Röntgen-Fluoreszenz (XRF)

1. Vorbereitung der Silizium-Nitrid Windows

1. Umgekehrte Pinzette ein Fenster (Siliziumnitrid, die Windows erschüttern werden herunterfallen) abholen.
2. Legen Sie Fenster auf einen Objektträger, flachen Seite nach oben.
3. Halten Sie kleine Stücke Klebeband an den Seiten des Fensters zu, und verwenden Sie diese, um die Fenster am unteren Rand der Kulturschale zu halten.
4. Sterilisieren Sie die Fenster in Kultur Gerichte mit UV-Bestrahlung. Kann dies mit der Auto-Crosslink-Einstellung auf eine UV-Vernetzung-Schrank, gefolgt von weiteren UV-Bestrahlung unter der UV-Lampe in der Laminar-Flow-Haube für ca. 1 h.

(2) Beschichtung die Zellen auf die sterilisierten Silizium-Nitrid-Fenster

1. Halten Sie das Gericht mit ihm in einem Winkel von 45° geneigt.
2. Hinzufügen von Medien durch Pipettieren in Richtung der Seite der Schale und langsam entlasten den Neigungswinkel um das Fenster mit den Medien zu beschichten.
3. Zellen in der Kulturschale auf die gleiche Weise hinzufügen, und inkubieren.
4. Beobachten Sie die Zellen, die gelegentlich mit einem Lichtmikroskop um zu bestimmen, wann sie bereit sind zu verwenden.

(3) Fixierung und Trocknung von Zellen

1. Entfernen Sie in einem Laminar-Flow-Haube das Medium durch sanftes Absaugen beim Kippen des Gerichts, wie oben beschrieben.
2. Fügen Sie PBS, Pipettieren in Richtung der Seite der Schale schräg halten. Langsam zu entlasten den Neigungswinkel um die Fenster mit PBS zu beschichten.
3. Entfernen Sie die PBS mit sanften Aspiration.
4. Pipettieren in Richtung der Seite der Schale, und hielt sie in einem Winkel, fügen Sie 4 % PFA/PBS, pH 7, um die Zellen zu decken. Halten Sie in dieser Lösung für 20 min bei Raumtemperatur.
5. Entfernen Sie die PFA/PBS-Mischung, und als gefährliches Material entsorgen.
6. Fügen Sie PBS, pipettieren, wie oben beschrieben.
7. Wiederholen Sie die Schritte 3.5 und 3.6 zweimal.
8. Entfernen Sie die PBS durch sanftes absaugen.
9. 20-mM-Rohre, 200 mM Saccharose, pH 7 hinzufügen.
10. Entfernen Sie die Rohre/Saccharose durch sanftes absaugen.
11. Wiederholen Sie die Schritte 2.8 und 2.9 zweimal.
12. Schnell Beflecken der Kanten und Einzug des Fensters mit einem Wischtuch zurück, dann legen Sie das Fenster auf eine saubere Oberfläche, wie z. B. eine Gummimatte Raster, um zu trocknen.

4. Röntgen-Fluoreszenz-Bildgebung von Zellen

1. Sobald die Probe trocken ist, überprüfen Sie das Vorhandensein von Zellen auf die Fenster mit einem Lichtmikroskop.
2. Verwenden Sie Nagellack, um die Fenster zu einer Aluminium-Halterung durch das Strahlrohr zu sichern.
3. Einfügen Sie den Aluminium-Halter in einer kinematischen Halterung und dann legen Sie es in Position im Brennpunkt der Optik in die Röntgenmikroskop und in einem Winkel von ca. 45° zur einfallenden Röntgenstrahl, montiert auf die Probe Nanopositionierung Bühnen.
4. Beenden Sie Bereich Röntgenmikroskop Instrument (in der Regel ein Stall von Blei Wände gemacht), und öffnen Sie den Auslöser. Führen Sie die verbleibenden Schritte aus der Ferne.
5. Mit eine Zonenplatte oder Kirkpatrick-Baez Spiegel, einfarbigen Röntgenstrahl konzentrieren (in der Regel 10 keV Energie) auf eine Sub-Mikrometer-spot-Größe.
6. Nanopositionierung Probe Stufen verwenden und Anzeigen der Position der Röntgenstrahl auf die Probe mit einer vorkalibrierten nachgelagerten Szintillator-Kamera bestimmen, die entsprechende Breite und Höhe der Rasterscan um Daten der Probe zu erfassen.
7. Mit der Wellenlänge-dispersive Silizium Drift Detektor bei 90° zum einfallenden Strahl und ca. 3 mm oder weniger aus der Probe sammeln ein Test-Spektrum mit einer Verweilzeit von 1 – 2 sec.
8. Das Test-Spektrum anzeigen, wählen Sie eine angemessene Verweilzeit für den Scan, um genügend Signal-Rausch-für die Elemente von Interesse bieten.
9. Wählen Sie eine geeignete Auflösung des Scans, die nicht deutlich kleiner als die Punktgröße des Strahls auf die Probe, noch größer als die Merkmale in der Stichprobe ist.
10. Programmieren Sie den Scan in der Scan-Software zu, und sammeln Sie das Bild.