Name: eine Speichel- Antikörper Multiplex-Immunoassay Entwicklung der Humanexposition Umwelt Pathogens zu messen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-09-12T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 8 s
Description: Erfahren Sie die Entwicklung eines bead-basierten Speichel-Antikörper-Multiplex-Immunoassays zur gleichzeitigen Messung menschlicher Exposition gegenüber mehreren Umweltpathogenen. Diese Methode ermöglicht schnelle, kostengünstige Analysen für die Expositionsforschung.

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Clarissa Curioso wurde durch eine Berufung in das Research Participation Program bei der U.S. Environmental Protection Agency unterstützt, das vom Oak Ridge Institute for Science and Education verwaltet wird, durch eine behördenübergreifende Vereinbarung zwischen dem U.S. Department of Energy und der U.S. EPA.

Zustimmung wurde von der Institutional Review Board erhalten (IRB # 08-1844, University of North Carolina, Chapel Hill, NC, USA) für die Sammlung von stimulierter creviculare Speichelproben von beachgoers bei Boquerón Beach, Puerto Rico, als Teil der Vereinigten Staaten Environmental Protection Agency (US - EPA) Nationale Epidemiologische und die Umweltprüfung von Freizeit (Neear) Wasser Studie 23 zum Schwimmen im Zusammenhang Belichtungen und Krankheiten bewerten. Studienteilnehmer informierten Zustimmung zur Verfügung gestellt und wurden über die Verwendung der Speichelsammelvorrichtung durch geschultes USEPA Auftragnehmer angewiesen. Die Speichelproben wurden auf Eis transportiert und auf den Empfang, wurden sie bei -80 ° C zentrifugiert und gespeichert , wie 4 beschrieben. 1. Bead-Aktivierung <ol><li> Resuspendieren Beadset Bestände durch Verwirbelung und Beschallen für 20 Sekunden und Transfer ca. 5,0 x 10 6 der Lager - Perlen (400 ul) zu Mikrozentrifugenröhrchen. Hinweis: Ter Perlen werden in einer Konzentration von 12,5 x 10 6 Perlen / ml geliefert. </li><li> Pellet die Lager Perlen durch bei 10.000 × g für 2 Minuten zentrifugiert. </li><li> Entfernen Sie den Überstand und resuspendieren die pelletierten Perlen in 100 ul destilliertem Wasser (dH 2 O) durch Wirbel und Beschallung für 20 Sekunden. Wiederholen Sie Schritt 1.2. </li><li> Entfernen Sie den Überstand und resuspendieren die gewaschenen Perlen in 80 ul 100 mM monobasisches Natriumphosphat, pH 6,2 durch Wirbel und Beschallung für 20 Sekunden. </li><li> Unmittelbar vor dem Gebrauch machen eine 50 mg / ml N -hydroxysulfosuccinimide (Sulfo-NHS) Lösung , die durch Zugabe von 200 &amp; mgr; l dH 2 O auf 10 mg Sulfo-NHS - Aliquot. Mix von Wirbel. </li><li> Fügen Sie 10 &amp; mgr; l der 50 mg / ml Sulfo-NHS an die Kügelchen. Mix von Wirbel. </li><li> Unmittelbar vor dem Gebrauch machen eine 50 mg / ml 1-ethyl- [3dimethylaminopropyl] carbodiimidhydrochlorid (EDC) -Lösung durch Zugabe von 200 &amp; mgr; l destilliertem Wasser (dH 2 O) an die 10 mg EDC aliquoten. Mix von Wirbel. </li><li> In 10 ul 50mg / ml EDC-Lösung an die Kügelchen. Mix von Wirbel. Inkubieren der Perlen für 20 min bei Raumtemperatur im Dunkeln unter Mischen mit dem Vortex in 10 min Intervallen. Pellet die aktivierte Kügelchen durch Mikrozentrifugieren bei 10.000 × g für 2 min. </li><li> Entfernen des Überstandes und Resuspendieren der Kügelchen in 250 ul 50 mM 2- [N - Morpholino] ethansulfonsäure (MES), pH 5,0 durch Vortexen und Ultraschall - Behandlung für 20 Sekunden. </li><li> Pellet die aktivierte Kügelchen durch Mikrozentrifugieren bei 10.000 × g für 2 min. </li><li> Wiederholen Sie die Schritte 1.9 und 1.10. Anmerkung: Dies stellt insgesamt zwei Waschungen mit 50 mM MES, pH 5,0. </li><li> Resuspendieren der Kügelchen in 100 ul 50 mM MES, pH 5,0 durch Vortexen und Ultraschall-Behandlung für 20 Sekunden. </li></ol> 2. Bead Kupplung <ol><li> Paar die Antigene zu den Bead - Sets mit den in Tabelle 1 angegebenen Konzentrationen. </li><li> Fügen Sie jedes Antigen an die aktivierten Perlen und bringen das Gesamtvolumen auf 500 &amp; mgr; l in 50 mM MES, pH-Wert 5,0. Mischen Sie die Antigene eind Perlen durch Wirbel. </li><li> Inkubieren der Antigene und Perlen für 2 Stunden unter Mischen durch Rotation (~ 15 Upm) bei Raumtemperatur im Dunkeln. Pellet die gekoppelten Kügelchen durch Mikrozentrifugieren bei 10.000 × g für 2 min. </li><li> Entfernen des Überstandes und Resuspendieren der Kügelchen in 500 &amp; mgr; l phosphatgepufferter Salzlösung (PBS) -bovine Serumalbumin (BSA) -polyoxyethylenesorbitan Monolaurat (Tween-20) -natrium Azid (PBS-TBN) pH 7,4 durch Vortexen und Ultraschall. Pellet die Perlen durch Mikrozentrifugieren bei 10.000 × g für 2 Minuten und entfernen Sie den Überstand. Vorsicht: Natriumazid ist eine akut toxische Chemikalie. Es ist fatal, wenn sie verschluckt oder kommt in Kontakt mit der Haut. Staub / Rauch / Gas / Nebel / Dampf oder Aerosol nicht einatmen. Tragen Sie geeignete persönliche Schutzausrüstung (PPE) beim Umgang mit und entsorgen in Übereinstimmung mit den entsprechenden Gesetzen. </li><li> Resuspendieren der Kügelchen in 1 ml PBS-TBN von Vortexen und Ultraschall-Behandlung für 20 Sekunden. </li><li> Pellet die Perlen durch Mikrozentrifugieren bei 10.000 × g für 2 min. </li><li>Wiederholen Sie die Schritte 2.5 und 2.6. Anmerkung: Dies stellt insgesamt zwei Waschungen mit PBS-TBN. </li><li> Resuspendieren der gewaschenen Kügelchen gekoppelt und in 1 ml PBS, 1% BSA, 0,05% Azid, pH 7,4. Lagern Sie die gekoppelten Kügelchen in einer 2-8 ° C Kühlschrank im Dunkeln. </li></ol> 3. Bead Graf <ol><li> Bereiten Sie eine Verdünnung von 1:10 der gekoppelten Kügelchen in Wasser oder PBS-Puffer. </li><li> Last 10 ul der Wulst Verdünnung auf einem Hämozytometer an der Probeneinleitungspunkt. </li><li> Zählen Sie die gesehen Perlen in einem der 4 x 4 Ecke Gitter. Berechnen der Gesamtzahl der gekoppelten Kügelchen mit der folgenden Formel: Count (1 - Ecke von 4 x 4 Gitter) x (1 x 10 &amp; sup4 ; ) x (Verdünnungsfaktor) x Resuspension Volumen in ml. </li></ol> 4. Bestätigung von Antigen Kupplung <ol><li> Resuspendieren Lager Mischung von Kügelchen gekoppelt Antigene von Interesse durch Wirbel und Beschallung für 20 Sekunden. </li><li> Bereiten Sie eine Arbeits Perlen-Mischung durch die gekoppelten Wulst Aktien bis zu einer endgültigen VerdünnungKonzentration von 100 Perlen / ul jeder einzigartige Perle in PBS-1% BSA-Puffer (PBS-1% BSA, pH 7,4) eingestellt. </li><li> Bereiten Sie mindestens 7 zweifache serielle Verdünnungen von Anti-Spezies-IgG primärer Antikörper gemäß den Empfehlungen des Herstellers in 96-Well-Rundbodenplatte mit PBS-1% BSA-Puffer. </li><li> Vorbefeuchtenden eine separate 8-Well-Säule (8 Zeilen) einer 96-Well-Filterbodenplatte für jedes Antigen Kupplungsbestätigungstest mit 100 ul Waschpuffer und entfernen Überstand durch Vakuum. Werden 50 &amp; mgr; l Arbeits bead Mischung (antigen-gekoppelten Kügelchen) zu den vorbefeuchtenden Brunnen. </li><li> Zugabe von 50 &amp; mgr; l der Antikörperverdünnungen auf Zeilen 1-7 von jeder Spalte der 96-Well - Filterplatte , und 50 ul PBS-1% BSA - Puffer 8 anstelle des verdünnten Antikörpers zu Zeile als Hintergrundvertiefungen dienen. Mischen Sie mit einem Multi-Kanal-Pipette pipettiert, nach oben und unten 5-mal. Führen Sie die gleiche Prozedur für jedes Antigen-gekoppelte Beadset bestätigt werden. </li><li> Zudecken und im Dunkeln bei Raumtemperatur inkubierteratur für 1 h auf einem Mikrotiterplatten-Schüttler bei 500 rpm. Überstand entfernen durch Vakuum. </li><li> Waschen Vertiefungen mit 100 &amp; mgr; l Waschpuffer und entfernen Überstand durch Vakuum. Wiederholen 1x. Resuspendieren der Kügelchen in 50 &amp; mgr; l PBS-1% BSA mit einem Mehrkanal-Pipettor. </li><li> Verdünnter biotinylierter anti-Spezies-spezifischen IgG sekundären Detektionsantikörper zu 16 &amp; mgr; g / ml in PBS-1% BSA. </li><li> In 50 ul des verdünnten sekundären Antikörper zu jeder Vertiefung durch Auf- und Abpipettieren 5-mal. </li><li> Bedecken Filterplatte und lassen Sie im Dunkeln bei Raumtemperatur für 30 Minuten auf einem Plattenschüttler inkubiert. Überstand entfernen durch Vakuum. Waschen Vertiefungen mit 100 &amp; mgr; l Waschpuffer und entfernen Überstand durch Vakuum. Wiederholen Sie waschen 1x. </li><li> Resuspendieren der Kügelchen in 50 &amp; mgr; l PBS-1% BSA mit einem Mehrkanal-Pipettor. </li><li> Verdünnte Streptavidin-R-Phycoerythrin reporter (SAPE) bis 24 &amp; mgr; g / ml in PBS-1% BSA. </li><li> In 50 ul Reporter in jede Vertiefung und mischen durch Pipettieren auf und ab 5 mal. </li><li> CFilterplatte über und lassen Sie im Dunkeln bei Raumtemperatur für 30 Minuten auf einem Plattenschüttler inkubiert. Überstand entfernen durch Vakuum. Waschen Vertiefungen mit 100 &amp; mgr; l Waschpuffer und entfernen Überstand durch Vakuum. Wiederholen Sie waschen 1x. </li><li> Resuspendieren Perlen in 100 ul PBS-1% BSA und 50 ul analysieren 29 mit dem Analysator. Hinweis: Die Ergebnisse des Wulstes basierten multiplex-Immunoassay gemessen in mittlere Fluoreszenzintensität (MFI). Bezieht sich immer auf die neueste Version der Software-Handbuch, falls vorhanden, Fehler zu vermeiden. </li></ol> 5. Speichel- Multiplex-Immunoassay <ol><li> Entfernen Sie Speichel aus dem -80 ° C Gefrierschrank und bei Raumtemperatur auftauen. </li><li> Resuspendieren Antigen gekoppelt Wulst Aktien durch Wirbel und Beschallung für 20 Sekunden. </li><li> Bereiten Sie eine Arbeits Perlen-Mischung durch die gekoppelten Wulst Aktien bis zu einer endgültigen Konzentration von 100 Perlen Verdünnung / ul jeder einzigartigen Beadset in PBS-1% BSA-Puffer. </li><li> Bereiten Sie eine 1: 4-Verdünnung des Speichels with PBS-1% BSA-Puffer in einer 96-Well, Deep-Well-Platte. </li><li> Vornässen Filterplatte mit 100 ul Waschpuffer und entfernen Überstand durch Vakuum. </li><li> Werden 50 ul einer Arbeits bead Mischung und ein gleiches Volumen von verdünntem Speichel zu 95 Wells der 96-Well-Filterplatten für eine 1: 8 Endverdünnung. Mischungs Reaktionen mit einem Mehrkanal-Pipettor. Zum einen Steuer gut, fügen Sie 50 ul Antigen-gekoppelten Kügelchen plus 50 ul PBS-1% BSA-Puffer (als Ersatz für Speichel). </li><li> Zudecken und im Dunkeln bei Raumtemperatur für 1 h auf einem Mikrotiterplatten-Schüttler bei 500 rpm inkubiert. Überstand entfernen durch Vakuum. Waschen Vertiefungen mit 100 &amp; mgr; l Waschpuffer und entfernen Überstand durch Vakuum. Wiederholen Sie waschen 1x. </li><li> Resuspendieren Perlen in 50 ul PBS-1% BSA mit einem Mehrkanal-Pipettor. </li><li> Verdünnte biotinyliertem Ziege-anti-human IgG sekundären Detektionsantikörper zu 16 &amp; mgr; g / ml in PBS-1% BSA. </li><li> In 50 ul zu jeder Vertiefung sekundären Antikörper verdünnt und mischen Inhalte mitein Mehrkanal-Pipettor. </li><li> Bedecken Filterplatte und lassen Sie im Dunkeln bei Raumtemperatur für 30 Minuten auf einem Plattenschüttler inkubiert. Überstand entfernen durch Vakuum. Waschen Vertiefungen mit 100 &amp; mgr; l Waschpuffer und entfernen Überstand durch Vakuum. Wiederholen Sie waschen 1x. </li><li> Resuspendieren Perlen in 50 ul PBS-1% BSA mit einem Mehrkanal-Pipettor. </li><li> Verdünnte Streptavidin-R-Phycoerythrin reporter (SAPE) bis 24 &amp; mgr; g / ml in PBS-1% BSA. </li><li> In 50 ul Reporter in jede Vertiefung und mischen mit einem Multi-Kanal-Pipette. </li><li> Bedecken Filterplatte und lassen Sie im Dunkeln bei Raumtemperatur für 30 Minuten auf einem Plattenschüttler inkubiert. Überstand entfernen durch Vakuum. Waschen Vertiefungen mit 100 &amp; mgr; l Waschpuffer und entfernen Überstand durch Vakuum. Wiederholen Sie waschen 1x. </li><li> Resuspendieren Perlen in 100 ul PBS-1% BSA und 50 ul analysieren 29 mit dem Analysator. Hinweis: Die Ergebnisse des Multiplex-Immunoassays sind in mittlere Fluoreszenzintensität (MFI) -Einheiten gemessen. Informieren Sie sich beidie neueste Version der Software-Handbuch, falls vorhanden, Fehler zu vermeiden. </li></ol>

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<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Luminex+User+Software+Manual+%28RUO%29+xPONENT+3.1+Rev.+2%22">Luminex User Software Manual (RUO) xPONENT 3.1 Rev. 2</a>. 3, 6-102 (2014).</li>
<li>Waterboer, T., Sehr, P., Pawlita, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Suppression+of+non-specific+binding+in+serological+Luminex+assays%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol+Methods%22%5BJournal%5D)">Suppression of non-specific binding in serological Luminex assays.</a> J Immunol Methods. 309 (1-2), 200-204 (2006).</li>
</ol>

Die United States Environmental Protection Agency durch ihr Amt für Forschung und Entwicklung finanziert und verwaltet die Forschung hier beschrieben. Es hat sich Agentur administrative Überprüfung unterzogen und zur Veröffentlichung freigegeben. Die Erwähnung von Handelsnamen oder Handelsprodukten stellt keine Billigung oder Empfehlung für den Einsatz.

Diese Ergebnisse zeigen, dass die Multiplex-Immunoassay-Verfahren ist nützlich zum Unterscheiden zwischen Speichelproben, die immunopositive oder immunonegative sind. Um zu bestimmen, immunopositivity wurde durch Berechnung der Mittelwert plus drei Standardabweichungen der log transformierten MFI Reaktionen der Steuerung abgekoppelt Perlen eine einzige Grenzpunkt mit all den Speichelproben getestet entwickelt. Der Cut-off-Punkt die Fähigkeit zur Beurteilung der Belichtung und immunoprevalence entweder eine einzelne oder...

Eighty-acht Prozent der weltweiten Durchfall-Erkrankungen mit der Exposition des Menschen gegenüber kontaminierten Wasser, unsichere Lebensmittel und schlechte Hygiene / Hygiene verbunden ist, etwa 1,5 Millionen Menschen ums Leben kamen, die meisten davon sind 1 Kinder. Dies ist ein wichtiger Grund zur Besorgnis für Beamte des öffentlichen Gesundheitswesens und politische Entscheidungsträger. In dem Bemühen , mit wässrigen und anderen Umweltkrankheitserreger assoziiert Belichtungen und Krankheiten zu untersuchen, haben wir eine Multiplex - Immunoassay Antikörper in menschlichen Proben 2-4 zu messen. Dieses Verfahren kann auf epidemiologische Studien angewendet werden, die Exposition des Menschen auf diese Erreger zu bestimmen und zu einer besseren immunoprevalence und Incident-Infektionen zu definieren. Saliva hält erhebliche Versprechen als Alternative für den menschlichen Biomarker-Forschung im Serum. Zu den Vorteilen der Verwendung von Speichel sind die Nicht-Invasivität und einfache Probenentnahme, niedrige Kosten, und die Proben leicht von Kindern 5-7 gesammelt werden kann &lt;/ Sup&gt;. Serum und Speichelproben wurden ausgiebig für Antikörper gegen H. studierte pylori 2,3,8, Plasmodium falciparum 9, Entamoeba histolytica 10, parvum Cryptosporidium 3,11, Streptococcus pneumoniae 12, Hepatitis - Viren A und C 13-14, Noroviren 2-4,15, T. gondii 2-4, Dengue - Virus 16, human immunodeficiency virus (HIV) 17 und Escherichia coli O157: H7 18. Ein Multiplex-Immunoassays ermöglicht die Analyse von mehreren Analyten gleichzeitig in einem einzigen Probenvolumen und innerhalb eines einzelnen Zyklus oder laufen. Multiplexed Antigene von C. jejuni, T. gondii, H. pylori, Hepatitis - A - Virus und zwei Noroviren wurden verwendet , um menschliche Speichel IgG 2-4 und IgA 3,4 und Plasma - IgG 2,3 Antikörper - Antworten auf diese Erreger zu messen unter Verwendung einesMultiplexen Immunoassay bead-basiert. Wenn sie in Verbindung mit epidemiologischen Studien der Exposition gegenüber Mikroben in Wasser, Boden und Nahrungsmittel verwendet wird, kann die Art des Assay in dieser Studie beschriebenen wertvolle Informationen liefern, das Verständnis von Infektionen durch Pathogene verursacht Umwelt zu verbessern. Außerdem Speichel Antikörper Daten aus solchen Untersuchungen erhalten wird, kann verwendet werden , um die Risikobewertung Modelle 19-22 verbessern.

<table><tbody><tr><td>Equipment and Software</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mikrozentrifuge</td><td>Thermo Electron Corporation</td><td>75002446</td><td>Zum Zentrifugieren von Proben</td></tr><tr><td>Vortex-Mischer</td><td>VWR</td><td>G560</td><td>Zum Mischen von Proben</td></tr><tr><td>Ultraschallgerät (mini)</td><td>Fisher Scientific</td><td>15-337-22</td><td>Zum Trennen von Kügelchen</td></tr><tr><td>Pipettiergeräte P10, P20, P100, P1000, 8 ch. </td><td>Capp</td><td>Verschiedene</td><td></td></tr><tr><td>Hämazytometer (helle Linie)</td><td>Housser Scientific&nbsp;</td><td>3200</td><td>Wird zum Zählen von gekoppelten Kügelchen</td></tr><tr><td>verwendet Multiscreen-Vakuumverteiler</td><td>Millipore</td><td>MSVMHTS00</td><td>Wird in Waschschritten verwendet, um Überstände zu entfernen</td></tr><tr><td>MicroShaker</td><td>VWR</td><td>12620-926</td><td>Wird zum Rühren von Kügelchen während der Inkubation verwendet</td></tr><tr><td>Röhrchengestell (1,5 ml und 0,5 ml) (sortiert)</td><td>VWR</td><td>30128-346</td><td></td></tr><tr><td>Waage</td><td>Mettler oder andere</td><td></td><td>Wird zur Messung von Waschreagenzien für die Herstellung von Puffern</td></tr><tr><td>verwendet Dynabead Probenmischer</td><td>Invitrogen</td><td>947-01</td><td>Wird während des Kopplungs-Inkubationsschritts</td></tr><tr><td>verwendet MatLab (R2014b)</td><td>The MathWorks, Inc.</td><td></td><td>Wird zur Analyse von Antikörper-Response-Daten</td></tr><tr><td>verwendet Microsoft Excel 2014</td><td>Microsoft Corporation</td><td></td><td>Wird zur Analyse von Antikörper-Response-Daten</td></tr> verwendet <tr><td>Luminex Analyzer mit xPonent 3.1 Software</td><td>Luminex Corporation</td><td>LX200-XPON3.1</td><td>Instrument und Software zum Ausführen von</td></tr> <tr><td>assayAntigens</td>GI.1 Norwalk-Virus<td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>: p-Partikel</td><td>Xi Jiang (CCHMC)*</td><td>NA</td><td>*Cincinnati Kinderkrankenhaus. Finale conc. 5 &micro;g.</td></tr><tr><td>GII.4 Norovirus VA387: p-Partikel</td><td>Xi Jiang (CCHMC)*</td><td>NA</td><td>*Cincinnati Childrens' Hospital. Finale conc. 5 &micro;g.</td></tr><tr><td>Hepatitis-A-Virus: Konzentrat Grad II aus Zellkultur</td><td>Meridian Life Sciences</td><td>8505</td><td>Antigen gekoppelt bei 100 & Mikro; g</td></tr><tr><td>Helicobacter pylori: Lysat</td><td>Meridian Life Sciences</td><td>R14101</td><td>Antigen gekoppelt bei 25 &; Mikro; g</td></tr><tr><td>Toxoplasma gondii: rekombinante p30 (SAG1)</td><td>Meridian Life Sciences</td><td>R18426</td><td>Antigen gekoppelt an 25 &; micro; g</td></tr><tr><td>Campylobacter jejuni: Hitze tötete ganze Zellen</td><td>KPL</td><td>50-92-93</td><td>Antigen gekoppelt bei 50 & Mikro; g</td></tr><tr><td>Primärantikörper</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Meerschweinchen-Anti-Norovirus</td> <td>(CCHMC)*</td><td>NA</td><td>Wird zur Bestätigung der Kopplung</td></tr> verwendet <tr><td>Anti-Hepatitis A IgG</td><td>Meridian Life Sciences</td><td>C65885M</td><td>wird zur Bestätigung der Kopplung</td></tr> verwendet <tr><td>Anti-Hepatitis A IgG</td><td>Meridian Life Sciences</td><td>C65885M</td><td>Wird zur Bestätigung der Kopplung</td> verwendet</tr><tr><td>BacTraceAffinity Aufgereinigter Antikörper gegen Helicobacter pylori</td><td>KPL</td><td>01-93-94</td><td>Zur Kopplungsbestätigung</td></tr> von <tr><td>Ziegen-pAb an Toxoplasma gondii</td><td>Abcam</td><td>Ab23507</td><td>Zur Kopplungsbestätigung</td></tr><tr><td>BacTrace Ziege anti-CampylobacterSpezies</td><td>KPL</td><td>01-92-93</td><td>Zur Kopplungsbestätigung</td></tr><tr><td><stark>Sekundär&nbsp; Antikörper</stark></td>Biotin-SP-konjugiertes AffiniPure <td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Donkey Anti-Ziegen-IgG (H+L)</td><td>Jackson</td><td>705-065-149</td><td>Zur Bestätigung der Kopplung</td></tr><tr><td>Biotinyliertes Kaninchen Anti-IgG (H+L)</td><td>KPL</td><td>16-13-06</td><td>Zur Bestätigung der Kopplung</td></tr><tr><td>Biotinyliertes Kaninchen gegen IgG (H+L)</td><td>KPL</td><td>16-18-06</td><td>Zur Bestätigung</td></tr> <tr><td>der KopplungAffinitätsgereinigter Antikörper Biotin markierte Ziege Anti-Kaninchen IgG (H+L)</td><td>KPL</td><td>176-1506</td><td>Wird zur Kopplung</td></tr> von Bestätigungs<tr><td><stark>Verbrauchsmaterialien</stark>1,5</td> ml Copolymer-Mikrozentrifugenröhrchen <td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>verwendet USA Scientific</td><td>1415-2500</td><td>Wird als niedrig bindende Mikrozentrifugenröhrchen</td></tr><tr><td>10 & Mikro verwendet; l Nachfüllungen für Pipettenspitzen</td><td>BioVentures</td><td>5030050C</td><td></td></tr><tr><td>200 & micro; l Nachfüllungen mit Pipettenspitze</td><td>BioVentures</td><td>5030080C</td><td></td></tr><tr><td>1.000 &micro; l Pipettenspitzen-Nachfüllungen</td><td>BioVentures</td><td>5130140C</td><td></td></tr><tr><td>Aluminiumfolie</td><td>Verschiedene Anbieter</td><td></td><td>Verwendet Halten Sie Kügelchen während der Inkubation im Dunkeln</td></tr><tr><td>Deep-Well-Platten</td><td>VWR</td><td>40002-009</td><td>Wird zum Verdünnen von Speichelproben verwendet</td></tr><tr><td>Multiscreen-Filterplatten</td><td>Millipore</td><td>MABVN1250</td><td>Wird zur Durchführung von Assays verwendet</td></tr><tr><td>Oracol Speichelsammelsystem</td><td>Malvern Medical Developments Limited</td><td></td><td>Wird für die Speichelsammlung</td></tr> verwendet<tr><td>Reagenzien</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Carboxylierte Mikrosphären (Kügelchen)</td><td>Luminex Corporation</td><td>Abhängig vom Bead-Set</td><td>Antigene sind an die Mikrosphären</td></tr><tr><td>gekoppelt EDC (1-Ethyl-3-[3-dimethylaminopropyl]carbodiimid-Hydrochlorid)</td><td>Pierce</td><td>77149 oder 22980</td><td>Wird bei der Bead-Aktivierung</td></tr> <tr><td>verwendetSulfo-NHS (N-hydroxysulfosuccinimid)</td><td>Pierce</td><td>24510</td><td>Zur Verwendung bei der Bead-Aktivierung</td></tr><tr><td>Steptavidin-R-phycoerythrin (1 mg/ml)</td><td>Molekulare Sonden</td><td>S-866</td><td>Zur Verwendung als Reporter</td></tr><tr><td>MES (2-[N-Morpholino]ethansulfonsäure)</td><td>Sigma</td><td>M-2933</td><td>Zur Kopplung</td></tr> von <tr><td>Tween-20 (Polyoxyethylenorbitanmonolaurat)</td><td>Sigma</td><td>P-9416</td><td>Wird in Waschpuffern verwendet, um unspezifische Bindung</td></tr><tr><td><stark>Proteinpuffer</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>PBS-TBN Blockierungs-/Lagerpuffer (PBS, 0,1 % BSA, 0,02 % Tween-20, 0,05 % Azid, pH 7,4) zu entfernen</stark>**</td><td></td><td></td><td>Filter Sterilisieren und lagern bei 4 μde; C</td></tr><tr><td>PBS, pH 7,4</td><td>Sigma</td><td>P-3813</td><td>138 mM NaCl, 2,7 mM KCl</td></tr><tr><td></td><td>BSA Sigma</td><td>A-7888</td><td>0,1 % (w/v)</td></tr><tr><td>Tween-20</td><td>Sigma</td><td>P-9416</td><td>0,2 % (v/v)</td></tr><tr><td>Natriumazid (0,05 % Azid)**</td><td>Sigma</td><td>S-8032</td><td>**<stark>Vorsicht</stark>: Natriumazid ist akut toxisch. Vermeiden Sie den Kontakt mit Haut und Augen. Tragen Sie geeignete PSA. Entsorgen Sie gemäß den geltenden Gesetzen.</td></tr><tr><td>MES/Coupling Buffer (0,05 M MES, pH 5,0)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>MES (2-[N-Morpholinosulfonsäure)</td><td>Sigma</td><td>S-3139</td><td></td></tr><tr><td>5 N NaOH</td><td>Fisher</td><td>SS256-500</td><td></td></tr><tr><td>Assay Puffer (PBS, 1% BSA, pH 7,4)&nbsp; </td><td></td><td></td><td>Filter Sterilisieren und bei 4 ° C lagern; C</td></tr><tr><td>PBS, 1% BSA, pH 7,4</td><td>Sigma</td><td>P-3688</td><td>138 mM NaCl, 2,7 mM KCl, 1% BSA</td></tr><tr><td>Aktivierungspuffer (0,1 M NaH2PO4, pH 6,2)</stark></td><td></td><td></td><td>Filter Sterilisieren und lagern bei 4 Grad; C</td></tr><tr><td>NaH2PO4 (Natriumphosphat, monobasisch wasserfrei)</td><td>Sigma</td><td>S-3139</td><td>0,1 M NaH2PO4</td></tr><tr><td>5 N NaOH</td><td>Fisher</td><td>SS256-500</td><td></td></tr><tr><td>Wash Buffer (PBS, 0,05% Tween-20, pH 7,4)</td><td></td><td></td><td>Filter Sterilisieren und lagern bei 4 & Grad; C</td></tr><tr><td>PBS, 0,05 % Tween-20, pH 7,4</td><td>Sigma</td><td>P-3563</td><td>138 mM NaCl, 2,7 mM KCl, 0,05 % TWEEN</td></tr></tbody></table>

eine speichel- antikörper multiplex-immunoassay entwicklung der humanexposition umwelt pathogens zu messen

Developing a Salivary Antibody Multiplex Immunoassay to Measure Human Exposure to Environmental Pathogens

Die Ätiologie und die Auswirkungen der Exposition des Menschen gegenüber Umwelt Erreger sind von großer Besorgnis weltweit und damit die Fähigkeit, Belichtung und Infektionen mit kostengünstige, High-Throughput-Ansätze unabdingbar wäre zu beurteilen. Diese Handschrift beschreibt die Entwicklung und Analyse eines bead-based multiplex Immunoassay Lage sind, die Anwesenheit von Antikörpern in menschlichen Speichel an mehrere Pathogene gleichzeitig messen. Saliva ist besonders attraktiv in dieser Anwendung, da sie nicht invasiv ist, billiger und leichter zu erfassen als Serum. Antigene aus Umweltpathogene wurden an carboxylierte Mikrokügelchen (Perlen) und verwendet, um Antikörper in sehr kleinen Volumina von menschlichen Speichelproben zu messen, eine Perlenbasis, Lösungsphasen-Assay. Die Perlen wurden in Verbindung mit Antigenen von Campylobacter jejuni, Helicobacter pylori, Toxoplasma gondii, Noroviren (G I.1 und G II.4) und Hepatitis - A - Virus. Um sicherzustellen, dass die Antigene wurden ausreichend gekoppeltdie Perlen, Kupplung wurde mit biotinyliertem Anti-Spezies Sekundär Nachweis-Antikörper und Streptavidin-R-Phycoerythrin Reporter (SAPE) unter Verwendung von artspezifischen, von Tieren stammenden primären Fänger-Antikörper, gefolgt von einer Inkubation bestätigt. Als Kontrolle nicht-spezifische Bindung zu messen, wurde ein Beadset identisch zu den anderen behandelt, außer es nicht an Antigen gekoppelt wurde. Die antigen-gekoppelt und Kontrollkügelchen wurden dann mit prospektiv gesammelten menschlichen Speichelproben inkubiert, auf einem Hochdurchsatz-Analysator auf den Prinzipien Durchflusszytometrie basierend gemessen von und die Anwesenheit von Antikörpern gegen jedes Antigen wurde in mittlere Fluoreszenzintensitätseinheiten (MFI), gemessen . Dieser Multiplex-Immunoassay hat eine Reihe von Vorteilen, mehr Daten mit weniger Probe enthält; reduzierte Kosten und Arbeit; und die Fähigkeit, den Test zu viele Ziele von Interesse anzupassen. Die Ergebnisse zeigen, dass die Speichel Multiplex-Immunoassay-fähig sein kann vorherigen Belichtungen und Infektionen zu identifizieren, die especia sein kannlly nützlich in Beobachtungsstudien großen menschlichen Populationen beteiligt sind.

Eine einzigartige Perle Set wurde als Kontrolle zur Messung der unspezifischen Bindung und Probe Variabilität zu probieren. Diese Kügelchen wurden identisch zu den Antigen gekoppelten Kügelchen mit der Ausnahme behandelt, daß sie nicht mit einem Antigen in der Kopplungsschritt inkubiert. MFI-Werte&gt; 500 von den Kontrollkügelchen mit allen Speichelproben inkubiert erhalten wurden von der weiteren entfernt Analysen aufgrund vermuteter Kontamination von Serum und die restlichen Antworten ...

Im aktuellen Klima knapper Ressourcen entstehen neue Technologien, die es Forschern ermöglichen, Studien billiger, schneller und präziser durchzuführen. Hier beschreiben wir die Entwicklung eines bead-basierten Speichel-Antikörper-Multiplex-Immunoassays zur gleichzeitigen Messung der Exposition des Menschen gegenüber mehreren Umweltpathogenen.

eine Speichel- Antikörper Multiplex-Immunoassay Entwicklung der Humanexposition Umwelt Pathogens zu messen

The etiology and impacts of human exposure to environmental pathogens are of major concern worldwide and, thus, the ability to assess exposure and ...

Das übergeordnete Ziel dieses speichelbasierten, kernbasierten Multiplex-Immunoassays für Antikörper besteht darin, die kausalen Erreger von umweltbedingten symptomatischen und asymptomatischen Erkrankungen zu identifizieren, indem die IGG-Antikörperantworten gegen mehrere Krankheitserreger gleichzeitig gemessen werden. Diese Methode kann helfen, zentrale Fragen im Bereich der Expositionswissenschaft zu beantworten. Zum Beispiel: Welche Erreger sind für die Entstehung von Erkrankungen in bestimmten Bevölkerungsgruppen verantwortlich? Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass sie zur schnellen und kostengünstigen Bestimmung von Antikörpern gegen mehrere Analyten gleichzeitig mit sehr geringen Probenvolumina genutzt werden kann. Diese Methode kann Aufschluss über ätiologische Agentien und deren Expositionsquellen geben, einschließlich lebensmittel-, wasser- und luftübertragener Übertragungswege. Die offizielle Demonstration dieses Verfahrens ist entscheidend, da die Ergebnisse bei unsachgemäßer Durchführung unzuverlässig sein können.Vortexen und sonifizieren Sie zunächst die Stammlösungen der an die Antigene gebundenen Perlen jeweils 20 Sekunden lang, um homogene Perlen-Suspensionen zu erzeugen. Verdünnen Sie anschließend die konjugierten Perlen-Stammlösungen auf eine Endkonzentration von 100 Perlen pro Mikroliter jeder einzelnen Perlen-Set in PBS, ergänzt mit 1 % BSA. Bereiten Sie danach mindestens sieben zweifache serielle Verdünnungen des primären Anti-Spezies-IGG-Antikörpers gemäß den Herstellerempfehlungen in PBS mit BSA in einer 96-Loch-Rundbodenplatte vor.Befeuchten Sie separat eine acht 12-Spalten-Kolonne einer 96-Loch-Filterbodenplatte für jeden Antigen-Kopplungsbestätigungstest mit 100 µL Waschpuffer und entfernen Sie den Überstand mittels Vakuum. Geben Sie anschließend 50 µL der mit Antigen beschichteten Perlen in die vorbefeuchteten Vertiefungen sowie jeweils 50 µL des seriell verdünnten Antikörpers in die Reihen eins bis sieben der 96-Loch-Filterplatte; geben Sie 50 µL PBS mit BSA in Reihe acht als Hintergrundkontrolle für den verdünnten Antikörper. Verwenden Sie eine Mehrkanalpipette, um den Inhalt jedes Wells fünfmal auf- und abzusaugen, um eine gründliche Durchmischung zu gewährleisten.Decken Sie die Platte ab und inkubieren Sie die Antikörper mit den Antigen-gekoppelten Perlen im Dunkeln bei Raumtemperatur auf einem Mikroplatten-Shaker bei 500 U/min. Nach einer Stunde saugen Sie den Überstand ab und waschen die Vertiefungen mit zwei Portionen von jeweils 100 Mikroliter Waschpuffer. Nach dem zweiten Waschgang ersetzen Sie den Puffer durch 50 Mikroliter PBS mit BSA.Verdünnen Sie nun den biotinylierten, artenspezifischen sekundären IGG-Detektionsantikörper auf 16 Mikrogramm pro Milliliter in PBS mit BSA und geben Sie 50 Mikroliter des verdünnten sekundären Antikörpers in jede Reihe. Inkubieren Sie die Kügelchen und Antikörper 30 Minuten bei Raumtemperatur im Dunkeln auf einem Plattenschüttler. Am Ende der Inkubation saugen Sie den Überstand ab und waschen die Kügelchen mit zwei Portionen je 100 Mikroliter Waschpuffer.Nach der zweiten Waschung die Pellets in 50 Mikrolitern PBS mit BSA erneut suspendieren und den Streptavidin-r-Phycoerythrin-Reporter auf 24 Mikrogramm pro Milliliter in PBS mit BSA verdünnen. 50 Mikroliter des Reporters zu jeder Vertiefung hinzufügen und durch Pipettieren mischen. Die Platte 30 Minuten bei Raumtemperatur im Dunkeln auf dem Schüttler inkubieren, gefolgt von zwei Spülgängen mit je 100 Mikrolitern Waschpuffer, wie gezeigt.Anschießend die Kügelchen in 100 Mikroliter PBS mit BSA wieder in Suspension bringen und die antigengebundenen Kügelchen mit dem Analysator auswerten. Nach dem erneuten Suspandieren der antigengebundenen Kügelchenlager durch Vortexen und Beschallung für 20 Sekunden, die gebundenen Kügelchenlager auf eine Endkonzentration von 100 Kügelchen pro Mikroliter jedes einzelnen Kügelchensatzes in PBS mit BSA verdünnen. Danach eine Verdünnung von Speichel bei Raumtemperatur im Verhältnis 1:4 in PBS mit BSA in einer 96-Loch-Tiefbrunnenplatte herstellen.Befeuchten Sie eine Filterplatte mit 100 Mikrolitern Waschpuffer und aspirieren Sie den Überstand. Geben Sie anschließend 50 Mikroliter antigenbeschichtete Kügelchen und ein gleiches Volumen der verdünnten Speichellösung in 95 Vertiefungen der 96-Loch-Filterplatte für eine Endverdünnung von eins bis acht. Gleichzeitig geben Sie 50 Mikroliter antigenbeschichtete Kügelchen sowie 50 Mikroliter PBS mit BSA allein in das Kontrollloch.Die Kügelchen im Dunkeln eine Stunde lang bei Raumtemperatur auf dem Mikroplatten-Shaker mit 500 U/min inkubieren. Danach den Überstand abpipettieren und die Vertiefungen zweimal mit jeweils 100 Mikrolitern Waschpuffer waschen. Nach dem zweiten Waschgang die Kügelchen in 50 Mikrolitern PBS mit BSA erneut suspendieren.Verdünnen Sie den sekundären Antikörper und geben Sie 50 Mikroliter davon in jede Vertiefung. Nach dem Mischen des Inhalts der Vertiefungen mit einer Mehrkanalpipette inkubieren Sie die Platte 30 Minuten bei Raumtemperatur im Dunkeln auf dem Schüttler, waschen Sie die Vertiefungen anschließend zweimal mit jeweils 100 Mikrolitern Waschpuffer und resuspendieren Sie die Kügelchen in 50 Mikrolitern frischem PBS mit BSA. Verdünnen Sie nun den Reporter und geben Sie 50 Mikroliter davon in jede Vertiefung.Sorgfältig mit einer Mehrkanalpipette mischen. Nach 30 Minuten bei Raumtemperatur auf dem Schüttler im Dunkeln die Vertiefungen zwei Mal wie gezeigt waschen, dann die Perlen in 100 µL PBS mit BSA resuspendieren und die Proben auf dem Analysator auswerten. Um sicherzustellen, dass die antigenbelegten Perlen in der Lage sind, den dynamischen Bereich des Assays zu erreichen, wird eine geeignete Kopplung definiert als eine mittlere Fluoreszenzintensität größer oder gleich 18.000.Wie anhand dieser repräsentativen Kopplungsbestätigungen der Antigene im Test für C.jejuni und T.gondii gezeigt wurde. Basierend auf dem etablierten Cut-off-Wert lagen die Immunprävalenzraten für die Proben zwischen etwa 2 % für T.gondii und nahezu 50 % für Norovirus-Genogruppe 1.1, was darauf hinweist, dass die Immunprävalenzrate für Noroviren am höchsten war, gefolgt von Hepatitis A und H. pylori. Während 32 % der Proben gegenüber allen im Test enthaltenen Erregern immunonegativ waren, erwiesen sich 68 % der Proben als immunpositiv gegenüber einem oder mehreren Erregern.Wenn man einmal die Beherrschung dieser Methode erlangt hat, kann sie bei korrekter Durchführung in etwa vier Stunden abgeschlossen werden. Während des Durchführens dieser Prozedur ist es wichtig, die Perlen vor Licht zu schützen, um eine Photo-Bleiche zu vermeiden. Nach dieser Methode können andere Verfahren wie ELISAs und Western Blotting angewendet werden, um zusätzliche Fragen zur Empfindlichkeit und Spezifität zu beantworten.Sowie der Kreuzreaktivität der Antikörper. Nach ihrer Entwicklung ebnete diese Technik Forschern auf den Gebieten der Epidemiologie, Expositionswissenschaft und klinischen Mikrobiologie den Weg, menschliche Risiken durch Umweltexpositionen zu untersuchen. Nach dem Ansehen dieses Videos sollten Sie ein sehr gutes Verständnis dafür haben, wie man einen multiplex-Immunoassay entwickelt, analysiert und die Ergebnisse interpretiert, um Antikörper gegen mehrere Erreger gleichzeitig zu messen.Vergessen Sie nicht, dass die Arbeit mit Körperflüssigkeiten und Natriumazid äußerst gefährlich sein kann und dass stets Vorsichtsmaßnahmen wie das Tragen geeigneter persönlicher Schutzausrüstung sowie die ordnungsgemäße Entsorgung von Reagenzien zu beachten sind, wenn dieses Verfahren durchgeführt wird.

developing-salivary-antibody-multiplex-immunoassay-to-measure-human

Research

Forschung

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie und Infektion

Mit Luminex Corporation xMAP-Mikrokugel-Technologie haben wir die Multiplex Fluorometric Immunoassay (MFIA) für serologischen Überwachung von verschiedenen Labors Tierarten entwickelt. Die MFIA ist eine Suspension Microarray, wo Antigen, Gewebekontrolle oder Immunglobuline kovalent an farbkodierten Polystyrol-Mikrokügelchen verbunden sind. Die MFIA Prüfverfahren sowie verschiedene Themen zur Fehlerbehebung adressiert ist.

Multiplexed Fluorometric Immunoassay Testing Methodology und Fehlerbehebung

Dieses Video demonstriert eine Bead-basierte Multiplex-Immunoassay-Technik zum gleichzeitigen Nachweis von Antikörpern gegen mehrere Umweltpathogene im menschlichen Speichel. Fluoreszierende Kügelchen wurden an Antigene verschiedener Erreger gekoppelt, die mit Hilfe von Antikörpern in der menschlichen Speichelprobe eingefangen wurden. Nach der Markierung der Antikörper mit einem fluoreszierenden Reporter wurden die Kügelchen mittels Durchflusszytometrie analysiert, um das Vorhandensein...

Ein Bead-basierter Multiplex-Immunoassay zur Identifizierung von erregerspezifischen Antikörpern im Speichel

Wir beschreiben ein Verfahren zum Profilieren von Speichelproteinen mit gemultiplexten Basis von Mikroarrays Antikörper. Monoklonale Antikörper wurden kovalent an Fluoreszenzfarbstoff-codierten 4,5 &amp;mgr; m-Mikrokugeln unter Verwendung von Carbodiimid-Chemie gebunden. Die modifizierten Mikrosphären wurden in faseroptischen Mikrovertiefungen abgeschieden, um Protein-Spiegel im Speichel mittels Fluoreszenz-Sandwich-Immunoassays zu messen.

Multiplex-Fluoreszenz-Mikroarray für Menschenspeichelproteinanalytik Verwendung von Polymer-Mikrosphären und LWL-Bundles

Dieses Protokoll beschreibt eine nicht-invasive Technik für die Entnahme von ungestörten Schleimhaut Flüssigkeit aus den oberen Atemwegen. Es kann verwendet werden, die Quantifizierung der in Vivo -Level von Protein Mediatoren wie Zytokine und Chemokine, bei Patienten aller Altersgruppen durchführen.

Nicht-invasive Probenahme von Schleimhaut-Flüssigkeit für die Quantifizierung von In Vivo oberen Atemwegen immun-Mediator-Level

Hier präsentieren wir ein Protokoll um die Entwicklung und Validierung eines einzelnen Moleküls Array digitale ELISA Assays, ermöglicht ultra-sensitive Detektion von allen IFN-α-Subtypen in humanen Proben zu beschreiben.

Entwicklung und Validierung eines empfindsamen Einzelmolekül Array digitale Enzym-linked Immunosorbentprobe Assay für menschliche Interferon-α

Dieser Beitrag stellt ein Protokoll zum Nachweis von Serum-spezifische Immunglobulin E mit einem mikrofluidischen Patrone-basierte Chemilumineszenz-System und die Bewertung der Nützlichkeit Allergie Diagnosen.

Einsatz von Biochip mikrofluidischen Technologie zur Erkennung Serum Allergen-spezifische Immunglobulin E (sIgE)

Wir präsentieren ein Protokoll zur Verwendung eines Protein-Mikroarrays, das durch den Druck von Influenza-Antigenen auf nitrozellulosebeschichtete Dias konstruiert wurde, um gleichzeitig Serum für mehrere Antikörper-Isotypen gegen über 250 Antigene aus verschiedenen Virusstämmen zu sonden, Messung der Breite von Serumantikörpern über Virussubtypen hinweg.

Verwendung eines Influenza-Antigen-Mikroarrays zur Messung der Breite von Serum-Antikörpern über Virussubtypen hinweg

Ein Flow-Analysesystem für perlenbasierte Multiplex-Assays, das eine Zwei-Reporter-Ablesung ermöglicht, wurde für die Entwicklung von multiplex-serologischen und Antikörper-Neutralisationsassays verwendet, die gleichzeitig neutralisierende IgG- und IgM-Antikörper für SARS-CoV-2 messen können.

Ein schneller Multiplex-Dual-Reporter-IgG- und IgM-SARS-CoV-2-Neutralisationsassay für ein multiplexed Bead-basiertes Durchflussanalysesystem

Dieser Artikel beschreibt eine geeignete Methode zur gleichzeitigen Überwachung dynamischer Veränderungen in Antikörpertitern für zwei Immunglobulin-Isotypen (entweder IgA, IgM oder IgG), die sich aus einer Immunantwort auf eine SARS-CoV-2-Infektion oder -Impfung ergeben. Dieses "Multianalyte Covid-19 Immune Response Panel" verwendet drei indirekte Immunoassays, die auf codierten Mikrosphären basieren und mit einem flussbasierten Multiplex-Leser mit "Dual-Channel"-Fähigkeit gelesen werden.

Dynamisches Monitoring der Serokonversion mittels Multianalyte Immunobead Assay für Covid-19

Ein Dreikanal-Dual-Reporter-Fluoreszenz-Flussanalysesystem wurde verwendet, um einen Bead-basierten Multiplex-Immunoassay zu entwickeln, der gleichzeitig Serumproben auf IgG und IgM auswertet, die gegen mehrere Antigene verschiedener Borrelienspezies extrahiert wurden, die die Lyme-Borreliose in Europa und Nordamerika verursachen.

Gleichzeitiger Nachweis verschiedener Antikörperklassen in einem serologischen Multiplex-Test

Multiplex-Fluoreszenz-Immunoassays werden zu einer Referenz für serologische Tests. Ihre Anwendung ist jedoch durch die Komplexität und zeitaufwändigen Bead-Analyt-Kopplungsprozesse begrenzt. In diesem Bericht wird ein halbautomatisches, reproduzierbares Multiplex-Mikrosphären-Bead-Kopplungsprotokoll vorgestellt, das mit der Standardmethode vergleichbar ist und gleichzeitig die Zeit bis zum Ergebnis erheblich verkürzt.

Ein serologischer Multiplex-Assay zum Nachweis von Antikörperantworten auf Arboviren

Erfahren Sie die Entwicklung eines bead-basierten Speichel-Antikörper-Multiplex-Immunoassays zur gleichzeitigen Messung menschlicher Exposition gegenüber mehreren Umweltpathogenen. Diese Methode ermöglicht schnelle, kostengünstige Analysen für die Expositionsforschung.

eine Speichel- Antikörper Multiplex-Immunoassay Entwicklung der Humanexposition Umwelt Pathogens zu messen

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