Name: Visualisierung der Auswirkungen von Sputum auf Biofilm-Entwicklung eines Modells mit Kammerdeckgläser (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-12-14T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 3 s
Description: Erfahren Sie, wie Sie Biofilm-Entwicklung unter Sputum-Einfluss mit einem Kammerdeckglas-Modell visualisieren und quantifizieren. Diese Methode ermöglicht die direkte Beobachtung von Antibiotika-Wirkungen.

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TB erkennt ein Forschungsstipendium von Cystic Fibrosis Kanada.

Beachten Sie, dass Forschungsethik Board (REB) erforderlich zu sammeln und zu speichern, Sputum-Proben von menschlichen Probanden. Diese Studien wurden von der Klinik zugelassen für kranke Kinder REB # 1000019444. 1. Vorbereiten CF Sputum-Proben <ol><li> Sammeln Sie Sputum Probe von Patienten während der Routine Abfragen der Mukoviszidose-Klinik und auf Eis halten. </li><li> Transport Sputumprobe auf Eis innerhalb der ersten Stunde nach der Entnahme, zum Forschungslabor, die Verarbeitung zu unterziehen. </li></ol> 2. Sputum Verarbeitung <ol><li> Aufzeichnen des Volumens des Sputum-Probe erhalten. Fügen Phosphat - gepufferter Salzlösung (PBS) , um das Volumen der Probe auf 2x (dh 2 Teile PBS, 1 Teil Probe). </li><li> Mischen Sie die Probe gut mit einer Transferpipette. Vortex die Probe auf die höchste Einstellung für 1 min vollständig zu mischen. </li><li> Aliquot 1 ml der obigen Mischung in die entsprechende Anzahl von 1,5 ml Mikrozentrifugenröhrchen und Spin bei 5000 × g nach unten für20 min bei 4 ° C. </li><li> Nach der Zentrifugation den Überstand und das Pellet verwerfen. </li><li> Filter sterilisieren den Überstand durch ein 0,22 um Filter und sammeln sich in einem sauberen Reaktionsgefäß. HINWEIS: Sterility des Filtrats durch Ausplattieren auf LB-Agar getestet und flüssigen Medien Animpfen. </li><li> Speichern von Sputum Überstand bei -80 ° C für zukünftige Verwendung. HINWEIS: Sputum von mehreren Patienten können auch nach der Filtration gesammelt werden. </li><li> Vor der Verwendung verdünnt Sputum Filtrat 1/10 v / v (100 &amp; mgr; l Sputum, 900 ul Medium) in gewünschte Medien. HINWEIS: Hier Standard LB-Medium (LB) Medien verwendet wurde. </li></ol> 3. Kammerdeckgläser Verfahren zur Bildung von Biofilmen <ol><li> Wachsen Bakteriumisolat von Interesse über Nacht in das gewünschte Medium bei 37 ° C unter Schütteln (200 rpm). Hinweis: Eine Anzahl verschiedener Bakterien verwendet wurden, einschließlich der klinischen Isolate von Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus,Burkholderia cepacia und Achromobacter xylosoxidans. Wahl der Medien hängt von Stämmen und Bedingungen von Interesse kann jedoch LB-Medien für erste Experimente verwendet werden. </li><li> Von Übernachtkultur, legen 40 &amp; mgr; l der Kultur in die 4 ml frisches Medium wachsen und für 3-4 h bei 37 ° C unter Schütteln (200 Upm) , um eine Kultur mit einer optischen Dichte bei 600 nm (OD 600) von ungefähr 0,5 zu erhalten , -0.6. </li><li> Verdünnen Sie die Kultur aus Schritt 3,2 bis 1/5 in das gewünschte Medium mit 10% Sputum Filtrat oder ohne Auswurf Filtrat (als Kontrolle). Andere Konzentration von Sputum Filtrat kann (dh 50% oder 100%) getestet werden. </li><li> Verwenden Sie 200 ul der Verdünnung Vertiefungen Schiebekammern auf Saatgut. </li><li> Lassen Bakterien für 4 Stunden bei 37 ° C zu befestigen ohne Schütteln. </li><li> Nach 4 Stunden, um die Medien zu entfernen und sanft den Biofilm mit 1x frisches Medium waschen. Ersetzen mit 200 &amp; mgr; l frisches Medium. Hinweis: Um die Auswirkungen von Sputum auf dem Biofilm studieren, die fresh Medien sollten Sputum Überstand enthalten. </li><li> Erlauben Biofilmen für gewünschte Zeitdauer bei 37 ° C zu wachsen, ohne Schütteln, Medien alle 12 Stunden ersetzt, ohne Waschen, bis die Zeit für die Mikroskopie. ANMERKUNG: Um die Wirkung von Sputum Überstände auf Biofilm antibiotischen Empfänglichkeit untersuchen, werden Antibiotika zum Medium hinzugefügt folgenden 24 h Biofilmwachstum und werden in den Medien bis zum Anfärben und Abbildung von Biofilmen gehalten. </li></ol> 4. Die Färbung Biofilme und konfokale Mikroskopie <ol><li> gewünschte Wachstumszeit verfolgt (24-48 h funktioniert am besten), entfernen Sie Medien aus der Kammer Brunnen und sanft jede Kammer zweimal mit 300 ul sterilem PBS waschen. </li><li> Bereiten Sie Färbemischung für Biofilm durch Mischen von 1 ul jeder Farbstoff (sofern in der Lebensfähigkeit Kit) für jeden ml Lösung benötigt. Machen Farbstoff in Wasser oder Media-Lösung. HINWEIS: Das Wasser wird vom Hersteller empfohlen. </li><li> Mit 200 &amp; mgr; l der Farbstoffmischung in jede Vertiefung chambered coverglass und für 45 min bei Raumtemperatur im Dunkeln inkubieren. </li><li> Entfernen Färbung Mischung aus Kammern und waschen Sie jede Vertiefung mit 300 ul sterilem PBS. Entfernen PBS und ersetzen mit frischem Wasser oder Medien. </li><li> Fahren Sie mit der Visualisierung von Biofilmen durch konfokale Mikroskopie. </li></ol> 5. Visualizing Biofilme mit konfokale Mikroskopie <ol><li> Lesen gefärbten Biofilmen in Kammern unmittelbar nach dem Färben (innerhalb von 1 h). Minimieren Verzögerung in Visualisierung der Objektträger durch Anfärben August 1-02-well Kammern zu einer Zeit. </li><li> Führen Bildgebung mit konfokalen Mikroskop mit Lasern für die Anregung und Filtersätze für die Erfassung. HINWEIS: Hier wird die sich drehende Scheibe konfokalen System mit spektraler borealis Laser (Grün: 491nm, Rot: 561 nm) zur Anregung verwendet wurden. Emissionsfiltersätze von 515/40 und 624/40 wurden verwendet, um die Flecken aus dem Biofilm Lebensfähigkeit Kit zu visualisieren. </li><li> Nehmen Sie Bilder mit einem 25X Wasser Ziel auf konfokalen Mikroskop mit Kamera. </li><li&gt; Verwenden Z-Stacks des Biofilms zu modellieren. Nehmen Sie Bilder jede 0,5-1 &amp; mgr; m ausgehend von der ersten in-Fokusebene auf den letzten im Fokus befindlichen Rahmen des Biofilms (typischerweise Spanning 30-80 &amp; mgr; m für 48 Stunden Biofilme) </li><li> Nehmen Sie 3-5 Bilder von jedem gut. HINWEIS: So für einen 8 gut chambered Abdeckglas, 24-40 Bilder erzeugt werden. </li><li> Speichern Sie die Bilder für die Analyse. HINWEIS: Bilder gespeichert werden sollen als OME-TIFF - Dateien mit COMSTAT 18,19 analysiert werden. Hinweise zur Biofilmbildanalyse kann bei http://www.comstat.dk/ finden. Sobald Bilder importiert werden, können Parameter wie die durchschnittliche Dicke, Biomasse und Flächendeckung für jeden Kanal (rot und grün) analysiert werden. </li></ol>

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</ol>

Die hierin beschriebenen Verfahren ermöglichen die Visualisierung von bakteriellen Biofilmen in Gegenwart von exogenen Produkten gewachsen. Es überrascht nicht, die Herstellung der exoproducts ist von Bedeutung, wenn diese Art von System. Zum Beispiel Dithiothreitol (DTT), wird häufig auf die menschliche Sputum-Proben verwendet, um die Proben helfen verflüssigen. Jedoch allein der Wirkung von DTT Biofilmentwicklung verringern kann und die Lebensfähigkeit (Daten nicht gezeigt). Somit sind geeignete Kontrollen für alle no...

Bakterielle Biofilme sind Gruppen von Mikroorganismen, die miteinander und umhüllt in einer selbst sezerniert Matrix gebunden sind. 1,2 Classically stellen sie Bakterien physisch an einen abiotischen oder biotischen Oberfläche unter den Bedingungen der Strömung gebildet angebracht. Biofilme sind auch gezeigt worden, unter statischen Bedingungen (keine Strömung) und distal von Oberflächen, beispielsweise an der Luft-Flüssigkeit-Grenzfläche der thermischen Pools oder Häutchen gebildet in Reagenzgläsern zu wachsen. Diese Biofilme sind seit langem in der Umwelt erkannt und sind eine große Nachteil für industrielle Prozesse, wie sie in Wasserbehältern oder in Rohren bilden können, was zu Biofouling, Korrosion und Verstopfung. 3,4 Biofilme sind auch im Gesundheitsbereich kritisch, da sie in Katheter bedingten Infektionen, Lungeninfektionen bei Mukoviszidose-Patienten, sowie in zahlreichen anderen Infektionen beteiligt haben gezeigt werden. 5,6 Eines der Markenzeichen von Biofilm - Infektionen ist die deerhöhte Empfindlichkeit von Bakterien gegen Antibiotika und die Beeinträchtigung der Clearance durch das angeborene Immunsystem. 7-9 Die gut untersucht, klinisch relevante Szenarien Biofilm-basierten Infektion beteiligt tritt bei Patienten mit zystischer Fibrose (CF), die chronisch infiziert sind , mit Pseudomonas aeruginosa Biofilme. P. aeruginosa kann eine Reihe von Änderungen bei Etablierung einer chronischen Infektion zu unterziehen , die es sehr schwierig zu behandeln , machen. 10,11 Biofilme können unterschiedlich angeborenen Immunität aktivieren und Entzündung fahren. 12-14 Da diese Infektionen zu einer erhöhten Morbidität und Mortalität bei CF - Patienten führen, ist es wichtig , Faktoren zu verstehen , die Biofilmbildung in diesem Zusammenhang beeinflussen können. Eine neue Studie schlägt vor , dass Host-Faktoren bei der Bildung von P. aeruginosa Biofilm Aggregate kritisch sind. 15 Diese Biofilme tragen zu einer reduzierten Empfindlichkeit gegenüber Antibiotika und Abwehrmechanismen des Wirts. Die Presenz von Wirt-abgeleiteten Faktoren, wie Neutrophilen-Elastase, sowie sekretierte Produkte von Mikroorganismen, die in der CF-Lunge, haben das Potential stark zu Biofilmbildung und Entwicklung modulieren. 16 Darüber hinaus interagieren Biofilmen mit dem Host - Expression zahlreicher Wege zu modulieren und Entzündungen auslösen. Während Hochdurchsatzverfahren, wie zum Beispiel die Standardkristallviolett-Assay, einige Informationen in Bezug auf die Biofilmverfahren zur Verfügung stellen kann, die Visualisierung des Biofilms in Reaktion auf diese Faktoren liefern weitergehende Informationen. In diesem Manuskript beschreiben wir ein Verfahren zur Faktoren aus dem Sputum von Patienten mit CF mit der Entwicklung von Biofilmen in vitro zu studieren. Dieses Verfahren ermöglicht eine schnelle Visualisierung von auf Sputum enthaltenden Wirtsfaktoren ausgesetzt Biofilmen Kommerzielle Biofilm Lebensfähigkeit Kit. Diese Technik kann verwendet werden, um visuell Veränderungen zu identifizieren, die während der Biofilmwachstum in Gegenwart von exogeno auftretenuns Produkte und stellt ein verbessertes Verfahren der Änderungen in Biofilmentwicklung unter verschiedenen Bedingungen zu untersuchen.

<table><tbody><tr><td>Lab-Tek II Deckglas mit Kammer, #1,5 Borosilikat, 8-well</td><td>Thermo Sicher Scientific</td><td>155409</td><td></td></tr><tr><td>Filmtracer Lebende/tote Biofilme Viabilty Kit</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>L10316</td><td></td></tr><tr><td>Blut-Agar-Platten</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>R10215</td><td>Bestätigung der Lebensfähigkeit durch KBE-Zählungen oder Auswahl von Kolonien für die Innokulation</td></tr><tr><td>COMSTAT</td><td>Software online verfügbar</td><td></td><td>COMSTAT ist eine Software zur Analyse von Biofilmbildern. Verfügbar unter www.comstat.dk&nbsp;</td></tr><tr><td>Millers LB Broth</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>12780-052</td><td>Standardmedien für das Wachstum von Biofilmen über Nacht</td></tr><tr><td>Millex-GV Spritzenfilter</td><td>Millipore</td><td>SLGV013SL</td><td>Filtration von Sputumüberständen</td></tr><tr><td>Phosphat gepufferte Kochsalzlösung (Dulbecco A)</td><td>Oxoid</td><td></td><td>BR0014G Waschen von Biofilmkammern nach der Medienentfernung</td></tr><tr><td>Zeiss AxioVert 200M</td><td>Carl Zeiss</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hamamatsu C9100-13 EM-CCD</td><td>QS Technologies Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Spectral Borealis</td><td>Qs Technologies Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Perkin Elmer Volocity</td><td>QS Technologies Inc.</td><td></td><td>Eine Anleitung für diese Software finden Sie unter: http://cellularimaging.perkinelmer.com/pdfs/manuals/VolocityuserGuide.pdf</td></tr></tbody></table>

visualisierung der auswirkungen von sputum auf biofilm-entwicklung eines modells mit kammerdeckgläser

Visualizing the Effects of Sputum on Biofilm Development Using a Chambered Coverglass Model

Biofilme bestehen aus Gruppen von in einem selbst sezerniert Matrix eingeschlossen Bakterien. Sie spielen eine wichtige Rolle in der industriellen Verschmutzung sowie in der Entwicklung und Persistenz von vielen gesundheitsbezogenen Infektionen. Eines der am besten beschrieben und untersucht Biofilmen in der menschlichen Erkrankung tritt bei chronischen Lungeninfektion von Mukoviszidose-Patienten. Wenn Biofilme im Rahmen des Host studieren, können viele Faktoren die Biofilmbildung und Entwicklung beeinflussen. Um zu ermitteln, wie Wirtsfaktoren die Bildung von Biofilmen und Entwicklung beeinflussen können, haben wir eine statische chambered Abdeckglas Methode Biofilmen in Gegenwart von Wirt abgeleiteten Faktoren in Form von Sputum Stände zu wachsen. Die Bakterien werden in die Kammern ausgesät und Sputum Filtrate ausgesetzt. mit einem handelsüblichen Biofilm Lebensfähigkeit Kit vor der konfokalen Mikroskopie und Analyse folgenden 48 h des Wachstums werden Biofilme gefärbt. Nach der Bildaufnahme können Biofilm Eigenschaften mit Hilfe Plattformen unterschiedlicher Software bewertet werden.Dieses Verfahren ermöglicht es uns, Schlüsseleigenschaften von Biofilmwachstum in Gegenwart verschiedener Substanzen einschließlich Antibiotika zu visualisieren.

Das Gesamtdesign des Experiments ist in Abbildung 1 dargestellt. Die Verwendung dieses Protokoll bietet eine bequeme Methode , die Veränderungen in Biofilmen für verschiedene Zeiträume (beispielsweise 24, 48 oder 72 Stunden) gezüchtet zu visualisieren. Wichtig ist, dass exogene Signale, wie Sputum Filtrate können hinzugefügt werden, um die Veränderungen in der Biofilmentwicklung zu visualisieren. Wie in Figur 2 zu sehen ist , kann die Gegenwart ...

Dieses Protokoll beschreibt die Visualisierung der Biofilmentwicklung nach Exposition gegenüber Wirtsfaktoren unter Verwendung eines Objektträgerkammermodells. Dieses Modell ermöglicht die direkte Visualisierung der Biofilmentwicklung sowie die Analyse von Biofilmparametern mit Hilfe von Computersoftwareprogrammen.

Visualisierung der Auswirkungen von Sputum auf Biofilm-Entwicklung eines Modells mit Kammerdeckgläser

Biofilms consist of groups of bacteria encased in a self-secreted matrix. They play an important role in industrial contamination as well as in the ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens besteht darin, Veränderungen von Biofilmen als Reaktion auf Sputum und Antibiotika sichtbar zu machen und zu quantifizieren. Mit dieser Methode können Forscher wichtige Fragen untersuchen, beispielsweise wie die Wirksamkeit verschiedener Antibiotika gegen bakterielle Biofilme durch das Vorhandensein von Sputum beeinflusst wird. Der Hauptvorteil dieser Methodik liegt darin, dass sie es ermöglicht, Veränderungen in Biofilmen als Reaktion auf unterschiedliche Faktoren direkt zu beobachten.Um das Experiment zu beginnen, notieren Sie das Volumen der zuvor gewonnenen Sputumprobe. Geben Sie zwei Volumina an phosphatgepufferter Kochsalzlösung, auch PBS genannt, hinzu. Mischen Sie die Probe anschließend gründlich mit einer Transferpipette. Versetzen Sie die Probe eine Minute lang auf der höchsten Stufe im Vortex, um sie vollständig zu mischen. Portionieren Sie ein Milliliter der Mischung in 1,5-Milliliter-Mikrozentrifugenröhrchen. Zentrifugieren Sie anschließend die Röhrchen.Nach der Zentrifugation das Überstand aufbewahren und das Pellet verwerfen. Den Überstand durch einen 0,22-Mikron-Filter filtrieren, um ihn keimfrei zu machen, und in einem sauberen Mikrozentrifugenröhrchen auffangen. Den Sputum-Überstand bei 80 Grad Celsius zur späteren Verwendung lagern.Geben Sie 40 Mikroliter der zuvor vorbereiteten Kultur in vier Milliliter frische Luria-Brühe oder LB-Medien und kultivieren Sie die Bakterien, bis eine optische Dichte von 0,55 bei 600 Nanometern erreicht ist. Verdünnen Sie anschließend 100 Mikroliter der 0,5-OD-Kultur in 400 Mikrolitern der vorbereiteten 10 % Sputumfiltrate in LB. Verwenden Sie 200 Mikroliter der Verdünnung, um die Vertiefungen der Objektträgerkammern zu beimpfen. Lassen Sie die Bakterien vier Stunden lang bei 37 Grad Celsius ohne Schütteln anheften.Nach vier Stunden das Medium entfernen und den Biofilm vorsichtig mit frischem 1X LB waschen. Das verbleibende Medium durch 200 Mikroliter frisches LB ersetzen. Die Biofilme bei 37 Grad Celsius ohne Schütteln wachsen lassen. Das Medium alle 12 Stunden ersetzen, ohne zu waschen, bis der Biofilm für die Mikroskopie bereit ist. Es ist sehr wichtig, die Objektträger vorsichtig zu waschen, um anhaftende Bakterien nicht zu stören.Nach dem Wachstum das Medium aus den Kammermulden entfernen und jede Kammer vorsichtig zweimal mit jeweils 300 Mikrolitern steriler PBS waschen. Als Nächstes zur Herstellung der Biofilm-Färbemischung ein Mikroliter jeder im Vitalitätskit enthaltenen Farbstoffe zu jedem benötigten Milliliter Lösung hinzufügen und die Lösung mischen. Die optimale Menge an Farbstoff und die Färbedauer werden empirisch für jeden Organismus bestimmt.Geben Sie 200 Mikroliter der Färbelösung in jede Vertiefung der Kammerobjektträger. Inkubieren Sie den Objektträger. Nach der Inkubation entfernen Sie die Färbelösung aus den Kammern und waschen jede Vertiefung mit 300 Mikrolitern steriler PBS-Lösung.Ersetzen Sie das PBS durch frisches Medium. Fahren Sie abschließend mit der Visualisierung mittels konfokaler Mikroskopie fort. Repräsentative Bilder des Burkholderia cepacia-Komplexes oder klinischer BCC-Isolate nach 48 Stunden Wachstum in Kammerobjektträgern mit Medium allein oder in Gegenwart von 10 % Sputumfiltraten zeigen, dass deren Vorhandensein die Architektur des Biofilms verändern kann.Die Bilder wurden mit der Comstat-Software analysiert, um wichtige Biofilmparameter zu erhalten, darunter die durchschnittliche Dicke des Biofilms, die sich bei Behandlung mit 10 % Sputum erhöhte. Um die unterschiedlichen Einflüsse auf das Biofilmwachstum zu beurteilen, wurden klinische Isolate entweder allein im Kulturmedium oder mit Sputum sowie jeweils mit oder ohne Antibiotikabehandlung kultiviert. Nach Anschauung dieses Videos sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie man Biofilme auf Kammerobjektträgern erzeugt und behandelt sowie sie für die Färbung und konfokale Analyse vorbereitet.

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Research

Forschung

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie und Infektion

Dieses Papier beschreibt verschiedene Methoden der...

Co-Kultur Modelle Pseudomonas aeruginosa Biofilme auf lebenden menschlichen Zellen gezüchtet Airway

Dieser Artikel beschreibt das Verfahren für die Bildung und Visualisierung eines bakteriellen Biofilms in einem 8-well Kammer schieben...

In-vitro-Bildung von Biofilmen in einem 8-well Chamber Slide

Quelle: Beaudoin, T., et al. Visualisierung der Auswirkungen von Sputum auf die Biofilmentwicklung mit einem Kammer-Coverglass-Modell. J. Vis. Exp. (2016)Dieses Video demonstriert die Verwendung eines kammerbasierten Deckglases zur Untersuchung der Auswirkungen von Patienten durch Mukoviszidose abgeleiteten Spötterwirtsfaktoren auf die Entwicklung bakterieller Biofilme.

Eine Kammerabdeckungsglas-Methode zur In-vitro-Bakterienbiofilmbildung

Quelle: Beaudoin, T., et al. Visualisierung der Auswirkungen von Sputum auf die Biofilmentwicklung mit einem Kammer-Coverglass-Modell. J. Vis. Exp. (2016)Dieses Video demonstriert eine in-vitro-Methode , um zu untersuchen, wie patientenabgeleitetes Mukoviszidose-Sputum die bakterielle Biofilmbildung beeinflusst. Durch Verwendung von Kammerobjektträgern, fluoreszierender Färbung und konfokaler Mikroskopie zeigt es eine erhöhte Dicke, veränderte Architektur und eine höhere lebensfähige Biomasse...

Konfokale Bildgebung bakterieller Biofilme, indusert durch Sputumfiltrate von Mukoviszidose-Patienten

Protokolle zur Untersuchung der Biofilmbildung in einem mikrofluidischen Gerät, das poröse Medien nachahmt, werden diskutiert. Das mikrofluidische Gerät besteht aus einem Array von Mikrosäulen und die Biofilmbildung durch Pseudomonas fluorescens wird in diesem Gerät untersucht.

Protokoll für Biofilm Streamer Formation in einem Mikrofluidik-Gerät mit Micro-Säulen

Diese Studie präsentiert die Entwicklung reproduzierbarer Methoden zur Untersuchung von Biofilm-Inhibitoren und deren Auswirkungen auf die Bacillus subtilis-Vielzelligkeit.

Methodologien für das Studium<em&gt; B. subtilis</em&gt; Biofilme als Modell für kleine Molekül-Inhibitoren Biofilm Charakterisieren

Der Schleim verstopft die Atemwege von zystischer Fibrose (CF) Patienten sind eine ideale Umgebung für die mikrobielle Krankheitserreger zu gedeihen. Das Manuskript beschreibt ein neuartiges Verfahren der CF-Lunge microbiome in einer Umgebung für die Untersuchung, dass imitiert, wo sie Krankheit und wie Veränderungen der chemischen Bedingungen verursachen mikrobielle Dynamik antreiben kann.

Das WinCF-Modell - Ein preiswerter und tragbarer Mikrokosmos eines Schleims verstopfte Bronchiole zur Untersuchung der Mikrobiologie von Lungeninfektionen

Dieses Protokoll beschreibt die Verwendung eines Geräts anpassbare automatisierte mikrofluidischen Biofilmbildung in Candida Albicans unter physiologischen Bedingungen Host zu visualisieren.

Visualisierung der Biofilmbildung in Candida Albicans ein automatisiertes mikrofluidischen Gerät

Beschreiben wir die Montage, Betrieb, und Reinigung von einem Fluss Apparat Bild Pilz Biofilmbildung in Echtzeit unter fließen sollen. Wir bieten und diskutieren quantitative Algorithmen auf die aufgenommenen Bilder verwendet werden.

Echtzeit-Bildgebung und Quantifizierung der Pilz Biofilm-Entwicklung mit einem Zweiphasensystem rezirkulierenden Flow

Antimikrobiell induzierte Veränderungen der Biofilmarchitektur von Pseudomonas aeruginosa unterscheiden sich zwischen klinischen Isolaten, die von Patienten mit Mukoviszidose und chronischer Lungeninfektion kultiviert wurden. Nach der konfokalen Mikroskopie kann die COMSTAT-Software verwendet werden, um Variationen in der Biofilmarchitektur (z. B. Oberfläche, Dicke, Biomasse) für einzelne Isolate zu quantifizieren und so die Wirksamkeit von Antiinfektiva zu bewerten.

Quantifizierung der Auswirkungen von Antibiotika auf die In-vitro-Biofilmarchitektur mit der COMSTAT-Software

Erfahren Sie, wie Sie Biofilm-Entwicklung unter Sputum-Einfluss mit einem Kammerdeckglas-Modell visualisieren und quantifizieren. Diese Methode ermöglicht die direkte Beobachtung von Antibiotika-Wirkungen.

Visualisierung der Auswirkungen von Sputum auf Biofilm-Entwicklung eines Modells mit Kammerdeckgläser

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