Name: Überwachung der Astrozyten Reaktivität und Proliferation in Vitro unter ischämischen-ähnlichen Bedingungen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-10-21T13:00:00.000+00:00
Duration: 15 min 8 s
Description: Lernen Sie die Isolierung primärer Astrozyten aus Rattenhirnen für Schlaganfallforschung unter Sauerstoff-Glukose-Entzug. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung zellulärer Reaktionen auf ischämische Bedingungen.

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Die Autoren möchten Paola López Pieraldi für die technische Unterstützung zu danken. A.H.M. ist dankbar für die Zuschüsse 8G12MD007600 und U54-NS083924, die diese Publikation unterstützt. Wir danken NIH-NIMHD-G12-MD007583-Stipendium für die Anlage-Unterstützung. D.E.R.A. ist dankbar für die Gemeinschaft von NIHNIGMS-R25GM110513 zur Verfügung gestellt. Wir sind dankbar für die Nutzung des gemeinsamen Instrumentierung und Gewährung der Beihilfe von Dr. Priscila Sanabria für den Einsatz der optischen Bildgebung Anlage des Programms RCMI durch G12MD007583. Darüber hinaus wollen wir danke Jose Padilla für seine herausragende Rolle in Filmen und schneiden das visuelle Protokoll.

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Die Autoren haben nichts preisgeben.

Dieses Protokoll beschreibt die Isolation der Astrozyten aus Ratte Cortex. Bei dieser Methode ist es entscheidend, Kontamination mit anderen zellulären Arten wie Mikroglia, Oligodendrozyten und Fibroblasten zu verringern. Um die Anzahl der Mikroglia zu reduzieren, können mehrere Schritte unternommen werden: Ändern der Medien, Orbital, rütteln und chemischen Behandlungen. Wenn Kultur Reinheit durch Immunfluoreszenz mittels selektiver zellulären Marker oder für die prominentesten Zelle Verunreinigungen bestätigt ist, könne...

Schlaganfall ist definiert als "eine akute neurologische Dysfunktion vaskulären Ursprungs mit plötzlichen oder schnelle Entwicklung der Symptome und Zeichen, entsprechend der Beteiligung der Schwerpunkte im Gehirn"1,2. Es gibt zwei Arten von Schlaganfällen: ischämische und hämorrhagische. Wenn vaskuläre Dysfunktion verursacht wird, entweder durch ein Aneurysma oder eine arteriovenöse Fehlfunktion, begleitet durch eine Schwächung mit hinteren Ruptur einer Arterie ist dies hämorrhagischer Schlaganfall3 bezeichnet, die in den meisten Fällen zum Tod führt. Wenn ein Thrombus oder eine Lungenembolie Blutfluss behindert, verursacht eine vorübergehende Entziehung von Sauerstoff und Glukose zu einer Region des Gehirns, ischämischen Schlaganfall4heißt es. Bei Nichtbeachtung nähren Zellen um das betroffene Gebiet oder ischämischen Kern führt zu eine homöostatische und metabolische Ungleichgewicht, energetische Dysfunktion, neuronalen Tod und Entzündung5, die eine lebenslange Behinderung für Patienten6auslösen können.
Ischämischen Schlaganfall ist eine multifaktorielle Verletzungen, an denen verschiedene Arten von Zellen, die reagieren und üben ihre Wirkungen zu unterschiedlichen Zeitpunkten. Viele Interaktionen erstellen ein schwierigen Umfelds um das Verhalten einzelner Zellen untersuchen. Also, wie wir den Beitrag von einem bestimmten Zelltyp unter einem komplexen Umfeld zu studieren? Eine anerkannter in-vitro- Modell der Ischämie besteht aus auszusetzen Zellen Sauerstoff und Glukose Deprivation (OGD), für einen bestimmten Zeitraum, gefolgt von der Wiederherstellung der Zellen zu einer inklusieve Umgebung. Dieses System simuliert einen ischämischen Schlaganfall gefolgt von Blut Reperfusion. Bei dieser Methode sind Zellen oder Geweben eine Glukose-freie Medien in einem Umfeld von Sauerstoff, mit einer spezialisierten hypoxischen Kammer gesäubert ausgesetzt. Die OGD Inkubationszeit variiert von wenigen Minuten bis zu 24 Stunden, abhängig von der Hypothese, die getestet werden will. Studien haben gezeigt, dass je nach den Zeiten der OGD und inklusieve Umwelt, bestimmten Phänotypen eines Schlaganfalls (d.h.akute oder subchronische) erreicht werden. Primäre isolierte Astrozyten, OGD mit hinteren Restaurierung inklusieve Bedingungen ausgesetzt ist ein gut untersuchten zellulären Modell, Schlaganfall in-vitro-7zu imitieren. OGD ist möglich, die unabhängige molekularen Mechanismen der isolierten Zellen unter einem Schlaganfall-ähnliche Umgebung zu offenbaren.
Mit zunehmender unser Wissen der Astrozyten Biologie deutlich geworden, dass sie entscheidend für die Aufrechterhaltung der Synapsen und Aufrechterhaltung neuronaler Plastizität, Reparatur und Entwicklung8sind. Unter normalen Bedingungen Astrozyten freizugeben und reagieren auf Zytokine, Chemokine, Wachstumsfaktoren und Gliotransmitters, metabolic-Balance und Homöostase innerhalb von Synapsen5,9zu halten. In akuten Neuroinflammation, wie ischämischen Schlaganfall können diese Zellen reaktive werden, zeigen eine langfristige Überexpression des Glial Fibrillary sauren Protein (GFAP) und zeigen Hypertrophie in ihrer Morphologie5,10, 11 , 12. wie der ischämischen Infarkt entwickelt, die Homöostase von Astrozyten bereitgestellt wird betroffen, bei normalen Glutamat-Aufnahme, Energiestoffwechsel, Austausch von aktiven Molekülen und antioxidative Aktivität13.
Reaktivierte Astrozyten vermehren um das Infarkt-Gewebe während Leukozyten in Richtung der lesioned Bereich14migrieren. Astrocytic Verbreitung kann mit Hilfe von Markern wie wuchernden Cell nuclear Antigen (PCNA), Ki67 und Bromodeoxyuridine (BrdU)15gemessen werden. Diese proliferative Reaktion wird in einer zeitabhängigen Weise erzeugt und es hilft bilden die glial Narbe, ein Array von irreversibel reaktive Astrocyten entlang das Parenchym der beschädigten Seite nach einer Verletzung-9. Eine der ersten Funktionen dieser Narbe ist die Immunzelle Extravasation aus diesem Bereich zu begrenzen. Studien haben jedoch gezeigt, dass die Narbe ein physisches Hindernis für Axone wird zu erweitern, wie sie release-Moleküle axonale Wachstum hemmen, und erstellen Sie eine physische Barriere, die verhindert, dass Axone erweitern um den verletzten Bereich16. Dennoch gibt es wissenschaftliche Beweise dafür, dass nach einer Rückenmarksverletzung ganz glialen Narbenbildung zu vermeiden die Regeneration der Axone17beeinträchtigen kann. So, der Kontext, in der die spezifischen astrocytic Reaktion gemessen wird, muss auf dem Rahmen der Verletzung studierte berücksichtigt werden.
Die vorgestellte Methode kann angewendet werden, um die individuelle Funktion der Astrozyten nach Glukose Sauerstoffmangel zu untersuchen und es kann geändert werden, je nach Fragestellung, die der Prüfer beantworten will. Z. B. neben der morphologischen Veränderungen und die Marker OGD zeitversetzt zum Ausdruck gebracht, die Überstände von Astrozyten OGD ausgesetzt können analysiert werden, weiter um lösliche Faktoren von diesen Zellen freigegeben wird, oder als konditionierten Medium zur Beurteilung zu identifizieren sein Wirkung in anderen Gehirnzellen. Dieser Ansatz ermöglicht Untersuchungen zur Reaktivität von Astrozyten, die die Aufklärung der Faktoren führen könnte, die Regeln und modulieren ihre Antwort in einem Szenario mit ischämischen Schlaganfall.

<table><tbody><tr><td>Instrumente für die Chirurgie - Schritt 1</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Operationsschere 5,5"</td><td>Roboz Company</td><td>RS-6812</td><td>Werkzeuge, die zum Enthaupten der Ratten verwendet wurden.</td></tr><tr><td>Gebogene Pinzette 7" &nbsp;</td><td>Roboz Company</td><td>RS-5271</td><td>Hält die Haut der Ratte, während der Schädel entfernt wird.</td></tr><tr><td>Mikro-Präparierschere 4" &nbsp;</td><td>Roboz Company</td><td>RS-5882</td><td>Schneidet sowohl die Haut als auch den Schädel der Ratte.</td></tr><tr><td>Mikro-Präparierzange 4" abgewinkelt, fein scharf &nbsp;</td><td>Roboz Company</td><td>RS-5095</td><td>Hält die Haut der Ratte, während der Schädel entfernt wird.</td></tr><tr><td>Mikro-Präparierzange 4" leicht gebogen 0,8</td><td>Roboz Company</td><td>RS-5135</td><td>Werkzeug zur Trennung von Kortex.</td></tr><tr><td>Mikro-Präparierpinzette</td><td>Roboz Company</td><td>RS-4972</td><td>Schält Hirnhäute.</td></tr><tr><td>Dissektionsmikroskop</td><td>Olympus</td><td>SZX16</td><td>Wichtig für die Entfernung der Hirnhaut aus den Kortiken.</td></tr><tr><td>DMEM Vorbereitung - Schritt 2</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco' s Modifizierter Adler" s Medium (DMEM)</td><td>GibCo. Firma</td><td>11995-065</td><td>Unterstützt das Wachstum von Zellen.</td></tr><tr><td>Natriumbicarbonat</td><td>Sigma-Aldrich Company</td><td>S7277</td><td>Supplement für die Zellkulturmedien.</td></tr><tr><td>Fötales Rinderserum (FBS)</td><td>GibCo. Firma</td><td>10437-010</td><td>Serum-Supplement für die Zellkultur.</td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin&nbsp;</td><td>GibCo. Firma</td><td>15140-148</td><td>Hemmt das Wachstum von Bakterien in der Zellkultur.</td></tr><tr><td>Filtersystem 1L mit 0,22 μm Poren</td><td>Corning</td><td>431098</td><td></td></tr><tr><td>Astrozytenkultur - Schritt 3</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Serologische Pipetten 5mL</td><td>VWR</td><td>89130-896</td><td>Zum Pipettieren von DMEM in Behälter mit Küvetten.</td></tr><tr><td>Serologische Pipetten 10mL</td><td>VWR</td><td>89130-898</td><td>Zum Pipettieren von DMEM in Behälter mit Zellen.</td></tr><tr><td>Serologische Pipetten 25mL</td><td>VWR</td><td>89130-900</td><td>Zum Pipettieren von DMEM in Behälter mit Küvetten.</td></tr><tr><td>Konisches Zentrifugenröhrchen 15 mL</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>sc-200250</td><td></td></tr><tr><td>Safe-Lock-Röhrchen 1,5 mL</td><td>Eppendorf</td><td>022363204</td><td></td></tr><tr><td>Barrier Tips 200 uL</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>sc-201725</td><td></td></tr><tr><td>Barrier Tips 1 mL</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>sc-201727</td><td></td></tr><tr><td>Biohazard Orange Bag 14 x 19"</td> <td>VWR</td><td>14220-048</td><td></td></tr><tr><td>60mm Petrischalen</td><td>Falcon</td><td>351007</td><td></td></tr><tr><td>Sterile Mullkissen</td><td>Honeywell Safety</td><td>89133-086</td><td></td></tr><tr><td>Stomacher 80 Biomaster</td><td>Sewar Lab System</td><td>030010019</td><td>Trituration des Gehirngewebes.</td></tr><tr><td>Stomacher 80 Blender Sterile Beutel</td><td>Sewar Lab System</td><td>BA6040</td><td>Steriler Beutel für den Stomacher-Zell-Homogenisator.</td></tr><tr><td>Becherglas 400mL</td><td>Pyrex</td><td>1000</td><td></td></tr><tr><td>Steriles Zelldissoziationssieb, Masche #60&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich Company</td><td>S1020</td><td>Um eine einheitliche einzellige Suspension zu erhalten.</td></tr><tr><td>Steriles Zelldissoziationssieb, Maschenweite #100</td><td>Sigma-Aldrich Company</td><td>S3895</td><td>Zur Gewinnung einer einheitlichen Einzelzellsuspension.</td></tr><tr><td>Invert-Phasenmikroskop</td><td>Nikon</td><td>Eclypse Ti-S</td><td>Überprüfen Sie Zellen auf Kontamination oder abnormales Zellwachstum.</td></tr><tr><td>75 cm2 sterile Kolben</td><td>Falcon</td><td>353136</td><td></td></tr><tr><td>Multi-Well-Platte</td><td>Falcon</td><td>353046</td><td></td></tr><tr><td>Micro Deckgläser (Deckgläser), 18 mm, rund</td><td>VWR</td><td>48380-046</td><td></td></tr><tr><td>Bright-Line Hämazytometer</td><td>Sigma-Aldrich Company</td><td>Z359629</td><td></td></tr><tr><td>Pasteur Pipetten</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-678-20D</td><td></td></tr><tr><td>Ethylalkohol&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich Company</td><td>E7023</td><td></td></tr><tr><td>L-Leucinmethylester-Hydrochlorid 98% (LME)</td><td>Sigma-Aldrich Company</td><td>L1002</td><td>Fördert die Eliminierung von Mikrogliazellen in der primären kortikalen Astrozytenkultur.</td></tr><tr><td>Cytosin &beta;-D-Arabinofuranosid (Ara-C)</td><td>Sigma-Aldrich Company</td><td>C1768</td><td></td></tr><tr><td>Poly-D-Lysin Hydrobromid, mol wt 70.000-150.000</td><td>Sigma-Aldrich Company</td><td>P0899</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin/EDTA</td><td>GibCo. Unternehmen</td><td>15400-054</td><td></td></tr><tr><td>Trypan Blue</td><td>Sigma-Aldrich Unternehmen</td><td>T8154</td><td></td></tr><tr><td>Phosphatpuffer-Kochsalztabletten (PBS)</td><td>Calbiochem</td><td>524650</td><td></td></tr><tr><td>Steriles Wasser</td><td>Sigma-Aldrich Unternehmen</td><td>W3500<</td><td></td></tr><tr><td>strong>&nbsp; OGD Medium Aufbereitung - Schritt 5</stark></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Zentrifuge konisches Röhrchen 50 mL</td><td>VWR</td><td>89039-658</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco' s modifizierter Eagle" s mediumfreie Glukose</td><td>Sigma-Aldrich Company</td><td>D5030</td><td>Unterstützt das Wachstum von Zellen.</td></tr><tr><td>Natriumbicarbonat</td><td>Sigma-Aldrich Company</td><td>S7277</td><td>Supplement für die Zellkulturmedien.</td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin&nbsp;</td><td>GibCo. Firma</td><td>15140-148</td><td>Hemmt das Wachstum von Bakterien in der Zellkultur.</td></tr><tr><td>200 Mio. M&nbsp; L-Glutamin&nbsp;</td><td>GibCo. Firma</td><td>25030-081</td><td>Aminosäure, die das Wachstum von Zellen ergänzt.</td></tr><tr><td>Phospahet Puffer Kochsalzlösung (PBS) Tabletten</td><td>Calbiochem</td><td>524650</td><td></td></tr><tr><td>Filtersystem 50 ml mit 0,22 μm Pore</td><td>Corning</td><td>430320</td><td></td></tr><tr><td>Zentrifuge konisches Röhrchen 50 mL</td><td>VWR</td><td>89039-658</td><td></td></tr><tr><td>Einzelner Durchflussmesser</td><td>Billups-Rothenberg</td><td>SMF3001</td><td>Messung des Gasflusses in der Sauerstoffspülung.</td></tr><tr><td>Hypoxie-Inkubator-Kammer&nbsp;</td><td>StemCell</td><td>27310</td><td>Erzeugt eine hypoxische Umgebung für die Zellkultur.</td></tr><tr><td>Rückführbares Messgerät für gelösten Sauerstoff</td><td>VWR</td><td>21800-022</td><td></td></tr><tr><td>95 % N2/ 5 % CO2-Gasgemisch</td><td>Linde</td><td></td><td>Reinigt die Umgebung von Sauerstoff.</td></tr><tr><td><starke>primäre Astrozyten-Immunfluoreszenz - Schritt 6</stark></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Phosphatpuffer Kochsalzlösung (PBS) Tabletten</td><td>Calbiochem</td><td>524650</td><td></td></tr><tr><td>Formalinlösung Neutraler Puffer 10%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>HT501128</td><td>Lösung zur Fixierung von Zellen.</td></tr><tr><td>Methanol&nbsp;</td><td>Fisher</td><td>A4544</td><td>Lösung zur Fixierung von Zellen.</td></tr><tr><td>Nichtionisches Tensid (Triton X-100)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8787</td><td></td></tr><tr><td>Fötales Rinderserum (FBS)</td><td>GibCo. Firma</td><td>10437-010</td><td>Serum-Supplement für die Zellkultur.</td></tr><tr><td>Anti-NeuN</td><td>Cell Signaling</td><td>24307</td><td>Detektiert reife Neuronen und dient zur Validierung der astrozytären Kultur.</td></tr><tr><td>Anti-PCNA-Zellsignalisierung</td><td></td><td>2586</td><td>Erkennt proliferierende Zellen.</td></tr><tr><td>Propidiumiodid (PI)</td><td>Sigma-Aldrich Company</td><td>P4170</td><td>Apoptose-Färbung.</td></tr><tr><td>Anti-Olig1</td><td>Abcam</td><td>AB68105</td><td>Erkennt reife Oligodendrozyten.</td></tr><tr><td>Anti-Iba1+</td><td>Wako</td><td>016-20001</td><td>Erkennt Mikrogliazellen.</td></tr><tr><td>Anti-GFAP-Konjugiert mit Cy3&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich Company</td><td>C9205</td><td>Weist reaktive Astrozyten in den behandelten Zellen nach.</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488</td><td>Molecular Probe Life Technology</td><td>A1101</td><td>Anti-Maus-Sekundärantikörper.</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 555</td><td>Molecular Probe Life Technology</td><td>A21428</td><td>Anti-Kaninchen-Sekundärantikörper.</td></tr><tr><td>4',6'-diamidino-2-phenylindol (DAPI)</td><td>Sigma-Aldrich Company</td><td>D9542</td><td>Kernfärbung.</td></tr><tr><td>Konfokales Mikroskop</td><td>Olympus</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

Überwachung der astrozyten reaktivität und proliferation in vitro unter ischämischen-ähnlichen bedingungen

Monitoring Astrocyte Reactivity and Proliferation in Vitro Under Ischemic-Like Conditions

Ischämischen Schlaganfall ist eine komplexe-Hirn-Trauma durch einen Thrombus oder Lungenembolie behindern Blutfluss in Teilen des Gehirns verursacht. Dies führt zur Entziehung von Sauerstoff und Glukose, die Energie Versagen und neuronalen Tod verursacht. Nach eine Beleidigung des ischämischen Schlaganfalls Astrozyten werden reaktive und vermehren sich um die Verletzung Aufstellungsort, wie es sich entwickelt. In diesem Szenario ist es schwierig, den spezifischen Beitrag der Astrozyten, die Region des Gehirns ausgesetzt Ischämie zu studieren. Dieser Artikel stellt daher eine Methode zur primären Astrozyten Reaktivität und Verbreitung unter einem in Vitro Modell einer Ischämie-ähnlichen Umgebung, genannt Glukose Sauerstoffmangel (OGD) zu studieren. Astrozyten wurden isoliert von 1-4 Tage-alten Neugeborenen Ratten und die Anzahl der unspezifischen astrocytic Zellen wurde anhand Astrozyten selektive Marker Glial Fibrillary sauren Protein (GFAP) und nukleare Färbung. Der Zeitraum, in dem Astrozyten OGD Zustand ausgesetzt sind, sowie der Sauerstoffgehalt anpassbar, denen sie ausgesetzt sind. Diese Flexibilität ermöglicht es Wissenschaftlern, die Dauer der ischämischen-ähnlichen Zustand in verschiedene Gruppen von Zellen in Vitrozu charakterisieren. Dieser Artikel beschreibt die Zeitrahmen von OGD, die Astrozyten Reaktivität, hypertrophe Morphologie und Verbreitung gemessen durch Immunfluoreszenz mit wuchernden Cell Nuclear Antigen (PCNA) induzieren. Neben der Verbreitung Astrozyten Energie- und oxidativen Stress zu unterziehen, und reagieren auf OGD durch Loslassen lösliche Faktoren in der Zelle-Medium. Dieses Medium kann gesammelt und verwendet, um die Auswirkungen von Molekülen veröffentlicht von Astrozyten im neuronalen Primärkulturen ohne Zell-Zell-Interaktion zu analysieren. Zusammenfassend lässt sich sagen diese Primärzelle Kulturmodells effizient einsetzbar zu verstehen, die Rolle der isolierten Astrozyten auf Verletzungen.

Eines der Hauptanliegen der astrocytic Primärkultur ist das Vorhandensein von anderen Zellen wie Neuronen, Oligodendrozyten, Fibroblasten und Mikroglia. In Abbildung 1isolierte Zellen von Ratte Cortex hatten Medien Änderungen alle 3 Tage und waren entweder unbehandelt oder behandelt mit hinzugefügt LME für 1 h 24 h später, Zellen wurden Immunostained für GFAP und counterstained mit DAPI. Unbehandelte Zellen zeigte einen Durchschnitt von 39 % nicht-GFAP positi...

Ischämischen Schlaganfall ist schwer zu lernen ist ein komplexer Vorgang, in dem der spezifische Beitrag der Astrozyten, die betroffene Hirnregion Glukose Sauerstoffmangel (OGD) ausgesetzt. Dieser Artikel stellt eine Methode zur isolierte Astrozyten zu erhalten und ihre Reaktivität und Verbreitung unter OGD Bedingungen zu studieren.

Überwachung der Astrozyten Reaktivität und Proliferation in Vitro unter ischämischen-ähnlichen Bedingungen

Ischemic stroke is a complex brain injury caused by a thrombus or embolus obstructing blood flow to parts of the brain. This leads to deprivation of ...

Das folgende Protokoll soll die Isolierung primärer Astrozyten aus den Gehirnen von Rattenwelpen zur Durchführung einer Sauerstoff-Glukose-Entzug (OGD)-Behandlung zeigen. Die Exposition gereinigter Astrozyten gegenüber einem Sauerstoff-Glukose-entzogenen Milieu ist ein Modell, das es uns ermöglicht, die Reaktion auf einige der Bedingungen, die bei ischämischen Schlaganfällen auftreten, zu testen. Methodische Veränderungen nach der Exposition gegenüber Sauerstoff-Glukose-Entzug können mithilfe spezifischer Astrozyten-Marker wie GFAP beobachtet und gemessen werden.Zusammenfassend können diese isolierten Zellen, die hypoxieähnlichen Bedingungen ausgesetzt werden, verwendet werden, um neue Wirkstoffe zu testen, die unter hypoxischen Bedingungen aktiviert werden, sowie andere Medikamente, die vor ischämischem Schlaganfall schützen. In diesem Teil des Protokolls werden Astrozyten aus den Großhirnrinden von Rattenwürfen isoliert. Der Zweck dieses Verfahrens besteht darin, eine primäre astrozytäre Zellkultur zu gewinnen, um Experimente zur Sauerstoff-Glukose-Deprivation durchzuführen.Die Materialien für dieses Verfahren sind die folgenden: Autoklavieren Sie alle Materialien, bevor Sie sie

monitoring-astrocyte-reactivity-proliferation-vitro-under-ischemic

Research

Forschung

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowissenschaften

Dieser Artikel beschreibt ein neuartiges Protokoll und Reagenz-Set für empfindliche Messung der neurotoxischen Wirkungen von Verbindungen und Behandlungen auf Co-Kulturen von Neuronen und Astrozyten mit High Content Analyse entwickelt. Die Ergebnisse zeigen, dass High Content Analyse eine spannende neue Technologie für die Neurotoxizität Beurteilung darstellt.

Eine Neuronale und Astrocyte Co-Kultur-Assay für High Content Analyse der Neurotoxizität

Astrozyten wurden erkannt, vielseitige beteiligten Zellen in grundlegender biologischer Prozesse, die wichtig für die normale Entwicklung des Gehirns und Funktion, und das zentrale Nervensystem Reparatur sein. Hier präsentieren wir ein schnelles Verfahren zur reinen Maus Astrozytenkulturen erhalten, um die Biologie dieser wichtigen Klasse von zentralen Nervensystems Zellen zu untersuchen.

Isolation und Kultur von Maus Kortikale Astrozyten

Hier beschreiben wir eine Anpassung der Protokolle verwendet, um homöostatische Plastizität in Neuronen für die Untersuchung der Plastizität von Astrozyten G-Protein-gekoppelten Rezeptoren zu induzieren. Kürzlich verwendet werden, um Veränderungen in Astrozyten Gruppe I mGluRs mit jungen Mäusen zu untersuchen, kann das Verfahren auf die Skalierung der verschiedenen Astrozyten GPCRs zu messen, in Gewebe von erwachsenen Mäusen in situ und in vivo, und ein besseres Verständnis für die...

Induktion von Plastizität Astrozytäre Rezeptoren durch Manipulation der neuronalen Feuerraten

Phänotypische Wildtyp-Astrozyten und neurale Stammzellen, die von Mäusen entnommen wurden, die mit floxierten, bedingten onkogenen Allelen gezüchtet und über virale Cre-vermittelte Rekombination transformiert wurden, können zur Modellierung der Astrozytom-Pathogenese in vitro und in vivo durch orthotope Injektion von transformierten Zellen in Gehirne von syngenen, immunkompetenten Wurfgeschwistern verwendet werden.

Modellierung Astrozytom Pathogenese In-vitro- Und In Vivo Verwenden kortikale Astrozyten oder neuralen Stammzellen aus dem Bedingten, gentechnisch veränderte Mäuse

Astrozyten im ZNS verändern ihre funktionellen und strukturellen Eigenschaften als Reaktion auf schädliche Reize. Dieser Bericht stellt ein Protokoll zur Beurteilung der dreidimensionalen Astrozytenmorphologie bei Erkrankungen oder nach therapeutischen Eingriffen vor.

Protokoll zur dreidimensionalen konfokalen morphometrische Analyse der Astrozyten

Astrozyten sind eine der wichtigsten Schlüsselspieler im zentralen Nervensystem (ZNS). Hier berichten wir eine praktische Methode der sexed Hippokampus - Astrozyten Kulturprotokoll , um die zugrunde liegenden Mechanismen der Astrozytenfunktion bei männlichen und weiblichen Neugeborenen Welpen nach In-vitro - Ischämie zu untersuchen.

Geschlechtsunterschiede in Mäuse Hippocampus Astrozyten nach<em&gt; In-Vitro</em&gt; Ischemia

Die Erhaltung der Blut-Hirn-Schranke Abdeckung ist der Schlüssel für die Homöostase des zentralen Nervensystems. Dieses Protokoll beschreibt in vitro- Techniken, um die fundamentalen und pathologischen Prozesse abzugrenzen, die die Blut-Hirn-Schrankenabdeckung modulieren.

In-Vitro- Assays zur Beurteilung der Blut-Hirn-Schranke Mesh-artigen Gefäßbildung und -störung

Die hier beschriebene AWESAM-Protokoll ist optimal für die Kultivierung von murinen Astrozyten isoliert von anderen Gehirnzellen in eine schnelle, einfache und kostengünstige Weise. AWESAM Astrozyten weisen spontane Ca2 + -Signalisierung, Morphologie und gen Expressionsprofile Astrozyten in Vivoähnlich.

In VivoKultivierung-wie Murine Astrozyten über das schnelle, einfache und kostengünstige AWESAM-Protokoll

Hier präsentieren wir einen einfachen Ansatz mit spezifischen Kulturmedien, die die Etablierung von neuron- und astrozytenangereicherten Kulturen oder neuronglia-Kulturen aus dem embryonalen Kortex mit hoher Ausbeute und Reproduzierbarkeit ermöglichen.

Ein Zellkulturmodell zum Studium der Rolle von Neuron-Glia-Interaktionen in Ischämie

Hier beschreiben wir ein Protokoll, das die Differenzierung von humanen induzierten pluripotenten Stammzellen in funktionelle Vorderhirn-spezifische Astrozyten erleichtert. Dies ermöglicht die Untersuchung der Rolle von Gliazellen bei der Pathogenese von neurologischen Entwicklungsstörungen, wie dem Fragile-X-Syndrom, und die Modellierung anderer Hirnerkrankungen.

Generierung und Charakterisierung von humanen induzierten pluripotenten Stammzell-abgeleiteten Astrozyten, denen das fragile X-Boten-Ribonukleoprotein fehlt

Dieses Protokoll bietet eine integrierte Methode, die virale Abgabe, Optrodenimplantation, photothrombotische Induktion, gleichzeitige Aufzeichnung der Astrozyten- und neuronalen Aktivität sowie optogenetische Stimulation von Astrozyten umfasst. Diese integrierte Methode zielt darauf ab, eine parallele Untersuchung der Astrozyten-Neuron-Beziehung über die akuten bis chronischen Stadien des ischämischen Schlaganfalls zu ermöglichen.

Eine integrierte Methode zur photothrombotischen Schlaganfallmodellierung und zur in-vivo-Optrodenerfassung neuronaler und astrozytischer Aktivität bei sich wirkenden Mäusen

Lernen Sie die Isolierung primärer Astrozyten aus Rattenhirnen für Schlaganfallforschung unter Sauerstoff-Glukose-Entzug. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung zellulärer Reaktionen auf ischämische Bedingungen.

Überwachung der Astrozyten Reaktivität und Proliferation in Vitro unter ischämischen-ähnlichen Bedingungen

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