Name: Erhöhte Erholzeit und abnehmend LPS-Verabreichung die Vagusnervstimulation Mechanisms in beschränkten Entzündungsreaktionen zu studieren (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-03-29T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 43 s
Description: Lernen Sie die modifizierte Vagusnervstimulation zur Untersuchung cholinergischer antiinflammatorischer Mechanismen bei Entzündungsreaktionen. Diese Methode ermöglicht die Analyse neuroimmunologischer Signalwege im Labor.

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Die Studie wurde unterstützt vom Schwedischen Forschungsrat, der Schwedischen Rheuma-Vereinigung, den Karolinska-Institutsstiftungen, dem Stockholm County Council, der Wallenberg-Stiftung und der GV 80 Years' Foundation für die Forschung. Die Autorinnen und Autoren danken auch Hannah Aucott für das Korrekturlesen des Manuskripts.

Alle Tierversuche wurden nach den Richtlinien für die Pflege und Verwendung von Tieren von der lokalen Ethikkommission am Karolinska Institutet, Stockholm genehmigt durchgeführt. Die lokale Ethikkommission folgt den Richtlinien der Europäischen Union auf die Tierpflege. HINWEIS: Die wesentlichen Änderungen aus dem ursprünglichen Protokoll sind die Erholungszeit nach der Operation (6 h gegenüber 1 h) , und die Höhe der LPS injizierten (2 mg / kg im Vergleich zu 15 mg / kg). Andernfalls sich nicht geändert worden sind, die verschiedenen Einstellungen der Operation zusammen. 1. Vorbereiten Werkstoff für Stimulation <ol><li> Schalten Sie den Computer und dem Datenerfassungssystem zu der Stimulationselektrode (1A) verbunden ist . </li><li> Geben Sie das Quittieren Programm. </li><li> Vorbereiten einer Stammlösung von LPS in einer Konzentration von 5 mg / ml in 1X PBS, Aliquot es und lagern bei -20 ° C. Am Tag des Experiments, tauen eine aliquote und bereitet eine adeQuate Probe von LPS (0,5 mg / ml), um etwa 100 &amp; mgr; l in das Tier zu injizieren, nach dem Gewicht. </li></ol> 2. Vorbereitung des Tier für Anästhesie <ol><li> Verwenden Sie C57Bl / 6-Mäuse. Pflegen sie unter klimatisierten Bedingungen mit einer 12-Stunden - Hell / Dunkel - Zyklus, füttern sie Standard - Nagetierfutter, und geben ihnen Wasser ad libitum. </li><li> Führen Sie Operation auf Mäuse, die etwa 25 g am Tag des Experiments wiegen. HINWEIS: Bei Entzündungsreaktionen hervorgerufen werden, ist es besonders wichtig regelmäßige Vorsorgeuntersuchungen und Beobachtungen der klinischen Reaktionen bei den Tieren durchzuführen. Eine vorzeitige Euthanasie durch CO 2 Inhalation erforderlich ist , wenn der Zustand eines Tieres nicht die ethischen Kriterien nicht erfüllt. </li><li> Stellen Sie das Anästhesiegerät. <ol><li> Achten Sie darauf, dass der Schlauch richtig angeschlossen ist und nicht in irgendeiner Weise beschädigt. Achten Sie darauf, dass die belüfteten Bereich richtig funktioniert. Schließen Sie den Schlüssel Filter auf die Flasche Isofluran und füllen das vaporizer mit einer ausreichenden Menge von Isofluran. </li><li> Öffnen Sie die Gaszufuhr (Luft und Sauerstoff) und stellen Sie sicher, dass die Flaschen genug Gas für das Experiment enthalten. Ein Drei-Wege-Verbinder kann dann die Isofluran Strömung zur Induktionskammer oder die Maske zu senden. </li></ol></li><li> Drehen Sie den Drei-Wege-Anschluss mit dem Induktionskammer. Wählen Sie eine Maus aus dem Käfig und setzen Sie das Tier in die Kammer. Stellen Sie den Durchflußmengenregler auf 1,0 l / min Sauerstoff und 1,0 l / min Luft. Stellen Sie die Isofluran-Konzentration auf 4 bis 5%. </li><li> Wenn der gewünschte Grad der Anästhesie erreicht ist, wenn der gewünschte Grad der Anästhesie erreicht ist, schert das Operationsgebiet und das Tier aus der Kammer zu der Maske bewegen. Drehen Sie den Drei-Wege-Anschluss an die Maske fließen. Stellen Sie den Durchflußmengenregler auf 0,25 l / min Sauerstoff und 0,25 L / min Luft. <ol><li> Stellen Sie die Isofluran-Konzentration auf 1,5 bis 2,5%. Überprüfen Sie die Höhe der Anästhesie durch Reflex-Steuerung und Atemfrequenz vor der chirurgischen procedur Ausgangse. </li></ol></li><li> Fix die Beine der Maus auf die Werkbank Klebeband. Achten Sie darauf, dass die Nase des Tieres noch sorgfältig in der Maske positioniert ist. </li></ol> 3. Operation und Stimulation des Nervus vagus <ol><li> Desinfizieren das Operationsgebiet mit 70% Ethanol. </li><li> Unter Verwendung eines Skalpells, einzuschneiden sorgfältig die Haut auf der Höhe des Halses (Inzision von etwa 1 bis 1,5 cm). Hinweis: Im Protokoll endet die Chirurgie Verfahren hier für Sham-Tiere. Tatsächlich hat es sich gezeigt, dass nur mit einem Metallwerkzeug den Nerv berührt es bereits zu einem gewissen Grad stimuliert. Daher ein genaueres Operation Kontrolltier zu erhalten, wenn eine kleine Menge an LPS mit, bei diesem Schritt die Operation stoppen. </li><li> Mit Hilfe eines Mikroskops (12,5-fach-Objektiv), Isolieren des linken Vagusnerv aus der Arteria carotis mittels Dissektionszangen. Zuerst suchen Sie die Kopfnickers von Haut und Fettschichten zu entfernen und zurückziehen sie dann inbestellen die Zange setzen hinter sowohl den Nerv und die Arterie. Anmerkung: Der folgende Schritt sehr schwierig ist, da die Nerven und Arterie eng aneinander geklebt sind. Daher ist es sehr einfach, das Schiff und tötet das Tier zu schneiden. Doch durch die Zange sehr sorgfältig zwischen Nerv und Arterie platziert, sie schließlich zu trennen, und es ist möglich, den Nerv zu isolieren. </li><li> Die Elektrode (1B) , unter dem Vagusnerv. Die Nadelelektrode ist ziemlich lang, so dass selbst wenn der Nerv leicht während der Stimulation bewegt, wird es immer mit der Elektrode in Kontakt sein. </li><li> Führen Sie eine intraperitoneale (ip) Injektion von LPS (2 mg / kg) mit Hilfe einer Spritze (für das Auslesen auf Cytokinspiegel, dh die nach unten regulierenden Wirkung zu messen). </li><li> Warten 5 min vor Beginn der Stimulation. </li><li> Stimulieren des Vagusnervs für 5 min bei 5 V und 1 Hz durch die Starttaste in dem Programm Acknowledge drücken. </li><li> Rebewegen, um die Elektrode und die Wunde vernäht des Tieres mit chirurgischen Nähfadens. </li><li> Sprühen Sie einen No Sting Barrier Film (NSBF) auf der Wunde, um die Heilung zu verbessern und vor Infektionen zu schützen. </li></ol> 4. Wiederherstellung des Tieres <ol><li> Nach der Operation bewegt in seinen Heimkäfig das Tier zurück zum Erwachen und Erholung. Unter Infrarot-Licht, um die Körpertemperatur zu halten, stellen Sie sicher, dass das Tier zu überwachen, bis volles Bewusstsein wiedererlangt hat worden. </li><li> Lassen Sie das Tier für 6 Stunden vor der Tötung zur Analyse in seinem Käfig erholen. Hinweis: Die Wirkung der Vagusnervstimulation ist sehr schnell und hat auch durch den Experimentator festgelegt wird entsprechend die Bedürfnisse der Studie gezeigt wurde , kann seine lang anhaltende (bis zu 48 h), so dass die Recovery - Zeit. </li></ol> 5. Opfer für die weitere Analyse <ol><li> Legen Sie das Tier in einem an eine CO 2 Verabreichungsvorrichtung verbunden Käfig. </li><li> Stellen Sie das Gerät auf eine 5-min Zyklus von CO 2 Inhalation. </li><li> Wenn die Euthanasie durchgeführt wird, die Organe von Interesse sammeln und sie direkt für die weitere Analyse auf Trockeneis einfrieren (zB die Messung von Cytokinspiegel in Milz Extrakten eine Maus TH1 / TH2 9-Plex - Test unter Verwendung) 3. </li></ol>

<ol><li>Nathan, C. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/12490957">Points of control in inflammation.</a> Nature. 420 (6917), 846-852 (2002).</li>
<li>Rosas Ballina, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acetylcholine-synthesizing+T+cells+relay+neural+signals+in+a+vagus+nerve+circuit%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Acetylcholine-synthesizing T cells relay neural signals in a vagus nerve circuit.</a> Science. 334 (6052), 98-101 (2011).</li>
<li>Le Maître, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impaired+vagus-mediated+immunosuppression+in+microsomal+prostaglandin+E+synthase-1+deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Prostaglandins+Other+Lipid+Mediat%22%5BJournal%5D)">Impaired vagus-mediated immunosuppression in microsomal prostaglandin E synthase-1 deficient mice.</a> Prostaglandins Other Lipid Mediat. 121 (Part B), 155-162 (2015).</li>
<li>Borovikova, L. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vagus+nerve+stimulation+attenuates+the+systemic+inflammatory+response+to+endotoxin%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Vagus nerve stimulation attenuates the systemic inflammatory response to endotoxin.</a> Nature. 405 (6785), 458-462 (2000).</li>
<li>Olofsson, P. S., Rosas-Ballina, M., Levine, Y. A., Tracey, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rethinking+inflammation%3A+neural+circuits+in+the+regulation+of+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol.+Rev%22%5BJournal%5D)">Rethinking inflammation: neural circuits in the regulation of immunity.</a> Immunol. Rev. 248 (1), 188-204 (2012).</li>
<li>Pavlov, V. A., Tracey, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+circuitry+and+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol+Res%22%5BJournal%5D)">Neural circuitry and immunity.</a> Immunol Res. 63 (1-3), 38-57 (2015).</li>
<li>Huston, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Splenectomy+inactivates+the+cholinergic+antiinflammatory+pathway+during+lethal+endotoxemia+and+polymicrobial+sepsis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Med%22%5BJournal%5D)">Splenectomy inactivates the cholinergic antiinflammatory pathway during lethal endotoxemia and polymicrobial sepsis.</a> J. Exp. Med. 203 (7), 1623-1628 (2006).</li>
<li>Rosas-Ballina, M., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2504833/">Splenic nerve is required for cholinergic anti-inflammatory pathway control of TNF in endotoxemia.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 105 (31), 11008-11013 (2008).</li>
<li>Wang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nicotinic+acetylcholine+receptor+alpha7+subunit+is+an+essential+regulator+of+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Nicotinic acetylcholine receptor alpha7 subunit is an essential regulator of inflammation.</a> Nature. 421 (6921), 384-388 (2003).</li>
<li>Pavlov, V. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Central+muscarinic+cholinergic+regulation+of+the+systemic+inflammatory+response+during+endotoxemia%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+USA%22%5BJournal%5D)">Central muscarinic cholinergic regulation of the systemic inflammatory response during endotoxemia.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 103 (13), 5219-5223 (2006).</li>
<li>Pavlov, V. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain+acetylcholinesterase+activity+controls+systemic+cytokine+levels+through+the+cholinergic+anti-inflammatory+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Behav.+Immun%22%5BJournal%5D)">Brain acetylcholinesterase activity controls systemic cytokine levels through the cholinergic anti-inflammatory pathway.</a> Brain Behav. Immun. 23 (1), 41-45 (2009).</li>
<li>Rosas-Ballina, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Xanomeline+suppresses+excessive+pro-inflammatory+cytokine+responses+through+neural+signal-mediated+pathways+and+improves+survival+in+lethal+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Behav.+Immun%22%5BJournal%5D)">Xanomeline suppresses excessive pro-inflammatory cytokine responses through neural signal-mediated pathways and improves survival in lethal inflammation.</a> Brain Behav. Immun. 44, 19-27 (2014).</li>
<li>Bellinger, D. L., Lorton, D., Lubahn, D., Felten, D. L. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBellinger%2C+DL+%22Psychoneuroimmunology%22">Psychoneuroimmunology</a>. Ader, R., Felten, D. L., Cohen, N. 55, Academic. San Diego. 55-112 (2001).</li>
<li>Andersson, U., Tracey, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+approach+to+rheumatoid+arthritis%3A+treating+inflammation+with+computerized+nerve+stimulation%5BTitle%5D)+AND+%22Cerebrum%22%5BJournal%5D)">A new approach to rheumatoid arthritis: treating inflammation with computerized nerve stimulation.</a> Cerebrum. 2012, 3(2012).</li>
<li>Ono, S. J., Nakamura, T., Miyazaki, D., Ohbayashi, M., Dawson, M., Toda, M. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/12789214">Chemokines: Roles in leucocyte development, trafficking, and effector function.</a> J. Allergy Clin. Immunol. 111 (6), 1185-1199 (2003).</li>
<li>Silvestre-Roig, C., Hidalgo, A., Soehnlein, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil+heterogeneity%3A+implications+for+homeostasis+and+pathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Neutrophil heterogeneity: implications for homeostasis and pathogenesis.</a> Blood. , (2016).</li>
<li>Matteoli, G., Boeckxstaens, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+vagal+innervation+of+the+gut+and+immune+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">The vagal innervation of the gut and immune homeostasis.</a> Gut. 62, 1214-1222 (2013).</li>
<li>Pereira, M. R., Leite, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+involvement+of+parasympathetic+and+sympathetic+nerve+in+the+inflammatory+reflex%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell.+Physiol%22%5BJournal%5D)">The involvement of parasympathetic and sympathetic nerve in the inflammatory reflex.</a> J. Cell. Physiol. 231, 1862-1869 (2016).</li>
<li>Levine, Y. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurostimulation+of+the+cholinergic+anti-inflammatory+pathway+ameliorates+disease+in+rat+collagen-induced+arthritis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Neurostimulation of the cholinergic anti-inflammatory pathway ameliorates disease in rat collagen-induced arthritis.</a> PLoS One. 9 (8), e104530(2014).</li>
<li>Huston, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcutaneous+vagus+nerve+stimulation+reduces+serum+high+mobility+group+box+1+levels+and+improves+survival+in+murine+sepsis%5BTitle%5D)+AND+%22Crit.+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Transcutaneous vagus nerve stimulation reduces serum high mobility group box 1 levels and improves survival in murine sepsis.</a> Crit. Care Med. 35 (12), 2762-2768 (2007).</li>
<li>Yuan, H., Silberstein, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vagus+nerve+and+vagus+nerve+stimulation%2C+a+comprehensive+review%3A+Part+II%5BTitle%5D)+AND+%22Headache%22%5BJournal%5D)">Vagus nerve and vagus nerve stimulation, a comprehensive review: Part II.</a> Headache. 56 (2), 259-266 (2016).</li>
</ol>

Die Autoren haben nichts zu offenbaren.

Seit seiner Entdeckung in den frühen 2000er Jahren wurden die Mechanismen der GAP gründlich untersucht. Wir haben jetzt ein gutes Bild des Weges, und insbesondere das Zielorgan, die Milz, wo NE, Gedächtnis - T - Zellen, Ach, und Makrophagen Arbeit als ein sehr effizientes Team herunterregulieren Entzündungsmediator 2. Wir haben vor kurzem auch Daten über die Bedeutung eines funktionellen Prostaglandinsystems bei Mäusen veröffentlicht, insbesondere PGE 2, die für die ACh - Freisetzung i...

Angeborene Immunität sorgt für eine sofortige erste Verteidigungslinie gegen Infektionen und Krankheiten in einem breiten Spektrum von Organismen. Es initiiert nicht nur die primäre Immunantwort die Gefahr zu beseitigen, aber es spielt auch eine zentrale Rolle bei der Aktivierung und die adaptive Immunität zu erziehen, die in einer pathogen-spezifischen Weise sekundäre Immunantworten führen. Die Entzündung wird durch eine Vielzahl von Zytokinen und Chemokinen orchestriert, was wiederum die Fähigkeit haben, andere Immunzellen an den Ort der Infektion zu gewinnen und die kardinalen Zeichen einer Entzündung, wie Rötung, Schwellung, Schmerzen, Verlust der Funktion und Fieber zu induzieren . Die Dauer und die Intensität der Entzündung, hängen von mehreren Faktoren ab, aber die Entzündung zu lösen und die Wiederherstellung der Homöostase ist ein wichtiger Schritt, um die Entstehung von chronischen entzündlichen Erkrankungen zu vermeiden. Jüngste Fortschritte auf dem Gebiet der Neurowissenschaften und Immunologie haben spezifische neuronale Mechanismen mit immensem therapeutischem Potential entwirren Einfl zu steuernammation sowohl im zentralen Nervensystem und in der Peripherie. Einer dieser Mechanismen ist der cholinerge antiinflammatorische Stoffwechselweg (CAP), das auch als Entzündungs reflex bekannt, die durch das autonome Nervensystem 4, 5 angesteuert wird. Es wird derzeit angenommen, dass Entzündungsmediator sensorische Nerven aktivieren und den Zustand der Entzündung auf das zentrale Nervensystem über Signale senden. Ein Reflexantwort wird dann durch die efferente Vagusnerv aktiviert. Eine umfangreiche Studie über die anatomischen Details der Kappe hat ein Parasympathikus-sympathisches Modell zweiere Nerven, den Vagusnerv und splenic Nerven bzw. 6 zusammengesetzt offenbart. In der Kappe endet die efferente cholinerge aktivierten Vagusnerv im celiac-mesenterialen Ganglion, was zur Aktivierung des adrenergen Nerven splenic durch einen Mechanismus noch erforscht werden. Die Milz- Nerven-, so aktiviert wird, um innere bekanntvate in unmittelbarer Nähe zu Immunzellen in der weißen Pulpa, Randzone, und roten Pulpa der Milz, der Haupt- und obligatorischen Organ der Kappe 7, 8. Norepinephrin (NE) aus dem Nervenendigungen splenic bindet an den β 2 -adrenergen Rezeptoren auf Milz - T - Lymphozyten exprimiert entspricht. Dies induziert Cholin - Acetyltransferase (ChAT) -vermittelten Acetylcholin (ACh) -Freisetzung, die wiederum α7 nikotinischen Acetylcholinrezeptoren (α7nACh) auf Makrophagen aktiviert, wodurch die Begrenzung der Cytokinproduktion und Entzündungen 2. Folglich ist es nun klar, dass das Nervensystem in der Lage ist eine Entzündung in den peripheren Geweben zu regulieren und lokale Immunhomöostase wiederherzustellen. Wie der Name des Weges schon sagt, ist das ACh-System von zentraler Bedeutung für das Funktionieren dieses neuro-immun regulierenden Weges. Interessanterweise beteiligten Mechanismen bei der Aktivierung vondie CAP scheint unterschiedlich in der Peripherie und im Zentralnervensystem zu sein. Während die Bedeutung von nikotinischen Rezeptoren (α7nAChR) in der Milz hat früher 9 gezeigt worden sind Muscarin - Rezeptoren (mAChR) zwingend für die zentrale Aktivierung des Weges 10, 11. In jüngerer Zeit, Muscarin periphere Verabreichung eines zentral wirkenden M1 - Agonisten signifikant unterdrückt Serum und Milz Tumornekrosefaktor α (TNF &amp; agr;) während lethal murine Endotoxämie, eine Aktion , die intakte Vagusnerv und splenic Nervensignale 12 erforderlich. Wir haben auch vor kurzem , dass Mäuse ohne Prostaglandin E 2 (PGE 2) waren nicht in der Lage zu reagieren Vagusnervstimulation und nicht herunterregulieren die LPS-induzierte Freisetzung von Zytokinen im Serum und Milz 3 gezeigt. Daher könnte die GAP auch von anderen Systemen als dem Haupt ACh pathw geregelt werdenay. Der Vagusnerv hat als solche wegen seiner Wanderung natürlich im Körper, Innervation Hauptorgane einschließlich der Leber, Lunge, Milz, Nieren und Darm 13 benannt. diese große Innervation und die sehr starke immunsuppressive Wirkung des Nervus vagus In Anbetracht könnte das therapeutische Potenzial der GAP eine Vielzahl von entzündlichen Erkrankungen abdecken. Der Nervus vagus kann elektrisch (oder mechanisch) aktiviert wird, die Kontrolle über die Spannung und die Frequenz, und im Gegensatz zur konventionellen Behandlung, ohne Arzneimittel auf den Körper gegeben. Studien laufen derzeit bei Rheumapatienten, zum Beispiel, die klinische Bedeutung der VNS zu testen , in 14 chronische Entzündung zu behandeln. Insgesamt ist die Neuroimmun-Kommunikation und Regulation der Entzündung derzeit untersucht, die eine mögliche alternative Behandlung zur konventionellen Therapie bieten. Daher Analyse des Nervus vagus stimulation-Effekt in den verschiedenen Organen innerviert, sondern auch die Charakterisierung der potentiellen therapeutischen Wirkung in Tiermodellen der chronischen Entzündung, würde auf jeden Fall Einblicke geben und für neue potenzielle therapeutische Ziele hoffen. Die ursprüngliche Methode , entwickelt von Tracey und Kollegen 4 konnte wegen Reizüberflutung der entzündlichen Reaktion auf unseren Bereich der Forschung umgesetzt werden (durch eine letale Dosis von LPS) und einem zu kurzem Zeitbereich zwischen CAP - Aktivierung und dem Auslesen. In der vorliegenden Arbeit präsentieren wir die auf den ursprünglichen Protokoll vorgenommene Änderungen, vergleichen die beiden unterschiedlichen Methoden auf Cytokinspiegel, und markieren Sie eine neue und entgegengesetzte Beobachtung auf dem Zielorgan (Milz).

<table><tbody><tr><td>Computer</td><td>Toshiba-Jeder</td><td></td> <td>Computer ist tatsächlich kompatibel</td></tr><tr><td>MP-150 Datenerfassungssystem</td><td>Biopac Systems</td><td>MP150WSW</td><td></td></tr><tr><td>Software bestätigen</td><td>Biopac Systems</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mäuse C57Bl/6</td><td>Charles River</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Anästhesiemaschine</td><td>Simtec Engineering</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Medical Sauerstoffflasche</td><td>AGA</td><td>107563</td><td></td></tr><tr><td>Medical Luftflasche&nbsp;</td><td>AGA</td><td>108639</td><td></td></tr><tr><td>Vetfluran (1.000 mg/g)</td><td>Virbac</td><td>137317</td><td></td></tr><tr><td>LPS</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L2630</td><td></td></tr><tr><td>Kochsalzlösung</td><td>Merck Millipore</td><td>1024060080</td><td></td></tr><tr><td>PBS 10x</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P5493</td><td>10-mal verdünnt für die verwendete Konzentration</td></tr><tr><td>Spritze (1 ml)</td><td>BD Plastipak</td><td>303172</td><td></td></tr><tr><td>Nadeln 23 G</td><td>KD-FINE</td><td></td><td>900284 0,6 x 30 mm (blau)</td></tr><tr><td>Mikrodisparierzange (gebogen)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F4142</td><td></td></tr><tr><td>Präparierschere</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Z265969</td><td></td></tr><tr><td>Chirurgisches Naht 4-0</td><td>Ethicon</td><td>G667G</td><td></td></tr><tr><td>Euthanasieeinheit</td><td>Euthanex Smartbox</td><td>EA-32000</td><td></td></tr><tr><td>Cavilon No Sting Barrierefolie</td><td>3M Health Care</td><td>3346N</td><td></td></tr><tr><td>TH1/TH2 9-Plex Assay, ultrasensitives Kit</td><td>MesoScale Discovery</td><td>K15013C-1</td><td></td></tr><tr><td>Stimulationselektrodengerät</td><td>Biopac Systems</td><td>STIMSOC</td><td></td></tr><tr><td>Aesculap Isis Rasierer</td><td>Agnthos</td><td>GT420</td><td></td></tr><tr><td>R70</td><td></td><td></td><td>Nagetierdiät von Lantmannen, Stockholm, Schweden</td></tr></tbody></table>

erhöhte erholzeit und abnehmend lps-verabreichung die vagusnervstimulation mechanisms in beschränkten entzündungsreaktionen zu studieren

Increased Recovery Time and Decreased LPS Administration to Study the Vagus Nerve Stimulation Mechanisms in Limited Inflammatory Responses

Entzündung ist eine lokale Reaktion auf Infektionen und Gewebeschäden, die durch aktivierte Makrophagen, Monozyten und andere Immunzellen vermittelt wird, die Zytokine und andere Entzündungsmediatoren freisetzen. Lange Zeit wurden humorale und zelluläre Mechanismen auf ihre Rolle bei der Regulierung der Immunantwort untersucht, aber jüngste Fortschritte auf dem Gebiet der Immunologie und Neurowissenschaften haben auch spezifische neuronale Mechanismen mit interessantem therapeutischem Potenzial entschlüsselt. Es wurde beschrieben, dass der sogenannte cholinerge antiinflammatorische Signalweg (CAP) die angeborene Immunantwort und Entzündungen auf sehr wirksame Weise kontrolliert. In den frühen 2000er Jahren entwickelten Tracey und seine Mitarbeiter eine Technik, die den Vagusnerv stimuliert und die Wirkung des Signalwegs nachahmt. Die Methodik basiert auf der elektrischen Stimulation des Vagusnervs bei niedriger Spannung und Frequenz, um Nebenwirkungen der Überstimulation, wie z.B. eine Deregulierung der Herzfrequenzvariabilität, zu vermeiden. Elektrische Geräte zur Stimulation sind jetzt verfügbar, so dass es einfach ist, die Methodik im Labor einzurichten. Ziel dieser Forschung war es, die mögliche Beteiligung von Prostaglandinen an der GAP zu untersuchen. Leider haben wir auf der Grundlage früherer Versuche versagt, das ursprüngliche Protokoll zu verwenden, da die induzierte Entzündungsreaktion entweder zu hoch war oder nicht für enzymatische Stoffwechseleigenschaften geeignet war. Die verschiedenen Einstellungen des ursprünglichen Operationsprotokolls blieben größtenteils unverändert, aber die Bedingungen bezüglich der Entzündungsinduktion und des Zeitpunkts vor der Opferung wurden verbessert, um unseren Zwecken gerecht zu werden (d.h. um die Beteiligung der CAP an begrenzteren Entzündungsreaktionen zu untersuchen). 
Die modifizierte Version des ursprünglichen Protokolls, die hier vorgestellt wird, beinhaltet einen längeren Zeitraum zwischen Vagusnervstimulation und Analyse, was mit einer geringeren Induktion von Entzündungsreaktionen verbunden ist. Zusätzlich stießen wir bei der Verringerung des Gehalts an zu injizierenden Lipopolysacchariden (LPS) auch auf neue Beobachtungen bezüglich der mechanistischen Eigenschaften in der Milz.

Level von TNFa und Interleukin-1β (IL-1β) nach dem Zeitraffer nach der Operation Erhöhung und Verringerung der Dosis von LPS Wie vorher gezeigt, kann das ursprüngliche Protokoll verwenden, verringert VNS die Niveaus von TNF &amp; agr; (169,3 ± 24,9 pg / mg in SHAM gegenüber 39,7 ± 10,8 pg / mg in VNS, p &lt;0,001) und IL-1β (360,0 ± 40,21 pg / mg in SHAM gegenüber 191,7 ± 27,2 pg / mg in VNS, p &lt;0,01) in der Milz nach einer in...

Die Stimulation des Vagusnervs hat sich als stark wirksam erwiesen, um periphere Entzündungen zu verringern. In dieser Arbeit stellen wir ein modifiziertes Vagusnerv-Stimulationsprotokoll vor, das weitere Untersuchungen der cholinergen antiinflammatorischen Mechanismen bei begrenzten Entzündungsreaktionen ermöglicht.

Erhöhte Erholzeit und abnehmend LPS-Verabreichung die Vagusnervstimulation Mechanisms in beschränkten Entzündungsreaktionen zu studieren

Inflammation is a local response to infection and tissue damage mediated by activated macrophages, monocytes, and other immune cells that release ...

Das übergeordnete Ziel dieses chirurgischen Eingriffs ist es, die Wirkung der Stimulation des Vagusnervs bei entzündlichen Zuständen zu beobachten. Analyse und Verständnis der verschiedenen Mechanismen und Zellen, die am sogenannten cholinergen entzündungshemmenden Signalweg beteiligt sind. Diese Methode wurde im Kevin-Tracey-Labor am Feinstein Institute entwickelt.Die Methode kann helfen, zentrale Fragen im Bereich der Neuroimmunologie zu beantworten. Die jüngsten Fortschritte stellen eine enge Verbindung zwischen dem Nerven- und dem Immunsystem her. Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass sie einfach in einem Labor aufgestellt werden kann.Es müssen jedoch wichtige Regeln bezüglich der Tierhaltung und des Operationsprotokolls beachtet werden. Der wandernde Verlauf des Vagusnervs durch den ganzen Körper und seine Fähigkeit, Informationen in verschiedenen Tiermodellen herunterzuregulieren, deuten darauf hin, dass seine Stimulation bei der Behandlung vieler entzündlicher Erkrankungen nützlich sein könnte. Normalerweise haben Personen, die neu in dieser Technik sind, Schwierigkeiten, den Vagusnerv unter mikroskopischer Beobachtung zu identifizieren und von der Halsschlagader zu isolieren.Obwohl es am Anfang knifflig ist, wird es mit der Zeit und Übung einfacher. Beginnen Sie mit dem Einschalten des Computers und des Datenerfassungssystems, das mit der Stimulationselektrode verbunden ist. Starten Sie die Datenerfassungs- und Analysesoftware.Dann folgt ein Aliquot von 5 Milligramm pro Milliliter Lipopolysaccharid oder LPS und verdünnt es mit Kochsalzlösung auf null Komma fünf Milligramm pro Milliliter. Betäuben Sie eine 25 Gramm schwere Maus in einer Induktionskammer. Wenn der gewünschte Anästhesiegrad erreicht ist, bewegen Sie das Tier aus der Kammer in die Maske.Drehen Sie den Drei-Wege-Anschluss, um die Maske zuzuführen, und stellen Sie den Durchflussregler ein. Prüfen Sie, ob eine chirurgische Anästhesieebene durch Verlust des Aufrichtreflexes und eine regelmäßige Atemfrequenz von etwa 100 Atemzügen pro Minute vorhanden ist, bevor Sie mit dem chirurgischen Eingriff beginnen. Sobald die Maus richtig betäubt ist, befestigen Sie die Beine der Maus mit Klebeband an der Werkbank.Achten Sie darauf, dass die Nase des Tieres noch vorsichtig in der Maske positioniert ist. Desinfizieren Sie den Operationsbereich ordnungsgemäß gemäß den zugelassenen Verfahren. Nachdem Sie einen Eins-zu-Eins-Punkt-Einschnitt von fünf Zentimetern in die Haut auf Höhe des Halses gemacht haben, positionieren Sie ein Stereomikroskop mit einem 12-Punkt-Fünf-x-Objektiv, um den Operationsbereich zu betrachten.Lokalisieren Sie den M. sternocleidomastoideus, indem Sie die Haut- und Fettschichten mit einer Pinzette entfernen. Ziehen Sie den M. sternocleidomastoideus zurück und bewegen Sie die Pinzette sowohl hinter den linken Vagusnerv als auch hinter die Halsschlagader. Isolieren Sie den Nerv von der Arterie, indem Sie die Pinzette sehr vorsichtig zwischen Nerv und Arterie platzieren.Dies ist ein kritischer Schritt in dem Verfahren, da der Nerv und die Arterie nahe beieinander liegen, ist es sehr einfach, die Gefäße zu durchtrennen und die Tiere zu töten. Wenn man jedoch die Pinzette sehr vorsichtig zwischen dem Nerv und der Arterie platziert, trennt sie sich schließlich und es ist möglich, den Vagusnerv zu isolieren. Platzieren Sie nun die Elektrode unter dem Vagusnerv.Da die Nadelelektrode ziemlich lang ist, wird der Nerv immer in Kontakt mit der Elektrode sein, auch wenn er sich leicht bewegt. Führen Sie anschließend eine intraperitoneale Injektion von LPS durch und warten Sie fünf Minuten, bevor Sie mit der Stimulation beginnen. Stimulieren Sie nach fünf Minuten den Vagusnerv für fünf Minuten bei fünf Volt und einem Hertz, indem Sie den Startknopf in der Erfassungssoftware drücken.Wenn die Stimulationsphase vorbei ist, entfernen Sie die Elektrode und nähen Sie die Wunde des Tieres mit einem chirurgischen Nahtfaden. Sprühen Sie eine stechende Barrierefolie auf die Wunde, um die Heilung zu verbessern und vor Infektionen zu schützen. Bringen Sie das Tier schließlich in einen sauberen Käfig und überwachen Sie, wie es wieder bei vollem Bewusstsein ist.Die folgenden Bilder zeigen die Auswirkungen einer verminderten LPS-Konzentration und einer erhöhten Latenzzeit auf die Spiegel von TNF alpha und IL one beta nach der Stimulation des Vagusnervs. Hier ist zu sehen, dass das ursprüngliche Paradigma sowohl TNF alpha als auch IL one beta im Vergleich zu scheinbetriebenen Kontrollen signifikant senkt. Das in diesem Video gezeigte Protokoll reduziert die Spiegel von TNF alpha, aber nicht von IL one beta erheblich.Wie hier zu sehen ist, hat eine sechsstündige Genesung ohne LPS-Injektion keinen Einfluss auf die Spiegel von TNF alpha oder IL one beta. Einmal gemeistert, kann diese Technik in etwa 20 Minuten durchgeführt werden, wenn sie richtig ausgeführt wird. Nach ihrer Entwicklung hat diese Technik den Weg für Forscher auf dem Gebiet der Neuroimmunologie geebnet.Untersuchung des Zusammenhangs zwischen dem Zentralnervensystem und dem Immunsystem. Und untersuchen Sie auch die Innervation des Vagusnervs neuer Organe und die Wirkung des cholinergen entzündungshemmenden Signalwegs bei chronischen Entzündungskrankheiten. Nachdem Sie sich dieses Video angesehen haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie Sie den Vagusnerv lokalisieren, isolieren und stimulieren können.Denken Sie auch daran, dass das Ausmaß der induzierten Entzündung und die Zeit bis zur Genesung des Tieres wichtige Aspekte sein können, die berücksichtigt werden müssen.

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Research

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