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DOI: 10.3791/54465-v
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Dieses Protokoll zeigt, wie zytoplasmatische Mikroinjektionen in Nutztierzygoten durchgeführt werden. Diese Technik kann verwendet werden, um jede Lösung in den einzelligen Embryo zu bringen, wie z. B. Genom-Editing-Tools zur Erzeugung von Knockout-Tieren.
Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, mit Hilfe eines Lasers mit einer stumpfen Nadel effektiv Lösungen in das Zytoplasma von Nutztierzygoten zu bringen. Diese Methode wird in der Forschung und im Bereich der Transgenese von Tieren eingesetzt, da man mit einem Genom-Editing-Tool wie einem CRISPR-Cas9-System verbunden ist und neue Kühe erzeugen kann, um die Genfunktion und transgene Tiere auf sehr einfache und zuverlässige Weise zu untersuchen. Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass sie verwendet werden kann, um jede Lösung in das Zytoplasma der Zygoten eines Großtieres zu bringen.
Mit einer handlichen Injektionseffizienz minimiert die Injektionseffizienz der tierischen Leber-Lomotil-Rate. Bereiten Sie zunächst die Injektionsmikropipette vor, indem Sie eine Borosilikatglaskapillare in einen Mikropipettenabzieher einsetzen und verriegeln. Verwende ein geeignetes Programm, um die Kapillare so zu ziehen, dass eine dünne Spitze mit einer langen Verjüngung entsteht.
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