Name: Differenzierung der Primitive und Definitive hämatopoetischen Vorläuferzellen aus menschlichen pluripotente Stammzellen gerichtet (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-11-01T12:30:00.000+00:00
Duration: 14 min 37 s
Description: Lernen Sie die Differenzierung von menschlichen pluripotenten Stammzellen zu hämatopoetischen Vorläuferzellen durch stadienspezifische WNT-Signalmanipulation. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung primitiver und definitiver Hämatopoese.

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Diese Arbeit wurde von der Abteilung für Innere Medizin, Abteilung Hämatologie, Washington University School of Medicine unterstützt. CD wurde von T32HL007088 von der National Heart, Lung and Blood Institute unterstützt. CMS wurde von einer amerikanischen Gesellschaft von Hämatologie Scholar Award unterstützt.

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<li>Ng, E. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+primitive+streak+gene+Mixl1+is+required+for+efficient+haematopoiesis+and+BMP4-induced+ventral+mesoderm+patterning+in+differentiating+ES+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">The primitive streak gene Mixl1 is required for efficient haematopoiesis and BMP4-induced ventral mesoderm patterning in differentiating ES cells.</a> Development. 132 (5), 873-884 (2005).</li>
<li>Pick, M., Azzola, L., Mossman, A., Stanley, E. G., Elefanty, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differentiation+of+human+embryonic+stem+cells+in+serum-free+medium+reveals+distinct+roles+for+bone+morphogenetic+protein+4%2C+vascular+endothelial+growth+factor%2C+stem+cell+factor%2C+and+fibroblast+growth+factor+2+in+hematopoiesis%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Differentiation of human embryonic stem cells in serum-free medium reveals distinct roles for bone morphogenetic protein 4, vascular endothelial growth factor, stem cell factor, and fibroblast growth factor 2 in hematopoiesis.</a> Stem Cells. 25 (9), 2206-2214 (2007).</li>
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Die Autoren erklären, dass sie keine finanziellen Interessenkonflikte.

Dieses Protokoll beschreibt eine rasche, Serum-frei, Stroma Methode für die Differenzierung von primitiven oder definitive hämatopoetischen Vorläuferzellen. Mesodermalen Spezifikation der primitiven oder definitive hämatopoetischen Vorläuferzellen kann zuverlässig mit unserem Protokoll, welches eindeutig niedermolekularer Hemmer der kanonischen WNT signalisieren nutzt erreicht werden. Bühne-spezifische WNT Aktivierung durch den GSK3β-Inhibitor CHIR9902133 gibt Anlass zu endgültigen hämatopoetische...

Menschlicher pluripotenter Stammzellen (hPSCs) sind definiert als mit humanen embryonalen Stammzellen (HES) und menschlichen induzierten pluripotenten Stammzellen (HiPSCs) und haben die einzigartige Fähigkeit, nicht nur in der Selbsterneuerung unter geeigneten Wachstumsbedingungen, aber auch die Fähigkeit, sich in alle Zelltypen differenzieren abgeleitet aus den drei Mikrobeschichten: Entoderm, Mesoderm und Ektoderm1. Aufgrund dieser einzigartigen Fähigkeiten halten hPSCs große Verheißung für die regenerative Medizin, Krankheit Modellierung und zellbasierte Therapien2. Während mehrere Zelltypen erfolgreich von hPSCs unterschieden wurde, ist eine große Herausforderung der in-vitro- Spezifikation ausschließlich Erwachsenen-wie hPSC hämatopoetischen Stammzellen (HSCs) und definitive hämatopoetischen Vorläuferzellen.
Eine wahrscheinlich Hindernis für die Entwicklung der menschlichen HSCs aus hPSCs ist das Vorhandensein von mehreren hämatopoetischen Programmen innerhalb der menschlichen Embryos3. Das erste Programm, das entsteht, "primitive Hämatopoese," bezeichnet, entsteht im Gewebe extraembryonic Dottersack und zeichnet sich durch seine vorübergehende Produktion von Erythroblast Vorfahren (EryP-CFC), Makrophagen und Megakaryozyten am besten. Vor allem, dieses Programm gibt keinen Anlass, HSCs, noch gibt es Anlass zu T- und B lymphoiden Vorläuferzellen. Allerdings der Dottersack vorübergehend eingeschränkt definitive hämatopoetischen Vorfahren, wie z. B. der Erythro-myeloischen Vorläuferzellen (EMP4,5,6,7,8) hervorrufen und die erythroiden-defizienten lymphatischen grundiert multipotenten Vorläuferzellen (LMPP9). Jedoch sind weder EMPs noch LMPPs, voll multipotenten oder HSC-ähnliche Engraftment in Erwachsenen Empfänger in der Lage. Im Gegensatz dazu wird später in der Entwicklung, das klassisch definierte "definitive" hämatopoetische Programm im Großraum Aorta-Gonade-Wachstum des Embryos richtige, was zu allen Erwachsenen hämatopoetischen Linien, einschließlich der HSC angegeben. Die Spezifikation dieser intra embryonalen definitive hämatopoetischen Zellen tritt in einer Kerbe-abhängigen Weise über eine endotheliale-hämatopoetischen Übergang von Hemogenic Endothel (er)3,10,11 ,12,13,14. Abgesehen von Rekonstitution Kapazität Multilineage potenzielle und Notch-Abhängigkeit von diesen Zellen lässt sich diese endgültige hämatopoetischen Vorläuferzellen aus der EMP und die LMPP (rezensiert in Referenzen3,13 unterscheiden ).
Verständnis der Mechanismen für primitiv und definitive hämatopoetischen Spezifikation von hPSCs dürfte für die reproduzierbare Produktion von definitive hämatopoetischen Vorläuferzellen über eine Vielzahl von hPSC Linien von entscheidender Bedeutung. Bis vor kurzem existierten hPSC Differenzierung Protokolle, die multipotente primitive und definitive hämatopoetische Vorläuferzellen trennen konnte nicht15,16,17,18, 19,20,21,22,23,24,25. Viele Ansätze mit fetalen bovine Serum (FBS) und/oder Stromazellen Kokultur zuerst umrissen der hämatopoetische Potenzial der hPSC Differenzierung, mit einer Mischung aus primitiven und endgültige hämatopoetischen potenzielle15,16, 17,19,22,23,25. Weitere, viele serumfreien hämatopoetischen Protokolle haben die Signal-Anforderungen für die Spezifikation von Mesoderm aus hPSCs, die blutbildenden potenzielle18,20,21, birgt beschrieben 24. wie diese Methoden noch heterogene Mischungen beider Programme hervorbrachte, deren Einsatz in klinische Anwendungen und Entwicklungsmechanismen Verständnis kann jedoch begrenzt.
Wir haben vor kurzem auf diesen Studien aufgebaut haben skizziert die Bühne-spezifische Signal Anforderungen an ACTIVIN/NODAL und WNT signalisieren in primitive und endgültige hämatopoetischen Spezifikation vom hPSC abgeleitet Mesoderm18,26 . Letzteres war besonders einzigartig, da die Nutzung der Bühne-spezifische WNT Signalmanipulation für die Spezifikation von ausschließlich primitiv oder ausschließlich endgültige hämatopoetischen Vorläuferzellen26ermöglicht. Während Mesoderm-Spezifikation, die Hemmung der kanonischen WNT signalisieren mit dem PORCN-Inhibitor IWP2 führt bei der Spezifikation von CD43+ EryP-CFC und myeloischer Vorläuferzellen mit kein nachweisbar lymphoide Potenzial. In scharfem Kontrast, Stimulation der kanonischen WNT-Signal mit dem GSK3β-Inhibitor, CHIR99021, in der gleichen Phase der Differenzierung führte in die völlige Abwesenheit von nachweisbaren CD43+ EryP-CFC, während gleichzeitig führt zu den Spezifikation der CD34+CD43− HE. Diese Bevölkerung besaß myeloische, HBG-erythroiden und T-lymphatischen Potenzial zum Ausdruck bringt. Spätere Analysen identifiziert, das er als Ausdruck CD7327,28 und CD18428und sein hämatopoetischen Potential fehlt Kerbe-abhängige28war. Weitere, einzellige klonale Analysen gezeigt, dass diese endgültige hämatopoetischen Linien von multipotenten Einzelzellen28abgeleitet werden können. Zusammen genommen, zeigen diese Studien, dass die Bühne-spezifische WNT signalisieren Manipulation pur primitive hämatopoetischen Vorläuferzellen oder multipotenten Kerbe-abhängige definitive hämatopoetischen Vorläuferzellen angeben kann.
Hier beschreiben wir unsere Differenzierungsstrategie, die ausschließlich primitive oder endgültige hämatopoetischen Stammväter, durch Manipulation der kanonischen WNT signalisieren während mesodermalen Musterung und ihre nachgelagerten hämatopoetischen Linie Assays ergibt. Dieses Protokoll ist von großem Wert für die Ermittler, die die Produktion von entweder primitiv oder endgültige hämatopoetischen Vorläuferzellen aus hPSCs für regenerative Medizin Anwendungen interessiert sind.

<table><tbody><tr><td>Iscove's Modified Dulbecco's Medium (IMD)</td><td>Corning</td><td>10-016</td><td></td></tr><tr><td>Fetales Rinderserum (FBS), ES-Zell-bewertet</td><td>Gemini Bioproducts</td><td>100-500</td><td></td></tr><tr><td>Fötales Rinderserum (FBS)</td><td>Hyklon</td><td>SH30396,03</td><td></td></tr><tr><td>L-Glutamin, 200 mM Lösung</td><td>Life Technologies</td><td>25030-081</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin</td><td>Leben Technologies</td><td>15070-063</td><td></td></tr><tr><td>0,25 % Trypsin-EDTA</td><td>Life Technologies</td><td>25200056</td><td></td></tr><tr><td>0,05 % Trypsin-EDTA</td><td>Life Technologies</td><td>25300054</td><td></td></tr><tr><td>Gelatine, Schweinehaut, Typ A</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G1890</td><td></td></tr><tr><td>Alpha-MEM</td><td>Life Technologies</td><td>12000-022</td><td></td></tr><tr><td>DMEM-F12</td><td>Corning</td><td>10-092-CV</td><td></td></tr><tr><td>Knock-out-Serumersatz</td><td>Life Technologies</td><td>10828028</td><td>"KOSR"</td></tr><tr><td>Nicht-essentielle Aminosäuren (NEAA)</td><td>Life Technologies</td><td>11140050</td><td></td></tr><tr><td>b-Mercaptoethanol, 55 mM Lösung</td><td>Life Technologies</td><td>21985023</td><td></td></tr><tr><td>Salzsäure</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H1758</td><td></td></tr><tr><td>Fraktion V, Rinderserumalbumin</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP1605</td><td></td></tr><tr><td>Ham's F12</td><td>Corning</td><td>10-080</td><td></td></tr><tr><td>N2 Supplement</td><td>Life Technologies</td><td>17502048</td><td></td></tr><tr><td>B27 Supplement, kein Vitamin A</td><td>Life Technologies</td><td>12587010</td><td></td></tr><tr><td>Stempro-34 (SP34)</td><td>Life Technologies</td><td>10639011</td><td>"SP34"</td></tr> <tr><td>Wachstumsfaktor reduziert Matrigel</td><td>Corning</td><td>354230</td><td>"MAT"</td></tr><tr><td>L-absorbierbare Säure</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A4403</td><td></td></tr><tr><td>Humanserumtransferrin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>10652202001</td><td></td></tr><tr><td>Monothioglycerin (MTG)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M6145</td><td></td></tr><tr><td>Kollagenase B</td><td>Roche</td><td>11088831001</td><td></td></tr><tr><td>Kollagenase II</td><td>Life Technologies</td><td>17101015</td><td></td></tr><tr><td>DNaseI</td><td>Calbiochem</td><td>260913</td><td></td></tr><tr><td>phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS)</td><td>Life Technologies</td><td>14190144</td><td></td></tr><tr><td>bFGF</td><td>R& D Systems</td><td>233-FB</td><td></td></tr><tr><td>BMP4</td><td>F& Technik D Systems</td><td>314-BP</td><td></td></tr><tr><td>Activin A</td><td>F& T D Systems</td><td>338-AC</td><td></td></tr><tr><td>VEGF</td><td>F& Technik D Systems</td><td>293-VE</td><td></td></tr><tr><td>SCF</td><td>F& Technik D Systems</td><td>255-SC</td><td></td></tr><tr><td>IGF-1</td><td>F& Technik D Systems</td><td>291-G1</td><td></td></tr><tr><td>IL-3</td><td>F& Technik D Systems</td><td>203-IL</td><td></td></tr><tr><td>IL-6</td><td>R& D Systems</td><td>206-IL</td><td></td></tr><tr><td>IL-7</td><td>F& Technik D Systems</td><td>207-IL</td><td></td></tr><tr><td>IL-11</td><td>R& D Systems</td><td>218-1L</td><td></td></tr><tr><td>TPO</td><td>F& Technik D Systems</td><td>288-TP</td><td></td></tr><tr><td>EPO</td><td>Peprotech</td><td>100-64</td><td></td></tr><tr><td>Flt-3 Ligand (FLT3-L)</td><td>R& D Systems</td><td>308-FK</td><td></td></tr><tr><td>CHIR99021</td><td>Tocris</td><td>4423</td><td></td></tr><tr><td>IWP2</td><td>Tocris</td><td>3533</td><td></td></tr><tr><td>Angiotensin II</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9525</td><td></td></tr><tr><td>Losartan Kalium</td><td>Tocris</td><td>3798</td><td></td></tr><tr><td>CD4 PerCP Cy5.5 Klon RPA-T4</td><td>BD Biosciences</td><td>560650</td><td>Verdünnung 1:100; T-Zell-Assay</td></tr><tr><td>CD8 PE Klon RPA-T8</td><td>BD Biosciences</td><td>561950</td><td>Verdünnung 1:10; T-Zell-Assay</td></tr><tr><td>CD34 APC Klon 8G12</td><td>BD Biosciences</td><td>340441</td><td>Verdünnung 1:100; EHT-Assay</td></tr><tr><td>CD34 PE-Cy7 Klon 8G12</td><td>BD Biosciences</td><td>348801</td><td>Verdünnung 1:100; Hämogenes Endothel</td></tr><tr><td>CD43 FITC Klon 1G10</td><td>BD Biosciences</td><td>555475</td><td>Verdünnung 1:10; Hämogenes Endothel</td></tr><tr><td>CD45 APC-Cy7 Klon 2D1</td><td>BD Biosciences</td><td>557833</td><td>Verdünnung 1:50; T-Zell-Assay</td></tr><tr><td>CD45 eFluor450 Klon 2D1</td><td>BD Biosciences</td><td>642284</td><td>Verdünnung 1:50; EHT-Assay</td></tr><tr><td>CD56 APC Klon B159</td><td>BD Biosciences</td><td>555518</td><td>Verdünnung 1:20; T-Zell-Assay</td></tr><tr><td>CD73 PE Klon AD2</td><td>BD Biosciences</td><td>550257</td><td>Verdünnung 1:50; Hämogenes Endothel</td></tr><tr><td>CD184 APC Klon 12G5</td><td>BD Biosciences</td><td>555976</td><td>Verdünnung 1:50; Hämogenes Endothel</td></tr><tr><td>4',6-Diamidino-2-phenylindol (DAPI)</td><td>BD Biosciences</td><td>564907</td><td>Verdünnung 1:10.000; T-Zell-Assay</td></tr><tr><td>OP9 DL4 Zellen</td><td></td><td></td><td>Holmes, R. und J.C. Zuniga-Pflucker. Kalte Quelle Harb Protoc, 2009. 2009(2): p. pdb prot5156</td></tr><tr><td>MethoCult H4034</td><td>Stemcell Technologies</td><td>4034</td><td>"MeC"</td></tr><tr><td>Milli-Q Wasseraufbereitungssystem</td><td>EMD Millipore</td><td></td><td></td></tr><tr><td>5% CO2-Inkubator</td><td></td><td></td><td>Set bei 37 C</td></tr><tr><td>Multigas-Inkubator</td><td></td><td></td><td>Set bei 37 C, 5% CO2, 5% O2</td></tr><tr><td>6-Well-Gewebekulturplatte</td><td>Corning</td><td>353046</td><td></td></tr><tr><td>24-Well-Gewebekulturplatte</td><td>Corning</td><td>353226</td><td></td></tr><tr><td>6-Well-Gewebekulturplatte mit geringer Adhärenz</td><td>Corning</td><td>3471</td><td></td></tr><tr><td>24-Well-Gewebekulturplatte mit geringer Adhärenz</td><td>Corning</td><td>3473</td><td></td></tr><tr><td>35-mm-Gewebekulturschalen</td><td>Corning</td><td>353001</td><td></td></tr><tr><td>Nadel mit stumpfem Ende, 16-Gauge-Corning-Spritzen</td><td></td><td></td> 305198 <td></td>3</tr><tr><td>cc</td><td>Corning</td><td>309657</td><td></td></tr><tr><td>5 mL Polypropylen Reagenzglas</td><td>Corning</td><td>352063</td><td></td></tr><tr><td>5 mL Polystyrol Reagenzglas</td><td>Corning</td><td>352058</td><td></td></tr><tr><td>15 mL Polypropylen konisch</td><td>Corning</td><td>430791</td><td></td></tr><tr><td>50 mL Polypropylen konisch</td><td>Corning</td><td>430921</td><td></td></tr><tr><td>2 mL serologische Pipette</td><td>Corning</td><td>357507</td><td></td></tr><tr><td>5 mL serologische Pipette</td><td>Corning</td><td>4487</td><td></td></tr><tr><td>10 mL serologische Pipette</td><td>Corning</td><td>4488</td><td></td></tr><tr><td>25 mL serologische Pipette</td><td>Corning</td><td>4489</td><td></td></tr><tr><td>Zellschaber</td><td>Corning</td><td>353085</td><td></td></tr><tr><td>2,0 mL Kryofläschchen</td><td>Corning</td><td>430488</td><td></td></tr><tr><td>5 mL Reagenzglas mit 40 & Mikro; M Zellensieb</td><td>Corning</td><td>352235</td><td></td></tr><tr><td>40 &micro; M Zellsieb</td><td>Corning</td><td>352340</td><td></td></tr><tr><td>Zellkulturzentrifuge</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Biosicherheitshaube</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>FACS AriaII oder gleichwertig</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>LSRii oder gleichwertig</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>FlowJo Software</td><td>TreeStar</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Wasserbad</td><td></td><td></td><td>Set bei 37 °C</td></tr><tr><td>0,22 &Mikro; M Filtersystem</td><td>Corning</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Autoklav</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>4 C Kühlschrank-20</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>C Gefrierschrank-80</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>C Gefrierschrank</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

differenzierung der primitive und definitive hämatopoetischen vorläuferzellen aus menschlichen pluripotente stammzellen gerichtet

Directed Differentiation of Primitive and Definitive Hematopoietic Progenitors from Human Pluripotent Stem Cells

Eines der wichtigsten Ziele für die regenerative Medizin ist die Erzeugung und die Wartung von hämatopoetischen Stammzellen (HSCs) aus menschlicher pluripotenter Stammzellen (hPSCs). Bis vor kurzem haben Anstrengungen zur hPSCs in HSCs differenzieren überwiegend hämatopoetische Vorläuferzellen generiert, die fehlen, HSC-Potenzial, und stattdessen ähneln Dottersack Hämatopoese. Diese resultierenden hämatopoetischen Vorläuferzellen können Dienstprogramm für in-vitro- Krankheit Modellierung von verschiedenen Erwachsenen hämatopoetischer Erkrankungen, insbesondere der lymphatischen Linien beschränkt haben. Allerdings haben wir vor kurzem beschrieben Methoden zum Generieren von Erythro-Myelo-lymphatischen multilineage endgültige hämatopoetischer Vorläuferzellen aus hPSCs mit einem Stadium-spezifische gerichtete Differenzierung-Protokoll, die wir hier erläutern. Durch enzymatische Dissoziation des hPSCs auf Basalmembran Matrix-beschichtete Plasticware Embryoid Körper (EBs) gebildet. EBs unterscheiden sich um Mesoderm durch rekombinante BMP4, die anschließend von der GSK3β-Inhibitor, CHIR99021 zum endgültigen hämatopoetischen Programm angegeben ist. Alternativ wird primitive Blutbildung durch den PORCN-Inhibitor, IWP2 angegeben. Hämatopoese wird weiter durch die Zugabe von rekombinanten VEGF und unterstützende hämatopoetischen Zytokinen angetrieben. Die daraus resultierende hämatopoetischen Vorfahre generiert, mit dieser Methode haben das Potenzial für Krankheiten und Entwicklungsstörungen Modellierung, in Vitroverwendet werden.

Eine schematische Darstellung der Induktions von primitiven und endgültige hämatopoetischen Vorläuferzellen aus hPSCs ist in Abbildung 1dargestellt. Mesoderm Musterung von kanonischer WNT signalisieren, während der 2. und 3. Tag der Differenzierung, gefolgt von hämatopoetischen Vorläuferzellen Spezifikation auftritt.
Repräsentative durchflusszytometrischen Analyse und koloniebildenden Methylcellulos...

Hier präsentieren wir menschlicher pluripotenter Stammzellen (hPSC) Kultur Protokolle verwendet, um hPSCs in CD34 unterscheiden+ hämatopoetischen Vorläuferzellen. Diese Methode nutzt Bühne-spezifische Manipulation von kanonischer WNT signalisieren Zellen ausschließlich entweder die definitive oder primitive hämatopoetischen Programm angeben.

Differenzierung der Primitive und Definitive hämatopoetischen Vorläuferzellen aus menschlichen pluripotente Stammzellen gerichtet

One of the major goals for regenerative medicine is the generation and maintenance of hematopoietic stem cells (HSCs) derived from human pluripotent stem ...

Das übergeordnete Ziel dieser Methode besteht darin, die Differenzierung menschlicher pluripotenter Stammzellen in Richtung des primitiven oder definitiven hämatopoetischen Programms mithilfe eines stadienspezifischen Ansatzes zur Signalmanipulation zu steuern. Diese Methode kann zahlreiche zentrale Fragen auf diesem Forschungsgebiet beantworten, beispielsweise das Verständnis der Signal- und transkriptionellen Regulatoren der menschlichen definitiven Hämatopoese. Der Hauptvorteil dieser Technik liegt darin, dass sie eine sofortige stadienspezifische Manipulation ermöglicht.Carissa Dege, eine Postdoktorandin in meinem Labor, demonstriert dieses Verfahren. Um mit dem Protokoll zu beginnen, beschaffen Sie zuvor hergestellte humane pluripotente Stammzelllinien oder HPSCs, die auf embryonalen Mausfibroblasten oder MEFs in einem Inkubator bei 37 °C mit fünf Prozent CO2 bis zu einer Konfluenz von 70 % bis 80 % kultiviert wurden. Aspirieren Sie das HPSC-Medium und geben Sie je nach Vertiefung ein Milliliter 37 °C warmes 0,25 %iges Trypsin-EDTA für eine Minute hinzu.Nach einer Minute das Trypsin abpipettieren und je ein Milliliter Stammmedium in jede Vertiefung geben. Mit einem Zellabstrei

directed-differentiation-primitive-definitive-hematopoietic

Research

Forschung

JoVE Journal

Developmental Biology

Entwicklungsbiologie

Generierung von T-Lymphozyten aus induzierten pluripotenten Stammzellen (iPS-Zellen) gibt einen alternativen Ansatz der Verwendung von embryonalen Stammzellen für die T-Zell-basierten Immuntherapie. Verfahren zeigt, dass durch Verwendung von...

Gerichtete Differenzierung von induzierten pluripotenten Stammzellen in Richtung T-Lymphozyten

Wir, basierend auf Erkenntnissen aus der Entwicklungsbiologie und veröffentlichten Forschungsergebnissen, haben ein optimiertes Protokoll entwickelt, um effizient A9-Mittelhirn-dopaminerge Neuronen sowohl aus menschlichen embryonalen Stammzellen als auch aus menschlichen induzierten pluripotenten Stammzellen zu erzeugen, was für die Krankheitsmodellierung und Zellersatztherapie bei der Parkinson-Krankheit nützlich wäre.

Regie dopaminergen Neuron Differenzierung von humanen pluripotenten Stammzellen

Dieses Protokoll beschreibt die effiziente Induktion von hämogenem Endothel und multipotenten hämatopoetischen Vorläuferzellen aus menschlichen pluripotenten Stammzellen durch die erzwungene Expression von Transkriptionsfaktoren.

Direkte Induktion von Hemogenic Endothel und das Blut durch die Überexpression von Transkriptionsfaktoren in der Personal pluripotenten Stammzellen

Das hier beschriebene Protokoll beschreibt die Induktion eines hämogenen Programms in embryonalen Fibroblasten der Maus durch Überexpression eines minimalen Satzes von Transkriptionsfaktoren. Diese Technologie kann auf das menschliche System übertragen werden, um Plattformen für zukünftige Studien zur Hämatopoese, zu hämatologischen Erkrankungen und hämatopoetischen Stammzelltransplantationen bereitzustellen.

Maus Umprogrammieren Embryonale Fibroblasten mit Transkriptionsfaktoren ein Hemogenic Programm zu induzieren

Hier stellen wir ein Protokoll zur präzisen Bildung hämogenen Endothelaus aus menschlichen pluripotenten Stammzellen in einem feeder- und xenofreien Zustand vor. Diese Methode wird breite Anwendungen bei der Modellierung von Krankheiten und beim Screening auf therapeutische Verbindungen haben.

Hämogene Endotheldifferenzierung von humanen pluripotenten Stammzellen in einem feeder- und xenofreien definierten Zustand

Hier stellen wir ein Protokoll zur immunphenotypischen Charakterisierung und Zytokin-induzierten Differenzierung von Nabelschnurblut abgeleitet CD34+ hämatopoetischen Stamm- und Vorläuferzellen zu den vier myeloischen Linien vor. Die Anwendungen dieses Protokolls umfassen Untersuchungen über die Wirkung von myeloischen Krankheitsmutationen oder kleinen Molekülen auf die myeloische Differenzierung der CD34+ Zellen.

Panmyeloische Differenzierung von humanem Cordblood abgeleitet CD34+ hämatopoetische Stamm- und Vorläuferzellen

Dieses Protokoll demonstriert die Induktion eines hämogen Programms in humanen dermalen Fibroblasten durch erzwungene Expression der Transkriptionsfaktoren GATA2, GFI1B und FOS zur Erzeugung hämatopoetischer Stamm- und Vorläuferzellen.

Hämogene Reprogrammierung menschlicher Fibroblasten durch erzwungene Expression von Transkriptionsfaktoren

Das Ziel dieses Artikels ist es, einen standardisierten Ansatz zur Induktion der Differenzierung des menschlichen Lebervorläufers von pluripotenten Stammzellen bereitzustellen. Die Entwicklung dieses Verfahrens mit gebrauchsfertigen Medienformulierungen bietet dem Anwender ein einfaches System zur Erzeugung menschlicher Leberzellen für die biomedizinische Forschung und Translation.

Hepatischer Vorläufer aus pluripotenten Stammzellen unter Verwendung eines definierten Differenzierungssystems

Hier wird ein einfaches Protokoll für die gezielte Differenzierung von hämogenen Endothelzellen aus humanen pluripotenten Stammzellen in ca. 1 Woche vorgestellt.

Gerichtete Differenzierung hämogener Endothelzellen aus humanen pluripotenten Stammzellen

Dieses Protokoll stellt die Differenzierung humaner Osteoklasten aus induzierten pluripotenten Stammzellen (iPSCs) dar und beschreibt Methoden zur Charakterisierung von Osteoklasten und Osteoklastenvorläufern.

Differenzierung und Charakterisierung von Osteoklasten aus humanen induzierten pluripotenten Stammzellen

Lernen Sie die Differenzierung von menschlichen pluripotenten Stammzellen zu hämatopoetischen Vorläuferzellen durch stadienspezifische WNT-Signalmanipulation. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung primitiver und definitiver Hämatopoese.

Differenzierung der Primitive und Definitive hämatopoetischen Vorläuferzellen aus menschlichen pluripotente Stammzellen gerichtet (Video) | JoVE Journal

Differenzierung der Primitive und Definitive hämatopoetischen Vorläuferzellen aus menschlichen pluripotente Stammzellen gerichtet

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