Name: Ein detailliertes Protokoll der murinen C1498-Zelllinie und der damit verbundenen Leukämie Maus-Modell für Charakterisieren (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-10-14T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min
Description: Erfahren Sie die Charakterisierung akuter myelomonozytärer Leukämie mit murinen C1498-Zellen im Mausmodell. Diese Methode ermöglicht Forschern die Untersuchung von Leukämieentwicklung und Immunsuppression.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Die Autoren danken der "Ligue Nationale contre le Cancer" (Comité du Septentrion), dem SIRIC ONCOLille (Grant INCa-DGOS-INSERM 6041) und dem Institut pour la Recherche sur le Cancer de Lille (IRCL) für die Unterstützung dieser Arbeit. Sie danken Delphine Taillieu und den Mitarbeitern der Tierstation für die Unterbringung der Mäuse und die Aufrechterhaltung ihres Wohlergehens. Wir danken auch Raphaëlle Caillerez und Nathalie Jouy für ihre jeweilige Hilfe in der Mikroskopie und Durchflusszytometrie.

<ol><li>Forthun, R. B., Hinrichs, C., Dowling, T. H., Bruserud, Ø, Selheim, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+past%2C+present+and+future+subclassification+of+patients+with+acute+myeloid+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Pharm.+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">The past, present and future subclassification of patients with acute myeloid leukemia.</a> Curr. Pharm. Biotechnol. 17 (1), 6-19 (2016).</li>
<li>Goldie, H., Butler, C. H., Anderson, M. M., Maxwell, M. C., Hahn, P. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth+characteristics+of+free+C1498+%28granulocytic+leukemia%29+tumor+cells+in+the+peritoneal+fluid+and+the+blood+of+C57+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Growth characteristics of free C1498 (granulocytic leukemia) tumor cells in the peritoneal fluid and the blood of C57 mice.</a> Cancer Res. 13 (2), 125-129 (1953).</li>
<li>Tanaka, K. K., Roberts, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biological+studies+of+E.L.4+lymphoma+and+C+Leukemia+in+susceptible+%28C57BL%29+and+resistant+%28B10.D2%29+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Biological studies of E.L.4 lymphoma and C Leukemia in susceptible (C57BL) and resistant (B10.D2) mice.</a> Cancer Res. 24 (1498), 1785-1797 (1964).</li>
<li>Law, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+an+influence+affecting+growth+of+transplantable+leukemias+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Characterization of an influence affecting growth of transplantable leukemias in mice.</a> Cancer Res. 4, 257-260 (1944).</li>
<li>Graham, J. D., McMahon Welch, C., Patchen, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Studies+of+an+implanted+murine+myelogenous+leukemia+C1498%5BTitle%5D)+AND+%22Ohio+J.+Sci%22%5BJournal%5D)">Studies of an implanted murine myelogenous leukemia C1498.</a> Ohio J. Sci. 75 (4), 202-208 (1975).</li>
<li>Boyer, M. W., Orchard, P. J., Gorden, K. B., Anderson, P. M., Mclvor, R. S., Blazar, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dependency+on+intercellular+adhesion+molecule+recognition+and+local+interleukin-2+provision+in+generation+of+an+in+vivo+CD8%2B+T-cell+immune+response+to+murine+myeloid+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Dependency on intercellular adhesion molecule recognition and local interleukin-2 provision in generation of an in vivo CD8+ T-cell immune response to murine myeloid leukemia.</a> Blood. 85 (9), 2498-2506 (1995).</li>
<li>Labelle, J. L., Truitt, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+a+murine+NKT+cell+tumor+previously+described+as+an+acute+myelogenous+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Leuk.+Lymphoma%22%5BJournal%5D)">Characterization of a murine NKT cell tumor previously described as an acute myelogenous leukemia.</a> Leuk. Lymphoma. 43 (8), 1637-1644 (2002).</li>
<li>Bradner, W. T., Pindell, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myeloid+leukemia+as+a+screen+for+cancer+chemotherapeutic+agents%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Myeloid leukemia as a screen for cancer chemotherapeutic agents.</a> Cancer Res. 26 (4), Pt 2 375-390 (1966).</li>
<li>Lin, J. M., Li, B., Rimmer, E., VanRoey, M., Jooss, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhancement+of+the+anti-tumor+efficacy+of+a+GM-CSF-secreting+tumor+cell+immunotherapy+in+preclinical+models+by+cytosine+arabinoside%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Hematol%22%5BJournal%5D)">Enhancement of the anti-tumor efficacy of a GM-CSF-secreting tumor cell immunotherapy in preclinical models by cytosine arabinoside.</a> Exp. Hematol. 36 (3), 319-329 (2008).</li>
<li>Robinson, J. P. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aRobinson%2C+JP+%22Handbook+of+Flow+Cytometry+Methods%22">Handbook of Flow Cytometry Methods</a>. , Wiley-Liss, Inc. New York, NY. (1993).</li>
<li>Xu, Y., McKenna, R. W., Wilson, K. S., Karandikar, N. J., Schultz, R. A., Kroft, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunophenotypic+identification+of+acute+myeloid+leukemia+with+monocytic+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Leukemia%22%5BJournal%5D)">Immunophenotypic identification of acute myeloid leukemia with monocytic differentiation.</a> Leukemia. 20 (7), 1321-1324 (2006).</li>
<li>Hassan, K., Qureshi, M., Shafi, S., Ikram, N., Akhtar, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+myeloid+leukemia-FAB+classification+and+its+correlation+with+clinico-haematological+features%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Pak.+Med.+Assoc%22%5BJournal%5D)">Acute myeloid leukemia-FAB classification and its correlation with clinico-haematological features.</a> J. Pak. Med. Assoc. 43 (10), 200-203 (1993).</li>
<li>Quesenberry, P. J., Rappeport, J. M., Fountebouni, A., Sullivan, R., Zuckerman, K., Ryan, M. Inhibition of normal murine hematopoiesis by leukemic cells. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aQuesenberry%2C+PJ+%22N.Engl.J.+Med%22">N.Engl.J. Med</a>. 299 (2), 71-75 (1978).</li>
<li>Youn, J. I., Nagaraj, S., Collazo, M., Gabrilovich, D. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subsets+of+myeloid-derived+suppressor+cells+in+tumor-bearing+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Subsets of myeloid-derived suppressor cells in tumor-bearing mice.</a> J. Immunol. 181 (8), 5791-5802 (2008).</li>
<li>Loder, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((B+cell+development+in+the+spleen+takes+place+in+discrete+steps+and+is+determined+by+the+quality+of+B+cell+receptor-derived+signals%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Med%22%5BJournal%5D)">B cell development in the spleen takes place in discrete steps and is determined by the quality of B cell receptor-derived signals.</a> J. Exp. Med. 190 (1), 75-89 (1999).</li>
<li>Robbins, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extramedullary+hematopoiesis+generates+Ly-6C%28high%29+monocytes+that+infiltrate+atherosclerotic+lesions%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Extramedullary hematopoiesis generates Ly-6C(high) monocytes that infiltrate atherosclerotic lesions.</a> Circulation. 125 (2), 364-374 (2012).</li>
</ol>

Die Autoren erklären, dass sie keine konkurrierenden finanziellen Interessen haben.

In früheren Studien wurde die C1498 - Zelllinie als Induktor von akuter granulozytärer 5 beschriebenen myelomonocytic 6 oder 7 NKT - Zell - Leukämie. Allerdings demonstrative Daten in der Literatur waren entweder nicht vorhanden oder unvollständig sind. Das Protokoll vorgestellt hier verwendet verschiedene Techniken, wie Durchflusszytometrie, Immunofluoreszenz, MGG-Färbung und cytochemischen Assays kultiviert C1498-Zellen zu charakterisieren und die Art der Leukämie zu bestimmen, die in Mäusen induziert wird, nachdem sie injiziert werden. Wenn wir in vitro kultiviert C1498 - Zellen nach Immunfärbung phänotypisiert und Zytometrie Analysen Fluss durchgeführt wurden, beobachteten wir einige Einschränkungen , da diese Zellen einige Zelloberfläche hämatopoetischen Marker exprimiert , die 6,7 in der Literatur bereits beschrieben worden sind. In Übereinstimmung mit unseren Ergebnissen Labelle et al. Haben die Zelloberflächenexpression von reifen TCR auf C1498 - Zellen unter Verwendung von Fluss cytomet nicht beobachtenry Färbung. Allerdings hielten sie ihnen eine NKT - Zelllinie zu sein , nachdem sie 7 CD3 &amp; egr; und TCRVβ8.2 mRNAs nachgewiesen. Wir beobachteten auch die intrazelluläre Expression von CD3 &amp; egr; TCRVβ Ketten und Moleküle in die meisten Zellen (&gt; 70%), aber ihre hämatopoetischen Abstammungslinien konnte nicht bestimmt werden, weil es auch die gleichzeitige intrazelluläre Expression des Moleküls Mac-3 war. Myeloperoxidase, MGG-Färbung und Einschätzungen funktionelle Esterasen zu analysieren Zytochemie mit gezeigt, dass die C1498-Zelllinie eine myeloische Ursprung hatte und von Monoblasten und Myeloblasten zusammen. Diese Ergebnisse waren konkordant mit dem Prozentsatz der Mac-3 + Zellen , die in Durchflusszytometrie Färbungsanalyse erhalten wurden. Obwohl nicht quantitative, diese Schritte Schlüsselexperimente darstellen durchgeführt werden. Tatsächlich bleiben sie bisher die besten bestehenden Methoden zur Charakterisierung der Linie und Differenzierungsstadium von hämatopoetischen Zellen, die keine oder f ausdrückenew spezifische phänotypische Marker. Die Durchflusszytometrie Färbung war hilfreich für die Entwicklung von akuter Leukämie in congenic Mäusen demonstriert nach C1498-Zellen wurden intravenös injiziert. Die CD45.2 + C1498 - Zellen , die in das periphere Blut und verschiedene Organe infiltriert wurden isoliert, und ihre Frequenzen bestimmt. Eine quantitative Bestimmung wurde auch inhärente Mark und Milz-Zellen nach Immunophänotypisierung durchgeführt, um zu analysieren. Einschränkungen aufgetreten sind , wenn die C1498 Zellphänotyps in Organen wurde untersucht , wie sie einige hämatopoetischen Marker exprimiert (nur einige von ihnen waren B220 +). So definieren die Art der beobachteten akuten Leukämie, May-Grünwald-Giemsa-Färbung und eine Analyse der Aktivitäten von monozytären und granulocytic Esterasen wurden unter Verwendung von Knochenmark durchgeführt. Die Ergebnisse zeigten, dass C1498 Zellen behielten ihre myeloische und monoblastischen Morphologie und Funktion, den Beginn der myelomonocytic Leukämie enthüllt. <p class = &quot;jove_content&quot;&gt; Als Gegenleistung für die kritischen Schritte in diesem Protokoll beschrieben ist, sollte besonderes Augenmerk auf pH-Wert gegeben werden, wenn cytochemischer Reaktionen und MGG-Färbung durchzuführen, da Fehler in pH-Wert zu Fehlinterpretationen der Ergebnisse führen kann. Beispielsweise Esteraseaktivität α-naphthyl Butyrat ist spezifisch für Monozyten-Zellen, die nur bei einem pH von 6,0, da Granulozyten und Lymphozyten auch positiv für diesen Test bei höheren pH-Werten beflecken kann. die Zellen fixiert wird nicht vor der Durchführung MGG-Färbung empfohlen, und wir haben gezeigt, dass nur CAF Fixierung zufriedenstellende Ergebnisse zur Verfügung gestellt, wenn Esterasen cytochemischer Reaktionen unter Verwendung von C1498-Zellen durchführen. Zu erhalten Zytometrie die Expression des CD115 - Moleküls und dessen Detektion durch Strömungs, alle Proben (beispielsweise Blut, Knochenmark und Milzzellen) sollten auf Eis während des Verfahrens gehalten werden. Wenn keine Färbung wird in der Durchflusszytometrie oder / und Immunofluoreszenz Experimente, die Referenz der Antikörper, deren Lagerung re beobachtetLob und ihre Verdünnungen sollten überprüft werden. Die Verweise in den Materialien / Ausrüstung Tabelle angegeben wurden für die Durchflusszytometrie oder Immunofluoreszenz Anwendungen ausgewählt. Die primäre / sekundäre Antikörper oder deren konjugierte Fluorophore könnten ihre Aktivität durch falsche Lagerung verloren haben (zB Einwirkung von Licht oder Wärme), unsachgemäße Verdünnung, umfangreiche Einfrieren / Auftauen oder die Verwendung von kontaminierten Puffer. Führen positive Kontrollen, um sicherzustellen, dass sie ordnungsgemäß funktionieren. Mit der Maus Knochenmark oder Milz-abgeleiteten Zellen, die die Proteine ​​von Interesse sind dafür bekannt, zum Ausdruck bringen. Um eine hohe Hintergrund und nicht-spezifische Färbung zu vermeiden, stellen Sie sicher, dass sich die Zellen richtig gewaschen werden und gehalten bei hoher Luftfeuchtigkeit (für Immunofluoreszenz) und dass die Antikörper verdünnt, wie angewiesen. Verwenden Sie die gleiche Konzentration und Verdünnung für die Isotypkontrollantikörper und dem primären Antikörper, um genau die Hintergrundebene in der Probe zu bestimmen. Für Esterase Zytochemie Experimenten wurde dieReagenzien können mit positiven und negativen Steuerschiebern enthalten , gereinigter Maus splenic granulocytic (Ly6G +) und monozytären (CD115 + Zellen) getestet werden. Das Verfahren in dieser Studie beschrieben , zeigte , dass viele der leukämischen Merkmale in Mäusen nach der Injektion von C1498 - Zellen beobachtet geteilt gemeinsame Merkmale mit der menschlichen akuten myelomonozytäre Leukämie 11,12. Die Invasion leukämischen Zellen führte zu einer Reduktion von reifen und unreifen (Vorläufern und Vorprodukte) Mark hämatopoetischen Zellen. C1498-Zellen vorhanden sind, mit hoher Frequenz (&gt; 20%) in dem peripheren Blut, wie monozytären Zellen sind. Hepatomegalie und Splenomegalie beobachtet von der Infiltration von leukämischen Zellen führen und deutliche Steigerungen in B-Lymphozyten und myeloischen Zellen wurden auch Splenomegalie zu begleiten beobachtet. Thrombopenie wurde auch beobachtet, wenn Blutplättchen Zahlen geschätzt wurden ein Hämatologie-Analysator. Es war Shown, in - vitro - Experimenten mit, dass C1498 Zellen hemmen normalen murinen Hämatopoese durch lösliche Faktoren 13 sezer. In mehreren Tumormausmodellen, unreifen myeloischen Zellen (einschließlich Monozyten - und granulozytäre Zellen) haben auch gezeigt, aus dem Knochenmark in die Milz zu wandern, wo sie 14 anti-Tumor - spezifische T - Zell - Aktivierung und Proliferation hemmen. So haben die Reduktion in hämatopoetischen Zellen, die im Knochenmark beobachtet wurde, könnte entweder von einem Mangel in der Hämatopoese und / oder von ihrer Auswanderung geführt. Dieser letztere Mechanismus könnte die Anwesenheit von Monozytose im peripheren Blut oder die Beobachtung der vergrößerten myeloische Fraktionen in der Milz erklären. Es ist auch denkbar, dass diese Zellen von einem verbesserten splenic Hämatopoese abgeleitet worden sein könnte. Tatsächlich unter stationären Bedingungen wurden einige Untergruppen von Milz - B - Zellen , die als Vorläufer der reifen B - Lymphozyten 15. Außerdem unter entzündlichen Erkrankungen, medullary Stamm- und Vorläuferzellen wurden in die Milz zu verlagern 16 gezeigt , die Produktion von reifen Monozyten zu induzieren. Dieses Protokoll erlaubt uns nicht, Rückschlüsse auf die Mechanismen zu zeichnen, die bei der Entwicklung von Leukämie und zusätzliche funktionelle sowie molekulare Tests beteiligt sind, so zu tun, eingesetzt werden. Allerdings umfassen diese Daten detaillierte Informationen über die klinischen Merkmale der akuten myelomonocytic Leukämie und hilft Forschern dabei, die Auswirkungen neuer Therapeutika zu bewerten und zu verstehen.

Akute myeloische Leukämie (AML) durch die unkontrollierte Proliferation von hämatopoetischen myeloischen Zellen charakterisiert, die in verschiedenen Stadien der Reifung blockiert sind. Diese Dysregulation kann Einfluss auf die granulocytic, monozytären, erythrozytische oder megaryocytic Differenzierungswege 1. AML-Zellen reichern sich im Knochenmark, zu einer Beeinträchtigung der Hämatopoese führt, die in Thrombopenie, Lymphopenie und Anämie führt. Die leukämischen Zellen dringen auch das Blut und nicht-lymphatischen Organen. Die C1498 - Maus - Modell wird seit Jahrzehnten als Modell für akute Leukämie , da Krebszellen wurden isoliert aus einer leukämischen 10 Monate alte C57BL / 6 (H-2 b) weibliche Maus in 1941. In der Literatur wird die Invasion in das Blut verwendet hämatopoetische Organe (zB die Milz und Lymphknoten) und nicht-hämatopoetischen Organen (beispielsweise der Leber, Lunge, Ovarien und Nieren) durch stark proliferative C1498 - Zellen , nachdem sie wurden über eine in injizierteintravenöse, subkutane oder intraperitoneale Route in empfängliche Mäuse 2-4. Allerdings wurde diese Maus - Modell berichtet entweder granulocytic 2,5 oder myelomonocytic 6 Leukämie zu induzieren. In jüngerer Zeit 7 beschrieben , diese Art von Krebs als murine NKT - Zell - Leukämie eine Studie in 2002 veröffentlicht. Somit unterscheidet sich die Literatur die Natur dieser Zellinie C1498 betreffend und die zugehörige Leukämie in Mäusen induziert. Diese Diskrepanzen sind vor allem auf einen Mangel an detaillierten und aktualisierten veröffentlichten Informationen über die Zellen und die leukämische Erkrankung im Allgemeinen, weil viele Studien in den 1950er Jahren durchgeführt wurden - 70er Jahre. Hier stellen wir ein detailliertes Protokoll zu beschreiben, wie C1498-Zellen zu charakterisieren und die Art der leukämischen Krankheit zu analysieren, die durch die intravenöse Injektion in Mäuse induziert wird. Der erste Abschnitt dieses Protokolls wird auf eine Beschreibung der C1498 - Zellen gewidmet , die in vitro kultiviert wurden. Fluorescent Antiunter Verwendung von Durchflusszytometrie gerichtet Körper gegen die Oberfläche und die intrazelluläre wurden hämatopoetischen Marker verwendet ihren Phänotyp zu bestimmen. Die Anwesenheit von Myeloperoxidase beurteilt wurde Immunfluoreszenz-Mikroskopie unter Verwendung ihrer hämatopoetischen Abstammungslinie und Differenzierungsstadium wurden mit Zytochemie ausgewertet, die Aktivität von Esterasen zu bewerten und May-Grünwald-Giemsa-Färbung wurde durchgeführt. Die C1498-Zellen wurden dann in Mäuse injiziert und die akute Leukämie Krankheit, die induziert wurde, ist in dem zweiten Abschnitt des Manuskripts beschrieben. Die gleichen Techniken wurden verwendet, um die Frequenzen zu bestimmen und die Phänotypen von leukämischen und inhärenten Zellen im Knochenmark, peripherem Blut, Milz und nicht-hämatopoetischen Organen (Leber und Lunge). Dieses Protokoll ist in hohem Maße reproduzierbar, und die hier vorgestellten Daten werden Forschern helfen, die Auswirkungen von neuen therapeutischen Strategien zu bewerten. Diese Leukämie-Maus-Modell wurde bereits für die Immuntherapie zu testen, nähert sich einnd verschiedenen Krebschemotherapeutika 8,9. Ihre Wirksamkeit wurde durch die Bestimmung der Entwicklung der Tumorlast und Überlebensraten beurteilt. Dieses Protokoll kann verwendet werden, zusätzliche Informationen über die Verteilung zur Verfügung zu stellen und Aufenthaltskosten von leukämischen und anderen hämatopoetischen Zellpopulationen während der Behandlung.

<table><tbody><tr><td>C1498 Zelllinie</td><td>ATCC</td><td>TIB 49</td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6J-Ly5.1</td><td>Charles River</td><td>B6.SJL-Ptprc a Pep3 b/BoyCrl</td><td></td></tr><tr><td>Zellkulturreagenzien</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>2-Mercaptoethanol, Gibco</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>21985</td><td></td></tr><tr><td>Fötales Rinderserum (FBS)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>10270</td><td></td></tr><tr><td>HEPES, Gibco (1 m)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>15630</td><td></td></tr><tr><td>Lösung für nicht-essentielle Aminosäuren, Gibco&nbsp; &nbsp;</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>11140</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin, Gibco&nbsp;</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>15140</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640 Medium (Gibco, GlutaMAX Ergänzung)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>61870</td><td></td></tr><tr><td>Natriumpyruvat, Gibco (100 mM)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>11360</td><td></td></tr><tr><td><stark>Durchflusszytometrie-Färbereagenzien</stark></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Anti-Maus B220 APC (1)</td><td>ebiosciences</td><td>17-0452</td><td>Klon RA3-6B2, Endverdünnung 1/100</td></tr><tr><td>Anti-Maus B220 Biotin (2)</td><td>ebiosciences</td><td>13-0452</td><td>Klon RA3-6B2, 1/400</td></tr><tr><td>Anti-Maus CD3 eFluor450 (1)</td><td>ebiosciences</td><td>48-0032</td><td>Klon 17A2, 1/100</td></tr><tr><td>Anti-Maus CD3 PE (2)</td><td>BD Biosciences</td><td>555275</td><td>Klon 17A2, 1/100</td></tr><tr><td>Anti-Maus CD3 PE-Cy5 (3)</td><td>ebiosciences</td><td>15-0031</td><td>Klon 145-2C11, 1/100</td></tr><tr><td>Anti-Maus CD4 APC (1)</td><td>ebiosciences</td><td>17-0041</td><td>Klon GK1.5, 1/500</td></tr><tr><td>Anti-Maus CD4 PE (2)</td><td>ebiosciences</td><td>12-0041</td><td>Klon GK1.5, 1/200</td></tr><tr><td>Anti-Maus CD8 Biotin (1)</td><td>ebiosciences</td><td>13-0081</td><td>Klon 53-6.7, 1/100</td></tr><tr><td>Anti-Maus CD8 eFluor450 (2)</td><td>ebiosciences</td><td>48-0081</td><td>Klon 53-6.7, 1/500</td></tr><tr><td>Anti-Maus CD11a Biotin</td><td>ebiosciences</td><td>13-0111</td><td>Klon M17/4, 1/100</td></tr><tr><td>Anti-Maus CD11b PE&nbsp;</td><td>ebiosciences</td><td>12-0112</td><td>Klon M1/70, 1/200</td></tr><tr><td>Anti-Maus CD16/32 Biotin</td><td>ebiosciences</td><td>13-0161</td><td>Klon 93, 1/400</td></tr><tr><td>gereinigter Anti-Maus CD16/32 (FcR-Blockierung)&nbsp;</td><td>BD biosciences</td><td>553141</td><td>Klon 2.4G2</td></tr><tr><td>Anti-Maus CD18 Biotin (1)</td><td>ebiosciences</td><td>13-0181</td><td>Klon M18/2, 1/100</td></tr><tr><td>Anti-Maus CD18 FITC (2)</td><td>ebiosciences</td><td>11-0181</td><td>Klon M18/2, 1/50</td></tr><tr><td>Anti-Maus CD19 PE</td><td>ebiosciences</td><td>12-0193</td><td>Klon 1D3, 1/200</td></tr><tr><td>Anti-Maus CD21/35 PE</td><td>ebiosciences</td><td>12-0211</td><td>Klon 8D9, 1/50</td></tr><tr><td>Anti-Maus CD31 PE</td><td>ebiosciences</td><td>12-0311</td><td>Klon 390, 1/100</td></tr><tr><td>Anti-Maus CD34 eFluor660 ebiosciences</td><td></td><td>50-0341</td><td>Klon RAM34, 1/20</td></tr><tr><td>Anti-Maus CD44 PE</td><td>BD Biosciences</td><td>553134</td><td>Klon IM7, 1/50</td></tr><tr><td>Anti-Maus CD45.2 FITC&nbsp;</td><td>ebiosciences</td><td>11-0454</td><td>Klon 104, 1/100</td></tr><tr><td>Anti-Maus CD49b/Pan NK PE</td><td>&nbsp; BD biosciences</td><td>553858</td><td>Klon DX5, 1/50</td></tr><tr><td>Anti-Maus CD80 Biotin</td><td>Ebiosciences</td><td>13-0801</td><td>Klon 16-10A1, 1/200</td></tr><tr><td>Anti-Maus CD86 Biotin</td><td>Ebiosciences</td><td>13-0862</td><td>Klon GL1, 1/200</td></tr><tr><td>Anti-Maus CD107b (Mac-3) PE</td><td>ebiosciences</td><td>12-5989</td><td>Klon M3/84, 1/40</td></tr><tr><td>Anti-Maus CD115 PE</td><td>ebiosciences</td><td>12-1152</td><td>Klon AFS98, 1/100</td></tr><tr><td>Anti-Maus CD117 eFluor450</td><td>ebiosciences</td><td>48-1171</td><td>Klon 2B8, 1/100</td></tr><tr><td>Anti-Maus CD127 PE</td><td>ebiosciences</td><td>12-1271</td><td>Klon A7R34, 1/100</td></tr><tr><td>Anti-Maus CD150 APC</td><td>ebiosciences</td><td>17-1501</td><td>Klon 9D1, 1/20</td></tr><tr><td>Anti-Maus CD274 (PD-L1) Biotin</td><td>ebiosciences</td><td>13-5982</td><td>Klon MIH5, 1/200</td></tr><tr><td>Anti-Maus Ly-6A/E (Sca-1) PE</td><td>ebiosciences</td><td>12-5981</td><td>Klon D7, 1/100</td></tr><tr><td>Anti-Maus Ly-6C APC</td><td>ebiosciences</td><td>17-5932</td><td>Klon HK1.4, 1/200</td></tr><tr><td>Anti-Maus Ly-6G&nbsp; (Gr-1) Biotin (1)</td><td>ebiosciences</td><td>13-5931</td><td>Klon RB6-8C5, 1/400</td></tr><tr><td>Anti-Maus Ly-6G FITC (2)</td><td>ebiosciences</td><td>11-9668</td><td>Klon 1A8, 1/50</td></tr><tr><td>Anti-Maus MHC Klasse I (H-2Db) Biotin</td><td>ebiosciences</td><td>13-5999</td><td>Klon 28-14-8, 1/50</td></tr><tr><td>Anti-Maus MHC Klasse II (I-A/I-E) PE-Cy5</td><td>ebiosciences</td><td>15-5321</td><td>Klon M5/114.15.2, 1/1000</td></tr><tr><td>Anti-Maus NK1.1 PE</td><td>BD biosciences</td><td>557391</td><td>Klon PK136, 1/50</td></tr><tr><td>Anti-Maus TCRVb FITC</td><td>BD biosciences</td><td>553170</td><td>Klon H57-597, 1/50</td></tr><tr><td>Streptavidin PE-Cy5</td><td>ebiosciences</td><td>15-4317</td><td>&nbsp; &nbsp; 1/200</td></tr><tr><td>Immunfluoreszenz-Färbereagenzien</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Anti-Maus-Myeloperoxidase (schwerkettige Antikörper)</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>sc-16129</td><td>1/10 (20 & Mikro; g/ml)</td></tr><tr><td>&nbsp; Anti-Ziegen-IgG (Texas Red gekoppelter Antikörper)</td><td>Jackson Immunoresearch</td><td>705-076-147</td><td>1/250</td></tr><tr><td>Normales Eselserum</td><td>Jackson Immunoresearch</td><td>017-000-001</td><td></td></tr><tr><td>Hoechst Lösung</td><td>BD Biosciences</td><td>561908</td><td>1/1000</td></tr><tr><td>Eindeckmedium 1 (Fluoromount)&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F4680</td><td></td></tr><tr><td>Aceton</td><td>VWR&nbsp;</td><td>20066</td><td></td></tr><tr><td>Methanol</td><td>Merck Millipore</td><td>106009</td><td></td></tr><tr><td>Esterase zytochemische Färbereagenzien</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Naphtol AS-D Chloracetatlösung</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>911</td><td></td></tr><tr><td>Farbstofflösung (Fast Red Violet LB Base Lösung)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>912</td><td></td></tr><tr><td>pH6,3 Pufferkonzentrat (TRIZMAL)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>913</td><td></td></tr><tr><td>Natriumnitrit-Lösung</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>914</td><td></td></tr><tr><td>Citrat-Lösung</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>915</td><td></td></tr><tr><td>Hämatoxylin-Lösung</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>GHS3</td><td></td></tr><tr><td>Aceton</td><td>VWR&nbsp;</td><td>20066</td><td></td></tr><tr><td>Formaldehydlösung, 37%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F1635</td><td></td></tr><tr><td>&alpha;-Naphthylbutyratlösung</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1801</td><td></td></tr><tr><td>Phosphatpufferlösung</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1805</td><td></td></tr><tr><td>Natriumnitrittablette</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1809</td><td></td></tr><tr><td>Pararosanilinlösung</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1804</td><td></td></tr><tr><td>Methylenblau-Lösung</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1808</td><td>1/10</td></tr><tr><td>Eindeckmedium 2 (Clearmount)</td><td>Invitrogen</td><td>00-8010</td><td></td></tr><tr><td>May-Gr&uuml; nwald Giemsa Färbereagenzien</stark></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mai-Gr&uuml; nwald Lösung</td><td>RAL Diagnostics</td><td>320070</td><td></td></tr><tr><td>Giemsa R Lösung&nbsp;</td><td>RAL Diagnostik</td><td>320310</td><td>&nbsp; &nbsp; 1/20</td></tr><tr><td>pH 6,8 Pufferlösung</td><td>RAL Diagnostik</td><td>330368</td><td></td></tr><tr><td>Andere Materialien, Reagenzien und Geräte</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ketamin 1000 (100 mg/ml)</td><td>VIRBAC</td><td>3597132111010</td><td></td></tr><tr><td>Xylazin SEDAXYLAN (20 mg/ml)</td><td>CEVA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Bovin Albumin Serum (BSA) Pulver</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>BP671</td><td></td></tr><tr><td>PBS-Lösung (1x Konzentrat)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>14190</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyd (PFA)&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>158127</td><td></td></tr><tr><td>Saponin&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>47036</td><td></td></tr><tr><td>Ultra Pure 0,5 M EDTA-Lösung, pH 8,0</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>15575</td><td></td></tr><tr><td>Trennlösung (Pancoll Maus)</td><td>PANBIOTECH</td><td>P04-64100</td><td></td></tr><tr><td>Lysepuffer (Lysing-Puffer für rote Blutkörperchen) (10x)</td><td>BD Biosciences</td><td>555899</td><td>1/10</td></tr><tr><td>NaOH 10 N</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>SS267</td><td></td></tr><tr><td>Trypanblau-Lösung (0,4 %)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>15250-061</td><td>1/2</td></tr><tr><td>50 ml Tube (Falcon)</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-432-22</td><td></td></tr><tr><td>70 & Mikro; m Zellsieb (Falke)&nbsp;</td><td>Corning Biowissenschaften</td><td>352350</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp; Kammer & Filterkarte (EZ Cytofunnel Shandon)</td><td>Thermo Scientific</td><td>A78710003</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop Deckgläser, 24 x 24mm</td><td>Knittel Glas</td><td>VD1 2424 Y100</td><td></td></tr><tr><td>Objektträger (Starfrost - geschliffene Kanten 90)</td><td>Knittel Glas</td><td>VS1137# 077FKB</td><td></td></tr><tr><td>EDTA Tube</td><td>Greiner Bio-One</td><td>454034</td><td></td></tr><tr><td>Pasteur Pipette 150 mm (Kapillarrohr)</td><td>Fisherbrand</td><td>1154-6963</td><td></td></tr><tr><td>26 G Nadel</td><td>Terumo</td><td>NN-2613R</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp; Insulinspritze und -nadel 29 g</td><td>Terumo</td><td>BS05M2913</td><td></td></tr><tr><td>30 g Nadel</td><td>Becton & Dickinson</td><td>304000</td><td></td></tr><tr><td>Durchflusszytometrie-Röhrchen (blau)</td><td>Beckman Coulter</td><td>2523749</td><td></td></tr><tr><td>Wasserabweisender Stift (Dakopen)</td><td>Dako</td><td>S200230</td><td></td></tr><tr><td>Sharp sterile Schere&nbsp;</td><td>Nessi-care</td><td>SCI-01</td><td></td></tr><tr><td>Sterile Pinzette</td><td>Dominique Dutscher</td><td>956506</td><td></td></tr><tr><td>Thoma Zellzählkammer</td><td>VWR</td><td>631-0397</td><td></td></tr><tr><td>Petrischalen (Fisherbrand Kunststoff)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>S33580A</td><td></td></tr><tr><td>Mikrozentrifugenröhrchen (1,5 ml)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>05-408-129</td><td></td></tr><tr><td>Zylindrisches Restrainer 15 - 30 g</td><td>Stoelting</td><td>51338</td><td></td></tr><tr><td>Shandon Cytospin 3 Zytozentrifuge</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>10 ml Spritze</td><td>Terumo</td><td>SS-10L</td><td></td></tr><tr><td>1 ml Spritze</td><td>Terumo</td><td>SS-01T</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Merck</td><td>1.08543</td><td></td></tr><tr><td>Sterile Mullschwämme</td><td>URGO</td><td>501580</td><td></td></tr></tbody></table>

ein detailliertes protokoll der murinen c1498-zelllinie und der damit verbundenen leukämie maus-modell für charakterisieren

A Detailed Protocol for Characterizing the Murine C1498 Cell Line and its Associated Leukemia Mouse Model

Die intravenöse Injektion von C1498-Zellen in syngene oder kongenen Mäusen durchgeführt worden ist seit 1941. Diese Injektionen in der Entwicklung von akuter Leukämie führen. Allerdings hat die Natur dieser Krankheit nicht gut sind in der Literatur dokumentiert. Hier stellen wir ein technisches Protokoll für die Charakterisierung von C1498 - Zellen in vitro und für die Art der induzierten Leukämie in vivo zu bestimmen. Der erste Teil dieses Verfahrens ist, fokussiert die hämatopoetischen Abstammungslinie und dem Stadium der Differenzierung von kultivierten C1498-Zellen auf der Bestimmung. Um dies zu erreichen, wird multi-parametrischer durchflusszytometrische Färbung verwendet, um hämatopoetische Zellmarker erkennen. Immunofluoreszenz-Mikroskopie, Zytochemie und einer May-Grünwald-Giemsa-Färbung werden dann durchgeführt, um die Expression von Myeloperoxidase zu beurteilen, die Aktivität von Esterasen und zellulärer Morphologie, respectively. Der zweite Teil dieses Protokolls wird auf die Beschreibung der Leukämieerkrankung gewidmet , die in induziert wirdvivo. Letzteres kann durch die Bestimmung der Frequenzen von leukämischen und inhärenten Zellen im Blut, hämatopoetischen Organe (zB Knochenmark und Milz) und nicht-lymphoiden Geweben (zB Leber und Lunge) unter Verwendung spezifischer Färbung und Durchflusszytometrie - Analysen erreicht werden. Die Art der Leukämie bestätigt dann in dem Knochenmark für spezifische Esterasen May-Grünwald-Giemsa-Färbung und Färbung verwendet wird. Hier präsentieren wir die Ergebnisse, die erhalten wurden unter Verwendung dieses Protokolls in altersangepassten C1498- und PBS-injizierten Mäusen.

Um die C1498-Mausmodell charakterisieren, gingen wir mit zwei großen Schritten. Zuerst wurden die C1498 - Zellen charakterisiert ihre hämatopoetischen Abstammungslinie und Reifungsstufe in vitro (1) zu bestimmen. Diese Zellen wurden dann in kongenen Mäusen injiziert, und die Art der leukämischen Krankheit induziert wurde beurteilt unterschiedliche Merkmale bestimmen: leukämischen Zellinfiltration, ihren Phänotyp, eine Quantifizierung der hämatopoetischen Zellen (mature und Progenitoren / Precursoren) in Knochenmark, die Frequenzen von C1498-Zellen und reifen hämatopoetischen Zellen im Blut und einer Beurteilung der Organschwellung (in der Milz, Leber und Lunge) und zelluläre Zusammensetzung. Um die C1498 Zellphänotypen in vitro zu charakterisieren, wurden die Zellen mit Antikörpern gegen Molekülen markiert, die von hämatopoetischen Vorläufern und reifen Zellen (Tabelle 1) ausgedrückt werden, und die Ergebnisse wurden unter Verwendung von Strömungs cytomet analysiertry. Die C1498-Zellen waren positiv für Zelloberflächenexpression von Mac-1 (CD11b / CD18) (~ 7%), B220 (&gt; 25%), und sie zeigten eine intrazelluläre Expression von CD3 &amp; egr;, T-Zell-Rezeptor (TCR) Vß Ketten und Mac -3 (2A und B). Die Zellen waren negativ für die Zelloberflächenmarker Ly6G, Ly6C, CD115, CD21 / CD35, CD19, CD3, CD4, CD8, NK1.1 und pan-NK-Moleküle und für die intrazelluläre Expression von CD4 und CD8 (Daten nicht gezeigt) . Sie wurden dann für Marker von hämatopoetischen Stammzellen und Progenitoren (Tabelle 1) untersucht. Sie waren auch negativ für Zelloberflächenexpression von CD117, CD34, Sca-1, CD150 und CD16 / 32 (Daten nicht gezeigt). Diese leukämischen Zellen wurden dann getestet, um die Expression von Adhäsionsmolekülen, die Antigenpräsentation und co-stimulatorische Moleküle zu bestimmen. Die Zellen exprimierten die Oberflächenmarker LFA-1 (CD11a / CD18), CD44, CD31 (PECAM-1), H-2D b und waren negativ für MHC - Klasse II, CD80, CD86 und CD274 (Daten nicht gezeigt). C1498-Zellen therefore ausgedrückt beide myeloischen (Mac-1, Mac-3) und lymphatischen Markern (B220, CD3, TCR). Um besser auf ihre hämatopoetischen Abstammungslinie zu charakterisieren, wurde Myeloperoxidase Expression unter Verwendung von Immunfluoreszenz-Mikroskopie untersucht. Alle Zellen waren positiv für die Myeloperoxidase, die ihre myeloiden Ursprungs (3A) verifiziert. Eine Mehrheit der Zellen auch positiv gefärbt für α-Naphthyl - Butyrat Esterasen (3B, linke Tafel), und einige von ihnen für die Naphthol - AS-D chloroacetate Esterasen (schwarze Pfeile) (3B, rechts) gefärbt. Die Ergebnisse zeigen, dass die Zellen, Mischungen von monozytären und granulozytäre Zellen enthalten. Nach dem May-Grünwald Giemsa durchgeführt wurde, wurden die C1498 - Zellen beobachtet eine Explosion förmige Morphologie mit einem hohen Kern-Zellplasma - Verhältnis angezeigt werden , 3 bis 5 Kernkörperchen im Kern, ein perinukleären Halo, zahlreiche Vakuolen und ein basophilen Zytoplasma (3C ). thuns wird die C1498-Zelllinie von Monoblasten und Myeloblasten zusammen. Die C1498 - Zellen (CD45.2 +) wurden dann intravenös in CD45.1 + injizierten Mäusen. Die Mäuse erlag 17 bis 19 Tage, nachdem die Zellen injiziert wurden. Diese Mäuse wurden getötet, so dass ihre Leukämietyp analysiert werden, bevor sie an der Krankheit gestorben. Die Kontrollmäuse, die mit PBS injiziert wurden, wurden in den gleichen Zeitpunkten zum Vergleich analysiert. Der C1498-Zellen injizierten Mäuse zeigten massive Infiltration von C1498 - Zellen in ihrem Knochenmark, wie es durch den Hochartiges Aussehen der Zellen zeigten nach der May-Grünwald - Giemsa - Färbung (4A) durchgeführt wurde. Sie bewahrt ihre monozytären und granulocytic Phänotypen (4B und C), eine Ansammlung von monoblastischen und myeloische Zellen zeigen , die charakteristisch für akute myelomonozytische Leukämie ist. Um determine ob Markzahlen hämatopoetischen Zellen nach leukämischen Zellen Invasion niedriger waren, CD45.2 + C1498 - Zellen, B lymphatischer, monozytären und granulocytic Populationen (einschließlich Vorläufern, Vorläufern und reifen Zellen) wurden unter Verwendung von Immunfluoreszenzanfärbung quantifiziert und multiparametrisches Durchflusscytometrieanalyse. Leukämischen Zellen 16 bis 36% der hämatopoetischen Zellen dargestellt (Daten nicht gezeigt). Die anderen Zelltypen wurden alle in deutlich niedrigeren Zahlen in den C1498-injizierten Mäusen als in den PBS-injizierten Mäusen (von 5-fach im Durchschnitt für B-Zell-Subpopulationen, 4-fach im Durchschnitt granulocytic Zellen und 3-fach im Durchschnitt für monozytären Subsets) (5A bis C). Eine Untersuchung der Frequenzen von mononukleären Zellen in leukämischen und Kontroll - Maus Blutproben zeigten , daß sie einen vergleichbaren Prozentsatz der Lymphozyten (Figur 6A) , aber eine höhere Frequenz monozytären enthaltenenund leukämischen Zellen. Diese Eigenschaften sind repräsentativ für akute myelomonozytische Leukämie 11 (6B). Zu den weiteren Merkmalen der akuten Leukämie myelomonocytic 12, die C1498-injizierten Mäusen mit geschwollenen Leber (Hepatomegalie) präsentiert, Lunge und Milz (Splenomegalie) (7A). Verschiedene Frequenzen von CD45.2 + C1498 - Zellen wurden in diesen Organen mit Immunfluoreszenzanfärbung erkannt und Durchflusszytometrie - Analyse (7B). Wie Splenomegalie aus hohen Zahl von infiltriert Monozyten führen kann, schätzten wir auch die Anteile von Milz- Populationen. Die Zahl der Zellen in der B - lymphozytische, monozytären und granulocytic Zellfraktionen waren signifikant größer ist , um durchschnittlich 2-fach, 2,5-fach und 3-fach bzw. in leukämischen Milzen als bei den Kontroll Milzen (7C). Thin-page = &quot;1&quot;&gt; <img alt="Abbildung 1" src="/files/ftp_upload/54270/54270fig1.jpg" /> Abbildung 1. Schematische Darstellung des Protokolls Set Up für in - vitro - Charakterisierung von Cultured C1498 Zelllinien und in - vivo - Beschreibungen von akuter Leukämie. Hämatopoetischen Abstammungslinie und dem Differenzierungsstadium von Gewebekultur C1498 - Zellen wurden zuerst bestimmt. C1498-Zellen wurden dann in kongenen Mäusen injiziert, um die Entwicklung von akuter Leukämie zu induzieren. Die Isolierung von Knochenmark, peripherem Blut, Milz, Leber und Lungengewebe wurde durchgeführt, um die Frequenzen, Phänotypen und morphologische Veränderungen nach der C1498-Zellen-Infiltration zu bestimmen. IV: Intravenous MGG. May-Grünwald Giemsa <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54270/54270fig1large.jpg" target="_blank">Bitte hier klicken</a> , um <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54270/54270fig1large.jpg" target="_blank">eine größere Version dieser Figur zu sehen.</a> <html> ad / 54270 / 54270fig2.jpg &quot;/&gt; Abbildung 2 Phänotypische Analyse von C1498 - Zellen nach in vitro - Kultur. Representative Durchflusszytometrie Punktplots und Histogramme der Zelloberfläche (A) und intrazelluläre (B) C1498-exprimierten Moleküle , die mit hämatopoetischen mature Zelldifferenzierung zugeordnet wurden , sind gezeigt. C1498-Zellen wurden aus den Kulturen geerntet, gewaschen und markiert fluoreszierenden Antikörpern, die für die Zelloberflächen CD11b, CD18 und B220 Marker oder deren Isotypkontrollen spezifisch waren. Für die intrazelluläre Färbung wurden die Zellen fixiert, permeabilisiert und markierten Antikörpern, gerichtet gegen Mac-3, CD3 &amp; egr; und ein gemeinsames Epitop des TCR (T-Cell Receptor) Vß-Kette oder deren Isotyp-Kontrollen verwendet. Die Analysen wurden unter Verwendung von Gating mit lebenden Zellen durchgeführt werden . <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54270/54270fig2large.jpg" target="_blank">Bitte hier klicken</a> , um <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54270/54270fig2large.jpg" target="_blank">eine größere Version dieser Figur zu sehen.</a> <html> ntent &quot;fo: keep-together.within-page =&quot; 1 &quot;&gt; <img alt="Figur 3" src="/files/ftp_upload/54270/54270fig3.jpg" /> Abbildung 3. Funktionelle und morphologische Charakterisierung von Cultured C1498 Zellen. C1498 - Zellen aus Kulturen und zentrifugiert auf Objektträger für die Mikroskopie. (A) Die Färbung für Myeloperoxidaseexpression geerntet wurden , wurde unter Verwendung von Immunfluoreszenz durchgeführt. (B) Zytochemische Reaktionen wurden verwendet , um die α-naphthyl Butyrat - Esterase (NBE) und Naphthol AS-D chloroacetate Esterase zu analysieren (CAE) Aktivitäten in C1498-Zellen. Die Zellen wurden für jedes Etikett als positiv betrachtet , wenn braun und rot-lila, große zytoplasmatischen Granula bzw. beobachtet. (C) May-Grünwald Giemsa (MGG) Färbung von C1498 - Zellen. Für jede Färbung Experiment wird die Mikroskopie Objektiwergrößerung angezeigt. Jedes Bild ist repräsentativ für drei getrennte Experimente.large.jpg &quot;target =&quot; _ blank &quot;&gt; Bitte hier klicken, um eine größere Version dieser Figur zu sehen. <img alt="Abbildung 4" src="/files/ftp_upload/54270/54270fig4.jpg" /> Abbildung 4. Knochenmark - Morphologien in PBS- und C1498-injizierten Mäusen. Die Knochenmarkzellen von PBS- und C1498 Zellen injizierten Mäusen und zentrifugiert auf Objektträger für die Mikroskopie isoliert. (A) May-Grünwald Giemsa (MGG) Färbung. (B ) α-naphthyl Butyrat - Esterase (NBE) und (C) Naphthol AS-D - Chloracetat - Esterase (CAE) Funktionen wurden mit Zytochemie ausgewertet. Im Feld A, sind die Band (unreife) oder segmentiert (reifen) Neutrophilen weniger sichtbar im Knochenmark der C1498-injizierten Mäusen als die PBS-injizierten Mäusen. Panel B und C zeigen an, daß eine Ansammlung von monocytischen und granulozytäre Zellen in der leukämischen Knochenmark im Vergleich zu den Zahlen in der Kontrollknochenmark beobachtet war. Allemikroskopische Analysen wurden unter Verwendung eines 100 - facher Vergrößerung Ziel durchgeführt. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54270/54270fig4large.jpg" target="_blank">Bitte hier klicken</a> , um <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54270/54270fig4large.jpg" target="_blank">eine größere Version dieser Figur zu sehen.</a> <img alt="Abbildung 5" src="/files/ftp_upload/54270/54270fig5.jpg" /> Abbildung 5. Quantitative Analyse von Medulläre Populations in PBS- und C1498-injizierten Mäusen. Die Knochenmarkzellen von PBS- und C1498 Zellen injizierten Mäusen isoliert wurden und geschätzt nach Zellzählung durchgeführt wurde. Die Frequenzen der verschiedenen Zellpopulationen wurden nach Immunfärbung und lebenden Zellen Durchflußcytometrie - Analyse gated bestimmt. (A) Die B - Zell - Untergruppen enthalten CD19 + B220 + -Zellen in Stufen von pro-B - Zellen , B - Lymphozyten (B) granulozytäre Zellen in dem reifen CD3 - und CD11b + Ly6G + Abstammungslinien, die Vorläufer enthalten ein. nd unreifen und reifen Granulozyten (C) Die Monozyten - Subsets wurden als CD3 definiert - CD115 + und enthalten Zellen in der Vorläufer zu Monozyten Stufen reifen. n = 7 Mäuse / Gruppe, und die Daten werden als Histogramme dargestellt, die Mittel ± SEM zeigt. ***, P &lt;0,0001 und ** p &lt;0,01, t - Test verglichen PBS- und C1498-injizierten Mäusen ungepaarten Studenten. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54270/54270fig5large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier</a> , um <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54270/54270fig5large.jpg" target="_blank">eine größere Version dieser Figur zu sehen.</a> <img alt="Figur 6" src="/files/ftp_upload/54270/54270fig6.jpg" /> Abbildung 6. Blut - Analyse von mononukleären Zell - Populationen in PBS- und C1498-injizierten Mäusen. Repräsentative Durchflusscytometrie Punktplots von (A) T und B - Lymphozyten - Prozentsätze, die jeweils definiert wurden als CD3 + und B220 + -Zellen in PBS- und C1498-Zellen injiziert. Mäuse (B) monozytären Zellfrequenzen in C1498 leukämischen und Kontrolle (PBS) Mäuse wurden durch die Analyse von CD115 + Ly6C bestimmt - und CD115 + Ly6C hohe Zellen. Die Analyse wurde durch Gating lebenden Zellen durchgeführt. Zum Vergleich leukämischen und Kontrollmäuse, + CD45.2 C1498 Zellen wurden ausgeschlossen. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54270/54270fig6large.jpg" target="_blank">Bitte hier klicken</a> , um <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54270/54270fig6large.jpg" target="_blank">eine größere Version dieser Figur zu sehen.</a> <img alt="7" src="/files/ftp_upload/54270/54270fig7.jpg" /> Abbildung 7. Schätzung der Splenic Populations in Leukämische und Kontrollmäusen. (A) Repräsentative Photographien von Leber, Lunge und Milz in leukämischen Mäusen Quellung im Vergleich zu Kontrollmäusen. Die Milzen wurden gesammelt und gewogen, und Splenozyten wurden folgende Gewebezerstörung gezählt. (B) Histogramm darstellt leukämische Zelle Frequenzen in diffErent Organe nach Immunfärbung wurde für CD45.2 + Zellen durchgeführt , und die Ergebnisse wurden mittels Durchflusszytometrie analysiert fließen. (C) Ermittlung der Milz - B, granulozytärer und monozytären Zellzahlen nach Immunfärbung und Durchflusszytometrie - Analyse Gating durchgeführt wurden live CD19 + B220 zu identifizieren + , CD3 - CD11b + Ly6G +, CD3 - CD11b + Ly6C - und CD3 - CD11b + Ly6C hohe Zellen. Die Maßstabsbalken für die Lunge, Milz und Leber zeigen an, 1 cm. .. n = 5 bis 8 Mäuse / Gruppe, und die Daten werden in Histogrammen als Mittelwert ± SEM dargestellt *, p &lt;0,05; **, p = 0,0033, ungepaarten Student-t- Test Vergleich PBS- und C1498-injizierten Mäusen <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54270/54270fig7large.jpg" target="_blank">Bitte hier klicken</a> , um <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54270/54270fig7large.jpg" target="_blank">eine größere Version dieser Figur zu sehen.</a> <table fo:keep-together.within-page="1"><tbody&gt; <tr><td> Zelltyp </td><td> Membran oder intrazelluläre Moleküle </td></tr><tr><td></td><td></td></tr><tr><td> Precursors und reifen Zellen </td><td></td></tr><tr><td> NK-Zellen </td><td> NK1.1 +, pan-NK + </td></tr><tr><td> NKT-Zellen </td><td> NK1.1 +, pan-NK +, TCR Vbeta + (8.2), CD3 + </td></tr><tr><td> T-Lymphozyten </td><td> TCR Vbeta +, CD3 +, CD4 +, CD8 + </td></tr><tr><td> B-Zellen-Vorläufer und B-Lymphozyten </td><td> B220 +, CD19 +, CD21 / 35 + </td></tr><tr><td> granulocytic Vorläufer und Granulozyten </td><td> Ly6G +, Mac-1 +, CD11b + </td></tr><tr><td> Monozyten-Vorläufern und Monozyten / Makrophagen </td><td> CD11b +, Mac-1 +, Mac-3 +, CD21 / 35 +, CD115 +, Ly6Chi </td></tr><tr><td></td><td></td></tr><tr><td> Stammeltern </td><td></td></tr><tr><td> multi- Vorläufern </td><td> CD117 + Sca-1 + CD34 + (Lin- CD150-) </td></tr><tr><td> lymphatischen grundierten multi- Vorläufern </td><td> CD117hi Sca-1hi CD127 + (Lin-) </td></tr><tr><td> gemeinsame lymphatischen Vorläufern </td><td> CD117lo Sca-1LO CD127 + (Lin-) </td></tr><tr><td> gemeinsame myeloischen Vorläufern </td><td> CD16 / 32lo CD117 + CD34int (Lin- Sca-1-) </td></tr><tr><td> Granulozyten-Makrophagen-Vorläufern </td><td> CD16 / 32hi CD117 + CD34hi (Lin- Sca-1-) </td></tr><tr><td> Megakaryozyten-erythroiden Vorläufern </td><td> CD16 / 32lo CD117 + CD34lo (Lin- Sca-1-) </td></tr><tr><td></td><td></td></tr><tr><td> Hämatopoetischen Stammzellen </td><td> CD117 + Sca-1 + CD150 + (Lin- CD34) </td></tr></tbody></table> Tabelle 1 Marker hämatopoetischer Zelllinien und Differenzierung. CD: Cluster der Differenzierung; Lin: Marker von reifen Zellen; lo:niedrige Expression; hallo: hohe Expression; int: Zwischen Ausdruck; NK: natürliche Killerzellen; TCR: T-Zell-Rezeptor.

Diese Handschrift stellt ein technisches Verfahren , das verwendet werden kann , C1498 - Zellkulturen in vitro und der akuten Leukämie induziert in Mäusen nach der Injektion zu charakterisieren. Die phänotypische und funktionelle Analysen werden mit Hilfe der Durchflusszytometrie, Immunfluoreszenzmikroskopie, Zytochemie und May-Grünwald Giemsa Färbung durchgeführt.

Ein detailliertes Protokoll der murinen C1498-Zelllinie und der damit verbundenen Leukämie Maus-Modell für Charakterisieren

The intravenous injection of C1498 cells into syngeneic or congenic mice has been performed since 1941. These injections result in the development of ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens besteht darin, murine C1498-Zellen und die akute Leukämie zu charakterisieren, die sie nach intravenöser Injektion in Mäuse auslösen. Der Hauptvorteil dieses Verfahrens liegt darin, dass die murine myelomonozytäre Leukämie, die nach einer Injektion von C1498-Zellen auftritt, zahlreiche Merkmale der menschlichen Erkrankung aufweist. Dieses Tiermodell kann helfen, zentrale Fragen im Bereich der Hämatologie zu beantworten, beispielsweise, welche Mechanismen zur Entstehung von Leukämie und Immundefizienz führen.Die Bedeutung dieses Tiermodells erstreckt sich auf die Behandlung von Leukämie, da es die Prüfung neuer chemotherapeutischer und immuntherapeutischer Wirkstoffe ermöglicht. Überführen Sie zunächst eine fünf bis sechs Wochen alte weibliche kongene C57 black 6 Maus in eine sterile Flusskammer. Danach platzieren Sie das Tier in einer Fixiervorrichtung.Laden Sie als Nächstes eine Ein-Milliliter-Spritze, die mit einer 29-Gauge-Nadel ausgestattet ist, mit 100 Mikrolitern Zellen auf. Greifen Sie an das Schwanzende und desinfizieren Sie die Schwanzhaut mit einem mit 70 % Ethanol getränkten Mulltuch. Injizieren Sie dann langsam eine mal zehn hoch sechs Zellen in eine seitliche Schwanzvene.Wenn alle Zellen verabreicht wurden, entfernen Sie die Nadel und üben Sie mit steriler Gaze sanften Druck an der Injektionsstelle aus. Danach bringen Sie das Tier in seinen Käfig zurück und überwachen es in den folgenden Wochen sorgfältig. 17 bis 19 Tage später führen Sie ein Kapillarrohr in den medialen Augenwinkel des anästhesierten leukämischen Tieres ein.Es werden 100 bis 200 Mikroliter Blut aus dem Orbitalsinus in das Kapillarrohr entnommen. Entfernen Sie das Rohr und stillen Sie die Blutung durch vorsichtige Anwendung eines sterilen Gazetupfers auf das Auge. Anschließend wird das Blut in ein EDTA-Röhrchen überführt und bis zur Isolierung der mononukleären Zellen auf Eis aufbewahrt.Um die mononukleären Blutzellen zu isolieren, zunächst PBS mit einem Millimolar EDTA bis zu einem Endvolumen von 500 Mikrolitern hinzufügen. Danach die Probe in ein Mikrozentrifugenröhrchen überführen. Als Nächstes 500 Mikroliter Trennlösung mit einer 1-Milliliter-Spritze, die mit einer 30-Gauge-Nadel ausgestattet ist, vorsichtig unter das Blut schichten, wobei darauf geachtet werden muss, dass die Schichten nicht vermischt werden.Trennen Sie die Zellen durch Zentrifugation und verwenden Sie eine Pipette, um die opak-weiße mononukleäre Zellschicht in ein neues Mikrozentrifugenröhrchen zu überführen. Waschen Sie die Immunzellen anschließend in einem Milliliter PBS. Zentrifugieren Sie sie erneut und resuspendieren Sie das Pellet in 600 Mikrolitern FACS-Puffer zur Färbung und Analyse per Durchflusszytometrie.Um das Knochenmark zu isolieren, legen Sie die Maus auf den Rücken auf ein Plastikbrett und sichern Sie die Gliedmaßen des Tieres. Desinfizieren Sie das Tier mit 70 % Ethanol. Schneiden Sie dann jedes Bein am oberen Ende des Femurs oberhalb des Gelenks ab und ziehen Sie vorsichtig an den Tibiae, um sie von den Femura zu lösen.Entfernen Sie mit Pinzette und Schere die Haut und die Muskulatur von den Knochen und überführen Sie die Knochen in eine Petrischale auf Eis. Entfernen Sie mit der Schere die Extremitäten. Stechen Sie dann jeweils an einem Knochenende eine Nadel mit 26 Gauge, die an eine 10-Milliliter-Spritze mit fünf Milliliter kalter PBS angeschlossen ist, ein und spülen Sie das Knochenmark in die Schale. Führen Sie die Zellsuspension mehrmals durch die Nadelöffnung, um die Knochenmarkzellen aufzulösen. Anschließend filtrieren Sie die Zellen durch einen neuen 70-Mikron-Filter in ein 50-Milliliter-Konischgefäß, um eine Einzelzell-Suspension zu erhalten. Zentrifugieren Sie die Zellen und resuspendieren Sie das Pellet in zwei Milliliter Lysepuffer.Füllen Sie das Röhrchen sofort mit bis zu 50 Milliliter kaltem PBS und zentrifugieren Sie die Zellen. Suspendieren Sie das Knochenmarkspellet anschließend bei einer Konzentration von 1 × 10⁶ Zellen pro Milliliter in kaltem FACS-Puffer. Um die Knochenmarkzellen für die Färbung vorzubereiten, stellen Sie zunächst Objektträger in Einwegkammern mit vormontierten Filterkarten und setzen Sie die Kammern in eine Zytospinzentrifuge.Fügen Sie 100 Mikroliter FACS-Puffer zu jeder Filterkartenkammer hinzu und zentrifugieren Sie die Objektträger kurz. Geben Sie am Ende des Zentrifugierens 100 Mikroliter Zellen zu jeder Kammer hinzu und zentrifugieren Sie die Zellen. Entfernen Sie anschließend die Objektträger vorsichtig aus den Kammern, um sie an der Luft trocknen zu lassen.Um die Knochenmarkzellen zu färben, tauchen Sie die Objektträger für fünf Minuten in ein Coplin-Glas mit May-Grünwald-Lösung ein. Danach überführen Sie die Objektträger für eine Minute in ein Gefäß mit Pufferlösung mit einem pH-Wert von 6,8. Anschließend überführen Sie die Objektträger für 10 Minuten in Giemsa-R-Lösung.Anschließend eine 10-sekündige Wäsche mit pH-neutralem Wasser durchführen. Nach der Wäsche die Objektträger lufttrocknen lassen und je eine Tropfen Eindeckmedium auf jede Probe geben. Danach eine Kante eines Deckglases auf den Objektträger setzen und das Deckglas vorsichtig auf die Zellen absenken, wobei leicht gedrückt wird, um Luftblasen zu entfernen.Im Vergleich zu Kontrolltieren zeigen die mit C1498-Zellen injizierten Tiere eine massive Infiltration von C1498-Zellen im Knochenmark, wie durch das blastenähnliche Erscheinungsbild der Zellen beobachtet werden kann. Die das Knochenmark infiltrierenden C1498-Zellen weisen monozytäre und granulozytäre Phänotypen auf, die jeweils für monozytäre Blasten und myelozytäre Blasten charakteristisch sind und für eine akute myelomonozytäre Leukämie typisch sind. Die Durchflusszytometrie-Analyse der mononukleären Zellhäufigkeiten in Blutproben der mit C1498 injizierten Mäuse zeigt, dass etwa ein Viertel der gesamten Leukozytenpopulation aus leukämischen Zellen besteht.Die Häufigkeiten von T- und B-Lymphozyten sind zwischen Kontroll- und C1498-injizierten Tieren vergleichbar. Die Monocytenhäufigkeiten hingegen sind bei C1498-injizierten Mäusen erhöht, ein Merkmal der akuten myelomonocyten Leukämie. Bei der Durchführung der Zytchemie- und May-Grünwald-Giemsa-Verfahren ist es wichtig, die geeigneten pH-Werte, Temperaturen und Inkubationszeiten einzuhalten.Nachdem Sie sich dieses Video angesehen haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie akute myelomonozytäre Leukämie charakterisiert werden kann. Nach ihrer Entwicklung ebnete diese Technik den Forschern auf dem Gebiet der Hämatologie den Weg, um die Natur spontaner und induzierter akuter Leukämien in anderen Tiermodellen zu erforschen.

a-detailed-protocol-for-characterizing-murine-c1498-cell-line-its

Research

Forschung

JoVE Journal

Cancer Research

Krebsforschung

Zirkulierenden Tumorzellen (CTC) in mehreren metastatischen Krebsprognos. Dieses Manuskript beschreibt den Goldstandard Cellsearch System (CSS) CTC Aufzählung Plattform und Highlights gemeinsame Fehlklassifikation Fehler. Darüber hinaus werden zwei angepasste Protokolle für benutzerdefinierte Marker Charakterisierung von CTC und CTC Aufzählung in präklinischen Mausmodellen der Metastasierung mit dieser Technologie beschrieben.

Halbautomatische Anpassung der Umlauftumorzellen (CTC)-Assays für die klinische und vorklinische Forschungsanwendungen

Kombinatorische 5 fluoreszierenden Proteinen markiert von hämatopoetischen Stamm-und Vorläuferzellen in vivo ermöglicht klonalen Tracking über die konfokale und Zwei-Photonen-Mikroskopie, die einen Einblick in die Knochenmark blutbild Architektur während der Regeneration. Dieses Verfahren ermöglicht nicht-invasive Abbildung von Schicksal spektral kodierten HSPCs abgeleiteten Zellen in intaktem Gewebe für ausgedehnte Zeiträume nach der Transplantation.

In vivo Klonale Verfolgung von hämatopoetischen Stamm-und Vorläuferzellen durch Fünf Fluoreszierende Proteine ​​mit Hilfe der konfokalen und Multiphotonen Mikroskopie Markierte

Der Transfer von bm12-Lymphozyten in einen C57BL/6-Empfänger ist ein etabliertes Modell des systemischen Lupus erythematodes. Hier beschreiben wir, wie man mit diesem Modell eine Krankheit auslösen kann und wie man T-follikuläre Helferzellen, Keimzentrum-B-Zellen und Plasmazellen mittels Durchflusszytometrie charakterisiert.

Das BM12 Inducible Modell des systemischen Lupus erythematodes (SLE) in C57BL / 6-Mäuse

Dieses Manuskript bietet eine Beschreibung der Methodik, die zur Etablierung von Transduktions-Transplantations-Mausmodellen verwendet wurde. Es wird detailliert über technische Fehler berichtet, die bei der Durchführung von Knochenmarktransplantationen vermieden werden sollten. Es sollte ein klares Verständnis für die Bedeutung eines hohen Virustiters, Transfektion/Transduktion und Bestrahlung gewonnen werden.

Transduction-Transplantation Maus-Modell der myeloproliferativen Neoplasien

Hier beschreiben wir Protokolle für die genetischen und chemischen Validierung von c-Fos und Dusp1 als Medikament Ziel bei Leukämie mit in vitro und in vivo genetische und humanisierte Mausmodelle. Diese Methode kann auf jedes beliebige Ziel für genetische Validierung und therapeutische Entwicklung angewendet werden.

Methoden zur Bewertung der Rolle von c-Fos und Dusp1 in Abhängigkeit der Onkogen

Wir beschreiben eine Methode zur Verwendung von Multiparameter-Durchflusszytometrie zum Nachweis von mitochondrialen reaktiven Sauerstoffspezies (ROS) in murinen gesunden hämatopoetischen Stamm- und Vorläuferzellen (HSPCs) und Leukämiezellen aus einem Mausmodell akuter myeloischer Leukämie (AML), das von MLL-AF9.

Flow Cytometric Analysis of Mitochondrial Reactive Oxygen Species in Murine Hematopoietic Stem and Progenitor Cells and MLL-AF9 Driven Leukemia

Dieses Protokoll beschreibt die Isolierung von doppelt negativen Thymozyten aus dem Thymus der Maus, gefolgt von retroviraler Transduktion und Co-Kultur auf dem delta-like 4-exprimierenden Knochenmark-Stroma-Zelllinien-Co-Kultursystem (OP9-DL4) zur weiteren funktionellen Analyse.

Kokultur und Transduktion von murinen Thymozyten auf Delta-ähnlichen 4-exprimierenden Stromazellen zur Untersuchung von Onkogenen bei T-Zell-Leukämie

Dieses Protokoll beschreibt die Erzeugung von Mäusen mit menschlichem Immunsystem (KIS) für immunonkologische Studien. Anweisungen und Überlegungen zur Verwendung dieses Modells zum Testen von humanen Immuntherapeutika an menschlichen Tumoren, die in dieses Modell implantiert wurden, werden vorgestellt, wobei der Schwerpunkt auf der Charakterisierung der Reaktion des menschlichen Immunsystems auf den Tumor liegt.

Erprobung von Krebsimmuntherapeutika in einem humanisierten Mausmodell mit menschlichen Tumoren

Dabei wird die intraperitoneale Injektion von Leukämiezellen genutzt, um eine akute myeloische Leukämie (AML) bei Mäusen zu etablieren und zu propagieren. Diese neue Methode ist bei der seriellen Transplantation von AML-Zellen wirksam und kann als Alternative für diejenigen dienen, bei denen Schwierigkeiten und Inkonsistenzen bei der intravenösen Injektion bei Mäusen auftreten können.

Intraperitoneale Transplantation zur Erzeugung akuter myeloischer Leukämie bei Mäusen

Hier wird ein detailliertes Protokoll zur Isolierung und Charakterisierung von Knochenmark-Mikroumgebungspopulationen aus murinen Modellen myelodysplastischer Syndrome und akuter myeloischer Leukämie vorgestellt. Mit dieser Technik werden Veränderungen in der nicht-hämatopoetischen Knochenmarknische, einschließlich der endothelialen und mesenchymalen Stromazellen, mit Fortschreiten der Erkrankung identifiziert.

Identifizierung von Knochenmark-Mikroumgebungspopulationen beim myelodysplastischen Syndrom und der akuten myeloischen Leukämie

Das Protokoll zielt darauf ab, ein Mausmodell zur Erzeugung von Schüben akuter lymphatischer Leukämie zu beschreiben, basierend auf der Dynamik des Ansprechens auf eine Induktionschemotherapie.

Mausmodell des Leukämie-Rezidivs zur Induktionschemotherapie bei akuter lymphatischer Leukämie

Erfahren Sie die Charakterisierung akuter myelomonozytärer Leukämie mit murinen C1498-Zellen im Mausmodell. Diese Methode ermöglicht Forschern die Untersuchung von Leukämieentwicklung und Immunsuppression.

Ein detailliertes Protokoll der murinen C1498-Zelllinie und der damit verbundenen Leukämie Maus-Modell für Charakterisieren

Weitere Videos entdecken