Name: Lateral Chronic Cranial Fenster Vorbereitung Ermöglicht In Vivo Beobachtung Nach Artery Occlusion Distal cerebri bei Mäusen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-12-29T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 41 s
Description: Erfahren Sie die Präparation eines lateralen kranialen Fensters mit permanenter MCAo bei Mäusen. Diese Methode ermöglicht longitudinale Intravitalmikroskopie zur Untersuchung akuter und chronischer Veränderungen nach Schlaganfall.

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VP ist Teilnehmer des Charité Clinical Scientist Program, das von der Charité - Universitätsmedizin Berlin und dem Berlin Institute of Health finanziert wird. TB ist Stipendiatin des SNF PostDoc Mobility. Die Autorinnen und Autoren erhalten eine Förderung durch die EinsteinStiftung/A-2012-153 an PV.

ETHIK STATEMENT: Experimente mit Versuchstieren wurden in Übereinstimmung mit den Richtlinien und Vorschriften her durch Landes fuer Gesundheit und Soziales, Berlin, Deutschland (G0298 / 13) und den ANKOMMEN Kriterien durchgeführt, soweit zutreffend. Für diese Studie wurden 10 bis 12 Wochen alte männliche C57BL / 6J-Mäuse wurden verwendet. 1. Seitliche Chronische Cranial Fenster Vorbereitung <ol><li> Führen Anästhesie mit einer subkutanen Injektion von Ketamin (90 mg / kg) und Xylazin (10 mg / kg). Test für eine ausreichende Sedierung mit einem Schmerzreiz. </li><li> Sterilisieren der chirurgischen Instrumente und OP-Feld mit 70% Ethanol. </li><li> Entfernen Sie die Kopfhaare vom Hals bis zu den Augen ein Nagetier Rasierer. </li><li> Befestigen Sie den Kopf in einem stereotaktischen Rahmen. </li><li> Verwenden Sie Dexpanthenol Augensalbe auf beiden Augen Austrocknung zu vermeiden. </li><li> Reinigen Sie den OP-Bereich alle Haare zu entfernen und zu sterilisieren es mit drei Schichten von 74,1% Ethanol und 10% 2-Propranolol. </li><li> Führen Sie eine MittellinieInzision vom Hals bis zu den Augen unter Verwendung eines Skalpells. </li><li> Umspannen den Hautlappen mit 4 Ausbeulung Nähten. </li><li> Entfernen Sie die Periost vorsichtig auf der linken Hemisphäre, indem Sie sie mit einem Skalpell zu dem Punkt, Schaben, wo der Schläfenmuskel beginnt. ANMERKUNG: Diese Zubereitung dient auch eine gute Haftfläche für das Dentalkleber zu schaffen, die das Deckglas fixiert. </li><li> Durchführen einer fronto-parietalen Kraniotomie mit einem Durchmesser von 4 mm durch den Schädel an dem Rand der Knochenlappen Dünnung eines Mikrobohrers verwendet wird. Bewerben Salzlösung während des Bohrens Hitze Verletzungen zu vermeiden. </li><li> Elevate den Knochendeckel mit Kanülen und entfernen Sie sie microforceps verwenden. </li><li> Spülen Sie sorgfältig und ausgiebig mit Kochsalzlösung. </li><li> Mischen Sie die Dentalkleber , bis er die richtige Konsistenz hat und nicht Flüssigkeit (dh sollte der Kleber nicht produzieren Fäden mehr). Legen Sie es auf den Knochen um die Kraniotomie. </li><li> Legen Sie ein Deckglas mit einem 6-mm Durchmesser auf dem vorbereiteten Kleber und fixieren Sie es mit the Rest des Dentalkleber. Achten Sie darauf, dass es wasserdicht ist. Warten Sie, bis der Kleber getrocknet und hart indem sie sie mit einer Pinzette zu testen. HINWEIS: Eine zusätzliche Bewässerung beschleunigt die Aushärtung. </li><li> Entfernen Sie die Ausbeulung Nähte und schließen Sie die Wunde mit Hautnähte. </li><li> Ziehen Sie die Haut von der Flanke der Maus nach oben. Legen Sie eine Nadel subkutan und ersetzen sanft 0,5 ml steriler Kochsalzlösung subkutan für den Flüssigkeitshaushalt. </li><li> Nach der Operation bleiben die Tiere im beheizten Erholungskäfig für 90 min. Warten Sie, bis die Tiere, bevor sie vollständig wach sind verlassen sie unbeaufsichtigt. Warten Sie, bis die Tiere vollständig zurückgewonnen werden, bevor sie in einen Käfig mit anderen Tieren zurück. </li><li> Wiederholen Sie die subkutane Salzvolumensubstitution nach etwa 12 Stunden, wie in Schritt 1.16 beschrieben. </li><li> Immer anwenden Analgesie über eine Magensonde oder direkt in die Mundhöhle nach der Operation (zB Paracetamol (10 mg / ml) oder andere nicht-steroidale Antirheumatika). </li><li> Überprüf den<html> Zustand der jeden Tag nach der Operation Tiere, und immer auf dem Boden Tierfutter in einer Petrischale püriert bieten Essen einfach zu machen und kritische Gewichtsverlust nach der Operation zu vermeiden. HINWEIS: Intravitalmikroskopie kann am ersten Tag nach dem Schädelfenster Vorbereitung durchgeführt werden. </li><li> Bewerben Isofluran-Narkose und befestigen Sie das Tier in einem Kopfhalter. Öffnen Sie die Hautnaht und reinigen Sie das Fenster mit Wattestäbchen und steriler Kochsalzlösung. Nach 24 Stunden sollte das kraniale Fenster mit Zerebrospinalflüssigkeit von diesem Zeitpunkt gefüllt werden, die Bildgebung ermöglicht. Führen Bildgebung durch etablierte Mikroskopie - Protokolle 18. </li></ol> 2. Distal MCAo HINWEIS: Die MCAo Verfahren sollte etwa 5 d nach CW Vorbereitung durchgeführt werden. Dies minimiert die Interferenz von der Immunreaktion durch die CW-Zubereitung mit dem Hub-induzierte Immunreaktion verursacht. &quot;Src =&quot; / files / ftp_upload / 54701 / 54701fig1.jpg &quot;/&gt; Abbildung 1. Übersicht über die Distal MCAo. A. Dies ist eine schöne Übersicht über die Gefäße vor dem op. B. Die Gefäße nach dem ersten bipolaren Kontakt. C. Die Gefäße nach der zweiten bipolaren Kontakt. D. Die Übersicht über die Schiffe, die nun vollständig geschlossen sind. E. Abschließende Übersicht mit geringerer Vergrößerung. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54701/54701fig1large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier</a> , um <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54701/54701fig1large.jpg" target="_blank">eine größere Version dieser Figur zu sehen.</a> <ol><li> Betäuben die Mäuse eine Narkosemaske und eine angemessene Betäubung Regime, in Beratung mit Tierärzten (zB Induktion mit 1,5 bis 2% Isofluran und Wartung mit 1,0 bis 1,5% Isofluran in 2/3 N 2 O und 1/3 O 2 über einen Verdampfer). </li><li> Rasur und entfernen Sie die Haare und desinfizieren die Haut und die umliegenden Fell mit einem geeigneten Mittel (zB 70% Ethylalkohol) und trocknen Sie es danach. </li><li> Aufrechterhaltung der Körpertemperatur der Mäuse bei 36,5 ° C ± 0,5 ° C während der Operation. Eine Rückkopplung gesteuert Heizkissen, erhitzt nach der Rektaltemperatur der Maus, ist sehr zu empfehlen. </li><li> Legen Sie das Tier in der Seitenlage. Befestigen Sie die Nase in der Narkosemaske und stellen Sie die Isofluran-Konzentration auf 1,0 bis 1,5%. </li><li> Tragen Sie nass-Salbe (Dexpanthenol) für beide Augen. </li><li> Verwenden Sie den Hautschnitt für die CW-Vorbereitung gemacht. </li><li> trennen die Haut sanft und identifizieren unterhalb des Schläfenmuskel. </li><li> Stellen Sie die Energie des Hochfrequenzgenerators (5 bis 7 W) und den bipolaren Modus verwenden. </li><li> Verwenden Sie die Elektrokoagulation einer Pinzette vorsichtig die Schläfenmuskel aus dem Schädel zu entfernen, einen Muskellappen zu schaffen, ohne völlig den Muskel zu entfernen. </li><li> Identifizieren Sie den MCA unter der transparenten Schädel im rostralen Teil des Schläfenbereich, dorsal der retro Orbital Sinus. Wenn der MCA Bifurkation nicht identifiziert werden kann, versuchen Sie das Schiff die meisten rostral zu identifizieren. </li><li> Dünne der Schädel über dem MCA Zweig mit einem Mikrobohrer, während kontinuierlich Hitzeschäden zu vermeiden Bewässerung. </li><li> Heben Sie den Knochen mit Kanülen und entfernen Sie sie mit microforceps. </li><li> Verringern die Energie des Hochfrequenzgenerators auf 3 bis 5 W. </li><li> Nähern Sie sich die Arterie von oben und sanft berühren mit der bipolaren Pinzette auf beiden Seiten, ohne das Schiff zu heben. </li><li> Koagulieren der Arterie proximal und distal zu der Gefäßverzweigung. </li><li> Warten für 30 Sekunden, und dann um die Arterie sanft berühren, um sicherzustellen, dass der Blutfluss dauerhaft unterbrochen wird. Wiederholen Sie die Elektrokoagulation, wenn ein Rekanalisation beobachtet wird. </li><li> Befestigen Sie den Schläfenmuskel mit 1 oder 2 Stiche am Muskelansatz den Knochendefekt zu bedecken, wenn möglich. </li><li> Nähen Sie die Wunde und legen Sie das Tier in die erhitzte Rückgewinnungskasten. Im Allgemeinen Tiere Erholung schnell nach dem flüchtigen anesthesia. </li><li> Für Volumensubstitution gelten 0,5 ml steriler Kochsalzlösung subcutan, wie in Schritt 1.16 beschrieben. </li><li> Nach der Operation lassen sich die Tiere für 90 min im beheizten Erholungskäfig zu bleiben. Warten Sie, bis die Tiere bewusst sind, bevor sie unbeaufsichtigt lassen. Nur bringt sie mit anderen Tieren zu einem Käfig, wenn sie vollständig wiederhergestellt werden. </li><li> Wiederholen Sie die Volumensubstitution, wie in Schritt 1,16, nach 12 h erläutert. </li><li> Bewerben postoperativen Analgesie über das Trinkwasser (zB Paracetamol (10 mg / ml) oder andere nicht-steroidale Antirheumatika). </li><li> Überprüfen Sie den medizinischen Zustand der jeden Tag nach der Operation Tiere. Geben Sie püriert Tierfutter in einer Petrischale auf dem Boden essen zu vereinfachen und postoperativen Gewichtsverlust zu minimieren. </li></ol> 3. Sham-Behandlung <ol><li> Führen Sie alle identisch zu den Schritten 1 und 2 beschrieben oben einschließlich CW Vorbereitungs ausnehmen nicht die exponierten cerebri ar gerinnenrie. </li></ol>

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Die Autoren haben nichts offenzulegen.

Der Schlaganfall ist unter den Hauptursachen für langfristige Behinderung und Tod weltweit 1. Jenseits der Akutbehandlung, neue Ansätze und Mechanismen zu untersuchen Genesung nach einem Schlaganfall zu beschleunigen und zu verbessern bleibt ein erstklassiges medizinisches Ziel 7. Experimentelle Schlaganfall Forscher häufig Nagetiermodellen von fokaler zerebraler Ischämie beschäftigen. In der Tat, Modelle vorübergehend oder bleibend MCAo induzieren imitieren eine der häufigsten Arten von fokaler ze...

Schlaganfall gehört weltweit zu den Hauptursachen für langfristige Behinderung und Tod1 und steht nach der koronaren Herzkrankheit an zweiter Stelle. Darüber hinaus ist der Schlaganfall die Hauptursache für langfristige Behinderungen, was seine enormen sozioökonomischen Auswirkungen unterstreicht6-8. Über die Akutbehandlung hinaus bleibt die Erforschung neuer Ansätze und Mechanismen zur Beschleunigung und Verbesserung der Genesung nach einem Schlaganfall ein vorrangiges medizinisches Ziel7. 
In den letzten Jahrzehnten haben Daten aus der experimentellen Schlaganfallforschung wesentlich zum Verständnis der komplexen pathophysiologischen Kaskaden beigetragen, die durch Ischämie ausgelöst werden9,10. Exzitotoxizität, Apoptose, Periinfarkt-Depolarisation und Entzündung wurden als die wichtigsten Mediatoren des Zelltods nach fokaler zerebraler Ischämie identifiziert. Darüber hinaus wurden anhand von Tiermodellen der zerebralen Ischämie wichtige Konzepte, diagnostische Modalitäten und Therapieansätze entwickelt und validiert (z. B. "Penumbra" und Thrombolyse)11.
Die Verfügbarkeit von experimentellen Schlaganfallmodellen, kombiniert mit nicht-invasiven bildgebenden Verfahren (z.B. Magnetresonanztomographie (MRT), Computertomographie oder Laser-Speckle-Kontrastanalyse), ermöglicht es dem Forscher, hyperakute und chronische pathophysiologische Veränderungen, die durch den ischämischen Insult induziert werden, longitudinal zu untersuchen12. Neben der Untersuchung des raumzeitlichen Profils der sich entwickelnden Läsion können Veränderungen, die der neuronalen Plastizität ähneln, untersucht und mit funktionellen Ergebnissen und histologischen Befunden korreliert werden. In den letzten Jahren wurden weitere methodische Fortschritte mit der Kombination von zerebralen Ischämiemodellen und in vivo-Mikroskopie über kraniale Fenstererzielt 13. Diese neuen Techniken ermöglichen es den Forschern, die neurovaskuläre Einheit auf zellulärer und molekularer Ebene zu analysieren, mit großer analytischer Leistung in der akuten, subakuten und chronischen Phase nach fokaler zerebraler Ischämie14. Darüber hinaus hat die In-vivo-Mikroskopie der mikrozirkulatorischen Dynamik neue Aspekte der zerebralen Mikrovaskulaturfunktion und der Angioarchitektur mit signifikanter pathophysiologischer Relevanz aufgedeckt15-17. 
In diesem Protokoll stellen wir vor, wie man ein chronisches CW-Präparat lateral des sagittalen Sinus durchführt und wie man chirurgisch einen distalen Schlaganfall unter dem Fenster induziert. Dieses Mausmodell kann für die sequentielle Bildgebung von akuten, subakuten und chronischen Veränderungen nach fokaler zerebraler Ischämie mittels epi-illuminativer, konfokalem Laserscanning und Zwei-Photonen-Intravitalmikroskopie eingesetzt werden.

<table><tbody><tr><td>Binokulares Operationsmikroskop</td><td>Zeiss</td><td>Stemi 2000 C</td><td></td></tr><tr><td>Lichtquelle für Mikroskop</td><td>Zeiss</td><td>CL 6000 LED</td><td></td></tr><tr><td>Heizkissen mit Rektalsonde</td><td>FST</td><td>21061-10</td><td></td></tr><tr><td>Stereotaktischer Rahmen</td><td>Kopf</td><td>Modell 930</td><td></td></tr><tr><td>Anästhesiesystem für</td><td>Isofluran Draeger</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Isofluran</td><td>Abott</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dumont Pinzette #5</td><td>FST</td><td>11251-10</td><td></td></tr><tr><td>Dumont Pinzette #7</td><td>FST</td><td>11271-30</td><td></td></tr><tr><td>Bipolare Pinzette</td><td>Erbe</td><td>20195-501</td><td></td></tr><tr><td>Bipolare Pinzette&nbsp;</td><td>Erbe&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 20195-022</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mikrobohrmaschine</td><td>FST&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 18000-17&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Nadelhalter</td><td>FST</td><td>12010-14</td><td></td></tr><tr><td>5-0 Seidennaht</td><td>Feuerstein, Suprama</td><td></td><td></td></tr><tr><td>7-0 Seidennaht</td><td>Feuerstein, Suprama</td><td></td><td></td></tr><tr><td>8-0 Seidennaht</td><td>Feuerstein, Suprama</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Veterinärmedizinische Auffangkammer</td><td>Peco Services</td><td>V1200</td><td></td></tr></tbody></table>

lateral chronic cranial fenster vorbereitung ermöglicht in vivo beobachtung nach artery occlusion distal cerebri bei mäusen

Lateral Chronic Cranial Window Preparation Enables In Vivo Observation Following Distal Middle Cerebral Artery Occlusion in Mice

Fokaler zerebraler Ischämie (dh ischämischer Schlaganfall) verursachen kann schwere Hirnverletzung, zu einem schweren Verlust der neuronalen Funktion führen und damit zu einer Vielzahl von motorischen und kognitiven Behinderungen. Die hohe Prävalenz stellt eine ernste gesundheitliche Belastung, wie Schlaganfall zu den Hauptursachen für langfristige Behinderung und Tod weltweit 1 ist. Wiederherstellung der neuronalen Funktion ist in den meisten Fällen nur teilweise. Bisher sind Behandlungsmöglichkeiten sehr begrenzt, insbesondere aufgrund der engen Zeitfenster für die Thrombolyse 2,3. Die Bestimmung Methoden Erholung von Schlaganfall zu beschleunigen bleibt ein hervorragendes medizinisches Ziel; jedoch wurde dies durch eine unzureichende mechanistische Einblicke in den Recovery-Prozess behindert. Experimentelle Schlaganfall Forscher häufig Nagetiermodellen von fokaler zerebraler Ischämie beschäftigen. Jenseits der akuten Phase wird der Schlaganfallforschung an der subakuten und chronischen Phase nach einer zerebralen Ischämie zunehmend konzentriert. Die meisten Schlaganfall Forscher gelten permanent oder transient Verschluss der MCA bei Mäusen oder Ratten. Bei Patienten, Verstopfungen des MCA gehören zu den häufigsten Ursachen für einen ischämischen Schlaganfall 4. Neben proximalen Verschluss der MCA mit dem Glühfaden Modell, chirurgische Verschluss des distalen MCA ist wahrscheinlich die am häufigsten verwendete Modell in der experimentellen Schlaganfallforschung 5. Occlusion eines distalen (zur Verzweigung der lenticulo-Striatum Arterien) MCA Zweig erspart typischerweise das Striatum und betrifft vor allem die Neocortex. Gefäßverschluss können dauerhaft oder vorübergehend sein. Hohe Reproduzierbarkeit der Läsion Volumen und sehr niedrige Mortalitätsraten in Bezug auf die langfristige Ergebnis sind die wichtigsten Vorteile dieses Modells. Hier zeigen wir, wie eine chronische Hirn Fenster (CW) Vorbereitung lateral des Sinus sagittalis durchzuführen, und danach, wie chirurgisch zu einem distalen Hub unter dem Fenster induzieren eine Kraniotomie Ansatz. Dieser Ansatz kann über für sequentielle Abbildung von akuten und chronischen Veränderungen nach Ischämie angewendet werdenepi-Beleuchtung, konfokalen Laser-Scanning und Zwei-Photonen-Intravitalmikroskopie.

Die Zeitleiste und repräsentative Ergebnisse sind in den Abbildungen 2 und 3 dargestellt ist . Der kraniale Fenstervorbereitung, mit einem kleinen Fenster cranial lateral des Sinus sagittalis superior (Abbildung 2 B, C, D) führt zu einer sehr niedrigen Mortalität und Morbidität , wenn sie von einem erfahrenen Chirurgen durchgeführt. Alle 10 Tiere überlebten, und alle chronischen CW für qualitativ hochwertige Bildgebung verwendet werden k...

Chirurgische Verschluss eines distalen Arteria cerebri media Zweig (MCAo) ist ein häufig verwendetes Modell in experimentellen Schlaganfallforschung. Diese Handschrift beschreibt die grundlegende Technik der Dauer MCAo, mit der Einfügung eines seitlichen Schädelfenster kombiniert werden, die die Möglichkeit für eine Längsintravitalmikroskopie in Mäusen bietet.

Lateral Chronic Cranial Fenster Vorbereitung Ermöglicht In Vivo Beobachtung Nach Artery Occlusion Distal cerebri bei Mäusen

Focal cerebral ischemia (i.e., ischemic stroke) may cause major brain injury, leading to a severe loss of neuronal function and consequently to a host of ...

Das übergeordnete Ziel dieses Eingriffs ist die Präparation eines lateralen Schädelfensters in Kombination mit einem dauerhaften Verschluss der mittleren Hirnarterie. Zur Erleichterung der longitudinalen Intravitalmikroskopie bei Mäusen. Diese Methode kann helfen, zentrale Fragen im Bereich der zerebellären Ischämieforschung zu untersuchen und zu beantworten.Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass sie eine In-vivo-Bildgebung von akuten und chronischen Veränderungen nach einem Schlaganfall ermöglicht. Beginnen Sie mit der Verabreichung einer Anästhesie gemäß einem genehmigten Tierprotokoll. Stellen Sie sicher, dass eine chirurgische Anästhesieebene erreicht wurde, indem Sie einen Schmerzreiz verabreichen, z. B. einen Zehenkneifen, und das Fehlen einer Reaktion feststellen.Verwenden Sie anschließend einen Nagetierrasierer, um das Fell vom Hals bis zu den Augen zu entfernen. Fixieren Sie den Kopf der Maus in einem stereotaktischen Rahmen. Bedecken Sie dann die Augen mit einer Augensalbe, um eine Austrocknung zu verhindern.Reinigen Sie den rasierten Bereich, um alle Haare zu entfernen, und sterilisieren Sie die Kopfhaut mit drei Anwendungen von 74,1 % Ethanol und 10 % Propranolol. Machen Sie mit einem sterilen Skalpell einen Schnitt in der Mittellinie vom Hals bis zu den Augen. Überspannen Sie dann den Hautlappen mit vier Zeltnähten.Als nächstes kratzen Sie vorsichtig das Periost auf der linken Seite des Schädels ab. Und entfernen Sie es bis zu dem Punkt, an dem der Schläfenmuskel beginnt. Dünnen Sie nun mit einem Mikrobohrer den Schädel am Rand des Knochenlappens aus.Zur Erstellung einer frontoparietalen Kraniotomie mit einem Durchmesser von vier Millimetern. Tragen Sie beim Bohren Kochsalzlösung auf, um Hitzeverletzungen zu vermeiden. Nach dem Bohren den Knochenlappen mit Kanülen anheben und mit einer Mikrozange entfernen.Bewässern Sie die Fläche vorsichtig und ausgiebig mit Kochsalzlösung. Mischen Sie den Zahnkleber, bis er die richtige Konsistenz hat. Tragen Sie es dann auf den Knochen um die Kraniotomie auf.Legen Sie ein Deckglas mit einem Durchmesser von sechs Millimetern auf den vorbereiteten Kleber. Und fixieren Sie es mit dem restlichen Zahnkleber. Die Bewässerung beschleunigt den Aushärtungsprozess und sorgt dafür, dass die Versiegelung wasserdicht ist.Sondieren Sie den Zahnkleber mit einer Pinzette, um sicherzustellen, dass er getrocknet und hart ist. Nachdem der Kleber ausgehärtet ist, entfernen Sie die Zeltnähte und verschließen Sie die Wunde mit Hautnähten. Verabreichen Sie 0,5 Milliliter sterile Kochsalzlösung subkutan, um den Flüssigkeitshaushalt zu gewährleisten.Überwachen Sie das Tier nach der Operation in einem beheizten Aufwachkäfig, bis es sich von der Narkose erholt hat. Stellen Sie sicher, dass das Tier vollständig geborgen ist, bevor Sie es mit anderen Tieren in einen Käfig zurückbringen. Verabreichen Sie nach der Operation immer eine Analgesie.Hier werden dem Trinkwasser 10 Milligramm pro Milliliter Paracetamol zugesetzt. Geben Sie immer püriertes Tierfutter in eine Petrischale, die auf dem Boden steht, um das Essen zu erleichtern und einen kritischen Gewichtsverlust nach der Operation zu vermeiden. Die Intravitalmikroskopie kann am ersten Tag nach der Schädelfensterpräparation durchgeführt werden.Wenden Sie eine Isofluran-Anästhesie nach einem genehmigten Protokoll an. Befestigen Sie das Tier in einem Kopfhalter und stellen Sie sicher, dass der Nasenkonus richtig sitzt. Öffnen Sie die Hautnaht und reinigen Sie das Fenster mit Wattestäbchen und steriler Kochsalzlösung.Nach 24 Stunden sollte das Schädelfenster mit Liquor cerebrospinalis gefüllt werden, was eine Bildgebung ermöglicht. Führen Sie den Verschluss der mittleren Hirnarterie fünf Tage nach der Vorbereitung des Schädelfensters durch, wenn die Immunantwort auf den Eingriff zurückgegangen ist. Hier wird ein Überblick über die Kraniotomie zur MCAO-Induktion gezeigt.Das intraoperative Foto zeigt die Gefäße nach dem ersten und zweiten bipolaren Kontakt. Das distale MCA erscheint vollständig verschlossen. Dieses Bild gibt einen abschließenden Überblick mit geringerer Vergrößerung.Nachdem Sie wie zuvor eine chirurgische Anästhesie mit Isofluran eingeleitet haben, rasieren Sie das Fell im Bereich zwischen Auge und Ohr, tragen Sie eine Augensalbe auf beide Augen auf und desinfizieren Sie die Haut und das umgebende Fell wie zuvor mit Alkohollösung. Platzieren Sie die Maus auf einem rückkopplungsgesteuerten Heizkissen, um die Körpertemperatur zu halten. Bringen Sie das Tier in die Seitenlage und fixieren Sie die Nase in der Anästhesiemaske.Trennen Sie vorsichtig die Haut des Schnitts, der für die Vorbereitung des Schädelfensters gemacht wurde, und identifizieren Sie den darunter liegenden Schläfenmuskel. Stellen Sie als Nächstes die Energie des Hochfrequenzgenerators ein und verwenden Sie den bipolaren Modus. Verwenden Sie eine Elektrokoagulationszange, um den Schläfenmuskel vorsichtig vom Schädel zu heben, wodurch ein Muskellappen entsteht, ohne den Muskel vollständig zu entfernen.Identifizieren Sie dann die mittlere Hirnarterie unterhalb des transparenten Schädels im rostralen Teil des Schläfenbereichs. Dorsal des Sinus retroorbitalis. Dünnen Sie den Schädel über dem MCA-Ast mit einem Mikrobohrer aus, während Sie kontinuierlich spülen, um Hitzeschäden zu vermeiden.Heben Sie dann den Knochen an und entfernen Sie ihn mit einer Mikrozange. Verringern Sie die Energie des Hochfrequenzgenerators auf drei bis fünf Watt. Nähern Sie sich dann der Arterie von oben und berühren Sie sie vorsichtig mit der bipolaren Pinzette auf beiden Seiten, ohne das Gefäß anzuheben.Warten Sie dreißig Sekunden und berühren Sie dann die Arterie vorsichtig mit der Spitze der bipolaren Pinzette, um sicherzustellen, dass der Blutfluss dauerhaft unterbrochen wird. Nach dem MCA-Verschluss fixieren Sie den Schläfenmuskel mit ein oder zwei Stichen am Muskelansatz, um den Knochendefekt abzudecken. Nähen Sie dann die Wunde und legen Sie das Tier in den beheizten Käfig, bis es sich erholt hat.Dieses MRT wurde 24 Stunden nach der Scheinoperation durchgeführt und zeigt kein läsioniertes kortikales Gewebe. Dieses MRT, das 24 Stunden nach der Ischämie durchgeführt wird, zeigt die ischämische Läsion, die durch ein Sternchen unter dem chronischen Schädelfenster gekennzeichnet ist, deutlich. Dieses Bild zeigt die intravitale Epifluoreszenz-Bildgebung und die Zwei-Photonen-Bildgebung des kortikalen Gefäßsystems, um Veränderungen in der Mikrozirkulation zu überwachen.Das Infarktvolumen, das 24 und 96 Stunden nach der Ischämie mittels MRT beurteilt wurde, zeigt ein mittleres Läsionsvolumen von 13,16 Millimetern kubisch nach 24 Stunden und 12,2 Millimeter kubisch nach 96 Stunden. Einmal gemeistert, kann die Vorbereitung des Schädelfensters in etwa 30 Minuten durchgeführt werden. Und das MCAO in ca. 15 Minuten.Im Anschluss an dieses Verfahren können weitere Methoden wie MRT oder Dual-Photonen-Mikroskopie durchgeführt werden, um zusätzliche Fragen zu beantworten. Diese neuen Techniken ermöglichen es den Forschern, eine neurovaskuläre Einheit auf molekularer und zellulärer Ebene zu untersuchen. Und vor allem im lebenden Gehirn.

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In diesem Video-und ergänzendes Material zeigen wir ein Protokoll für die...

Chronische Imaging of Mouse Visual Cortex Mit einem ausgedünnten Schädel Vorbereitung

Intravitalmikroskopie zur zeitlichen und räumlichen hämodynamischen und entzündliche Ereignisse in der Pia Mikrozirkulation folgen.

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Die intraluminale Mitte Zerebralarterie (MCAO) Modell ist die häufigste verwendete Modell unter experimentellen Schlaganfall-Modellen. Hier zeigen wir Ihnen das gesamte Modell im Detail mit der Führung des Laser-Doppler-Flussmessung und seine repräsentative Ergebnisse.

Intraluminale Nahen Zerebralarterie (MCAO) Modell des ischämischen Schlaganfalls mit Laser-Doppler-Flussmessung Guidance in Mäuse

Dieser Artikel beschreibt eine Methode zur Visualisierung rat Hirnarterien durch ein Schädel-Fenster mit zeitlicher Kraniektomie um proximalen Abschnitte der mittleren Hirnarterie anzusehen...

Mit Hilfe eines Cranial Fenster, um den Nahen Cerebral Artery Während Endothelin-1 induzierte Middle Cerebral Artery Occlusion Visualisieren

Um die Pathophysiologie des Schlaganfalls zu verstehen, ist es wichtig, zuverlässige Modelle zu verwenden. Dieses Papier wird eine der am häufigsten verwendeten Taktmodelle bei Mäusen beschreiben, die Arteria cerebri media Okklusion (MCAo) Modell genannt (auch bezeichnet als die intraluminale Faden oder Naht Modell) mit Reperfusion.

Chirurgische Ansatz für Arteria cerebri media Occlusion und Reperfusion fokaler zerebraler Ischämie bei Mäusen

Hier wird ein Protokoll zur Implantation eines chronischen Schädelfensters für die Längsbildgebung von Gehirnzellen in wachen, kopfgefesselten Mäusen vorgestellt.

Implantation eines kranialen Fensters für wiederholte In-vivo-Bildgebung bei wachen Mäusen

Dieses Protokoll demonstriert ein einzigartiges Mausschlagmodell mit einem mittelgroßen Infarkt und einer ausgezeichneten Überlebensrate. Dieses Modell ermöglicht es präklinischen Schlaganfallforschern, die Dauer der Ischämie zu verlängern, gealterte Mäuse zu verwenden und langfristige funktionelle Ergebnisse zu bewerten.

Ein modifiziertes transkranielles Modell für den Verschluss der mittleren Hirnarterie zur Untersuchung von Schlaganfallergebnissen bei gealterten Mäusen

In dieser Arbeit stellen wir ein Protokoll zur Etablierung eines distalen Modells für einen Verschluss der mittleren Hirnarterie (dMCAO) durch transkranielle Elektrokoagulation bei C57BL/6J-Mäusen vor und bewerten das anschließende neurologische Verhalten und die histopathologischen Merkmale.

Induktion eines akuten ischämischen Schlaganfalls bei Mäusen mit der Technik des distalen Mittelarterienverschlusses

Dieses Protokoll beschreibt eine zweiphasige chirurgische Methode, um bei Mäusen ein großes, wiederverschließbares, dura-schonendes Schädelfenster zu schaffen. Diese Technik ermöglicht chronische, multimodale elektrophysiologische Aufzeichnungen aus verteilten, tief-gehirnbasierten Netzwerken wie dem Default Mode Network über mehrere Wochen.

Chirurgisches Protokoll für ein großes, wiederverschließbares Schädelfenster, das longitudinale, multimodale elektrophysiologische Aufzeichnungen des Maus-Default-Mode-Netzwerks ermöglicht

Ziel dieser Studie war es, eine reproduzierbare Methode zur Durchführung einer Kraniektomie zu etablieren, gefolgt von permanenter, selektiver Okklusion der mittleren Hirnarterie bei Ratten zur Anwendung in experimentellen Studien zu motorischen und räumlichen Gedächtnisdefiziten.

Selektive und permanente Verschluss der mittleren Hirnarterie bei Ratten: Ein experimenteller Ansatz zur Untersuchung motorischer und räumlicher Gedächtnisdefizite

Erfahren Sie die Präparation eines lateralen kranialen Fensters mit permanenter MCAo bei Mäusen. Diese Methode ermöglicht longitudinale Intravitalmikroskopie zur Untersuchung akuter und chronischer Veränderungen nach Schlaganfall.

Lateral Chronic Cranial Fenster Vorbereitung Ermöglicht In Vivo Beobachtung Nach Artery Occlusion Distal cerebri bei Mäusen

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