von each Auge und weisen Teilnehmer Augen zu halten für eine Minute geschlossen. </li><li> Evert oberen Deckel Auge und halten Sie ihn durch die Wimpern; Kontakt mit dem Deckel Wischbereich zu vermeiden. Optional: die Hilfe eines sekundären Ermittler kann diesen Schritt auszuführen, erforderlich. </li><li> Anwenden Membran senkrecht auf dem Mittelteil des Deckels Wischbereich mit minimalem Druck. </li><li> Halten Membran anstelle 3 - 5 sec. Beachten Sie die Membran durchscheinend im Kontaktbereich. An diesem Punkt, entfernen Sie die Membran und ermöglichen dem Teilnehmer Deckel zu &quot;kippen&quot; zurück an ihren Platz. </li><li> Unverzüglich einem Tropfen PBS auf die Probe anzuwenden, um es zu verhindern das Austrocknen. Membran schaltet lässig und sollte nicht drehen opaque jederzeit, da dies Trocknen angibt. Haben die Sekundär Ermittler gehen sofort mit der Bearbeitung der Proben (Abschnitt 3). </li><li> Führen Prüfung endgültig Auge Integrität der Bindehaut zu gewährleisten. Dispense Augen Schmierstoffe und anweisen Teilnehmerreiben sich die Augen zu vermeiden, bis betäubende Wirkung nachlässt (ca. 15 min.). </li></ol> 3. Probenverarbeitung <ol><li> Mit Mikro-Schere, schneiden Sie die Membran in die Hälfte (die eine Hälfte für jede der Downstream-Analysen), die senkrecht durch die Mitte der Zellsammlung. Schneiden Sie entlang der äußeren Rand einer Membran Hälfte aus dem Kunststoffhalter zu trennen; vermeiden Wechselwirkung mit den gesammelten Zellen auf der Membran, auch sichergestellt wird, dass die Membran nicht auf sich selbst falten wird. </li><li> Sichern Sie die Membran Pinzette vor dem vollständigen Lösen von dem Halter verwenden. Platz Membran in markierte 2 ml Zentrifugenröhrchen mit 500 ul 95% (v / v) Ethanol und lassen Sie für mindestens 20 Minuten bis maximal 2 Stunden zu beheben, bevor die Verarbeitung (Abschnitt 4.2). </li><li> Unmittelbar separate zweite Hälfte der Membran (wie in Abschnitt 3.2 beschrieben) und prompt mit Abschnitt 4.1 fortfahren. </li></ol> 4. Probenfärbungs <ol><li> Immunocytochemical Anfärben <ol><li> Vorsichtig Membran in 35 mm Glasboden Kulturschale mit Sammlung Seite nach unten; gewährleisten Membran ist flach. </li><li> Je 20 ul immunzytochemischer Zusammensetzung Fleck versammelt in Abschnitt 1 auf der Membran. Wenn Probe Locken, verwenden Sie Einweg-Pipettenspitzen vorsichtig die Membran flach an den Kanten nach unten drücken. Vermeiden Sie den Kontakt mit der Zellsammelgebieten. </li><li> Sanft decken die Membran mit Deckglas. Vermeiden Sie unnötige Bewegung der Probe. Deckel Schüssel mit Deckel und Dichtung mit Labor-Film an den Rändern. Nicht Transparenz der Schale (oben und unten) und die Sichtbarkeit der Probe behindern. Beschriften mit Labor-Marker. </li><li> Unmittelbar gehen mit Bildgebung (Abschnitt 5.1), dann wieder auf Abschnitt 4.2 mit zytologische Färbung der anderen Hälfte der Membran fortzusetzen. </li></ol></li><li> Die zytologische Färbung <ol><li> Allmählich Membran Hydrat langsam 500 ul destilliertem Wasser zu dem Rohr Zugabe used zur Fixierung in Abschnitt 3.4. Absaugen Inhalt mehrmals in Pipettenspitze zu mischen, dann Inhalt zu entfernen. </li><li> In 500 ul destilliertem Wasser. stehen lassen für ein paar Sekunden, dann entfernen. In 500 ul alcianblau und lassen für 3 min. Entfernen Fleck und führen Sie 3 aufeinanderfolgende 500 &amp; mgr; l destilliertes Wasser spült oder bis die Flüssigkeit spült klar. </li><li> In 500 ul Hematoxylin # 1 Fleck und lassen für 3 min. Entfernen Fleck und führen in drei aufeinander folgenden 500 &amp; mgr; l destilliertes Wasser Spülungen oder bis die Flüssigkeit spült klar. Entwässern (Rückseite der Abschnitt 4.2.1) durch die klare Flüssigkeit abgesaugt. </li><li> In 500 ul Papanicolaou OG-6 Fleck und lassen für 3 min. Entfernen Fleck und führen Sie einen 500 &amp; mgr; l 95% (v / v) Ethanol spülen. </li><li> In 500 ul Papanicolaou EA-65 Fleck und lassen für 3 min. Entfernen stain und führen 3 aufeinanderfolgende 500 &amp; mgr; l 95% (v / v) Ethanol Spülungen. </li><li> Fully dehydratisieren drei aufeinanderfolgende 500 &amp; mgr; l 100% Ethanol Spülungen verwendet. Mit TWEezers, entfernen Probe aus der Lösung; vermeiden Sie das Berühren Zellsammelgebiete. </li><li> Legen Membran auf Glasobjektträger; diese Zelle Sammelleitung sicherzustellen, ist entweder parallel oder senkrecht Rand zur leichteren Ausrichtung während der Bildgebung zu gleiten. </li><li> Einen Tropfen von 100% Ethanol und Deckel mit Glas rutschen. Unmittelbar gehen mit Bildgebung (Abschnitt 5.2). </li></ol></li></ol> 5. Beispiel Imaging <ol><li> Imaging Fluorescent Immunzytochemische Stains <ol><li> Verwenden eines konfokalen Laserscanning - Mikroskops (CLSM) 11 oder Fluoreszenzmikroskop 12, mit einer digitalen Farbkamera ausgestattet ist , mit einem Computer verbunden Software eine Bildaufnahme ausgeführt wird . Aufgrund der Proben innerhalb Kulturschalen enthalten ist, kann ein umgekehrtes Mikroskop erforderlich sein. </li><li> Set up Mikroskop 11,12 nach Absorptions- und Emissionsspektren von Ethidium Homodimer-1 (528/617 nm Ex / Em maxima in Gegenwart von DNA) und Calcein AM (494/517 nm Ex / Em maxima). </li><li> Wählen Sie die kleinste Vergrößerung des Mikroskops (zB 2.5X Objektiv) und aktivieren Sie den Digital - Imaging - System; beachten Sie die auf dem Computermonitor angezeigt Probe. </li><li> Überprüfen Sie Probe für zelluläre Funktionen von Interesse. </li><li> Wählen Sie die gewünschte Mikroskopvergrößerung und Bilder aufzunehmen, Imaging-Software. </li><li> Speichern von Dateien in entweder nativ Mikroskop - Dateiformat oder ein unkomprimiertes Dateiformat (zB * .raw, * .tif). </li></ol></li><li> Imaging zytologische Stains <ol><li> Mit einem Standard-Laborhellfeldmikroskop ohne Filter, mit einer digitalen Farbkamera ausgestattet ist, mit einem Computer verbunden Software eine Bildaufnahme ausgeführt wird. </li><li> Platz und Schloss Glasträger (aus Schritt 4.2.8) auf Mikroskoptisch. Rehydrieren Probe mit 100% Ethanol je nach Bedarf über den gesamten Abbildungsverfahren. </li><li> Wählen Sie die kleinste Vergrößerung des Mikroskops (zB 2.5X Objektiv) und aktivieren the Digital-Imaging-System; beachten Sie die auf dem Computermonitor angezeigt Probe. </li><li> Stellen Sie sicher, Zellsammlung ist entweder mit X oder Y-Achse des Mikroskoptisch Steuerung ausgerichtet. Stellen Sie, wenn nötig, durch das Deckglas zu entfernen und durch Drehen der Probe mit einer Pipettenspitze oder mit einer Pinzette. </li><li> Unter Verwendung der Imaging-Software, Capture-Bild (er) der gesamten Probe mit dem niedrigsten Mikroskopvergrößerung. </li><li> Wechseln Sie zu moderaten Mikroskopvergrößerung (zB 10 - 20fach - Objektiv) und justieren Mikroskop Lichtquelle und Software Abbildungsparameter (Belichtung, Kontrast, Weißabgleich, etc.), und deaktivieren Sie die automatische Software Metering. Speichern Sie diese Einstellungen für die zukünftige Verwendung. </li><li> Bestimmen Sie Anfangs- und Endpunkte von Scan (zB oben links und unten rechts Ecken der Zellsammlung). </li><li> Unter Verwendung der Imaging-Software, Capture-Bild (er) der gesamten Zelle Sammelbereich innerhalb der Anfangs- und Endpunkte. Stellen Sie sicher, 20% von Seite zu Seite und von oben nach unten überlappen between alle benachbarten Bildern. </li><li> Speichern von Dateien mit dem nativen Mikroskop - Dateiformat oder ein unkomprimiertes Dateiformat (zB * .raw, * .tif). </li><li> Generieren endgültige Panoramabild mit automatisierten Stitching - Software der Wahl (zB Adobe Photoshop Elements). Verwenden Sie Referenzbilder im Schritt genommen 5.2.5), um die Genauigkeit der automatischen Heften im endgültigen Bild zu bestätigen. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Barbato, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diurnal+variation+in+spontaneous+eye-blink+rate%5BTitle%5D)+AND+%22Psychiatry+Res%22%5BJournal%5D)">Diurnal variation in spontaneous eye-blink rate.</a> Psychiatry Res. 93, 145-151 (2000).</li>
<li>Korb, D. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lid-Wiper+Epitheliopathy+and+Dry-Eye+Symptoms+in+Contact+Lens+Wearers%5BTitle%5D)+AND+%22Eye+%26+Contact+Lens%22%5BJournal%5D)">Lid-Wiper Epitheliopathy and Dry-Eye Symptoms in Contact Lens Wearers.</a> Eye & Contact Lens. 28, 211-216 (2002).</li>
<li>Dumbleton, K., Woods, C. A., Jones, L. W., Fonn, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+impact+of+contemporary+contact+lenses+on+contact+lens+discontinuation%5BTitle%5D)+AND+%22Eye+%26+Contact+Lens%22%5BJournal%5D)">The impact of contemporary contact lenses on contact lens discontinuation.</a> Eye & Contact Lens. 39, 93-99 (2013).</li>
<li>Roba, M., Duncan, E., Hill, G., Spencer, N., Tosatti, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Friction+measurements+on+contact+lenses+in+their+operating+environment%5BTitle%5D)+AND+%22Tribol+Lett%22%5BJournal%5D)">Friction measurements on contact lenses in their operating environment.</a> Tribol Lett. 44, 387-397 (2011).</li>
<li>Sickenberger, W., Pult, H., Sickenberger, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((LIPCOF+and+contact+lens+wearers%3A+a+new+tool+to+forecast+subjective+dryness+and+degree+of+comfort+of+contact+lens+wearers%5BTitle%5D)+AND+%22Contactologia%22%5BJournal%5D)">LIPCOF and contact lens wearers: a new tool to forecast subjective dryness and degree of comfort of contact lens wearers.</a> Contactologia. 22, 74-79 (2000).</li>
<li>Pult, H., Purslow, C., Berry, M., Murphy, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+tests+for+successful+contact+lens+wear%3A+relationship+and+predictive+potential%5BTitle%5D)+AND+%22Optom+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Clinical tests for successful contact lens wear: relationship and predictive potential.</a> Optom Vis Sci. 85, E924-E929 (2008).</li>
<li>Doughty, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphological+features+of+cells+along+Marx%27s+line+of+the+marginal+conjunctiva+of+the+human+eyelid%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Exp+Optom%22%5BJournal%5D)">Morphological features of cells along Marx's line of the marginal conjunctiva of the human eyelid.</a> Clin Exp Optom. 96, 76-84 (2013).</li>
<li>Jalbert, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+the+human+lid+margin+epithelium+using+impression+cytology%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Ophthalm%22%5BJournal%5D)">Assessing the human lid margin epithelium using impression cytology.</a> Acta Ophthalm. 90, e547-e552 (2012).</li>
<li>Nelson, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impression+cytology%5BTitle%5D)+AND+%22Cornea%22%5BJournal%5D)">Impression cytology.</a> Cornea. 7, 71-81 (1988).</li>
<li>Egbert, P. R., Lauber, S., Maurice, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+conjunctival+biopsy%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">A simple conjunctival biopsy.</a> Am J Ophthalmol. 84, 798-801 (1977).</li>
<li>Wilson, T. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWilson%2C+T+%22Confocal+microscopy%22">Confocal microscopy</a>. , Academic Press. London. 1-64 (1990).</li>
<li>Denk, W., Strickler, J. H., Webb, W. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two-photon+laser+scanning+fluorescence+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Two-photon laser scanning fluorescence microscopy.</a> Science. 248, 73-76 (1990).</li>
<li>Tomlins, P., Roy, P., Curnow, J., Rauz, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+the+EyePRIM+Device+for+Conjunctival+Impression+for+Flow+Cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalm+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Assessment of the EyePRIM Device for Conjunctival Impression for Flow Cytometry.</a> Invest Ophthalm Vis Sci. 54, 5430-5430 (2013).</li>
<li>Knop, E., Korb, D. R., Blackie, C. A., Knop, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+lid+margin+is+an+underestimated+structure+for+preservation+of+ocular+surface+health+and+development+of+dry+eye+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Res+Proj+Dry+Eye+Syn%22%5BJournal%5D)">The lid margin is an underestimated structure for preservation of ocular surface health and development of dry eye disease.</a> Res Proj Dry Eye Syn. 45, 108-122 (2010).</li>
<li>Knop, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+lid+wiper+and+muco-cutaneous+junction+anatomy+of+the+human+eyelid+margins%3A+an+in+vivo+confocal+and+histological+study%5BTitle%5D)+AND+%22J+Anat%22%5BJournal%5D)">The lid wiper and muco-cutaneous junction anatomy of the human eyelid margins: an in vivo confocal and histological study.</a> J Anat. 218, 449-461 (2011).</li>
<li>Christensen, J. A., Skaarland, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nuclear+and+cell+area+measurements+in+the+cytological+evaluation+of+pleural+effusions%3A+a+study+of+subjective+assessments+and+morphometric+measurements%5BTitle%5D)+AND+%22Diag+Cytopathol%22%5BJournal%5D)">Nuclear and cell area measurements in the cytological evaluation of pleural effusions: a study of subjective assessments and morphometric measurements.</a> Diag Cytopathol. 3, 50-54 (1987).</li>
</ol>

Die Autoren haben keine relevanten Förderungen oder Konflikte offenzulegen.

Impressionszytologie wird typischerweise auf der bulbären Bindehaut durchgeführt, gemischte Celluloseestermembranen. Proben werden aus Schüttgut Blätter zugeschnitten, sterilisiert, aufgetragen und von der Oberfläche entfernt konjunktivale mit einer Pinzette. Unter Verwendung der gleichen Membranmaterial, ein kolbengesteuertes wurde IC - Vorrichtung vor kurzem entwickelt , um die Oberflächengeometrie der bulbären Bindehaut zu entsprechen, und aufrechtzuerhalten konsistente Druck zwischen Anwendungen 13. Diese...

Der menschliche Oberlid führt rund 10.000 blinkt täglich 1, mit nur 1 - 2 mm schmaler konjunktivaler Region die Augapfels zu widersetzen . Aufgrund seiner Wischbewegung während des Blink, dieser Teil der Lidrand hat den &quot;Deckel Wischer&quot; Bereich 2 bezeichnet worden. Es wird angenommen, dass die Reibung in diesem Bereich während der gewöhnlichen Blinzeln erhöht wird, aufgrund der Deckel über der Kugel Abwischen. Dies kann eine wichtige Rolle in der Augen Komfort spielen. Kontaktlinsenträger insbesondere Erfahrung Augenbeschwerden und dies ist einer der Hauptgründe für Aufhören Linse 3 tragen. Wenn eine Kontaktlinse auf dem Auge platziert ist, ist der Reibungskoeffizient zwischen dem Linsenmaterial und der Augenoberfläche sich gezeigt , 4 zu ändern. Es gibt Hinweise darauf , dass Trockenheit Symptome auf diese veränderte Reibung 2,5,6 zusammenhängen könnte. Dieser Verein kann auch in klinisch beobachtbaren Phänomenen reflektiert werden, insbesondere Deckel wipro Epitheliopathie (LWE), auch oberen Lidrand - Färbung (ULMS) 6 genannt. LWE ist ein frühes Zeichen der Augenreizung und ein potentieller Prädiktor für trockene Augenkrankheit. Es wird beobachtet, und durch die Vitalfärbung der oberen und unteren Deckelrandbereichen gemessen. Während dieses Grading - System 2 und ihrer klinischen Gültigkeit (dh Korrelation mit subjektiven Symptomen) noch immer umstritten sind, bleibt Augenbeschwerden ein Rätsel für Kliniker und Wissenschaftler gleichermaßen und, was am wichtigsten ist , eine Unannehmlichkeit für den Patienten. Bis heute ist wenig über klinisch relevanten Veränderungen in der (Teil-) Zelluläre Anatomie und Physiologie des Bereichs Deckel Wischer bekannt 7 und lediglich ein Bericht macht Gebrauch von zytologischen Methoden 8. Impression Zytologie (IC) ist seit mehr als 40 Jahren beschäftigt Zellen aus der epithelialen Oberfläche des Bulbus oder Tarsalbindehaut durch Anwendung einer 9,10 Membran zu sammeln. Nach dem Entfernen erfahren die anhaftenden Zellen cytological Färbung und mikroskopische Bildgebung. Aufgrund der anatomischen und zellulären Unterschiede im Deckel Wischbereich erfordert diese Technik Optimierung.

<table><tbody><tr><td>Alcian Blue, 1 % in 3 % Essigsäure</td><td>Sigma</td><td>B8438-250ML</td><td></td></tr><tr><td>Hämatoxylin, Gill 1</td><td>Sigma</td><td>GHS116-500ML</td><td></td></tr><tr><td>Papanicolaou-Färbung, OG-6</td><td>Sigma</td><td>HT40116-500 ml</td><td></td></tr><tr><td>Papanicolaou-Färbung, modifiziertes EA</td><td>Sigma</td><td>HT40232-1L</td><td></td></tr><tr><td>Lebend-/Totlebensfähigkeits-/Zytotoxizitätskit</td><td>Life Technologies</td><td>L-3224</td><td>enthält die Farbstoffe Ethidium-Homodimer-1 und Calcein AM</td></tr><tr><td>Alcain (0,5 % Proparacainhydrochlorid)</td><td>Alcon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Millicell Zellkultureinsatz, 12&nbsp; mm, hydrophiles PTFE, 0,4&nbsp; &Mikro; m</td><td>EMD Millipore</td><td>PICM01250&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>35 mm Glasbodenschalen</td><td>MatTek Corporation</td><td>P35G-0-20-C</td><td></td></tr></tbody></table>

impressionszytologie des deckels wiper bereich

Impression Cytology of the Lid Wiper Area

Es existieren nur wenige Berichte über die zelluläre Anatomie des Lidwischerbereichs (LW) des inneren Augenlids und nur ein Bericht verwendet zytologische Methoden. In dieser Arbeit wird die Optimierung eines Verfahrens zur Entnahme, Färbung und Bildgebung von Zellen aus der LW-Region mittels Impressionszytologie (IC) beschrieben. Die Zellen werden von der Innenfläche des oberen Augenlids menschlicher Probanden unter Verwendung hydrophiler Polytetrafluorethylen (PTFE)-Membranen entnommen und mit zytologischen Farbstoffen gefärbt, um das Vorhandensein von Becherzellen, Muzinen, Zellkernen und verschiedenen Graden der Prä- und Para-Keratinisierung nachzuweisen. Immunzytochemische Farbstoffe zeigen durch den Einsatz eines konfokalen Rasterlasermikroskops Zellesterase-Aktivität und beeinträchtigte Zellmembranen. Für jede Probe werden bis zu 100 mikroskopische Digitalbilder aufgenommen und zu einem hochauflösenden, großflächigen Bild der gesamten IC-Spanne zusammengefügt. Wir zeigen eine höhere Sensitivität von IC als bisher berichtet, die für die Identifizierung zellulärer Morphologien und metabolischer Aktivität im LW-Bereich geeignet ist. Unseres Wissens ist dies das erste Mal, dass diese Auswahl an Fluoreszenzfarbstoffen zur Abbildung von LW IC-Membranen verwendet wurde. Dieses Protokoll wird in zukünftigen Studien wirksam sein, um undokumentierte Details des LW-Bereichs aufzudecken, wie z. B. die Beurteilung zellulärer Besonderheiten von Kontaktlinsenträgern oder Patienten mit trockenem Auge oder Lidwischer-Epitheliopathie.

Die Zellkulturmembran über den Kunststoffhalter aufgespannt ist ein praktisches Werkzeug für Handheld-Sammlung von Epithelzellen aus dem Deckel Wischer Konjunktiven. Dieses Verfahren eliminiert die Notwendigkeit für zusätzliche sterilisierten Instrumente typischerweise verwendet zur Vorbereitung und IC Membranen verarbeiten. 1 ist die IC des Deckels Wischbereich stellt einen Zellkultureinsatz verwendet wird . Wir optimiert zwei verschiedenen Färbungsprotokolle, die sich ...

Wir haben Zellen aus der Bindehaut des inneren Augenlidrandes von menschlichen Probanden gesammelt, gefärbt und abgebildet. Durch die Charakterisierung der Zellmorphologie und der Stoffwechselaktivität kann diese Methode unser Verständnis des trockenen Auges und der Rolle, die die Reibung zwischen den Augenoberflächen bei der Wahrnehmung von Augenbeschwerden spielen kann, verbessern.

Impressionszytologie des Deckels Wiper Bereich

Few reports on the cellular anatomy of the lid wiper (LW) area of the inner eyelid exist and only one report makes use of cytological methods. The ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens besteht darin, epitheliale Zellen von den Lidrändern zu sammeln, aufzubereiten und sichtbar zu machen, um die Auswirkungen von Reibung auf der Augenoberfläche zu bewerten. Diese Methode kann helfen, wichtige Fragen zur okulären Beschwerden zu klären, insbesondere bei Patienten mit trockenem Auge und kontaktlinsenbedingten Beschwerden. Die Hauptvorteile dieser Technik liegen darin, dass sie vergleichsweise einfach, schnell, minimalinvasiv ist und zur Beurteilung der Auswirkungen von Reibung auf okuläre epitheliale Zellen eingesetzt werden kann.Entfernen Sie zunächst die Membraneinsätze aus der Verpackung. Beschriften Sie die Einsätze mit einem Permanentstift für jedes Augenlid, das beprobt werden soll, und kennzeichnen Sie die Orientierung der Zellentnahme an der Seite des Kunststoffhalters der Membran. Geben Sie anschließend einen Tropfen topisches Anästhetikum in den unteren Bindehautsack jedes Auges und weisen Sie den Probanden an, beide Augen eine Minute lang geschlossen zu halten.Danach wird ein oberes Augenlid an den Wimpern nach außen geklappt, wobei ein Kontakt mit dem Lidrand vermieden werden sollte. Anschließend wird die Insert-Memb

impression-cytology-of-the-lid-wiper-area

Research

Forschung

JoVE Journal

Medicine

Medizin

Das hier beschriebene Protokoll dient zur strukturellen Bewertung eines Wholemount-Netzhautpräparats. Dazu gehören Beschreibungen der Gewebedissektion, der Montage auf einem hydrophilisierten Membraneinsatz aus Polytetrafluorethylen (PTFE), der Bolusbeladung mit fluoreszierenden Markern und ein Vergleich der Fixierung mit Carbodiimid und Paraformaldehyd für die immunhistochemische Analyse zellulärer und synaptischer Komponenten.

Optimiertes Protokoll für die retinale Wholemount-Vorbereitung für Bildgebung und Immunhistochemie

Mit hochauflösenden Differentialinterferenzkontrast (DIC) Mikroskopie wird eine ex vivo Beobachtung des schlagenden motiler ependymaler Zilien innerhalb der Maus Hirnkammern entfernt von Live-Bildgebung nachgewiesen. Die Technik ermöglicht eine Aufnahme von der einzigartigen Zilienschlag Frequenz und Schlagwinkel sowie deren intrazellulären Calcium-Oszillation Stimulationseigenschaften.

Live-Imaging des Ependymale Cilia in der Seitenventrikel des Maus-Gehirn-

In dieser Studie wurde eine detaillierte lichtmikroskopische Technik für die Echtzeitbeobachtung und -analyse der Bewegung von CPEC-Zilien ex vivo zusammen mit einer elektronenmikroskopischen Methode zur Ultrastrukturanalyse optimiert.

Beobachtung der Flimmerbewegung von Plexus Epithelzellen<em&gt; Ex Vivo</em

Die exponierte normale Okularoberfläche besteht aus Hornhaut und Bindehaut. Epithelzellen, Becherzellen und Immunzellen sind in der Bindehaut vorhanden. Hier wird eine nicht-invasive Technik der Impressionszytologie beschrieben, die eine Impressionszytologie-Vorrichtung und Durchflusszytometrie zur Analyse von Immunzellen in der Bindehaut verwendet.

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Eine Entzündung der Augenoberfläche schädigt das Augenoberflächengewebe und beeinträchtigt lebenswichtige Funktionen des Auges. Das vorliegende Protokoll beschreibt eine Methode zur Induktion einer Augenentzündung und zur Sammlung von kompromittiertem Gewebe in einem Mausmodell der Meibom-Drüsendysfunktion (MGD).

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