Name: Dissection und Beobachtung von Honey Bee Dorsal Schiff für Untersuchungen der Herzfunktion (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-12-12T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 52 s
Description: Lernen Sie die Präparation des dorsalen Gefäßes bei Honigbienen zur Untersuchung der Herzfrequenz mit kardiomodulatorischen Substanzen. Diese einfache Methode ermöglicht kostengünstige Studien zur Insektenphysiologie und Bestäuber-Gesundheit.

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Die Autoren danken Dr. Jeffrey Bloomquist und Dr. Daniel Swale für ihre technischen Kommentare und Vorschläge. Dieses Projekt wurde teilweise vom Department of Entomology und dem College of Agriculture and Life Sciences an der Virginia Tech finanziert.

1. Erhebung und Erstellung von Testpersonen <ol><li> Sammeln Sie die entsprechende Anzahl von Bienen aus der Kolonie. Hinweis: Die Anzahl benötigt, hängt nicht nur von der Größe und der Umfang des Experiments, sondern auch die Fähigkeit des Forschers. wenn es zwei Behandlungsgruppen mit einer gewünschten Probengröße von 10 Bienen pro Gruppe sind, zum Beispiel ein einigermaßen erfahrener Ermittler könnte mindestens 30 Bienen zu machen erfolglos Dissektionen sammeln und mit 20 nützlichen Videos am Ende punkten. </li><li> Minimieren Sie die Zeitspanne, die zwischen Sammlung und Präparation passiert. Hinweis: Obwohl Bienen kann im Labor für Tage vor der Dissektion untergebracht werden, wobei die Erfolgsrate von Dissektionen (dh die Wahrscheinlichkeit einer stabilen Herzfrequenz in einem seziert Rückengefäß aufrechtzuerhalten) wurde beobachtet , bezogen auf die Menge der Zeit zu verringern , dass Bienen sind weg von der Kolonie untergebracht. <ol><li> Geben Sie Bienen mit einer Quelle für Wasser und Nahrung, während im Labor untergebracht. Für EXAmple, auf ein Minimum, den Zugang zu einer 50% (w / v) Saccharoselösung in Wasser (dies ist ausreichend für Zeitdauern von weniger als 6 h). Für längere Zeiträume bieten Bienen den Honig gelangen. </li><li> Haus Bienen im Labor über Nacht bei einer Temperatur von etwa 32 ° C und 60-80% relativer Luftfeuchtigkeit Stress zu reduzieren und Austrocknung zu vermeiden. </li></ol></li><li> Vor der Präparation, betäuben die Bienen kurz in der Handhabung zu erleichtern. HINWEIS: Dies kann die Erfolgsrate von Dissektionen verringern und den Durchsatz zu verringern. <ol><li> Kühlen Sie die Bienen entweder, indem sie auf Eis gestellt oder in einen Kühlschrank für gerade lange genug, um zu reduzieren Bewegung, um bei der Handhabung zu erleichtern. </li><li> Alternativ kurz Bienen zu CO 2 , um bei der Handhabung zu erleichtern aussetzen. HINWEIS: Längere Einwirkung von Kälte kann die Erfolgsrate von Dissektionen reduzieren. Erweiterte oder wiederholter Exposition gegenüber CO 2 kann auch die Erfolgsrate von Dissektionen reduzieren. </li></ol></li></ol> 2. Dissectionvon dorsale Bauchwand HINWEIS: Die Bienen sollten zum Zeitpunkt der Dissektion am Leben. <ol><li> Mit einer Pinzette und / oder Mikrodissektion Schere, entfernen Sie die Beine und Flügel Dissektion des Bauches zu erleichtern. Halten Sie einen kleinen Becher oder einem ähnlichen Behälter mit destilliertem Wasser gefüllt in der Nähe zum Zwecke der Instrumente zwischen Dissektionen Spülen. </li><li> Während die Biene mit einer Pinzette zurückzuhalten, die Mikrodissektion Schere verwenden seitlich zwischen dem ersten und dem zweiten tergites (siehe Abbildung 1) entlang der dorsalen Bauchwand zu schneiden. </li></ol><img alt="Abbildung 1" src="/files/ftp_upload/55029/55029fig1.jpg" /> Abbildung 1: Dorsale Ansicht der Bienen Bauch. Der anfängliche Einschnitt sollte zwischen den ersten und zweiten tergites hergestellt werden, wie durch die rote Linie bezeichnet. Maßstabsbalken = 1 mm. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55029/55029fig1large.jpg" target="_blank">Bitte klicken sie</a>e eine größere Version dieser Figur zu sehen. <ol start="3"><li> Während die leichte Schulter der hinteren Kante des zweiten Tergit mit der Greifzange, die entlang jeder Seite der Biene von der anfänglichen Einschnitt in die Stinger längs geschnitten (siehe Abbildung 2). Seien Sie vorsichtig beim Durchstoßen des Magen-Darm-Trakt zu vermeiden Schneiden. </li></ol><img alt="Figur 2" src="/files/ftp_upload/55029/55029fig2.jpg" /> Abbildung 2: Seitenansicht der Bienen Bauch. Die zweite und dritte Einschnitte sollten entlang jeder Seite des Abdomens durchgeführt werden, wie durch die rote Linie bezeichnet. Maßstabsbalken = 1 mm. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55029/55029fig2large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier</a> , um <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55029/55029fig2large.jpg" target="_blank">eine größere Version dieser Figur zu sehen.</a> <ol start="4"><li> Tauschen Sie die Schere für einen zweiten Satz von feinen Pinzette und verwenden sie sorgfältig auf die dorsale Bauchwand vom Rest trennen of den Bauch. Entfernen Sie vorsichtig die Stinger und einen Teil des Magen-Darm-Trakt, die an der dorsalen Bauchwand befestigt bleibt. Vermeiden Sie den Darm Bersten, als der Inhalt kann Mantel der Bauchdecke und Visualisierung des Rückengefäß behindern. </li></ol><img alt="Figur 3" src="/files/ftp_upload/55029/55029fig3.jpg" /> Abbildung 3: Ansicht des Rückengefäß. Sobald der Darm und Stinger entfernt worden sind, ist der Rückengefäß sichtbar entlang der Mittellinie der dorsalen Bauchwand seziert. Maßstabsbalken = 1 mm. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55029/55029fig3large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier</a> , um <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55029/55029fig3large.jpg" target="_blank">eine größere Version dieser Figur zu sehen.</a> <ol start="5"><li> Ordnen Sie die dorsalen Bauchwand in der gewünschten Ausrichtung unterhalb der Kamera , so dass das Rückengefäß sichtbar ist (siehe Abbildung 3). Nutzen Sie die Mikrodissektion Schere überschüssige ab wegzutrimmendominal Wand, die Visualisierung des dorsalen Fahrzeugs behindert wird. Die Form der dorsalen Bauchwand sollte eine flache Schale oder Schüssel ähneln, wenn sie richtig gelegen. <ol><li> Da das Rückengefäß nicht in die hinterste Abdominalsegment der Biene erweitern, entfernen Sie das letzte Tergit, um die Visualisierung des Rückengefäß zu verbessern. </li></ol></li><li> Mit Hilfe eines einstellbaren Volumen-Mikropipette, decken Sie die Rückengefäß mit 10 ul einer isotonischen Lösung physiologischen Bedingungen zu erhalten und einen stetigen Herzschlag erleichtern. HINWEIS: Die empfohlene Lösung Viertel Stärke Ringer-Lösung (0,120 g / L Calciumchlorid, 0,105 g / l Kaliumchlorid, 0,050 g / L Natriumbicarbonat und 2,250 g / l Natriumchlorid), das eine stabile zu erleichtern gefunden wurde, kontinuierliche Herzschlag. </li></ol> 3. Beobachtung und Modulation der Herzfrequenz <ol><li> Lassen Sie das Rückengefäß ungestört sitzen, bis eine stabile, kontinuierliche Herzschlag erreicht wird(In der Regel innerhalb von 300 sec). HINWEIS: Herzschlag als rhythmische Kontraktionen des dorsalen Gefäß sichtbar gemacht wird. Anfänglich kann es scheinen kein Herzschlag zu sein, besonders wenn die Biene anästhesiert wurde, aber das Herz wird in der Regel schlag fortgesetzt, nachdem mehrere Minuten in isotonischer Lösung ruhen und kann stundenlang weiter zu schlagen, vorausgesetzt, es bleibt in Lösung getaucht. </li><li> Messen Sie die Herzfrequenz in Bezug auf die Anzahl der Schläge pro Minute (BPM). <ol><li> Notieren Sie die Anzahl der Kontraktionen während eines 60 Sekunden Zeit beobachtet. Verwenden Sie einen Handtallykostenzähler und einen Timer, diesen Prozess zu erleichtern. </li></ol></li><li> Messen Sie die Veränderung der Herzfrequenz durch die beobachtete BPM Aufzeichnung vor und nach der Behandlung mit einer cardiomodulatory Verbindung. HINWEIS: Obwohl die Zeit eine Wirkung auf die Herzfrequenz variieren von der Verbindung kann in Abhängigkeit zu beobachten erforderlich getestet werden, können Veränderungen der Herzfrequenz der Regel innerhalb weniger Minuten beobachtet werden. <ol><li> Bestimmen Sie die Basisherzfrequenz unmittelbar vor derdie Zugabe einer Testverbindung. HINWEIS: Die Nachbehandlung Herzfrequenz kann in der Regel nach 90 bis 120 Sekunden bestimmt werden. </li><li> Bereiten Potential cardiomodulators (zB Octopamin) , indem die Verbindung in der gleichen isotonischen Lösung Auflösen verwendet , um die Rückengefäß baden. </li><li> Fügen Sie die Testverbindungen zur Lösung des Rückengefäß umgeben von einer micropipetter verwendet. </li></ol></li><li> Für eine höhere Genauigkeit und einen höheren Durchsatz, eine Videoaufzeichnung eines jeden Probanden machen und dann die Videos verwenden, um die Herzfrequenz zu einem späteren Zeitpunkt punkten. HINWEIS: Dies ermöglicht einen einzelnen Ermittler Dissektionen, um zu staffeln fast kontinuierliche Produktion von Videos zu erleichtern. Wenn die Aufnahme von Videos ist die empfohlene Mindestlänge ca. 240 sec bei jeder Testverbindung, bei der Markierung 60 Sekunden hinzugefügt. Dadurch wird sichergestellt, dass der Prüfer für Scoring-Basisherzfrequenz mit 60 sec Fenster hat und dann eine weitere 60 sec Fenster für Scoring Nachbehandlung Herzfrequenz 120 Sekundennach der Behandlung. </li></ol>

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</ol>

Die Autoren haben nichts offenzulegen.

Das hier vorgestellte Protokoll bietet einen einfachen und effektiven Ansatz zum Testen pharmakologischer Verbindungen auf ihre Auswirkungen auf die Herzfrequenz von Honigbienen. Wie in früheren Experimenten beobachtet, bei denen entweder der ventrale Nervenstrang eines lebenden Insekts5 durchtrennt oder der ventrale Nervenstrang bei Freilegung des dorsalen Gefäßes7 präpariert wird, führt der Verlust der Regulation des Zentralnervensystems zu einem stabilen, niederfrequenten Herzschlag. Die niedrige...

Das übergeordnete Ziel dieser Methodik ist der Prüfer zu ermöglichen, schnell und einfach zu beobachten und die Wirkung zu quantifizieren, dass ein pharmakologisches Mittel auf die Herzfrequenz von Honigbienen hat. Bees, wie andere Insekten, haben ein offenes Kreislaufsystem, die Hämolymphe der Insekten Äquivalent von Blut während der gesamten Körperhöhle, bekannt als Hämocoel verbreitet. Die Zirkulation von Hämolymphe ist essentiell für den Transport von Nährstoffen, Immunfaktoren, Abfallprodukte sowie Neurohormone und andere Signalmoleküle 1. Kreislauf wird durch die Rückengefäß erleichtert, die entlang der dorsalen Mittellinie des Insekts erstreckt, sowie Zubehör pulsatile Organe. Das Rückengefäß gliedert sich in zwei funktionell unterschiedliche Abschnitte, die das Herz in den Bauch und die Aorta im Thorax und Kopf bezeichnet. Propagated Kontraktionen in der Herzpumpe Hämolymphe in Richtung des Thorax und Kopf, während Zubehör pulsierender Organe gewährleisten Hämolymphe Fluss zu den Extremitäten. <pclass = &quot;jove_content&quot;&gt; Insect Herzfunktion kann unter Verwendung einer Vielzahl von Verfahren beobachtet werden, abhängig von der Größe, der Physiologie oder Lebensstadium des Insekts. Ein gemeinsamer Ansatz zur Beobachtung der Herzfrequenz in Larven oder kleineren Insekten ist die Verwendung von intravital Bildgebung 2. Diese Methode ist weniger nützlich bei erwachsenen Bienen jedoch, da es schwierig sein kann, um das Rückengefäß durch die Bauchdecke deutlich anzuzeigen. Ein etablierter Ansatz zur Erfassung der Herzfrequenz in einer Vielzahl von Insekten, einschließlich Bienen, ist die Verwendung von Kontaktthermographie, die an der Außenseite des Insekten angewendet Thermistoren verwendet , um Herz Pulsationen 3,4 detektieren. Die Herzfrequenz bei erwachsenen Bienen hat auch eine elektrophysiologische Technik aufgezeichnet wurden mit Hilfe eines elektrischen Impedanzsignals 4,5 zu messen. Diese Technik erfordert das Einsetzen von Elektroden in das Tier neben dem Herzen und die Verwendung eines Impedanzwandlers aufzuzeichnen Herzschläge 4. In ähnlicher Weise wurden Elektrokardiogramme verwendet, um DETECt elektrische Signale durch das Herz erzeugt und mit Videoaufzeichnung der bee 6 kombiniert Veränderungen in der Herzaktivität zu beobachten. Ein klarer Vorteil dieser Ansätze ist, dass die Herzfrequenz in einer intakten, lebenden Bienen bewertet wird, anstatt in einem seziert Probe, die die Verfügbarkeit des gesamten Spektrums von physiologischen Reaktionen im Fach hilft sicherzustellen. Die Herausforderungen dieser Ansätze umfassen Buchhaltung zur Immobilisierung oder anesthetization des Subjekts, die Notwendigkeit, außerhalb Variablen und Reize zu begrenzen, die die Herzfrequenz beeinflussen könnten, sowie eine entsprechende Liefermethode bestimmen, wann pharmakologische Wirkstoffe zu testen. Ein weiterer Ansatz, der zur Untersuchung von bee Herzaktivität verwendet wurde , ist , um teilweise das Insekt um sezieren das Herz freizulegen, dann messen dorsal Kontraktionen Gefäß eine Kraftverschiebungswandler 7 verwendet wird . In diesem Protokoll wird das Herz ständig mit dem Laufen physiologischer Kochsalzlösung und Test co gebadetmpounds 7 kann in dieser Lösung für die Anwendung auf dem Gegenstand gelöst werden. Ein signifikanter Unterschied zwischen diesem Verfahren und den zuvor beschriebenen ist , dass der Bauchmark entfernt wird, um die Rolle zu beseitigen , dass das zentrale Nervensystem in Modulieren Herzfrequenz 5 spielen gezeigt ist. Das Ergebnis ist , dass die Basisherzschlag, die in der Regel ziemlich erratisch ist, stabilisiert sich bei einer viel niedrigeren Frequenz und Amplitude als üblicherweise in einem lebenden Insekts 5,7 beobachtet. Was alle diese Methoden gemeinsam haben, ist, dass sie hoch spezialisierte und oft teure Ausrüstung erfordern, zusätzlich zu einem gewissen Maß an Know-how, um durchgeführt werden. Vielleicht ist der größte Nachteil ist, dass keiner dieser Ansätze sind besonders gut geeignet, um Versuche, die eine große Anzahl von Themen beinhalten testen, beispielsweise eine Bibliothek von potentiell cardiomodulatory Screening von Verbindungen. Die größte Stärke des hier beschriebenen Ansatzist seine Einfachheit. Das Protokoll ist relativ einfach zu meistern, das Setup benötigt wenig Platz, und nur ein minimaler finanzieller Aufwand notwendig ist. Das Verfahren erfordert wenig mehr als einige Bienen, einige chirurgische Instrumente, einer isotonischen Lösung und entweder ein digitales Mikroskop oder ein traditionelles Mikroskop mit einer Digitalkamera. Bienen werden seziert die dorsale Gefäß und digitalen Videos verwendet werden, zu visualisieren die Herzfrequenz vor und nach der Behandlung mit pharmakologischen Mitteln zu erfassen. Obwohl Videoaufzeichnung tatsächlich nicht notwendig ist , Änderungen der Herzfrequenz zu beobachten, wird es den Durchsatz stark erhöhen (dh die Anzahl der Probanden , die in einer bestimmten Zeitspanne verarbeitet werden können). Der Prüfer kann die Effizienz zu maximieren, indem sie eine große Anzahl von Videos auf einmal aufzunehmen und dann später erzielte diese Videos zu einem günstigeren Zeitpunkt. Ein weiterer Vorteil dieses Ansatzes besteht darin, dass Videos erlauben die Ermittler über zu starten, sollte der Scoring-Prozess unterbrochen werden, und machen es einfacher für die viewer bis auf die Behandlung, um Bias zu reduzieren geblendet werden.

<table><tbody><tr><td>Dino-Lite Edge digitales USB-Mikroskop</td><td>Dino-Lite</td><td>AM4815ZT</td><td>Jedes digitale Mikroskop oder eine ähnliche Einrichtung reicht</td></tr> aus <tr><td>Mikroskopstativ</td><td>Dino-Lite</td><td>RK-10</td><td>Jedes Stativ, das für das Digitalmikroskop geeignet</td></tr><tr><td>ist Laptop oder PC</td><td></td><td></td><td>Notwendig für das digitale Mikroskop</td></tr><tr><td>Mikrodissektionschere (Vannas, 8 cm, gerade, 5 mm Klingen)</td><td>World Precision Instruments</td><td>14003</td><td>Jede ähnliche Schere, die für die Mikrodissektion geeignet ist, reicht</td></tr> aus <tr><td>Mikrodissektion, 10,2 cm, abgewinkelt (2 Paar)</td><td>World Precision Instruments</td><td>504482</td><td>Jede ähnliche Pinzette, die für die Mikrodissektion geeignet ist, reicht aus</td></tr><tr><td>Ringers Lösung 1/4 Stärke Tabletten&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>96724-100TAB</td><td></td></tr><tr><td>Präparierlöffel</td><td></td><td></td><td>Jede für die Mikrodissektion geeignete Oberfläche</td></tr><tr><td>Einkanal 10 & Mikro; l Pipette</td><td></td><td></td><td>Jedes Gerät, das in der Lage ist, 10 & Mikro; l Volumen</td></tr><tr><td>Pipettenspitzen</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kleiner Becher oder Behälter mit Wasser</td><td></td><td></td><td>Zum Spülen von Instrumenten zwischen den Probanden</td></tr><tr><td>Handstrichzähler</td><td>Office Depot</td><td>295033</td><td>Jedes ähnliche Produkt reicht</td></tr> aus <tr><td>Timer</td><td>Office Depot</td><td>644219</td><td>Jedes ähnliche Produkt reicht aus</td></tr><tr><td>Deionisiertes Wasser</td><td></td><td></td><td>Vorbereitung der Ringers-Lösung und Spülinstrumente</td></tr></tbody></table>

dissection und beobachtung von honey bee dorsal schiff für untersuchungen der herzfunktion

Dissection and Observation of Honey Bee Dorsal Vessel for Studies of Cardiac Function

Die europäische Honigbiene, Apis mellifera L., ist eine wertvolle landwirtschaftliche und kommerzielle Ressource, die für die Produktion von Honig und die Bereitstellung von Bestäubungsdiensten für Nutzpflanzen bekannt ist, sowie ein wichtiges soziales Modellinsekt zur Erforschung von Gedächtnis und Lernen, Altern und mehr. Hier beschreiben wir ein detailliertes Protokoll für die Dissektion der dorsalen Bauchdecke einer Biene, um ihr dorsales Gefäß sichtbar zu machen, das beim Insekt die Rolle des Herzens erfüllt. Eine erfolgreiche Dissektion legt ein funktionsfähiges Herz frei, das unter den richtigen Bedingungen über einen längeren Zeitraum einen gleichmäßigen Herzschlag aufrechterhalten kann. Dies ermöglicht es dem Untersucher, die Herzfrequenz durch die Anwendung von kardiomodulatorischen Verbindungen auf das dorsale Gefäß zu manipulieren. Durch die Verwendung eines Digitalmikroskops oder eines Mikroskops, das mit einer Digitalkamera ausgestattet ist, kann der Untersucher vor und nach der Behandlung mit Testsubstanzen Videoaufnahmen des dorsalen Gefäßes machen. Die Videos können dann zu einem für den Benutzer günstigen Zeitpunkt bewertet werden, um Änderungen der Herzfrequenz sowie Änderungen des Herzschlagmusters nach der Behandlung zu bestimmen. Die Vorteile dieses Protokolls bestehen darin, dass es relativ kostengünstig einzurichten ist, leicht zu erlernen ist, wenig Platz oder Ausrüstung benötigt und nur sehr wenig Zeit in Anspruch nimmt.

Da viele der pharmakologisch wirksamen Verbindungen, die nicht löslich sind, getestet werden kann in Wasser unter Verwendung dieses Protokolls ist es erforderlich, ein zuverlässiges Lösungsmittel zu haben, die Testverbindungen über die isotonische Lösung ermöglicht geliefert werden verwendet, um die Rückengefäß baden. Dimethylsulfoxid (DMSO) ist ein Lösungsmittel , das üblicherweise als Vehikel zur Abgabe von experimentellen Arzneimitteln und anderen Verbindungen in Tieren verwendet wird...

Das Bauchgefäß der Honigbiene und anderer Insekten dient als funktionelles Äquivalent zum Säugetierherz und spielt eine wichtige Rolle beim Nährstofftransport, der Abfallbeseitigung, der Immunfunktion und mehr. Hier beschreiben wir ein Protokoll zur Visualisierung und pharmakologischen Manipulation der Bienenherzfrequenz.

Dissection und Beobachtung von Honey Bee Dorsal Schiff für Untersuchungen der Herzfunktion

The European honey bee, Apis mellifera L., is a valuable agricultural and commercial resource noted for producing honey and providing crop pollination ...

Das übergeordnete Ziel dieses Protokolls ist es, Veränderungen der Bienenherzfrequenz zu beobachten, die sich aus der direkten Anwendung von kardiomodulatorischen Mitteln auf das dorsale Gefäß ergeben. Diese Methode kann wichtige Fragen zur Physiologie von Insekten beantworten, insbesondere zur Gesundheit von Bestäubern. Der Hauptvorteil dieser Technik ist ihre Einfachheit, die sie kostengünstig und einfach durchzuführen macht.Sammle die entsprechende Anzahl an Bienen aus dem Volk. Eine kluge Maßnahme wäre es, einen Überschuss von 50 Prozent einzuplanen, um fehlgeschlagene Sektionen zu berücksichtigen, was selbst erfahrene Ermittler einplanen müssen. Stellen Sie den Bienen eine Wasser- und Nahrungsquelle zur Verfügung, während sie im Labor untergebracht sind.Bei einer Unterbringungsdauer von weniger als sechs Stunden sollten Sie mindestens Zugang zu einer 50-prozentigen Saccharoselösung gewähren. Bieten Sie auch für längere Zeiträume Zugang zu Honig. Halten Sie die Bienen über Nacht bei etwa 32 Grad Celsius und 60 bis 80 Prozent relativer Luftfeuchtigkeit.Frisch gesammelte Bienen lassen sich leichter sezieren, also fahre so schnell wie möglich mit dem Präparieren fort. Vor den Sektionen betäuben Sie die Bienen gerade so weit, dass ihre Bewegung reduziert wird, indem Sie sie kurz Kohlendioxid aussetzen. Die Tiefe der Anästhesie kann die Dissektion erschweren, verwenden Sie also so wenig Gas wie möglich.Die Bienen müssen zum Zeitpunkt der Sektion noch am Leben sein. Verwenden Sie zunächst eine Pinzette oder eine Mikrodissektionsschere, um die Beine und Flügel zu entfernen. Spülen Sie die Werkzeuge nach jeder Manipulation mit destilliertem Wasser ab.Halten Sie dann die Biene mit einer Pinzette fest und schneiden Sie mit der Schere seitlich entlang der dorsalen Bauchdecke, zwischen dem ersten und dem zweiten Tergiten. Fassen Sie dann den hinteren Rand des zweiten Tergits leicht mit der Pinzette und schneiden Sie vorsichtig in Längsrichtung entlang jeder Seite der Biene vom ersten Schnitt bis zum Stachel. Den Verdauungstrakt nicht durchstechen.Trennen Sie anschließend mit einer feinen Pinzette vorsichtig die dorsale Bauchdecke vom restlichen Bauch. Entfernen Sie dann vorsichtig den Stachel und entfernen Sie vorsichtig alle Teile des Verdauungstrakts, die an der dorsalen Bauchdecke befestigt bleiben. Geben Sie den Darminhalt nicht frei, da er die Sicht auf das dorsale Gefäß verdecken kann.Entfernen Sie nun den letzten Turgit, um die Sichtbarkeit des dorsalen Gefäßes zu verbessern. Der nächste Schritt besteht darin, das Stadium so anzupassen, dass das dorsale Gefäß sichtbar ist, und überschüssige Bauchdecke, die die Sicht behindert, abzuschneiden. Die Form der dorsalen Bauchdecke sollte bei richtiger Lage einer flachen Tasse oder Schüssel ähneln.Bedecken Sie das dorsale Gefäß mit 10 Mikrolitern der empfohlenen isotonischen Lösung, um den physiologischen Zustand aufrechtzuerhalten, und entfernen Sie alle verbleibenden Membranen, die die Visualisierung des dorsalen Gefäßes behindern. Die Zugabe der isotonischen Lösung kann dazu führen, dass die lose Membran schwimmt und die Sicht auf das dorsale Gefäß verdeckt. Diese Membranstücke können mit einer feinen Pinzette entfernt werden, aber seien Sie vorsichtig, um das dorsale Gefäß nicht zu beschädigen.Anfangs mag es so aussehen, als ob es keinen Herzschlag gibt, aber in ein paar Minuten in isotonischer Lösung wird das Herz normalerweise wieder schlagen. Wenn das Herz in Lösung gebadet wird, kann es stundenlang weiterschlagen. Lassen Sie das dorsale Gefäß ungestört sitzen, bis ein stabiler, kontinuierlicher Herzschlag erreicht ist.Dies geschieht in der Regel innerhalb von fünf Minuten. Messen Sie die Basisherzfrequenz mit einem Handzähler oder machen Sie für mehr Genauigkeit eine Videoaufzeichnung des Experiments und führen Sie die Messungen später durch. Zeichnen Sie vor der ersten Behandlung mindestens eine Minute lang stabile Herzschläge auf.Bereiten Sie sich nun auf die Anwendung der potenziellen Kardiomodulatoren vor, die idealerweise in der gleichen isotonischen Lösung wie das Bad gelöst sind. Aus diesem Grund enthält die empfohlene Lösung etwas DMSO, mit dem die meisten Verbindungen gelöst werden können. Warten Sie nach der Zugabe einer Testverbindung mindestens eine Minute, bevor Sie die Änderung der Herzfrequenz messen.Um eine genaue Messung der Herzfrequenz zu erhalten, werden mindestens eine Minute Daten benötigt, und in der Regel sind mehrere Minuten Daten erforderlich. Eine Vielzahl von isotonischen Lösungen, die eine Reihe von DMSO-Konzentrationen enthielten, wurde auf Auswirkungen auf die Herzfrequenz getestet. Fünf Prozent und 10 Prozent DMSO senkten die Herzfrequenz signifikant, während eine isotonische Lösung mit einem Prozent DMSO dies nicht tat.Also wurde die Ein-Prozent-Lösung für Experimente verwendet. Octopamin, ein gut charakterisierter Demodulator bei Wirbellosen, wurde gegen das Vehikel getestet. Höhere Konzentrationen von Octopamin erhöhten die Herzfrequenz signifikant und zeigten damit den Nutzen des Assays.Nachdem Sie sich dieses Video angesehen haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie Sie eine Dissektion durchführen, um das dorsale Gefäß zu visualisieren, und wie Sie die Auswirkungen potenzieller Kardiomodulatoren auf die Herzfrequenz der Bienen testen können. Sobald diese Technik gemeistert ist, kann eine Dissektion in wenigen Minuten abgeschlossen werden, wenn sie richtig durchgeführt wird.

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Forschung

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Biology

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Hier werden die experimentellen Protokolle für die Vorbereitung von Drosophila in verschiedenen Entwicklungsstadien und die Durchführung einer optischen Längsschnittbildgebung von Drosophila-Herzschlägen mit einem speziellen optischen Kohärenzmikroskopie-System (OCM) beschrieben. Die morphologischen und dynamischen Veränderungen des Herzens können durch die Analyse der strukturellen und funktionellen Parameter des Herzens aus OCM-Bildern quantitativ charakterisiert werden.

Drosophila Vorbereitung und Longitudinal Imaging der Herzfunktion in vivo unter Verwendung optischer Kohärenzmikroskopie (OCM)

Echokardiographische Untersuchung wird häufig bei Mäusen verwendet. Teure hochauflösende Ultraschall-Geräte wurden für diesen Zweck entwickelt. Dieses Protokoll beschreibt eine erschwingliche echokardiographische Verfahren kombiniert mit histologischen morphometrische Analysen kardiale Morphologie zu bestimmen.

Echokardiographische und histologische Untersuchung der kardiale Morphologie in der Maus

Präsentiert wird hier ein Protokoll zur Untersuchung der koronaren Mikrozirkulation im lebenden murinen Herzgewebe durch ex vivo-Überwachung des arteriellen Perfusionsdrucks und -flusses, der den Druck aufrechterhält, sowie gefäßvaskulärer Baumbestandteile, einschließlich der Kapillarbetten und Pericyten, da die Septalarterie kanüliert und unter Druck steht.

Dynamische Messung und Bildgebung von Kapillaren, Arteriolen und Pericyten im Mausherz

Aufgrund der komplexen Anatomie kann ein konsistent reproduzierbares Dissektions- und Entnahmeprotokoll für Herzproben schwierig umzusetzen sein. Dieses Manuskript präsentiert die Schlüsselelemente einiger Standardprotokolle zur kardialen Dissektion und hebt sowohl die groben Untersuchungsansätze als auch die üblicherweise für histopathologische Untersuchungen verwendeten Probenahmestellen hervor.

Dissektionstechniken und histologische Probenahme des Herzens in Großtiermodellen für Herz-Kreislauf-Erkrankungen

Das Drosophila-Protokoll für Herzschnitte und Fluoreszenzbildgebung vereinfacht die Untersuchung von Herzstrukturen und -pathologien. Dieser Ansatz beinhaltet einfaches Schneiden, Färben und Imaging, wobei das technische Know-how, das für die herkömmliche Dissektion erforderlich ist, umgangen wird. Es verbessert die Zugänglichkeit und macht Drosophila zu einem breiter nutzbaren Modell für die kardiale Forschung in der breiteren wissenschaftlichen Gemeinschaft.

Neuartige und effiziente Methode zur Fluoreszenzfärbung von Drosophila-Herzen mit Kryosektion

Lernen Sie die Präparation des dorsalen Gefäßes bei Honigbienen zur Untersuchung der Herzfrequenz mit kardiomodulatorischen Substanzen. Diese einfache Methode ermöglicht kostengünstige Studien zur Insektenphysiologie und Bestäuber-Gesundheit.

Dissection und Beobachtung von Honey Bee Dorsal Schiff für Untersuchungen der Herzfunktion

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