Name: Protokoll für die Maus Kreis von Willis Trenn (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-10-22T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 30 s
Description: Erfahren Sie die Isolierung des Circulus arteriosus cerebri bei Mäusen für zerebrovaskuläre Forschung. Diese Methode ermöglicht die schnelle Präparation großer Gefäße ohne Strukturveränderung für Genexpressionsstudien.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Diese Arbeit wurde von Paris VI University und einen Pierre Fabre Innovation Zuschuss unterstützt.

Alle Verfahren wurden in Übereinstimmung mit dem europäischen Gemeinschaftsstandards für die Pflege und Verwendung von Labortieren, mit Zustimmung der lokalen Ethikkommission für Tierversuche (Ile de France-Paris-Komitee, Zulassung 4270) durchgeführt. 1. Anesthesia <ol><li> eine letale Dosis von Pentobarbital (bis zu 1 mg / 10 g Körpergewicht) intraperitoneal (27-Gauge-Nadel und 1-ml Spritze) in erwachsenen Mäusen vor der Operation infundieren. </li></ol> 2. Behälter Perfusions HINWEIS: Es gibt keine Notwendigkeit, die Augen während der Gefäß Perfusion anwenden Tierarzt Salbe ist. Dieses Verfahren ist schnell (5-10 Minuten) und endet mit dem Tod des Tieres. Bestätigen Sie die fehlende Reaktion mit einer Zehe Prise. <ol><li> Mit Iris Schere, einen Schnitt zu machen, etwa 4 cm lang, in die Bauchdecke und Peritoneum, direkt unterhalb des Brustkorbs. </li><li> Machen Sie einen kleinen Schnitt (wenige Millimeter lang) in der Membran und dann continue der Schnitt der Membran entlang der gesamten Länge des Brustkorbs der Pleurahöhle zu belichten. </li><li> Heben Sie das Brustbein weg und klemmen Sie die Spitze des Brustbeins mit dem hemostat; Stellen Sie den hemostat auf den Hals. Sorgfältig schneiden Sie das Fettgewebe des Brustbeins zum Herzen zu verbinden. </li><li> Übergeben Sie die 15-Gauge-Perfusions-Nadel durch den linken Ventrikel in die Spitze des Herzens. </li><li> Schließlich verwenden Schere eine der Leberlappen zu schneiden einen Ausgang zu schaffen. HINWEIS: Eine alternative Ausgang kann mit Iris Schere erstellt werden, um einen Einschnitt in den rechten Vorhof zu schaffen. </li><li> Perfundieren das Tier mit 25 bis 50 ml Phosphat-gepufferter Salzlösung (PBS) mit einer Pumpe mit einer Geschwindigkeit von 2,5 ml / min betrieben wird. Die Leber sollte blanch wie das Blut wird mit PBS ersetzt. </li><li> Nach ungefähr fünf Minuten, nachdem die Flüssigkeit aus der Leber vollständig klar ist, die Perfusion zu stoppen. </li><li> Wenn Immunofärbung oder regelmäßige Färbung ist geplant, perfundieren das Tier mit 50 ml Paraformaldehyd(PFA; 4% in PBS) für 15 min. HINWEIS: Vorsicht, sind PFA Dämpfe giftig. Perfusion des Tieres mit PFA sollte in einem gut belüfteten Laborabzug durchgeführt werden. </li></ol> 3. Isolierung des Gehirns und der Kreis von Willis <ol><li> Isolation des Gehirns <ol><li> Entfernen Sie den Kopf mit einem Paar von chirurgische Scheren. </li><li> Machen Sie einen Mittelschnitt mit Iris Schere, entlang der Haut vom Hals bis zur Nase. </li><li> Schneiden Sie die Haut, den Schädel zu entlarven und entfernen Sie alle Rest Muskeln und Fettgewebe mit Iris Schere. </li><li> Platzieren das scharfe Ende der Iris Schere in das Foramen Magnum auf der einen Seite und vorsichtig gleiten entlang der inneren Oberfläche des Schädels auf den äußeren Gehörgang (auch als Ohrkanal bekannt). </li><li> Reproduzieren des Einschnitts in 3.1.4 auf der kontralateralen Seite beschrieben und eine Mittellinie entlang der Innenfläche des Zwischenscheitelbein zu Beginn der Sutura sagittalis Schnitt. </li><li> Pflanzen Sie die IrisSchere im Stirnbein, genau zwischen die Augen in der Pfeilnaht und sie dann öffnen, um den Schädel in zwei Teile gespalten. </li><li> Heben Sie das Gehirn aus, die Riechkolben greifen und mit Hilfe der Iris Schere, um die Nervenverbindungen auf ihrer Bauchseite abzuschneiden. </li><li> Entfernen Sie das Gehirn und legen Sie sie in einem 60-mm-Petrischale eiskaltem PBS für CoW Isolierung enthält. Völlig tauchen das Gehirn in der PBS. Wenn das Gehirn mit 4% PFA (für nachfolgende Schnitte und Immunfärbung oder regelmäßigen Färbung) fixiert wurde, halten Sie es in einem Bad von 4% PFA bei 4 ° C für 24 Stunden. </li></ol></li><li> Die Isolierung des Kreises von Willis HINWEIS: Ein Binokular für CoW Isolierung erforderlich ist. Das Gehirn sollte während des gesamten Verfahrens bei 4 ° C aufbewahrt werden. <ol><li> Setzen Sie das Gehirn auf den Kopf nach unten (dh auf seiner Rückenfläche) , die Kuh zu visualisieren. </li><li> Verwenden Sie eine kleine Zange die vorderen Hirnarterien (ACA) auf der Basis der Riechlappen greifen ( <strOng&gt; a, 1) und Druck ausüben , sie aus dem Behälter Kontinuum zu distanzieren. Verwenden Sie das gleiche Verfahren , um die mittleren Hirnarterien (MCA) in b (Abbildung 1) zu schneiden. </li><li> Verwenden Sie die spitzen Enden der Zange zu heben und entfernen Sie die Hauptarterien, die Kuh aus der Rinde bilden. </li><li> Heben Sie den Start der hinteren kommuniziere Arterien (PCA), um sie vom Gehirn zu trennen, indem Sie die mittlere Hirnarterien Greif (MCA) mit der Zange. Pick-up die vorderen Arterien (ACA und MCA) und ziehen Sie sie sanft über die Chiasma in einer anterior-dorsalen Richtung. Um zu verhindern, Störung des Rindes, unterbrechen die das Verfahren für den Umgang mit den anderen Arterien. </li><li> Wiederholen Sie die Schritte 3.2.2 und 3.2.3 für die oberen und hinteren Kleinhirnarterien (SCA) / (PCA) (c, Abbildung 1) und für die Basilaris (BA) (d, 1), so dass sie in einer dorsal ziehen anterior. Stoppen Sie am Ende des Verfahrens beschrieben in 3.2.4. </li><li> Entfernen Sie die gesamte Kuh sanft mit der Zange herausziehen. Legen Sie die Kuh in einem 60-mm-Petrischale gefüllt mit eiskaltem PBS und entfernen Sie alle verbleibenden angebracht Hirngewebe mit zwei Zangen, die Kuh an Ort und Stelle mit kleinen Stiften zu halten. </li><li> Halten Sie das geerntete CoW bei -80 ° C für die nachfolgende Verarbeitung für RNA-Reinigung (RNA Extraktionsausbeuten große Mengen an RNA - ca. 500 ng) oder Proteinextraktion. Hinweis: Die Kuh beibehalten werden kann ex vivo 24 h, durch das Organbad System Anpassung für isolierten Maus Riech Arterie 7 entwickelt. </li></ol></li></ol><img alt="Abbildung 1" src="/files/ftp_upload/54352/54352fig1.jpg" /> Abbildung 1: Schematische Darstellung eines ventrale Ansicht des Mäusegehirns Unter Hinweis auf die Kuh Die Kuh aus den beiden Arteria carotis interna (MCA) gebildet wird, die sich von den beiden vorderen Hirnarterien (ACA) abgeleitet sind;. die basilarArterie (BA) verzweigt sich in die hintere (PCA) und superior (SCA) Hirnarterien und zwei Wirbelarterien (VA).

<ol><li>Beckmann, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-dependent+cerebrovascular+abnormalities+and+blood+flow+disturbances+in+APP23+mice+modeling+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Age-dependent cerebrovascular abnormalities and blood flow disturbances in APP23 mice modeling Alzheimer's disease.</a> J Neurosci. 23 (24), 8453-8459 (2003).</li>
<li>Sadasivan, C., Fiorella, D. J., Woo, H. H., Lieber, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physical+factors+effecting+cerebral+aneurysm+pathophysiology%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Biomed+Eng%22%5BJournal%5D)">Physical factors effecting cerebral aneurysm pathophysiology.</a> Ann Biomed Eng. 41 (7), 1347-1365 (2013).</li>
<li>Ritz, K., Denswil, N., Stam, O., van Lieshout, J., Daemen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cause+and+mechanisms+of+intracranial+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Cause and mechanisms of intracranial atherosclerosis.</a> Circulation. 130 (16), 1407-1414 (2014).</li>
<li>Tulamo, R., Frösen, J., Hernesniemi, J., Niemelä, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammatory+changes+in+the+aneurysm+wall%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurointerv+Surg%22%5BJournal%5D)">Inflammatory changes in the aneurysm wall: a review.</a> J Neurointerv Surg. 2 (2), 120-130 (2009).</li>
<li>Yamada, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+amyloid+angiopathy%3A+emerging+concepts%5BTitle%5D)+AND+%22J+Stroke%22%5BJournal%5D)">Cerebral amyloid angiopathy: emerging concepts.</a> J Stroke. 17 (1), 17-30 (2015).</li>
<li>Oy, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracranial+atherosclerotic+stroke%3A+specific+focus+on+the+metabolic+syndrome+and+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Atheroscler+Rep%22%5BJournal%5D)">Intracranial atherosclerotic stroke: specific focus on the metabolic syndrome and inflammation.</a> Curr Atheroscler Rep. 8 (4), 330-336 (2006).</li>
<li>Lee, H. J., Dietrich, H. H., Han, B. H., Zipfel, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+an+ex+vivo+model+for+the+study+of+cerebrovascular+function+utilizing+isolated+mouse+olfactory+artery%5BTitle%5D)+AND+%22J+Korean+Neurosurg+Soc%22%5BJournal%5D)">Development of an ex vivo model for the study of cerebrovascular function utilizing isolated mouse olfactory artery.</a> J Korean Neurosurg Soc. 57 (1), 1-5 (2015).</li>
<li>Hosaka, K., Downes, D. P., Nowicki, K. W., Hoh, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modified+murine+intracranial+aneurysm+model%3A+aneurysm+formation+and+rupture+by+elastase+and+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurointerv+Surg%22%5BJournal%5D)">Modified murine intracranial aneurysm model: aneurysm formation and rupture by elastase and hypertension.</a> J Neurointerv Surg. 6 (6), 474-479 (2013).</li>
<li>Gauthier, S. A., Sahoo, S., Jung, S. S., Levy, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+cerebrovascular+cells+as+a+cell+culture+model+for+cerebral+amyloid+angiopathy%3A+isolation+of+smooth+muscle+and+endothelial+cells+from+mouse+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Murine cerebrovascular cells as a cell culture model for cerebral amyloid angiopathy: isolation of smooth muscle and endothelial cells from mouse brain.</a> Methods Mol Biol. 849, 261-274 (2012).</li>
<li>Choi, S., Kim, J., Kim, K., Suh, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+in+vitro+culture+of+vascular+endothelial+cells+from+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Korean+J+Physiol+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Isolation and in vitro culture of vascular endothelial cells from mice.</a> Korean J Physiol Pharmacol. 19 (1), 35-42 (2015).</li>
<li>Peters, D. G., Kassam, A. B., Yonas, H., O'Hare, E. H., Ferrell, R. E., Brufsky, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comprehensive+transcript+analysis+in+small+quantitiesof+mRNA+by+SAGE-Lite%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">Comprehensive transcript analysis in small quantitiesof mRNA by SAGE-Lite.</a> Nucleic Acids Res. 27 (24), (1999).</li>
<li>Badhwar, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stanimirovic%2C+Hamel%2C+%26+Haqqani+The+proteome+of+mouse+cerebral+arteries%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Stanimirovic, Hamel, & Haqqani The proteome of mouse cerebral arteries.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 34 (6), 1033-1046 (2014).</li>
<li>Castro, L., Brito, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Striatal+neurones+have+a+specific+ability+to+respond+to+phasic+dopamine+release%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Striatal neurones have a specific ability to respond to phasic dopamine release.</a> J Physiol. 591 (13), 3197-3214 (2013).</li>
<li>Hübscher, D., Nikolaev, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+transgenic+mice+expressing+FRET+biosensors%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Generation of transgenic mice expressing FRET biosensors.</a> Methods Mol Biol. 1294, 117-129 (2015).</li>
</ol>

Die Autoren haben nichts offenzulegen.

Wir beschreiben hier ein reproduzierbares Protokoll für die Isolierung des Kreises von Willis. Die häufigsten zerebrovaskulären Störungen, die Kuh zu ergreifen sind, CAA-assoziierten Gefäßerkrankungen, intrakranielle Atherosklerose und Aneurysmen, von denen alle die Wände der arteriellen Gefäße auswirken. Die Risikofaktoren sind bekannt, aber die molekularen Pathogenese dieser Erkrankungen zerebraler bleibt schlecht verstanden und die spezifische biologische Marker für ihr Auftreten vorherzusagen fehlen. Es gibt ein gro...

Der zerebrale arterielle Kreis (Circulus arteriosus cerebri), die auch als Kreis von Willis (Kuh), Schleife von Polygon Willisor Willis bekannt) wurde zum ersten Mal in 1664 von Thomas Willis beschrieben Es ist ein Kreislauf-Anastomose um die Sehnervenkreuzung und Hypothalamus das kann betrachtet werden als zentrale Drehscheibe Blut zum Gehirn versorgenden und der umgebenden Strukturen. Blut tritt diese Struktur über die A. carotis interna und Arteria vertebralis, und es strömt aus dem Kreis über das Innere mittleren und hinteren Hirnarterien. Jede dieser Arterien hat linke und rechte Zweige auf jeder Seite des Kreises. Die basilar, Post kommunizieren und vorderen Arterien vollständig den Kreis (Abbildung 1 und Abbildung 2) in Verbindung steht. Das Risiko einer Beeinträchtigung des Blutflusses in einem der Abflußadern wird durch die Zusammenführung von Blut Eingabe der Kreis von der Carotis und Hirnarterien minimiert, wodurch gewährleistet, dass ausreichend Blut zum b zugeführt wird,Regen. Diese Struktur dient auch als Hauptroute für Sicherheiten Blutfluss in schweren Verschlusskrankheiten der A. carotis interna. Mehrere Arten von zerebrovaskulären Erkrankungen haben ihren Ursprung in der Kuh. Die häufigsten sind die zerebrale Amyloid - Angiopathie (CAA) -assoziierten Gefäßerkrankungen, intrakranielle Atherosklerose und intrakraniellen Aneurysmen. 1, 2, 3 Diese Störungen aufgrund Vasodilatation hypoperfusion führen können, und intrazerebrale und / oder Subarachnoidalblutungen letztlich Übersetzung in ischämischen oder hämorrhagischen Schlaganfällen oder allenfalls eine transitorische ischämische Attacke. Jüngste Fortschritte in Diagnoseverfahren, bildgebenden Verfahren, einschließlich, möglicherweise mit Angiographie kombiniert, haben es möglich gemacht, diese großen zerebrovaskuläre Erkrankungen klinisch, ohne die Notwendigkeit für ein Gehirn-Biopsie zu diagnostizieren. Dennoch wirksame und spezifische Behandlungen (pharmakologische oder endovaskuläre) fehlen derzeit und es besteht daher ein Bedarf neu zu definierenmolekulare Ziele. Die Identifizierung neuer Arzneimitteltargets für die Prävention dieser Krankheiten beim Menschen werden Tiermodelle und Möglichkeiten erfordern die Cerebro-Gefäße einschließlich der Kuh zu isolieren. Solche Modelle sollten Beweise und Hinweise auf die spezifischen Veränderungen liefern, entzündliche Veränderungen , einschließlich, in den Wänden der großen Gefäße in Tiermodellen von intrakraniellen Aneurysma Arterie, CAA oder intrakranielle Atherosklerose auftreten. 4, 5, 6 Wir haben ein Verfahren zur Isolierung Maus CoW etablierten Studien der Gefäßentzündung bei Alzheimer-Krankheit (AD) und verwandter Krankheiten, wie CAA zu erleichtern. Dieses Verfahren zur Isolierung des Maus CoW wurde für die Beurteilung der Entzündungs ​​zerebrovaskulären Genexpression während Fortschreiten der Krankheit entwickelt. Zusammen mit dem Nachweis von Amyloid-beta-Ablagerung innerhalb der Wände der trigeminale und pial Arterien, könnte dieses Verfahren erleichtern abzuschreckenMine die mögliche Beziehung zwischen inflammatorischen Genexpression in der Cerebro-Gefäßwand und Aß-Peptid-Akkumulation. Das vaskuläre Netzwerk des Gehirns, einschließlich der trigeminale und pial in den Subarachnoidalraum, ist eine Erweiterung der großen Arterien, den Kreis der Willis bilden. Das hier beschriebene Verfahren kann verwendet werden , um die Kuh jeder Mauslinie zu isolieren und könnte für alle Arten von Screening (zB Genexpression, Proteinproduktion und posttranslationale Modifikationen) an den großen Gefäßen der Maus Cerebro- Vaskulatur verwendet werden.

<table><tbody><tr><td>Dulbecco' s Phosphatgepufferte Kochsalzlösung</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D8537</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #55 Pinzette</td><td>Fine Science Tools</td><td>11295-51</td><td></td></tr><tr><td>Gehärtete Feinirisschere&nbsp;</td><td>Fine Science Tools</td><td>14090-11</td><td></td></tr><tr><td>Schere - Gerade / Scharf / Scharf &nbsp; &nbsp; 16,5 cm</td><td>Fine Science Tools</td><td>14002-16</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #7b Pinzette&nbsp;</td><td>Fine Science Tools</td><td>11270-20</td><td></td></tr><tr><td>Stereoskopisches Zoommikroskop</td><td>Nikon</td><td>SMZ745T</td><td></td></tr><tr><td>CellBIND Surface 60mm Kulturschale</td><td>Corning</td><td>#3295</td><td></td></tr><tr><td>Peristaltische Pumpe - MINIPULS 3</td><td>Gilson</td><td>M312</td><td></td></tr><tr><td>Pentobarbital Sodique</td><td>Ceva Sant&eacute; Animale</td><td>FR/V/2770465 3/1992</td><td></td></tr></tbody></table>

protokoll für die maus kreis von willis trenn

Protocol for Isolating the Mouse Circle of Willis

Der zerebrale arterielle Kreis (Circulus arteriosus cerebri) oder Kreis von Willis (CoW) ist ein Kreislauf-Anastomose umgibt die Sehnervenkreuzung und dem Hypothalamus, die Blut zum Gehirn und der umgebenden Strukturen liefert. Es wurde in mehreren zerebrovaskulären Störungen, einschließlich zerebraler Amyloidangiopathie (CAA) -assoziierten Vaskulopathien, intracranial Atherosklerose und intrakranielle Aneurysmen gebracht. Studien der molekularen Mechanismen dieser Krankheiten für die Identifizierung neuer Arzneimitteltargets für deren Prävention zugrunde liegenden erfordern Tiermodellen. Einige dieser Modelle kann transgen sein, während andere Isolierung der cerebro-Vaskulatur einbeziehen, einschließlich der CoW.The hier beschriebene Verfahren eignet sich zur Isolation CoW in jeder Maus lineage und erhebliches Potenzial für das Screening (Expression von Genen, die Proteinproduktion, posttranslationalen Proteinmodifikationen, Sekretom Analyse, etc.) Studien zu den großen Gefäßen der Maus zerebro-Gefäße. Es kann auch für die Ex - vivo - Studien verwendet werden, indem das Organbad System für isolierten Maus Riech Arterien entwickelt anzupassen.

<html> Die PBS-perfundierten Maus getötet und die Kuh ist in Abschnitt 3.2 des Protokolls wie beschrieben isoliert. Wenn die Präparation korrekt durchgeführt wird, sollte die Kuh kommen in einem Stück aus und sollte aufgrund leicht transparent sein, um das Fehlen von Restblut in den Gefäßen. <img alt="Figur 2" src="/files/ftp_upload/54352/54352fig2.jpg" /> Abbildung 2: Die Maus CoW nach Isolation. ...

Wir beschreiben hier ein reproduzierbares Protokoll zur Isolierung des Mauskreises von Willis.

Protokoll für die Maus Kreis von Willis Trenn

The cerebral arterial circle (circulus arteriosus cerebri) or circle of Willis (CoW) is a circulatory anastomosis surrounding the optic chiasma and ...

Das übergeordnete Ziel dieses Präparationsverfahrens besteht darin, den arteriellen Kreis des Willis bei der Maus zu isolieren, um die Untersuchung der großen Gefäße der murinen Hirngefäße zu ermöglichen. Diese Methode kann dabei helfen, zentrale Fragen bei der Untersuchung der Genexpression im Bereich der zerebralen Gefäße bei verschiedenen Erkrankungen wie Alzheimer-Krankheit und zerebraler amyloider Angiopathie zu beantworten. Der Hauptvorteil dieser Technik liegt darin, dass die großen Gefäße schnell und einfach isoliert werden können, ohne die Gefäßstruktur zu verändern.Beginnen Sie damit, mit Iris-Scheren einen vier Zentimeter langen Schnitt in die Bauchdecke und das Peritoneum einer tödlich anesthetisierten Maus direkt unterhalb des Rippenbogens zu machen. Anschließend führen Sie einen einige Millimeter langen Schnitt im Zwerchfell durch und verlängern den Schnitt entlang der gesamten Länge des Rippenbogens, um die Pleurahöhle freizulegen. Heben Sie das Brustbein an und klemmen Sie die Spitze mit einer Hämoclip-Zange ab, wobei Sie die Zange auf dem Hals ablegen.Schneiden Sie vorsichtig das Fettgewebe, das das Brustbein mit dem Herzen verbindet. Führen Sie nun eine 15-Gauge-Perfusionsnadel durch den linken Ventrikel in die Herzspitze ein und schneiden Sie mit einer Schere einen der Leberlappen an, um eine Auslassöffnung für das Perfusat zu schaffen. Perfundieren Sie das Tier mit 25 bis 50 Milliliter PBS bei einer Pumpgeschwindigkeit von 2,5 Milliliter pro Minute für etwa zehn Minuten.Die Leber sollte sich aufhellen, wenn das Blut durch PBS ersetzt wird. Beenden Sie die Perfusion, wenn die Flüssigkeit aus der Leber vollständig klar ist. Um das Gehirn zu isolieren, verwenden Sie eine Iris-Schere, um einen medianen Schnitt entlang der Haut vom Hals bis zur Nase durchzuführen.Entfernen Sie mit der Iris-Schere die Haut, um den Schädel freizulegen, und beseitigen Sie restliches Muskel- und Fettgewebe. Danach führen Sie die Spitzen der Iris-Schere auf einer Seite des Foramen magnum ein und schieben die Spitzen vorsichtig entlang der inneren Oberfläche des Schädels bis zum äußeren Gehörgang. Führen Sie einen ähnlichen Einschnitt auf der anderen Seite des Foramen magnum durch, gefolgt von einem medianen Schnitt entlang der inneren Oberfläche des Interparietalbeins bis zum Beginn der Sagittalsnaht.Setzen Sie die geschlossene Iris-Schere in den Stirnbeinknochen zwischen den Augen in die sagittale Naht ein und öffnen Sie die Klingen, um den Schädel in zwei Hälften zu teilen. Greifen Sie mit einer Pinzette die Riechkolben und durchtrennen Sie mit der Iris-Schere die Nervenverbindungen an der ventralen Oberfläche des Gehirns. Anschließend tauchen Sie das Gehirn in eine 60 Millimeter große Petrischale mit eiskalter PBS-Lösung ein.Um den Circulus arteriosus (Willis) zu isolieren, übertragen Sie die Schale auf eine Kältepackung unter einem Stereomikroskop und drehen das Gehirn auf seine dorsale Fläche, um den Circulus arteriosus (Willis) sichtbar zu machen. Greifen Sie mit der feinen Pinzette die Arteriae cerebri anteriores an der Basis der Riechlappen und üben Sie Druck aus, um die Arterien vom Gefäßverlauf zu lösen. Durchtrennen Sie die Arteriae cerebri mediae auf die gleiche Weise.Verwenden Sie dann die scharfen Enden der Pinzette, um die Arteriae cerebri mediales zu fassen und den Beginn der Arteriae communicantes posteriores anzuheben, wodurch beide Arterienpaare vom Gehirn getrennt werden. Heben Sie anschließend die vorderen Arterien an, indem Sie sie vorsichtig in anterodorsaler Richtung über die Chiasma optica ziehen. Entfernen Sie auf die gleiche Weise die oberen und hinteren zerebellären Arterien, gefolgt von der Verlagerung der Arteria basilaris.Verwenden Sie abschließend die Pinzette, um den gesamten Circulus arteriosus (Circle of Willis) vorsichtig in eine 60 mm große Petrischale mit eiskaltem PBS zu überführen, und fixieren Sie die Gefäße mit kleinen Nadeln. Entfernen Sie dabei mit zwei Pinzetten sorgfältig jegliches verbleibendes Hirngewebe. Der Circulus arteriosus sollte vollständig und einheitlich entnommen werden und aufgrund des Fehlens von Restblut im Gefäßsystem leicht transparent erscheinen. Der gereinigte Circulus arteriosus sollte spezifisch Marker für vaskuläre glatte Muskelzellen exprimieren, wie zum Beispiel Smooth Muscle Actin, Smooth Muscle-Myosin Heavy Chain und Smoothelin.Neuronale Marker wie das Myelin-Oligodendrozyten-Glykoprotein oder das Mikrotubuli-assozierte Protein 2 sollten dagegen im Arterienkreis von Willis kaum nachweisbar sein. Außerdem ähnelt die Expression des endothelialen Markers E-Selektin in neuralen Geweben außerhalb des Arterienkreises von Willis stark der in Proben des Arterienkreises von Willis, was möglicherweise auf das Vorhandensein eines kapillaren Netzwerks im Gehirn hinweist. Wenn man die Technik einmal beherrscht, kann sie bei korrekter Durchführung innerhalb von zwei Stunden abgeschlossen werden.Bei der Durchführung dieses Verfahrens ist zu beachten, dass die zerebralen Gefäße der Maus sehr fein sind und leicht verletzt werden können. Die Dissektion sollte daher äußerst sorgfältig und ohne Eile durchgeführt werden, um sicherzustellen, dass die gesamte Struktur in einem Stück gewonnen wird. Nach ihrer Entwicklung ebnet diese Technik den Forschern auf dem Gebiet entzündlicher Erkrankungen des Nervensystems den Weg, zerebrale Gefäßerkrankungen im Mausmodell von Alzheimer und verwandten Erkrankungen wie der zerebralen amyloiden Angiopathie zu untersuchen.Nachdem Sie sich dieses Video angesehen haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie man den Circulus arteriosus des Gehirns von einer Maus isoliert.

protocol-for-isolating-the-mouse-circle-of-willis

Research

Forschung

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowissenschaften

Dieses Video zeigt das Verfahren zur Isolierung von Immunzellen aus Aderhautplexusen von Mäusen. Dieses Verfahren wird in der neuroimmunologischen Forschung eingesetzt, um zu verstehen, wie sich Immunzellen in den Aderhautgeflechten auf die Gesundheit des Gehirns und verschiedene neurologische Erkrankungen auswirken.

Isolierung von Immunzellen aus Aderhautplexusen der Maus

Wir stellen ein chirurgisches Verfahren, experimentelle Ischämie / Reperfusions (I / R) Schädigung induzieren Myokardinfarkt (MI) in Mausmodellen, die für mehr Klarheit in der Positionierung der Ligation an der linken vorderen absteigenden Arterie (LAD) simulieren können, um die Reproduzierbarkeit zu erhöhen MI Experimente in Mäusen.

Einem Mausmodell der myokardialen Ischämie-Reperfusion Injury durch Ligation des linken vorderen absteigenden Arterie

Entzündung spielt eine zentrale Rolle bei der Pathogenese des ischämischen Schlaganfalls. Immer mehr Hinweise deuten darauf hin, dass es wie ein zweischneidiges Schwert wirkt, das frühe Hirnverletzungen verschlimmert, aber auch zur späteren Reparatur beiträgt. Dieses Protokoll beschreibt die Isolierung von Immunzellen aus dem ischämischen Gehirn und ihre anschließende durchflusszytometrische Phänotypisierung.

Isolation und Analyse über Durchflusszytometrie von Immunzellen aus dem ischämischen Gehirn der Maus

Der Zweck dieses Protokolls ist es, die Isolierung und Kulturtechniken von murinen primären vaskulären glatten Muskelzellen (VSMCs) aus dem koronaren Kreislauf zu demonstrieren. Sobald VSMCs isoliert wurden, können sie für viele Standardkulturtechniken verwendet werden.

Die Isolierung von murinen Coronary glatten Gefäßmuskelzellen

Ein Verfahren zur Herstellung von Gesichtspräparaten der Kartoffel-Arterie und Aorta der Maus ist beschrieben. Solche Präparate, wenn sie mit spezifischen Antikörpern immunfluoreszenz gefärbt sind, ermöglichen es uns, die Lokalisation von Proteinen und die Identifizierung von Zelltypen innerhalb der gesamten Gefäßwand durch konfokale Mikroskopie zu untersuchen.

En Face Vorbereitung der Maus Blutgefäße

Hier präsentieren wir Ihnen ein Protokoll für die Isolierung von gesunden und funktionalen primäre Maustaste Hepatozyten. Anweisungen für die Erkennung von hepatischen im Entstehen begriffenen Proteinsynthese durch nicht-radioaktiven Kennzeichnung Substrat wurden zum besseren Verständnis der Mechanismen, die Protein-Synthese im Rahmen des Energie-Stoffwechsel-Homöostase in der Leber.

Isolierung der primäre Maustaste Hepatozyten für entstehende Protein Synthese Analyse von nicht-radioaktiven L-Azidohomoalanine Kennzeichnung Methode

Hier wird ein Protokoll zur Isolierung und Amplifikation aerober und fakultativer anaerober Maus-Bindehaut-Kommensalbakterien unter Verwendung eines einzigartigen Augenabstrichs und eines kulturbasierten Anreicherungsschritts mit anschließender Identifizierung durch mikrobiologische Methoden und MALDI-TOF-Massenspektrometrie vorgestellt.

Bindehautkommusale Isolierung und Identifizierung bei Mäusen

Der Goldstandard in der Kardiologie für zelluläre und molekulare Funktionsexperimente sind Kardiomyozyten. Dieser Artikel beschreibt Anpassungen an die Nicht-Langendorff-Technik zur Isolierung von Maus-Kardiomyozyten.

Eine einfache und effektive Methode zur konsistenten Isolierung von Maus-Kardiomyozyten

Hier skizzieren und demonstrieren wir ein Protokoll für die Isolierung primärer Lebersinuszellen (LSEC) in der Mausleber. Das Protokoll basiert auf der Perfusion der Leberkollagenase, der nichtparenchymalen Zellreinigung durch Zentrifugation mit niedriger Geschwindigkeit und der Auswahl magnetischer CD146-Perlen. Wir phänotypisieren und charakterisieren diese isolierten LSECs auch mittels Durchflusszytometrie und Rasterelektronenmikroskopie.

Isolierung und Charakterisierung von primären Leber-Sinus-Endothelzellen der Maus

In dieser Arbeit wird ein Verfahren zur magnetischen Bead-basierten Isolierung von murinen Endothelzellen aus dermalen lymphatischen Kapillaren beschrieben. Die isolierten lymphatischen Endothelzellen können für nachgelagerte In-vitro-Experimente und Proteinexpressionsanalysen verwendet werden.

Isolierung von dermalen lymphatischen Endothelzellen der Maus

Erfahren Sie die Isolierung des Circulus arteriosus cerebri bei Mäusen für zerebrovaskuläre Forschung. Diese Methode ermöglicht die schnelle Präparation großer Gefäße ohne Strukturveränderung für Genexpressionsstudien.

Protokoll für die Maus Kreis von Willis Trenn

Weitere Videos entdecken