Name: Analyse wohltuende Wirkung von Nahrungsergänzungsmitteln auf Darmepithel Barrierefunktionen Während Experimental ulcerosa (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-01-05T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 58 s
Description: Erfahren Sie die Auswirkungen von Nahrungsergänzungsmitteln auf die Darmepithel-Barrierefunktion bei Mäusen mit DSS-induzierter Kolitis. Diese Methode ermöglicht die Analyse von Kolonmorphologie und oxidativem Stress.

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Diese Arbeit wurde durch Zuschüsse aus dem mexikanischen Rat für Wissenschaft und Technologie (CONACYT, 207268 und 233395 zu Michael Schnoor) unterstützt. KFCO ist ein Empfänger eines CONACYT Stipendiums (396.260) einen Master-Abschluss zu erhalten.

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Die Autoren haben nichts zu offenbaren.

Um Nahrungsergänzungsmittel in den klinischen Studien zu verwenden, müssen die Vorteile und die Sicherheit dieser Ergänzungen sorgfältig in tierexperimentellen Studien in vivo bewertet werden. Im Falle von Kolitis, mehrere geeignete Tiermodelle, die die klinischen Symptome von IBD ähneln wurden eingerichtet, einschließlich der chemischen Modellen DSS, TNBS oder Essigsäure; Knock-out (KO) Modelle wie IL10-KO; und immunzellvermittelte Kolitis Verwendung adoptive T-Zell - Transfer 19-21. Das DSS - Model...

Ulcerosa ist eine entzündliche Erkrankung des Dickdarms, die Durchfall und Bauchschmerzen verursachen können. Ulcerosa kann akut sein, in Reaktion auf eine Infektion oder Stress, oder es kann als eine chronische Erkrankung, wie beispielsweise bei Colitis ulcerosa (UC) zu entwickeln, die zur Gruppe der entzündlichen Darmerkrankungen (IBD) gehört. Obwohl die klinischen Symptome von UC sind gut beschrieben wurde, ist die Pathogenese noch schlecht 1 verstanden. Es wird unter den Experten angenommen , dass UC eine multifaktorielle Erkrankung, die mit genetischen Mutationen und anomale Immunreaktionen ist es, eine große Rolle spielen 2. Allerdings Umweltfaktoren, wie zum Beispiel Wohnstil und Ernährung, tragen auch zur Krankheitsentstehung und Progression 3. Leider ist IBD nicht heilbar, aber es gibt viele Behandlungsmöglichkeiten, die klinischen Symptome zu lindern wollen. Aktuelle Behandlungen gehören entzündungshemmende Medikamente, wie Sulfasalazin und Kortikosteroide; Immunsuppressiva, wie azathioprine; monoklonale Antikörper, die Capture-pro-inflammatorische Zytokine wie Tumor-Nekrose-Faktor-α (TNF-α) oder Block Adhäsionsmoleküle, wie Integrine, übermäßige Rekrutierung von Leukozyten zu verringern; und Inhibitoren , die Kinasen angreifen , die pro-inflammatorischen Wege auslösen, wie Janus - Kinase (JAK) 4. Nicht reagieren alle Patienten auf alle Behandlungen, so therapeutische Strategien müssen 5 individualisiert werden. Darüber hinaus interferieren die meisten dieser therapeutischen Arzneimittel mit dem Stoffwechsel und Immunreaktionen, die oft schwere Nebenwirkungen zu verursachen. Aus diesem Grund wurden alternative Behandlungsmöglichkeiten untersucht. Alternative Behandlungen umfassen Probiotika und Nahrungsergänzungsmittel, die in Tiermodellen und klinischen Studien mit unterschiedlichem Erfolg 6,7 angewendet wurden. Wir fanden vor kurzem, dass die Anwendung von verschiedenen Einzelnahrungsergänzungsmittel, wie zum Beispiel antioxidativen Vitamine oder ω3-mehrfach ungesättigte Fettsäuren (PUFAS), ist schlechter als die Anwendung einer Kombination solcher Supplemente in 8,9 ulcerosa und kardiovaskulären Krankheitssymptome zu lindern. Diese Studien wurden in Mäusen durchgeführt, so dass klinische Studien müssen in Menschen durchgeführt werden, um festzustellen, ob diese Ergebnisse auch auf den Menschen anwendbar. Bevor klinische Studien initiiert werden, muss die Wirksamkeit und Sicherheit der neuen Behandlungsmöglichkeiten in Tiermodellen untersucht werden. Für IBD wurde verwendet , das Dextransulfatnatrium (DSS) Modell in großem Maße die Mechanismen der Krankheitsentwicklung und die positiven Wirkungen von Medikamenten und Nahrungsergänzungsmittel 6,10 zu studieren. In den meisten Studien nur eine akute Krankheit über einen Zeitraum von sieben Tagen induziert wird; doch die klinischen Symptome bei diesen Tieren beobachtet , die denen bei CED - Patienten beobachtet ähneln (dh, blutiger Durchfall, Gewichtsverlust, epithelialen Dysfunktion und Immunzellinfiltration) 10. DSS induziert Erosionen in der Schleimhaut,was zu einer Barrierestörung und einer erhöhten Darmepithel Permeabilität 11. Der genaue Mechanismus ist unbekannt. Allerdings schlägt eine Studie , dass DSS mit mittlerer Kettenlänge Fettsäuren interagiert Nano lipocomplexes zu bilden , die fähig sind an Epithelzellen eintreten und zu induzieren Entzündungssignalisierungs 12 Wegen. In diesem Artikel beschreiben wir ausführlich, wie bei Mäusen induziert und analysiert wird, Kolitis, wie Nahrungsergänzungsmittel mit der Schlundsonde angewendet werden eine konstante Dosierung bei jedem Tier zu gewährleisten, und wie die Auswirkungen dieser Ergänzungen auf verschiedene ulcerosa Symptome untersucht.

<table><tbody><tr><td>0,3% Gelatine&nbsp;</td><td>Bioxon</td><td>158</td><td></td></tr><tr><td>10% Formaldehyd</td><td>J.T. Baker</td><td>2106-03</td><td></td></tr><tr><td>96-Well-Platte mit flachem Boden</td><td>Corning</td><td>3368</td><td></td></tr><tr><td>Absolutes Ethanol&nbsp;</td><td>J.T. Baker</td><td>9000-03</td><td></td></tr><tr><td>Absolutes Xylol</td><td>J.T. Baker</td><td>9490-03</td><td></td></tr><tr><td>ABTS</td><td>Sigma Aldrich</td><td>H5882</td><td></td></tr><tr><td>Rinderserumalbumin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>9048-46-8</td><td></td></tr><tr><td>ColoScreen</td><td>Helena Laboratories</td><td>5072</td><td></td></tr><tr><td>Corabion (Mit freundlicher Verfügung gestellt von Merck, Naucalpan, Mexiko)</td><td>Merck</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dextransulfat-Natriumsalz</td><td>Affymetrix</td><td>9011-18-1</td> <td>(MW 40.000-50.000)</td></tr><tr><td>Dihydroethidium</td><td>Life Technology</td><td>D11347</td><td></td></tr><tr><td>Eosin-Y&nbsp;</td><td>J.T. Baker</td><td>L087-03</td><td></td></tr><tr><td>Evans blau</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>314-13-6</td><td></td></tr><tr><td>Zuführnadel</td><td>Cadence Science Inc.</td><td>9921</td><td></td></tr><tr><td>Glas-Objektträger-Gestell mit Griff</td><td>Elektronenmikroskopie</td><td>70312-16</td><td></td></tr><tr><td>Objektträger</td><td>Corning</td><td>2947</td><td></td></tr><tr><td>Harris Hämatoxylin&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H3136</td><td></td></tr><tr><td>Hexadecyltrimethyammonium (HTAB)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>H6269</td><td></td></tr><tr><td>Histosette (Einbettkassette)</td><td>Simport</td><td>M498.2</td><td></td></tr><tr><td>Salzsäure 1 m</td><td>J.T. Baker</td><td>9535-62</td><td></td></tr><tr><td>Wasserstoffperoxid</td><td>Sigma Aldrich</td><td>H3410</td><td></td></tr><tr><td>Ketamin</td><td>PiSA Agropecuaria</td><td>Q-7833-028</td><td></td></tr><tr><td>Flüssiges Paraffin&nbsp;</td><td>Paraplast</td><td>39501-006</td><td></td></tr><tr><td>Lithiumcarbonat&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>2362</td><td></td></tr><tr><td>N,N-dimethylformamid</td><td>J.T. Baker</td><td>68-12-2</td><td></td></tr><tr><td>N-acetylcystein</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9165</td><td></td></tr><tr><td>Kunststoffwürfel</td><td>Elektronenmikroskopie</td><td>70181</td><td></td></tr><tr><td>Poly-L-Lysin-Lösung</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>25988-63-0</td><td></td></tr><tr><td>Prisma 5 statistisch Software</td><td>GraphPad Software</td><td>Prism 5</td><td></td></tr><tr><td>Kochsalzlösung 0,9% NaCl</td><td>CS PiSA</td><td>Q-7833-009</td><td></td></tr><tr><td>Natriumcitrat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>W302600</td><td></td></tr><tr><td>Kunstharz&nbsp;</td><td>Poly Mont</td><td>7987</td><td></td></tr><tr><td>Taq DNA-Polymerase</td><td>Invitrogen</td><td>11615-010</td><td></td></tr><tr><td>Tissue-tek. O.C.T Compound</td><td>Sakura Finetek</td><td>4583</td><td></td></tr><tr><td>Tuberkulinspritze</td><td>BD Plastipak</td><td>305945</td><td></td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>9005-64-5</td><td></td></tr><tr><td>VECTASHIELD Antifade Eindeckmedium mit DAPI</td><td>Vector Laboratories</td><td>H-1200</td><td></td></tr><tr><td>Xylazin</td><td>PiSA Agropecuaria</td><td>Q-7833-099</td><td></td></tr></tbody></table>

analyse wohltuende wirkung von nahrungsergänzungsmitteln auf darmepithel barrierefunktionen während experimental ulcerosa

Analyzing Beneficial Effects of Nutritional Supplements on Intestinal Epithelial Barrier Functions During Experimental Colitis

Entzündliche Darmerkrankungen (IBD), einschließlich Morbus Crohn und Colitis ulcerosa, chronische rezidivierende Erkrankungen des Darmes. Sie verursachen schwere Probleme wie Bauchkrämpfe, blutiger Durchfall und Gewichtsverlust, in den betroffenen Individuen. Leider gibt es noch keine Heilung, und Behandlungen zielen nur die Symptome zu lindern. Gegenwärtige Behandlungen schließen entzündungshemmende und immunsuppressive Medikamente, die starke Nebenwirkungen verursachen können. Dies garantiert, dass die Suche nach alternativen Behandlungsmöglichkeiten, wie zum Beispiel Nahrungsergänzungsmittel, die keine Nebenwirkungen verursachen. Vor ihrer Anwendung in klinischen Studien, müssen solche Verbindungen rigoros auf ihre Wirksamkeit und Sicherheit in Tiermodellen getestet werden. Eine verlässliche experimentelle Modell ist das Dextransulfat-Natrium (DSS) Colitis-Modell bei Mäusen, die bei Menschen viele der klinischen Symptome der Colitis ulcerosa wiedergibt. Wir wendeten dieses Modell vor kurzem die wohltuende Wirkung eines Nahrungsergänzungsmittel zu testen, enthaltendVitamine C und E, L-Arginin und ω3-mehrfach ungesättigte Fettsäuren (PUFA). Wir untersuchten verschiedene Parameter Krankheit und festgestellt, dass diese Ergänzung konnte Ödembildung, Gewebeschädigung, Leukozyteninfiltration, oxidativer Stress, und die Produktion von pro-inflammatorischen Zytokinen zu verbessern, was zu einer Gesamtverbesserung in der Krankheitsaktivitätsindex. In diesem Artikel erläutern wir ausführlich in der korrekten Anwendung von Nahrungsergänzungsmitteln, die DSS Colitis-Modell in C57Bl / 6-Mäuse, sowie wie Krankheitsparameter wie Histologie, oxidativen Stress und Entzündungen werden mit bewertet. die positiven Auswirkungen der verschiedenen Nahrungsergänzungen analysieren dann schließlich neue Wege für die Entwicklung alternativer Behandlungsstrategien öffnen kann, die IBD Symptome zu lindern und / oder dass die Phasen des Stillstands, ohne dass schwere Nebenwirkungen zu verlängern.

Diät-Ergänzungen können von DSS Kolitis Schützen Entzündungshemmende und anti-oxidative Nahrungsergänzungsmittel, wie Vitamin C, Vitamin E, die Stickstoffmonoxid (NO) -Quelle L-Arginin und ω3-mehrfach ungesättigte Fettsäuren (ω3-PUFAs), wurden mit unterschiedlichem Erfolg in der Tier verwendet Modelle Anzeichen von Entzündungskrankheiten 3,6,15 zu lindern. Malnutrition, oxidativer Stress, und die Produktion von pro-inf...

Aktuelle Behandlungen von entzündlichen Darmerkrankungen (IBD) zielen darauf ab, die Krankheitssymptome zu lindern, kann aber schwere Nebenwirkungen verursachen. Somit sind alternative Strategien in Tier Colitis-Modellen untersucht. Hier erklären wir, wie die positiven Wirkungen von Nahrungsergänzungsmitteln auf die klinische IBD Zeichen sind in einer solchen ulcerosa Modell analysiert.

Analyse wohltuende Wirkung von Nahrungsergänzungsmitteln auf Darmepithel Barrierefunktionen Während Experimental ulcerosa

Inflammatory bowel diseases (IBD), including Crohn&#39;s disease and ulcerative colitis, are chronic relapsing disorders of the intestines. They cause ...

Das übergeordnete Ziel dieses Protokolls besteht darin, die Wirkungen zusätzlicher Nährstoffe in einem murinen Kolitis-Modell zu bewerten, das durch Dextran-Natriumsulfat induziert wurde. Diese Methode kann helfen, zentrale Fragen auf dem Gebiet der intestinalen Immunologie zu beantworten, insbesondere im Hinblick auf die Entwicklung der klinischen Wissenschaft entlang der Versuchsrichtung des Kolitis-Modells. Die wesentlichen Vorteile dieser Technik liegen in ihren geringen Kosten, dem Verzicht auf aufwändige Ausrüstung und der Möglichkeit einer klaren Analyse der Morphologie des gesamten Kolons.Diese Methode kann verwendet werden, um oxidativen Stress im Kolon als Folge einer übermäßigen Rekrutierung von Neutrophilen zu bewerten. Zur Verabreichung von Nahrungsergänzungsmitteln per Magensonde halte das Tier zunächst manuell am Nackenfell fest, wobei der Schwanz zwischen dem dritten Finger und der Daumenbasis platziert wird. Danach wird die Maus in aufrechter Position gehalten, die Magensonde wird in die linke Seite des Mauls des Tieres eingeführt und vorsichtig entlang des Gaumendaches geführt, um die Speiseröhre zu lokalisieren.Falls kein Widerstand spürbar ist, vorschieben Sie die Nadel langsam in Richtung des Magens. Geben Sie die gesamte Menge des Supplements langsam ab, anschließend entfernen Sie die Spritze vorsichtig und messen Sie das Körpergewicht des Tieres. Weisen Sie eine Punktzahl von null bis vier entsprechend dem Prozentsatz des Gewichtsverlusts zu, sammeln Sie dann eine frische Stuhlprobe und verwenden Sie die beigefügten Applikatoren, um eine dünne Schicht der Probe auf einem Objektträger aus einem Guaiac-Fäkalbluttestkit aufzutragen.Schließen Sie die Abdeckung an der Vorderseite des Kits und öffnen Sie das hintere Fenster, um zwei Tropfen der Entwicklerlösung auf die Rückseite der Probenstelle aufzutragen. Lesen Sie das Ergebnis nach 30 Sekunden ab und weisen Sie je nach Signalstärke einen Wert von null bis vier zu. Untersuchen Sie anschließend eine zweite frische Stuhlprobe, um die Konsistenz des Stuhls zu beurteilen, und weisen Sie entsprechend einen Wert von null bis vier zu.Um die intestinale epitheliale Permeabilität in vivo zu bestimmen, bringen Sie ein anästhesiertes Tier in Rückenlage und führen einen medianen Schnitt durch, um den Darm freizulegen. Lokalisieren Sie das Caecum und führen Sie einen kleinen Schnitt im proximalen Abschnitt des Colon ascendens durch. Danach wird eine 22-Gauge-Fütterungsnadel eingeführt und mit einer einfachen chirurgischen Seidenligatur fixiert.Spülen Sie vorsichtig eine große Menge PBS durch die Nadel, um sämtlichen Stuhl aus dem Kolon zu entfernen, gefolgt von der Applikation von Evans-Blau-Lösung, bis sich das Farbstoffgemisch bis zum Anus ausgebreitet hat. Nach 15 Minuten spülen Sie die Sonde mit einem überschüssigen Volumen an PBS, bis die perianale Spülung klar ist. Anschließend wird der Kolon exzisiert und das Gewebe mit weiterem PBS gespült, gefolgt von einem Milliliter sechs Millimolar N-Acetylcystein, um eventuell am kolorektalen Schleim haftende Farbstoffreste zu entfernen.Schneiden Sie nun den Kolon longitudinal und spülen Sie das Gewebe ein weiteres Mal mit PBS und N-Acetylcystein aus. Notieren Sie anschließend das Gewicht und die Länge des Kolons und geben Sie das Gewebe in zwei Milliliter N,N-Dimethylformamid bei Raumtemperatur unter sanfter Agitation, um den verbleibenden Farbstoff zu extrahieren. Am folgenden Morgen wird die Farbstoffkonzentration spektrophotometrisch bei 610 Nanometern gemessen. Nach sieben Tagen mit Dextran-Sulfat-Natrium (DSS)-induzierter Kolitis wird der gesamte Kolon präpariert und seine Länge dokumentiert. Für Schweizer Rollen wird der Kolon longitudinal eröffnet, vorsichtig sämtlicher Fäkalmassen entledigt und mithilfe eines dünnen, runden Holzstäbchens oder feiner Pinzette so aufgerollt, dass die Mukosa nach innen weist.Bringen Sie das Gewebe anschließend vorsichtig in eine Einbettungskassette und fixieren Sie es mit fünf Milliliter 10% Formaldehyd bei Raumtemperatur. Es ist entscheidend, den Colon eng zusammengerollt und ohne Faltung aufzubewahren, um Probleme während des Schneidens des Gewebes zu vermeiden, die zu einer klinischen Gewebeschädigung und einer falschen Interpretation als kolitisassoziierte Schädigung führen könnten. Nach 48 Stunden spülen Sie die Probe 18 Stunden lang mit Leitungswasser aus, gefolgt von einer Dehydrierung mittels einer Ethanolreihe.Nach der letzten Einweichung in absolutes Ethanol behandeln Sie das Gewebe mit vier einstündigen Inkubationen in Xylol. Nach der letzten Xylol-Einweichung geben Sie die Probe für eine 17-stündige und eine 3-stündige Inkubation in 50 Milliliter flüssiges Paraffin. Am Ende der dreistündigen Inkubation tauchen Sie die Probe 24 Stunden lang in eine 22 Kubikmillimeter große quadratische Kunststoffform mit acht bis zehn Milliliter frischem flüssigem Paraffin ein.Wenn das Paraffin erstarrt ist, schneiden Sie mit einem Mikrotom fünf Mikrometer dicke Gewebeschnitte und tauchen Sie die Querschnitte kurz in ein Liter Wasserbad mit 0,3 % Gelatine, bevor Sie die Proben unverzüglich auf mit Polylysin behandelten Objektträgern für die H&E-Färbung aufbringen. Für die Analyse des oxidativen Stresses erzeugen Sie zunächst mit einem hydrophoben Stift eine Barriere um das Gewebe. Anschließend inkubieren Sie acht Mikrometer dicke kryogene Gewebeschnitte 30 Minuten lang bei 37 °C im Dunkeln in fünf Mikromolar DHE, das in Wasser gelöst ist.Im Anschluss an die Inkubation erfolgen drei Waschschritte mit jeweils 15 Minuten Dauer in PBS unter leichtem Schütteln bei Raumtemperatur. Die Proben lufttrocknen und einen Tropfen Eindeckmedium hinzufügen, um die Fluoreszenz zu schützen. Anschließend die Fluoreszenz des oxidierten Ethidiums mit einem laser-scanning-konfokalen Mikroskop bei 40facher Vergrößerung beobachten.Die DSS-Behandlung führt wie erwartet zu einem kontinuierlich ansteigenden Krankheitsaktivitätsindex, der am siebten Tag nach der Induktion den maximalen Wert erreicht. Eine entzündungshemmende Ernährungssupplementierung verzögert den frühen Beginn der Kolitis, wobei die schützenden Effekte zu späteren Zeitpunkten nur geringfügig sind. Eine Ernährungsintervention kann außerdem DSS-induzierte Anstiege der intestinalen epithelialen Permeabilität sowie eine Verkürzung der Kolonlänge verhindern.Die Hämatoxylin- und Eosin-Färbung von paraffin-eingebetteten distalen Kolonproben zeigt, dass Kontrollproben eine normale Morphologie aufweisen, während Tiere, die mit DSS behandelt wurden, die typischen Anzeichen einer Kolitis zeigen. Bemerkenswert ist, dass eine parallele Behandlung durch diätetische Supplementierung die durch die Kolitis hervorgerufenen morphologischen Veränderungen deutlich abschwächt, wobei die Gesamtmorphologie der der Kontrollgruppe ähnelt. Die Immunfluoreszenzfärbung des distalen Kolon­gewebes zeigt zudem, dass die Moleküle der Tight- und Adherens-Junctions während der DSS-induzierten Kolitis internalisiert werden und dass die Kolokalisation dieser Proteine an den Zellkontakten der Kryptenepithelzellen teilweise verloren geht.Wichtig ist, dass diese Internalisierung verringert wird, wenn DSS-behandelte Mäuse die entzündungshemmende und antioxidative Nahrungsergänzung erhalten. Außerdem wird die starke Rekrutierung von Neutrophilen in den Kolon als Reaktion auf die DSS-induzierte Kolitis durch die Nahrungsergänzung entgegengewirkt, was zur gleichzeitigen Verbesserung des neutrophileninduzierten oxidativen Stresses und einer leichten Verringerung der Produktion entzündungsfördernder Zytokine führt. Nach dieser Prozedur können weitere Methoden wie Messungen in einer Oozing-Kammer durchgeführt werden, um den elektrischen Widerstand der epithelialen Barriere im Kolon zu analysieren.Nach ihrer Entwicklung ebnete diese Technik den Weg für Forscher im Bereich der Kolitisforschung und ermöglichte die Untersuchung der molekularen Mechanismen der Pathogenese der Colitis ulcerosa in einem reproduzierbaren Mausmodell. Nach dem Ansehen dieses Videos sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie die Entwicklung einer Kolitis sowie die positiven Wirkungen von Nahrungsergänzungsmitteln auf die Funktionen der intestinalen epithelialen Barriere analysiert werden können. Vergessen Sie nicht, dass die Arbeit mit lebenden Tieren die Einhaltung hoher ethischer Standards erfordert, um unnötiges Leid zu vermeiden.

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Research

Forschung

JoVE Journal

Medicine

Medizin

DNBS / TNBS induzierte Colitis bietet eine alternative und kostengünstige Methode, um die Pathobiologie von entzündlichen Darmerkrankungen zu untersuchen. Die in diesem Papier diskutiert Protokoll beschreibt die erfolgreiche Anwendung von DNBS Colitis bei Mäusen und Ratten zu induzieren, und erlaubt es, Host-Mediated-Darm-Reaktionen gründlich zu studieren.

DNBS / TNBS Colitis-Modelle: Einblicke in chronisch entzündlichen Darmerkrankungen und Effekte von Nahrungsfett

Hier beschreiben wir eine Technik zur Quantifizierung der Barriereintegrität kleiner Darmorganoide. Die Tatsache, dass die Methode auf lebenden Organoiden basiert, ermöglicht die sequenzielle Untersuchung verschiedener Barriereintegritätsmodulisierungssubstanzen oder Kombinationen davon in einer zeitaufgelösten Weise.

Untersuchung des Darmbarriereabbaus bei lebenden Organoiden

Unter Ausnutzung der intravitalen Mikroskopie ermöglicht die hier vorgestellte Methode die Echtzeit-Visualisierung des Darmepithelzellvergießens bei lebenden Tieren. Daher wird topisch gefärbte Darmschleimhaut (Acriflavine und RhodamineB-Dextran) von anästhesierten Mäusen bis zur einzelzelligen Auflösung mittels konfokaler Mikroskopie abgebildet.

Ein intravitaler, auf Mikroskopie basierender Ansatz zur Bewertung der Darmdurchlässigkeit und der Epithelzellvergießen-Performance

Dysregulierte intestinale epitheliale Barrierefunktion und Immunantworten sind Kennzeichen entzündlicher Darmerkrankungen, die aufgrund fehlender physiologischer Modelle noch schlecht untersucht sind. Hier beschreiben wir ein Maus-Darmschleifenmodell, das ein gut vaskularisiertes und exteriorisiertes Darmsegment verwendet, um die Schleimhautpermeabilität und die Leukozytenrekrutierung in vivo zu untersuchen.

Funktionelle Beurteilung der Intestinalpermeabilität und der neutrophilen transepithelialen Migration bei Mäusen mit einem standardisierten Darmschleifenmodell

Die systematische Bewertung von Darmentzündungen mit einem freien computergestützten System ist ein leistungsfähiges Werkzeug, um histopathologische Veränderungen in Kolitismodellen, die durch das Vorhandensein von Geschwüren und entzündlichen Veränderungen gekennzeichnet sind, quantitativ zu vergleichen. Die auswertung der histologischen Colitis-Score-Bewertung stärkt klinische Beobachtungen und erleichtert die Dateninterpretation.

Systematische Scoring-Analyse für Darmentzündungen in einem Murine Dextran Natriumsulfat-induzierte Colitis Modell

Hier stellen wir ein Protokoll zur Etablierung des Antibiotika-induzierten pseudo-keimfreien Dextransulfat-Natrium-induzierten Colitis-Mausmodells vor, um die Rolle der Darmmikrobiota bei der Regulierung der positiven Auswirkungen von Bacillus cereus auf Colitis zu untersuchen.

Untersuchung der lindernden Wirkung der Verabreichung von Bacillus cereus auf Colitis durch Modulation der Darmmikrobiota

In der vorliegenden Studie wird Fluorescein-Isothiocyanat-markiertes (FITC) Dextran Mäusen über eine orale Sonde verabreicht, um die Darmpermeabilität sowohl in vivo als auch in Plasma- und Kotproben zu bewerten. Da die Barrierefunktion des Darms bei vielen Krankheitsprozessen beeinträchtigt ist, kann dieser direkte und quantitative Assay in verschiedenen Forschungsbereichen eingesetzt werden.

Beurteilung der Integrität der Darmbarriere bei Mäusen unter Verwendung von Fluorescein-Isothiocyanat-markiertem Dextran

Wir beschreiben ein Protokoll, das die Isolierung von murinen Kolonkrypten für die Entwicklung von 3-dimensionalen Kolonoiden beschreibt. Die etablierten Kolonoide können dann terminalisiert werden, um die zelluläre Zusammensetzung des Wirtsepithels widerzuspiegeln, bevor sie eine entzündliche Herausforderung erhalten oder angewiesen werden, eine epitheliale Monoschicht zu bilden.

Untersuchung der epithelialen Effekte von intestinalen Entzündungen in vitro auf etablierte murine Kolonoide

Hier beschreiben wir die Konstruktion eines grundlegenden dreidimensionalen (3D) intestinalen Zelllinienmodellsystems und eines Paraffin-Einbettungsprotokolls für die lichtmikroskopische Bewertung von fixierten intestinalen Äquivalenten. Die Färbung ausgewählter Proteine ermöglicht die Analyse mehrerer visueller Parameter aus einem einzigen Experiment für den potenziellen Einsatz in präklinischen Wirkstoff-Screening-Studien.

Grundlegendes dreidimensionales (3D) Darmmodellsystem mit einer Immunkomponente

Wir stellen ein chirurgisches Verfahren zur Katheterisierung des Darmlymphstamms bei neugeborenen Schweinen vor, um große Mengen an Fettstoffwechselkomponenten aus efferenter Lymphe zu gewinnen.

Long-Term Katheterisierung der Darmlymphe Trunk und Sammlung von Lymphe in Neonatal Pigs

Erfahren Sie die Auswirkungen von Nahrungsergänzungsmitteln auf die Darmepithel-Barrierefunktion bei Mäusen mit DSS-induzierter Kolitis. Diese Methode ermöglicht die Analyse von Kolonmorphologie und oxidativem Stress.

Analyse wohltuende Wirkung von Nahrungsergänzungsmitteln auf Darmepithel Barrierefunktionen Während Experimental ulcerosa

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