Name: Symmetrische Bihemispheric Postmortem Gehirn Schneiden Gesund und krankhafte Gehirnbedingungen beim Menschen zu studieren (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-12-18T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 29 s
Description: Erfahren Sie die symmetrische bihemisphärische Hirnschnitttechnik zur Untersuchung von Hirnerkrankungen beim Menschen. Diese Methode liefert qualitative und quantitative neuropathologische Daten für klinische und bildgebende Korrelationen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Wir danken den Tausenden von Hirnspendern, Patienten, Familien und Neurowissenschaftlern auf der ganzen Welt, die in den letzten zwei Jahrhunderten und durch ihre großzügigen Gaben und intellektuellen Bemühungen dazu beigetragen haben, zu entdecken, wie das menschliche Gehirn funktioniert, verheerende Hirnkrankheiten zu verstehen und Behandlungen dafür zu entwickeln. Wir danken insbesondere Frau Cecilia V. Feltis für die Bearbeitung und Überprüfung dieses Manuskripts.

Verfahren postmortalen menschlichen Geweben beteiligt wurden von der Institutional Review Board überprüft und unter 45 CFR (Code of Federal Regulations) befreit. HINWEIS: Das Protokoll beschreibt einen symmetrischen bihemispheric Gehirn Schneidverfahren für post mortem Gehirn Beurteilung für neuropathologische Untersuchungen am Menschen abgeschlossen. Detaillierte Beschreibungen der Geräte, Instrumente, Materialien und liefert notwendige menschliche Gehirn Schneiden durchzuführen, werden ausgeschlossen. Materialien und Zubehör für Gehirn Dissektionen sind im Ermessen des einzelnen Forschers ausgewählt und basieren auf Autopsie-Tools erlaubt oder bei jeder Forschungseinrichtung zugelassen. Die minimale Menge von Werkzeugen und Material für dieses Verfahren erforderlich ist, in der Material / Ausrüstung Tabelle beschrieben. Spezifische Schnitt Verfahren und Vorsichtsmaßnahmen wegen des Verdachts auf übertragbare Krankheiten des Gehirns, wie menschliche CJD, sind außerhalb der Ziele dieses Manuskripts und sind aus anderen Quellen zur Verfügung 7. 1. Symmetrische Bihemisphärische Gehirn Cutting Hinweis: Sicherstellen , dass das Gehirn die notwendige Gewebefixierung erhalten hat (unter Verwendung von zum Beispiel neutral gepufferte 10% Formalinlösung) für einen Zeitraum von zwei bis drei Wochen, abhängig von der periagonal, metabolischer (dh pH) und Gewebekonservierung ( dh Temperatur) Bedingungen. Doch für die Bildgebung Pathologie Korrelationsstudien, eine längere Zinsbindung (&gt; 5,4 Wochen) wurde 8 vorgeschlagen. <ol><li> Legen Sie das Gehirn auf eine ebene Fläche, die Ermittler gegenüber, mit den frontalen Pole in die entgegengesetzte Richtung gerichtet in Bezug auf die Ermittler. </li><li> Legen Sie das Gehirn in einer solchen Weise, dass eine vollständige und klare Visualisierung aller kortikalen Windungen und Furchen des gesamten Großhirn (Abbildung 1a) ermöglicht. </li><li> Erster Blick für meningeal Anomalien, makroskopische hemisphärische Asymmetrien (mögliche Indikatoren für fokale, lobar oder generali hemisphärischen Erscheinungen der Atrophie), makroskopische tissutal Läsionen (dh tumors oder Herniation), angeborene Fehlbildungen, Gefäßanomalien und andere mögliche Anomalien oder ungewöhnliche Präsentationen der Gehirnoberfläche. HINWEIS: Detaillierte Beschreibungen, wie ein menschliches Gehirn zu bewerten, beziehen sich auf handelsüblichen neuropathology Lehrbücher und Handbücher Autopsie 9,10. </li></ol> 2. Protokoll Sequence <ol><li> Gesicht frontal Pole vom Prüfer weg, mit den oberflächlichen Aspekte der Hemisphären (Telenzephalon), um die Ermittler gegenüber. Nehmen Sie so viele digitale Bilder wie nötig in jedem einzelnen Fall zu dokumentieren mögliche Makro Anomalien und für mögliche klinisch-neuroanatomische und Nachschnitt-Überlegungen zu berücksichtigen. Haben wissenschaftlicher Mitarbeiter digitalen Fotos senkrecht zum Gehirn nehmen die gesamte kortikalen Oberfläche zu erfassen (Abbildung 1a - c). </li><li> Mark vor und postcentralis kortikalen gyri mit Tinte oder farbigen Nadeln vor dem Gehirn Schneiden (Abbildung 1b </strong&gt;). Hinweis: Dieses Verfahren ermöglicht eine sofortige Anerkennung des Motors und somatosensorischen Primärrinden nach dem Schneiden. </li><li> Drehen Sie das Gehirn um 180 Grad , während halten sie in die gleiche Richtung (dh die frontale Pole abgewandten Ermittler). Überprüfen Sie sorgfältig die Basis des Gehirns. Achten Sie besonders auf die Bedingungen für zerebrovaskuläre Systeme (dh basilaris und vertebralis und den Kreis von Willis) und Hirnnerven an ihren brainstem Ausgangs- / Eingangsstufen. Verwalten Sie die Riechkolben und Traktate mit besonderer Sorgfalt tissutal laceration, die aufgrund ihrer extremen Schwäche zu vermeiden. <ol><li> Nehmen Sie so viele digitale Bilder wie nötig in jedem einzelnen Fall zu dokumentieren mögliche Makro Anomalien und für mögliche klinisch-neuroanatomische und Nachschnitt-Überlegungen zu berücksichtigen. Haben wissenschaftlicher Mitarbeiter digitalen Fotos senkrecht zum Gehirn, um die Gesamtheit der kortikalen und brainstem Flächen zu erfassen. </li&gt; </ol></li><li> Mit Blick auf die Basis des Gehirns und mit einem Skalpell, schneiden Sie die brainstem quer auf der Ebene des oberen Teils der Brücke (so nahe wie möglich an die Basis des Cerebrum). Inspizieren Sie vorsichtig die SN (dh für Blässe) 11 und andere 12 benachbarten Strukturen. Beachten Sie , möglicherweise eine Audio - Recorder - Gerät, jedes außergewöhnliche Erscheinung des Gehirns im Vergleich zu einem normalen Gehirn 13. </li><li> Wieder drehen Sie das Gehirn um 180 Grad und durch Schneiden des Corpus callosum eine fronto-occipital Richtung mittig durch den medialen Längsfissur ein scharfes Messer, trennen die beiden Hemisphären mit und folgende. Überprüfen Sie jede Seite jeder Hemisphäre für mögliche Anomalien (zB ventrikuläre Vergrößerungen, Mißbildungen, Gewebe Erweichung, Tumoren, etc.) 13. Siehe Abbildung 2a. <ol><li> Nehmen Sie so viele digitale Bilder wie nötig in jedem einzelnen Fall möglich Makro Anomalien zu dokumentieren undzu berücksichtigen möglich klinisch-neuroanatomische und Nachschnitt-Überlegungen. Haben wissenschaftlicher Mitarbeiter digitalen Fotos senkrecht zum Gehirn nehmen die gesamte kortikalen Oberfläche zu erfassen. Beachten Sie jede ungewöhnliche Eigenschaft des Gehirns im Vergleich zu einem normalen Gehirn. </li></ol></li><li> Legen Sie die beiden Hemisphären flach liegend auf ihrer medialen Aspekte, wobei die Stirnlappen abgewandten dem Forscher, wie in 2b gezeigt. Legen sie in der Weise, dass ihre Mittelpunkte berühren (auch bei gekennzeichnet hemisphärischen Asymmetrie). </li><li> Mit einem scharfen Messer von Hand geschnitten durch beide Gehirnhälften, an den Stirn Pole starten und bewegt sich in Richtung der Hinterhaupts Pole durch die gesamte Länge der Hemisphären. Erhalten zwei Serien von 1 cm dicken Blöcken von Hirngewebe (etwa 18 Platten für jede Hemisphäre). </li><li> Legen Sie die Gehirn-Platten in einer anatomisch organisiert (fronto-occipital Richtung) Sequenz auf einer separaten ebene Fläche. Verwenden Sie einen weißen surface mit einem Lineal gedruckt auf es für einen besseren Kontrast beim Fotografieren. Zeigen Sie die zwei Serien von zerebralen Platten in einer anatomisch symmetrischen Art und Weise (fronto-occipital Richtung), um sicherzustellen , dass ihre koronalen Flächen für die Inspektion direkten Auge sichtbar sind und digitale Fotografie (Abbildung 3a). Verwenden Schneidflächen mit aufgedruckter Millimeternetze auf beiden Seiten Hirnstrukturen, Größen zu lokalisieren, und mögliche Anomalien in einer genaueren Art und Weise. <ol><li> Nehmen Sie so viele digitale Bilder wie nötig in jedem einzelnen Fall zu dokumentieren mögliche Makro Anomalien und für mögliche klinisch-neuroanatomische und Nachschnitt-Überlegungen zu berücksichtigen. Haben wissenschaftlicher Mitarbeiter digitalen Fotos senkrecht zum Gehirn nehmen die gesamte kortikalen Oberfläche zu erfassen. Machen Sie sich Notizen (möglicherweise eine Audio-Recorder-Gerät), der ungewöhnliche Aspekt des Gehirns im Vergleich zu einem normalen Gehirn. </li></ol></li><li> Mit einem scharfen Skalpell, sezieren manuell kleineren rechteckigen BlöckeHirngewebe für jeden etablierten Gehirnregion. Folgen Sie dem in Tabelle 1 beschrieben Gehirnregion Sammelsystem vorgeschlagen. <ol><li> Setzen Sie jeden Gewebeblock in separat gekennzeichnet histocassettes. Hinweis: Jeder Block von Hirngewebe muss geschnitten werden zu passen, so viel wie möglich, die Standard histocassette maximale Volumen (30 x 20 x 4 mm 3). </li><li> Beschriften Sie die histocassettes mit einem de-Identifizierungscode für jeden Fall und unter Verwendung spezifischer neuroanatomischen Kennungen (verwenden Sie keine zufällige Buchstaben oder Zahlen für unterschiedliche Gehirne, sondern immer die gleichen regionalen anatomischen Namen oder entsprechenden Zahlen, wie in Tabelle 1 gezeigt). Erstellen de-Identifizierungscodes, beispielsweise durch die Erzeugung von Zufalls oder halbZufallsZahlen für jeden Fall (dh BRC 130, wobei B für Hirn bleibt, R für Ressourcen bleibt, C für Zentrum bleibt und 130 ist eine progressive Beitritt oder AD160001, wo AD steht für &quot;Alzheimer-Krankheit Studie&quot; 16 ist dieJahr, wenn die Autopsie durchgeführt wurde (2016), und 0001 eine progressive Beitritt Probennummer). HINWEIS: Dieser Schritt ist für zukünftige Forscher sehr hilfreich ist; halten eine Legende, und geben Sie die Hemisphäre (L = linke Hemisphäre, R = rechte Hemisphäre). Verwenden Sie zwei verschiedene Farben von histocassettes, eine bestimmte Farbe für jede Hemisphäre zu etablieren. </li><li> Nehmen Sie so viele digitale Bilder wie nötig in jedem einzelnen Fall möglich macroanomalies zu dokumentieren und für mögliche klinisch-neuroanatomische und Nachschnitt-Überlegungen zu berücksichtigen. Haben wissenschaftlicher Mitarbeiter digitalen Fotos senkrecht zum Gehirn nehmen die gesamte kortikalen Oberfläche zu erfassen. Beachten Sie jede ungewöhnliche Eigenschaft des Gehirns im Vergleich zu einem normalen Gehirn. </li></ol></li><li> Nehmen digitale Bilder (so viele wie erforderlich oder gewünscht) der gesamten Schnitt Gehirn und die damit verbundenen histocassettes. </li><li> Stanze (beispielsweise durch Accu-punch) kleine Stücke von Gewebe für die DNA - Extraktion und genetische Analysen. Benutzenein Stempel von 2 bis 5 mm im Durchmesser. HINWEIS: Für seinen hohen Gehalt an Genmaterial, das Cerebellum ist die bevorzugte Wahl; Es ist jedoch jede andere Region in Ordnung. </li><li> Wieder tauchen alle histocassettes Blöcke Hirngewebe in der gleichen Art von Fixierungslösung enthält (beispielsweise 10% neutral-gepuffertes Formalin) , wie zuvor bis zum nächsten Schritt der Gewebebearbeitung verwendet. </li><li> Folgen Sie Standardverfahren für den menschlichen Formalin fixierten Gewebeverarbeitung 14. </li></ol> 3. Ein besonderer Ansatz: Alternating Tiefgekühltes und Feste Symmetric Bihemispheric Schneiden HINWEIS: Die symmetrische bihemispheric Gehirn Schneid Protokoll in Abschnitt 2 bietet die Möglichkeit von Gewebeplatten aus nicht fixierten, frische Gehirne (wenn vorhanden) in der gleichen systematischen und symmetrische Weise zu schneiden. <ol><li> Legen Sie das gesamte frische Gehirn auf den Kopf nach unten (vorzugsweise auf einer halbkugelförmigen schalenförmigen Kunststoffoberfläche) für 8 - 10 min in einem -80 ° C Gefrierschrank das Hirngewebe zu härten without provozieren biochemische Schäden und manuelles Schneiden zu erleichtern. </li><li> Mit einem scharfen Messer, schneiden beide Hemisphären in einer alternativen und aufeinanderfolgenden Weise, nach dem Protokoll Gehirn Schneiden in Abschnitt 2, aber frieren und jede andere Platte fixieren (aus beiden Hemisphären und entlang einer fronto-occipital anatomischen Richtung). <ol><li> An diesem Punkt, versuchen Sie nicht jede Gehirnregion zu schneiden, wie in Tabelle 1 beschrieben. Schneiden Sie spezifische frische Hirnregionen nur dann , wenn für die sofortige RNA oder Proteinextraktion erforderlich (dh für Genom- oder Proteom - Studien) 15. </li></ol></li><li> Nach dem Schneiden sofort einfrieren, Etikett und Nummer jedes frischem Gewebe. Nehmen Sie digitale Bilder von der gesamten Platte Serie; packen jede Platte in einem einzigen Plastikbeutel; sammeln die Platten in einem separaten, ein hirn nur Behälter; und speichern Sie die Behälter in einem dedizierten -80 ° C Gefrierschrank. HINWEIS: Der Gefrierschrank sollte nur für die menschliche Hirngewebe gewidmet sein. Erst später wird singenle gefrorenen Hirnregionen geschnitten werden, wie für jeden spezifischen Experiment erforderlich. </li><li> Tauchen Bramme jedes andere Gewebe ausgewählt zur Fixierung (10% neutral gepuffertem Formalin oder ein anderes Fixiermittel) in separaten Beuteln ein ausreichendes Volumen an Fixiermittel (3/1 Volumen Fixiermittel / gewebeBlockVerhältnis) enthält. Beschriften Sie jede Tasche durch nacheinander Nummerierungs sie nach einer fronto-occipital Sequenz. Siegel jede Tasche, nehmen Sie digitale Bilder und speichern sie in einem Plastikbehälter. </li><li> Öffnen Sie die Fixiermittel enthaltenden Taschen nach 2 Wochen der Gewebefixierung und schneiden Sie jede Gehirnregion , wie in Tabelle 1 beschrieben. </li></ol> 4. Histostain und Immunhistochemie HINWEIS: Die Menge der zerebralen Regionen schneiden auf der Grundlage der vorgeschlagenen Regelung (Tabelle 1) sind ausreichend , um die meisten zufrieden zu stellen, wenn nicht alle, die derzeit etablierten konsensbasierte pathologische Kriterien für AD 16, PD 17, Demenz mit Lewy - Körperchen (DLB) 18, frontotemporale Demenz (FTD / MND) <sup&gt; 19, Progressive Suprabulbar Lähmungs (PSP) 20, Multisystematrophie (MSA) 21, chronisch traumatischer Enzephalopathie (CTE) 22, usw. <ol><li> Für jede Region des Gehirns und für beide Hemisphären, führen Sie die folgenden minimalen Satz von histostains: Hematoxylin und Eosin (H &amp; E), Kresylviolett (CV; wenn quantitative Morphometrie geplant sind, zum Beispiel), und Silberfärbung (wenn &quot;explorative&quot; Analysen erforderlich). </li><li> Für jede Region des Gehirns und für beide Hemisphären, führen Sie die folgenden minimalen Satz von Immunhistochemie Protokolle: ß -Amyloid (β A), phosphoryliert-Tau (PtAu), phosphoryliert α-Synuclein (P &amp; agr;-syn) und phosphoryliert-TDP43 (pTDP43) wie beschrieben 14. HINWEIS: Die Gesamtzahl der Gewebeschnitte, um jedes Gehirn nach diesem Protokoll zu beurteilen ist 46 (wenn alle Hirnregionen von beiden Hemisphären zur Verfügung stehen). </li></ol>

Die Autoren haben nichts zu offenbaren.

Dieses Gehirn Schneidverfahren kann auf die spezifischen Bedürfnisse der einzelnen neuropathology Labor angepasst werden (zum Beispiel durch die Anzahl der zerebralen Regionen verringert werden für jede Hemisphäre zu bewerten), während immer noch die bihemispheric symmetrische Schneidverfahren als eines ihrer Hauptmerkmale beibehalten werden. Diese vorgeschlagene Protokoll könnte für Routineverfahren (forschungsorientierten neuropathologischen Zentren) oder nur bei Bedarf (spezifische klinisch orientierte Studien) verwe...

Neuropathologists haben die wissenschaftliche Privileg, intellektuelle Ehre und diagnostische Verpflichtung menschliche Gehirn zu beurteilen. Seit vielen Jahrzehnten detaillierte klinische Beschreibungen von Erkrankungen des Gehirns und großen Anstrengungen, um ihre mögliche neurohistologische Korrelate im menschlichen Gehirn Obduktion durchgeführt wurden, um individualisieren. Historisch gesehen, repräsentiert diese Bemühungen die produktivste Modalität, durch die die medizinischen Wissenschaften und Neurologie insbesondere in der modernen Ära fortgeschritten. Dank vorherigen eminent neuropathologists und ihre Hingabe, Entschlossenheit, Wissenschaft und erstaunliche Fähigkeit zwischen normalen und abnormen Hirngewebe zu unterscheiden (oft sehr rudimentären Werkzeuge verwenden), können wir jetzt untersuchen und zu bekämpfenden Krankheiten wie Alzheimer-Perusini-Krankheit (zu Unrecht nur genannt Alzheimer Krankheit; APD / AD) 1, Parkinson-Krankheit (PD) 2, Creutzfeldt-Jakob - Krankheit (CJD) 3, Lou-Gehrig-Krankheit / amyotrophische Lateral Sclerosis (ALS) 4 und Guam - Krankheit 5, um nur einige zu nennen. Erweiterte Techniken der bildgebenden Verfahren, wie zum Beispiel hochauflösende Computertomographie (dh Multisektions Spiral - CT, CT - Angiographie), morphologische und funktionelle Magnetresonanztomographie (dh fMRI, diffusions MRI, tractography-MRI, etc.), Positronen - Emissions - Tomographie (PET), ultraschallbasierte Bildgebung, und andere haben sicherlich unsere allgemeinen Ansatz geändert, wie neurologische und psychiatrische Patienten zu diagnostizieren und zu heilen. Nichtsdestoweniger, obgleich bildgebender Verfahren in der Lage, das Gehirn eines Menschen zu visualisieren, wenn alive, sie nicht die Möglichkeit bieten, bei dem auftretende Moment, um direkt die hoch komplizierten zellulären und subzellulären Strukturen der Zellen, wie Neuronen zu analysieren; oder zu visualisieren, zu kennzeichnen, und bestimmte Arten von intrazellulären Läsionen zu quantifizieren; oder genau zu zeigen, ihre neuroanatomische oder subregionalen Lokalisierung an circuital und sub-circuital anatomischen Ebenen. So kann beispielsweise bildgebende Verfahren nicht identifizieren oder Lewy-Körperchen (LB) in pigmentierten Neuronen der Substantia Nigra (SN), ein gemeinsames pathologisches Merkmal lokalisieren mit PD assoziiert, oder Neurofibrillen (NFT) im entorhinalen Kortex, ein klassisches Merkmal von AD und andere Hirnerkrankungen. Neuropathological Untersuchungen mit modernsten digitalen Mikroskopie kombiniert sind immer noch unersetzbar für detaillierte klinisch-pathologischen Korrelationen und damit für die endgültige Diagnosen. Wegen der eigentümlichen anatomo funktionellen Eigenschaften des menschlichen Gehirns und insbesondere seiner anatomischen Lokalisation (das heißt, innerhalb des Schädels, ein Naturschutzsystem , das nicht die direkte Prüfung ihres Inhalts nicht erlaubt), die Einführung von in vivo bildgebenden Verfahren haben außerordentlich geholfen, Kliniker und Forscher erste Antworten auf einige der Geheimnisse dieses komplexen Gewebe zu finden. Allerdings gibt es keine klinischen oder neuroimaging Methodik, die die einmalige Gelegenheit, ersetzen kann, um direkt Hirngewebe während einer Autopsie zu analysieren. Nur die organisierte Sammlung, Erhaltung und Kategorisierung von menschlichen Gehirnen können direkte und systematische Untersuchungen von neuronalen und nicht-neuronalen Zellen, deren subzelluläre Bestandteile, intra- und extrazellulären pathologischen Veränderungen erlauben, und jede Art von Anomalie im Inneren des Gehirns, um zu bestätigen, zu ändern oder klinischen Diagnosen neu zu definieren und neue klinisch-pathologischen Korrelationen zu entdecken. Einer der offensichtlichen Grenzen der Beurteilung des Gehirns bei der Autopsie wurde über die Tatsache, dass dieses Verfahren eine Schnittmethodik ist. Es wird immer eine Verzögerung zwischen einem laufenden neuropathologischen Prozess sein (klinisch manifestiert oder nicht) und die Möglichkeit, falls überhaupt, ist es am neurohistologischer Ebene zu definieren. Dies ist vor allem auf die Unfähigkeit des menschlichen Gehirns, sich zu regenerieren. Es ist derzeit nicht möglich , Hirngewebe in vivo zu erhalten , ohne die Schaffung permanent Schaden. Folglich ist es nicht möglich, in Längsrichtung und neuropathologisch die gleiche Gehirn / Person zu beurteilen. Allerdings könnte standardisierte Gehirn Bankverfahren und ein erhöhtes Bewusstsein für die Gehirnspende in der breiten Öffentlichkeit in hohem Maße zur Auflösung von Gehirn-Autopsie Timing-Probleme beitragen, indem sie konsequent die Zahl der Fälle zu erhöhen zu sammeln und zu analysieren. Auf diese Weise könnte eine ausreichende Anzahl von post mortem Gehirnen erhalten werden konstanten Muster pathologischer Herkunft und Entwicklung für jeden spezifischen Typ von Hirnläsion mit jedem menschlichen Gehirnerkrankung assoziiert zu definieren. Dies würde erfordern, Spende und Sammlung von so viele Gehirne wie möglich von Patienten durch eine neuropsychiatrische Störung betroffen sind, sowie von gesunden Kontrollpersonen in allen Altersgruppen. Eine mögliche Methode könnte so viele postmortale Gehirne wie möglich von allgemeinen und spezialisierten medizinischen Zentren als Standard Routine werden zu sammeln. Die Notwendigkeit für die Gehirn Spenden wurde kürzlich zum Ausdruck gebrachtvon denen , die Demenz und der normalen Alterung 6 studieren. Die gleiche Notwendigkeit sollte von der neuropsychiatrischen Feld als Ganzes ausgedrückt werden. Für die oben genannten und aus anderen Gründen, ist ein Update der laufenden Gehirn Schneidverfahren erforderlich. Darüber hinaus sollte über sein Verfahren Gehirn Schneiden verschiedener Neuropathologie Forschungszentren auf der ganzen Welt allgemein standardisiert, auch die Möglichkeit, in Berücksichtigung aktuelle und zukünftige biotechnologische Techniken zu verwenden, um besser zu untersuchen und, hoffentlich, um endgültig zu verstehen, die Ursachen und Mechanismen von Hirnerkrankungen in Menschen. Hier hauptsächlich für Forschungszwecke beschreiben wir eine symmetrische Methode zur postmortalen Hirn beim Menschen zu schneiden. Dieses Verfahren schlägt mehr Hirnregionen zu sammeln, als dies normalerweise getan und von beiden zerebralen Hemisphären und des Kleinhirns. Eine symmetrische bi-hemisphärische Gehirnschneidverfahren passt viel besser mit unseren derzeitigen Kenntnissen der menschlichenNeuroanatomie, Neurochemie und Neurophysiologie. Diese Methode ermöglicht es auch die Möglichkeit, die einzigartigen Eigenschaften des menschlichen Gehirns, wie hemisphärische Spezialisierung und Lateralisierung neuropathologisch zu analysieren, die mit höheren kognitiven und nicht-kognitiven Funktionen in der Regel oder ausschließlich in unserer Spezies zugeordnet sind. Ob es bestimmte pathogene Beziehungen zwischen hemisphärischen Spezialisierung / lateralization und bestimmte Arten von Hirnläsionen oder ob eine besondere neuropsychiatric pathogenetische Ereignis ist anfänglich vorwiegend oder ausschließlich mit einem bestimmten Halbkugel und der Funktion zugeordnet ist derzeit nicht bekannt. Durch die Beschreibung dieses symmetrischen Gehirn Schneidverfahren streben wir eine aktualisierte Methode des menschlichen Gehirns Dissektion vorzuschlagen, die besser helfen könnte, zu normalen und pathologischen Bedingungen in einem hoch spezialisierten Gewebe zu verstehen, das Gehirn. Diese Methode berücksichtigt auch diese morphologisch-funktionellen hemisphärischen Aspekte, die beim Menschen nur existieren.

<table><tbody><tr><td>Kopie der unterschriebenen Einverständniserklärung, die eine Autopsie und Hirnspende zu Forschungszwecken erlaubt.</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Detaillierte klinische Anamnese des Probanden, die eine detaillierte Beschreibung aller neurologischen und psychiatrischen Symptome und Anzeichen enthalten sollte.</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Medizinische oder nicht-medizinische Videoaufzeichnungen, sofern verfügbar (besonders nützlich im Bereich Bewegungsstörungen). Nächste Angehörige Zustimmung des Eigentümers erforderlich.</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Neuroimaging, Neurophysiologie, Neuropsychiatrie und Bewertung oder klinisch-metrische Skalen.</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Genetische und familiengeschichtliche Daten. Genetische Berichte überprüfen, ob neurogenetische Erkrankungen diagnostiziert wurden.</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Histologie-Behälter</td><td>ELEKTRONENMIKROSKOPIE SCIENCES</td><td>64233-24</td><td></td></tr><tr><td>Histologie-Kassetten</td><td>VWR</td><td>18000-142 (orange)</td><td></td></tr><tr><td>Histologie-Kassetten</td><td>VWR</td><td>18000-132 (marine)</td><td></td></tr><tr><td>Messergriffe und Einwegklingen</td><td>ELEKTRONENMIKROSKOPIE</td><td>62560-04</td><td></td></tr><tr><td>Lange Klingen</td><td>ELEKTRONENMIKROSKOPIE SCIENCES</td><td>62561-20</td><td></td></tr><tr><td>Einweg-Klingen-Messergriffe</td><td>ELEKTRONENMIKROSKOPIE</td><td>SCIENCES 72040-08</td><td></td></tr><tr><td>Skalpellklingen</td><td>ELEKTRONENMIKROSKOPIE WISSENSCHAFTEN</td><td>72049-22</td><td></td></tr><tr><td>Accu-Punch 2 mm</td><td>ELEKTRONENMIKROSKOPIE WISSENSCHAFTEN</td><td>69038-02&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Behälter aus Polystyrol &ndash; Steriles</td><td>ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES</td><td>64240-12</td><td></td></tr><tr><td>Präparierbrett</td><td>ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES</td><td>63307-30</td><td></td></tr><tr><td>Formalinlösung, neutral gepuffert, 10%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>HT501128 SIGMA</td> Hämatoxylinlösung<td></td></tr><tr><td>, Kieme Nr. 2</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>GHS280&nbsp; SIGMA</td><td></td></tr><tr><td>Eosin Y-Lösung, wässrig</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>HT1102128&nbsp; SIGMA</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Beta-Amyloid</td><td>Covance, Princeton, NJ</td><td>SIG-39220</td><td>1:500</td></tr><tr><td>Anti-Tau</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>MN1020</td><td>1:500</td></tr><tr><td>Anti-Alpha-Synuclein</td><td>Abcam</td><td>ab27766</td><td>1:500</td></tr><tr><td>Anti-Phospho-TDP43</td><td>Cosmo Bio Co.</td><td>TIP-PTD-P02</td><td>1:2000</td></tr><tr><td>Digitalkamera</td><td></td> Impulsversiegelungsmaschine für jeden <td></td><td></td></tr><tr><td>Kopf</td><td>Grainger</td><td>5ZZ35</td><td></td></tr></tbody></table>

symmetrische bihemispheric postmortem gehirn schneiden gesund und krankhafte gehirnbedingungen beim menschen zu studieren

Symmetric Bihemispheric Postmortem Brain Cutting to Study Healthy and Pathological Brain Conditions in Humans

Neuropathologen, zu Zeiten, fühlen sich von der Menge an Wissen eingeschüchtert benötigt definitive Diagnosen für komplexe neuropsychiatrische Phänomene bei Patienten beschrieben, zu erzeugen, für die ein Gehirn Autopsie angefordert wurde. Obwohl die Fortschritte der biomedizinischen Wissenschaften und bildgebenden Verfahren der neuropsychiatrischen Bereich revolutioniert haben, haben sie erzeugt auch die irreführende Vorstellung, dass Gehirn Autopsien nur einen Zweitwert haben. Diese falsche Idee schuf eine drastische Reduzierung der Autopsie Raten und damit eine reduzierte Möglichkeit detaillierter und umfangreiche neuropathologische Untersuchungen durchzuführen, die zahlreichen normalen und pathologischen Aspekten noch unbekannt des menschlichen Gehirns zu verstehen, notwendig sind. Die traditionelle folgernd Methode der Korrelation zwischen den beobachteten neuropsychiatrischen Phänomene und entsprechenden Lokalisierung / Charakterisierung ihrer möglichen neurohistologische Korrelate weiterhin einen unbestreitbaren Wert zu haben. Im Kontext der neuropsychiiatrischen Krankheiten, ist die traditionelle Methode clinicopathological noch die bestmögliche Methode (und oft auch die einzige verfügbare) eindeutige neuropsychiatric Funktionen auf die entsprechenden neuropathologischen Substrate zu verbinden, da sie speziell auf die direkte körperliche Untersuchung von Hirngewebe beruht. Die Beurteilung der postmortalen Gehirn basiert auf Gehirn Verfahren Schneiden, die über verschiedene Neuropathologie Zentren variieren. Gehirn-Stecklinge werden in einer relativ umfangreichen und systematischen Art und Weise auf der Grundlage der verschiedenen klinischen und akademischen Eventualitäten, die in jeder Einrichtung durchgeführt. Eine anatomisch inklusiven und symmetrische bi-hemisphärische Gehirnschnitt Methodik sollte zumindest für die Forschung in der menschlichen Neuropathologie verwendet werden , um spezifische kohärent zu untersuchen, in der Tiefe, normalen und pathologischen Bedingungen mit den Besonderheiten des menschlichen Gehirns (dh hemisphärische Spezialisierung und lateralization Funktionen). Ein solches Verfahren einen umfassen colle würdection von neuropathologisch gut charakterisierte Gehirne für aktuelle und zukünftige biotechnologische und bildgebenden Verfahren. Wir beschreiben eine symmetrische bi-hemisphärische Gehirnschneidverfahren für die Untersuchung der hemisphärischen Unterschiede in der menschlichen Hirnerkrankungen und für die Verwendung mit aktuellen sowie zukünftigen biomolekularen / bildgebende Verfahren.

Protokoll Länge Die Zeit für einen einzigen symmetrischen bihemispheric festen Gehirn Schneidvorgang ausgegeben wird , auf 1 h geschätzt (ohne Zeit damit verbracht die Einrichtung der Seziertisch, Werkzeuge und Schneidflächen; Kennzeichnung;. Usw.). Die benötigte Zeit für eine einzelne symmetrische bi-hemisphärische abwechselnd gefroren und fixiert Gehirn Verfahren Schneiden wird geschätzt, 2 h zu nehmen. 6 Wochen für ei...

Organisiert Gehirn Schneidverfahren sind erforderlich, spezifische neuropsychiatrischen Phänomene mit endgültiger neuropathologischen Diagnosen zu korrelieren. Gehirn-Stecklinge werden unterschiedlich durchgeführt auf der Grundlage verschiedener klinisch-akademischen Eventualitäten. Dieses Protokoll beschreibt ein symmetrisches Verfahren bihemispheric Hirnschnitt hemisphärischen Unterschiede in der menschlichen Hirnerkrankungen zu untersuchen und zu aktuellen und zukünftigen biomolekularen / bildgebende Verfahren zu maximieren.

Symmetrische Bihemispheric Postmortem Gehirn Schneiden Gesund und krankhafte Gehirnbedingungen beim Menschen zu studieren

Neuropathologists, at times, feel intimidated by the amount of knowledge needed to generate definitive diagnoses for complex neuropsychiatric phenomena ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens besteht darin, systematisch eine konstante Serie zerebraler Regionen zu sammeln und zu analysieren, die symmetrisch aus beiden Hemisphären des menschlichen Gehirns präpariert wurden, um Schweregrad, klinisch-pathologische Stadieneinteilung und hemisphärische Verteilung verschiedener Hirnerkrankungen zu beurteilen. Diese Methode kann helfen, zentrale Fragen im Bereich der Neuropathologie zu beantworten, indem sie eine systematisch geordnete Sammlung qualitativer und quantitativer neuropathologischer Daten für detaillierte klinisch-pathologische und bildgebend-pathologische Korrelationen bereitstellt. Der Hauptvorteil dieser Technik liegt darin, relevante Daten sowohl zu den pathologischen Prozessen an sich als auch zum histofunktionellen Spezialisierungsaspekt jeder einzelnen Gehirnhemisphäre zu liefern.Nach der Fixierung von postmortalen menschlichen Gehirngeweben gemäß dem Textprotokoll das Gehirn mit den Frontalpolen vom Untersucher weggerichtet auf eine ebene Fläche legen. Das Gehirn so ausrichten, dass alle kortikalen Gyri und Sulci des gesamten Großhirns vollständig und deutlich sichtbar sind. Das Gewebe auf meningeale Auffälligkeiten,

symmetric-bihemispheric-postmortem-brain-cutting-to-study-healthy

Research

Forschung

JoVE Journal

Medicine

Medizin

Dieses Video demonstriert eine Technik zur Herstellung von frei schwebenden Schnittkulturen aus dem erwachsenen menschlichen Gehirn. Dünne Scheiben werden mit Hilfe eines Vibratoms aus einem Gehirnschnitt erzeugt. Diese Scheiben werden dann in einem Kulturmedium suspendiert, das mit Wachstumsfaktoren ergänzt ist, um die Lebensfähigkeit des Gewebes zu erhalten.

Präparation frei schwebender Schnittkulturen aus einem erwachsenen menschlichen Gehirn

Das Video zeigt ein Schritt-für-Schritt-Verfahren zum symmetrischen Präparieren eines fixierten postmortalen menschlichen Gehirns und bereitet kleinere Gewebeblöcke für die weitere Analyse vor.

Symmetrische bihemisphärische Schnitte des menschlichen postmortalen Gehirns

Primär disassoziierte embryonale Hippocampus-Neuronalkulturen sind nützlich, um die Signalmechanismen zu untersuchen, die am Neuronentod beteiligt sind. Die Geschlechtsbestimmung der Embryonen vor der Isolierung und Dissoziation des Hippocampus ermöglicht die Herstellung separater männlicher und weiblicher Kulturen, was es dem Forscher ermöglicht, geschlechtsspezifische Zellsignale zu identifizieren und zu untersuchen.

Geschlechtsstratifizierte neuronale Kulturen zur Untersuchung des ischämischen Zelltods

Mit Hilfe von MRT-Scans (Mensch), 3D-Bildgebungssoftware und immunhistologischer Analyse dokumentieren wir Veränderungen an den Seitenventrikeln des Gehirns. Die longitudinale 3D-Kartierung von Volumenänderungen des lateralen Ventrikels und die Charakterisierung periventrikulärer zellulärer Veränderungen, die im menschlichen Gehirn aufgrund von Alterung oder Krankheit auftreten, werden dann an Mäusen modelliert.

3D-Modellierung der Seitenventrikel und histologische Charakterisierung Periventrikuläre Tissue in Mensch und Maus

Hier präsentieren wir ein Protokoll zur Bestimmung der minimalen Anzahl von Bildern, die registriert und gemittelt werden mussten, um subkortikale Strukturen aufzulösen und zu testen, ob die einzelnen Schichten des LGN ohne physiologisches Rauschen aufgelöst werden können.

Hochauflösende Strukturkernspintomographie des menschlichen Subcortex<I&gt; In-vivo-</I&gt; Und Postmortem

Wir beschreiben die Verwendung von Laser Capture Microdissection Proben unterschiedliche Zellpopulationen aus verschiedenen Gehirnregionen für gen- und MicroRNA Analyse zu erhalten. Diese Technik ermöglicht die Untersuchung der unterschiedlichen Auswirkungen von traumatischen Hirnverletzungen in bestimmten Regionen des Gehirns Ratte.

Stereotaktische Atlas-geführte Laser Capture Microdissection Hirnregionen von traumatischen Verletzungen betroffen

Dieses Papier zeigt den effektiven Einsatz einer Faser Dissektion Methode, die oberflächliche weiße Angelegenheit Flächen zu offenbaren und periventrikulären Strukturen des menschlichen Gehirns, im dreidimensionalen Raum, um Schüler Verständnis der ventrikulären Morphologie zu unterstützen.

Erkunden Deep Space - Aufdeckung der Anatomie der periventrikulären Strukturen, die seitlichen Ventrikel des menschlichen Gehirns zu offenbaren

Dieser Artikel beschreibt eine detaillierte Methode abgeflachten tangential Abschnitte von Säugetieren Cortex und kortikalen Module mit histochemische und immunhistochemischen Methoden zu visualisieren.

Visualisierung der kortikalen Module in abgeflachten Säugetier-Rinde

Multiple Sklerose ist eine entzündliche demyelinisierende Krankheit ohne Heilung. Die Analyse von Hirngewebe liefert wichtige Hinweise auf das Verständnis der Pathogenese der Krankheit. Hier diskutieren wir die Methodik und die nachgelagerte Analyse von MS-Gehirngewebe, das durch ein einzigartiges Schnellautopsieprogramm in der Cleveland Clinic gesammelt wurde.

Umfassendes Autopsieprogramm für Personen mit Multipler Sklerose

Dieses Protokoll beschreibt eine Methode, um einzelne Gehirn-Aging-Trajektorien durch ein Gehirn-Spenden-Programm und die richtige Charakterisierung des Gehirns zu verfolgen. Hirnspender sind an einer langfristigen Längs-Langzeitstudie beteiligt, einschließlich serieller multidimensionaler Bewertungen. Das Protokoll enthält eine detaillierte Beschreibung der Gehirnverarbeitung und eine genaue Diagnosemethodik.

Abbiategrasso Brain Bank Protocol zum Sammeln, Verarbeiten und Charakterisieren alternder Gehirne

Wir präsentieren ein praktisches, schrittweises, schnelles Protokoll für die Entfernung und Dissektion diskreter Regionen aus frischem Hirngewebe von Mäusen. Die Gewinnung von Hirnregionen für molekulare Analysen ist in vielen neurowissenschaftlichen Laboren zur Routine geworden. Diese Gehirnregionen werden sofort eingefroren, um qualitativ hochwertige transkriptomische Daten für die Analyse auf Systemebene zu erhalten.

Mikrodissektion des Mausgehirns in funktionell und anatomisch unterschiedliche Regionen

Erfahren Sie die symmetrische bihemisphärische Hirnschnitttechnik zur Untersuchung von Hirnerkrankungen beim Menschen. Diese Methode liefert qualitative und quantitative neuropathologische Daten für klinische und bildgebende Korrelationen.

Symmetrische Bihemispheric Postmortem Gehirn Schneiden Gesund und krankhafte Gehirnbedingungen beim Menschen zu studieren

Weitere Videos entdecken